常見臨床樣本的處理方法演講人：日期:目錄CATALOGUE血液樣本處理尿液樣本處理組織樣本處理痰液與呼吸道樣本處理糞便樣本處理通用原則與安全01血液樣本處理PART采集與抗凝技術(shù)靜脈穿刺標(biāo)準(zhǔn)化操作采用無菌技術(shù)選擇合適的靜脈穿刺點(diǎn)，避免溶血或組織液污染，確保采血針與采血管匹配，減少樣本誤差?？鼓齽┻x擇與比例控制特殊人群采血注意事項(xiàng)根據(jù)檢測項(xiàng)目選用合適的抗凝劑（如EDTA、肝素、枸櫞酸鈉），嚴(yán)格遵循抗凝劑與血液體積比例，防止凝血或過度稀釋影響結(jié)果。針對嬰幼兒或凝血功能障礙患者，需采用小規(guī)格采血針或預(yù)冷抗凝管，減少創(chuàng)傷并保證樣本質(zhì)量。123溫度與時(shí)間控制使用防漏、防震的專用運(yùn)輸容器，標(biāo)注生物危害標(biāo)識，確保樣本在運(yùn)輸過程中不發(fā)生泄漏或交叉污染。生物安全防護(hù)穩(wěn)定性評估與記錄對易降解指標(biāo)（如血糖、乳酸）需記錄采集至檢測的時(shí)間間隔，必要時(shí)添加穩(wěn)定劑以延長樣本有效期限。需根據(jù)檢測項(xiàng)目要求選擇常溫、冷藏（2-8℃）或冷凍（-20℃以下）運(yùn)輸，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致細(xì)胞破裂或生化成分降解。運(yùn)輸與儲存要求離心與分離步驟根據(jù)樣本類型設(shè)定轉(zhuǎn)速（如3000rpm）和時(shí)間（10-15分鐘），確保血漿/血清與血細(xì)胞分層清晰，避免纖維蛋白殘留。離心參數(shù)標(biāo)準(zhǔn)化使用無菌吸管或自動化分裝系統(tǒng)分離上清液，避免觸碰中間層（如白細(xì)胞層）或沉淀物，減少交叉污染風(fēng)險(xiǎn)。分層操作規(guī)范將分離后的血漿/血清分裝至凍存管，標(biāo)注唯一標(biāo)識碼并記錄分裝體積，便于后續(xù)檢測或長期保存。分裝與標(biāo)識管理02尿液樣本處理PART指導(dǎo)患者清潔外陰或尿道口后，棄去初始尿液