2025年大學(xué)《生物技術(shù)》專業(yè)題庫——生物技術(shù)在乙肝治療中的應(yīng)用考試時(shí)間：______分鐘總分：______分姓名：______一、選擇題（每小題2分，共20分）1.乙型肝炎病毒（HBV）的遺傳物質(zhì)是？A.單鏈DNAB.雙鏈DNAC.單鏈RNAD.雙鏈RNA2.在HBV的復(fù)制周期中，持續(xù)存在且難以被現(xiàn)有藥物清除的關(guān)鍵形式是？A.感染性病毒顆粒B.共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）C.包膜抗原（HBsAg）D.聚合酶前體（pre-core）3.以下哪種藥物屬于核苷（酸）類似物（NAs）？A.干擾素-αB.阿德福韋酯C.泛昔洛韋D.利巴韋林4.能夠特異性沉默HBVmRNA的基因治療技術(shù)是？A.基因編輯B.RNA干擾（RNAi）C.反義寡核苷酸（ASO）D.免疫檢查點(diǎn)抑制劑5.HBsAg在乙肝診斷中的主要意義是？A.具有傳染性B.提示急性感染或慢性感染C.是HBV復(fù)制活躍的直接指標(biāo)D.是HBV感染后產(chǎn)生保護(hù)性免疫的標(biāo)志6.以下哪項(xiàng)是干擾素（IFN）治療慢性乙肝的主要機(jī)制？A.直接抑制HBVDNA聚合酶B.免疫調(diào)節(jié)，增強(qiáng)對(duì)病毒感染的細(xì)胞毒性C.破壞肝細(xì)胞，清除病毒D.促進(jìn)cccDNA的降解7.HBVcccDNA的持續(xù)存在是導(dǎo)致慢性化及停藥后易復(fù)發(fā)的主要原因。A.正確B.錯(cuò)誤8.在乙肝免疫治療中，使用PD-1/PD-L1抑制劑的主要目的是？A.直接中和HBV病毒B.抑制病毒在肝細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制C.減輕肝臟炎癥，改善肝功能D.激活或增強(qiáng)宿主對(duì)HBV的特異性免疫應(yīng)答9.下列哪項(xiàng)技術(shù)不屬于利用基因轉(zhuǎn)移載體將治療物質(zhì)遞送至目標(biāo)細(xì)胞？A.脂質(zhì)體介導(dǎo)B.電穿孔C.直接注射治療性RNAD.病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)10.乙肝病毒表面抗原（HBsAg）血清學(xué)轉(zhuǎn)換（HBeAg陽性轉(zhuǎn)HBeAg陰性）通常意味著？A.病毒被徹底清除B.傳染性可能降低，病情趨于穩(wěn)定C.患者免疫力完全恢復(fù)D.必將發(fā)展為肝硬化二、填空題（每空2分，共20分）1.乙型肝炎病毒（HBV）的基因組是部分雙鏈的DNA，其中長鏈（+鏈）的末端通過__________與短鏈（-鏈）的末端連接，形成共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）。2.核苷（酸）類似物（NAs）治療慢性乙肝的機(jī)制主要是通過模擬天然核苷（酸）摻入病毒DNA鏈，造成聚合酶的__________，從而抑制病毒復(fù)制。3.基因治療中使用siRNA沉默HBV時(shí)，通常需要將其與__________載體共同遞送至肝臟細(xì)胞，以實(shí)現(xiàn)高效的基因沉默效果。4.在乙肝的診斷和監(jiān)測(cè)中，除了HBVDNA，__________也是重要的指標(biāo)，其血清學(xué)轉(zhuǎn)換是病情好轉(zhuǎn)的重要標(biāo)志。5.開發(fā)針對(duì)HBV_________的單克隆抗體，旨在阻斷病毒與肝細(xì)胞的結(jié)合或病毒復(fù)制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。6.利用CRISPR/Cas9技術(shù)治療乙肝，其核心是設(shè)計(jì)特定的向?qū)NA（gRNA）靶向HBV的__________，從而實(shí)現(xiàn)基因的敲除或編輯。7.乙肝疫苗主要誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)__________的免疫應(yīng)答，提供對(duì)乙肝的免疫力。8.免疫治療中，過繼性T細(xì)胞療法，特別是CAR-T細(xì)胞療法，旨在改造患者的T細(xì)胞使其能夠特異性識(shí)別并殺傷__________。9.除了直接抗病毒，生物技術(shù)也在探索通過調(diào)節(jié)宿主免疫微環(huán)境來治療乙肝，例如使用__________藥物來抑制免疫抑制性通路。10.由于cccDNA難以清除，現(xiàn)有NAs藥物__________徹底治愈慢性乙肝。三、名詞解釋（每小題3分，共15分）1.共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）2.RNA干擾（RNAi）3.HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換4.過繼性T細(xì)胞療法5.cccDNA四、簡答題（每小題5分，共20分）1.簡述核苷（酸）類似物（NAs）治療慢性乙肝的主要機(jī)制及其存在的局限性。2.簡述RNA干擾（RNAi）技術(shù)用于乙肝治療的基本原理。3.簡述乙肝疫苗的兩種主要類型及其作用機(jī)制。4.簡述利用單克隆抗體進(jìn)行乙肝免疫治療的潛在策略。五、論述題（10分）當(dāng)前，乙肝的治療仍面臨諸多挑戰(zhàn)，特別是難以清除cccDNA導(dǎo)致易復(fù)發(fā)。請(qǐng)結(jié)合您所學(xué)的生物技術(shù)知識(shí)，論述至少三種有前景的生物技術(shù)策略如何克服這一難題，并分析這些策略各自面臨的挑戰(zhàn)。試卷答案一、選擇題1.B2.B3.B4.B5.B6.B7.A8.D9.C10.B二、填空題1.尾部互補(bǔ)2.滯后合成終止3.脂質(zhì)體4.HBeAg5.病毒外殼蛋白（或HBsAg）6.基因編碼區(qū)（或病毒基因組）7.HBsAg8.HBV感染的肝細(xì)胞9.免疫檢查點(diǎn)抑制劑（或PD-1/PD-L1抑制劑）10.不能三、名詞解釋1.共價(jià)閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）：HBV的松弛circularDNA形式，存在于肝細(xì)胞核內(nèi)，是病毒復(fù)制的模板，難以被現(xiàn)有藥物清除，是慢性化的關(guān)鍵。2.RNA干擾（RNAi）：利用雙鏈RNA（如siRNA）激活細(xì)胞內(nèi)的降解機(jī)制，特異性沉默目標(biāo)基因mRNA，從而抑制基因表達(dá)的技術(shù)。3.HBeAg血清學(xué)轉(zhuǎn)換：在乙肝感染過程中，乙肝e抗原（HBeAg）轉(zhuǎn)陰，乙肝e抗體（HBeAb）轉(zhuǎn)陽的現(xiàn)象，通常提示病毒復(fù)制活動(dòng)減低，傳染性下降，病情可能好轉(zhuǎn)。4.過繼性T細(xì)胞療法：將患者自身的或異體的、經(jīng)過體外改造（如基因工程修飾）的T細(xì)胞回輸體內(nèi)，以增強(qiáng)其對(duì)抗特定抗原（如HBV）的免疫殺傷能力的一種細(xì)胞治療策略。5.cccDNA：共價(jià)閉合環(huán)狀DNA，HBV的基因組形式，結(jié)構(gòu)像一個(gè)閉合的環(huán)，在肝細(xì)胞核內(nèi)穩(wěn)定存在，是病毒復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的主要模板，不易被核苷類似物清除。四、簡答題1.機(jī)制：NAs結(jié)構(gòu)與HBVDNA鏈的天然核苷酸相似，能被HBV聚合酶錯(cuò)誤地?fù)饺胙由熘械腄NA鏈。一旦摻入，聚合酶通常會(huì)停止延伸，從而抑制病毒DNA的合成。部分NAs也能整合入宿主DNA，但在復(fù)制時(shí)可能被宿主DNA聚合酶切除。局限性：NAs主要抑制病毒DNA的合成，對(duì)已存在的cccDNA無效，因此不能徹底清除病毒庫。停藥后，cccDNA會(huì)再次啟動(dòng)病毒復(fù)制，導(dǎo)致病情反彈。長期使用可能導(dǎo)致耐藥突變。2.原理：將針對(duì)HBV特定抗原（如核心抗原、表面抗原或聚合酶）的短干擾RNA（siRNA）或長干擾RNA（lncRNA）設(shè)計(jì)并遞送入肝細(xì)胞。這些RNA分子作為引導(dǎo)，與靶標(biāo)mRNA結(jié)合形成雙鏈RNA（dsRNA）復(fù)合物。細(xì)胞內(nèi)的RNA干擾通路（如RISC）被激活，識(shí)別并切割靶標(biāo)mRNA，導(dǎo)致其降解，從而特異性下調(diào)HBV相關(guān)蛋白的表達(dá)，抑制病毒復(fù)制。3.類型：①重組蛋白疫苗：利用基因工程技術(shù)在大腸桿菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)HBsAg，純化后制成疫苗，如酵母重組乙肝疫苗。②核酸疫苗：將編碼HBsAg的質(zhì)粒DNA或mRNA作為基因疫苗，直接遞送入體內(nèi)，誘導(dǎo)細(xì)胞表達(dá)HBsAg，激發(fā)免疫應(yīng)答。作用機(jī)制是疫苗編碼的抗原被遞呈給免疫系統(tǒng)，刺激B細(xì)胞產(chǎn)生抗體和T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，建立對(duì)HBV的免疫力。4.策略：*開發(fā)中和抗體：制備能特異性結(jié)合并中和病毒顆粒（如阻止其與肝細(xì)胞結(jié)合或阻斷其入胞過程）的mAb。*開發(fā)治療性抗體：制備能識(shí)別并激活補(bǔ)體系統(tǒng)裂解病毒，或能識(shí)別并殺傷HBVinfectedhepatocytes的效應(yīng)細(xì)胞抗體（如抗體依賴性細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用ADCC）。*開發(fā)免疫調(diào)節(jié)性抗體：制備能阻斷抑制性免疫通路（如阻斷PD-1/PD-L1相互作用）或增強(qiáng)Th1型免疫應(yīng)答的抗體，以改善機(jī)體對(duì)HBV的清除能力。五、論述題克服cccDNA清除難的治療策略主要包括：1.靶向cccDNA的藥物/技術(shù)：*策略：開發(fā)能特異性識(shí)別cccDNA并誘導(dǎo)其降解的酶（如核酸內(nèi)切酶）或小分子化合物；設(shè)計(jì)能干擾cccDNA與宿主染色體整合或其轉(zhuǎn)錄/復(fù)制過程的藥物。*挑戰(zhàn)：cccDNA結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，位于細(xì)胞核內(nèi)，難以進(jìn)入；需要高度特異性以避免損傷宿主基因組；藥物穿透肝細(xì)胞核的能力有限；cccDNA持續(xù)存在可能誘導(dǎo)耐藥。2.基因編輯技術(shù)：*策略：利用CRISPR/Cas9等基因編輯系統(tǒng)，將靶向序列導(dǎo)向肝細(xì)胞中的cccDNA所在的區(qū)域，進(jìn)行切割、修復(fù)或直接敲除cccDNA基因座。*挑戰(zhàn)：脫靶效應(yīng)（編輯非靶向位點(diǎn)）的風(fēng)險(xiǎn)；如何有效遞送Cas9/gRNA系統(tǒng)至所有感染的肝細(xì)胞；如何克服宿主免疫反應(yīng)；編輯后細(xì)胞表型的潛在影響；倫理問題。3.增強(qiáng)免疫清除能力：*策略：使用免疫檢查點(diǎn)抑制劑（如PD-1/PD-L1抗體）解除T細(xì)胞的免疫抑制，增強(qiáng)對(duì)HBVinfectedhepatocytes的殺傷；開發(fā)治療性疫苗或采用過繼性T細(xì)胞療法（如CAR-T），針對(duì)HBVinfectedhepatocytes進(jìn)行特異性免疫攻擊；利用RNA干擾技術(shù)沉默HBV編碼的免疫抑制性蛋白或增強(qiáng)宿主抗病毒因子表達(dá)。*挑戰(zhàn)：免疫增強(qiáng)可能導(dǎo)致過度炎癥或自身免疫損傷；免疫治療的效果可能存在個(gè)體差異；如何確保免疫應(yīng)答精確針對(duì)病毒而非正常肝細(xì)胞；治療持續(xù)時(shí)間及成本問題。---解析思路說明：*選擇題解析：基于對(duì)乙肝病毒學(xué)、治療機(jī)制和生物技術(shù)原理的基礎(chǔ)知識(shí)進(jìn)行判斷。例如，第1題考查HBV遺傳物質(zhì)類型，正確答案是雙鏈DNA但結(jié)構(gòu)特殊；第2題考查cccDNA的重要性，它是持續(xù)存在的模板；第4題考查RNAi原理，是沉默mRNA。*填空題解析：要求準(zhǔn)確回憶關(guān)鍵術(shù)語、機(jī)制細(xì)節(jié)或技術(shù)名稱。例如，cccDNA形成涉及“尾部互補(bǔ)”；NAs機(jī)制是“滯后合成終止”；siRNA遞送常用“脂質(zhì)體”；HBeAg是重要“血清學(xué)”指標(biāo)；抗體可靶向“病毒外殼蛋白”；CRISPR靶向“基因編碼區(qū)”；疫苗誘導(dǎo)針對(duì)“HBsAg”的免疫；過繼性T細(xì)胞針對(duì)“HBV感染的肝細(xì)胞”；免疫治療藥物是“免疫檢查點(diǎn)抑制劑”；NAs“不能”徹底治愈是因?yàn)椴磺宄齝ccDNA。*名詞解釋解析：要求對(duì)核心概念進(jìn)行精確定義，說明其結(jié)構(gòu)、功能或意義。例如，cccDNA解釋需包含其結(jié)構(gòu)（環(huán)狀）、位置（細(xì)胞核）、作用（模板）、難清除性；RNAi解釋需包含機(jī)制（沉默mRNA）、工具（siRNA）；HBeAg轉(zhuǎn)換解釋需說明現(xiàn)象（HBeAg轉(zhuǎn)陰，HBeAb轉(zhuǎn)陽）及意義（傳染性下降，病情好轉(zhuǎn)）；過繼性T細(xì)胞解釋需包含來源（患者自身/異體）、改造（基因工程）、作用（殺傷病毒細(xì)胞）；cccDNA解釋同上。*簡答題解析：要求對(duì)某個(gè)知識(shí)點(diǎn)或機(jī)制進(jìn)行簡要闡述。例如，NAs簡答需說明“機(jī)制”（摻入干擾合成）和“局限性”（不清除cccDNA，易耐藥，停藥復(fù)發(fā)）；RNAi簡答需說明“原理”（siRNA引導(dǎo)切割靶mRNA）；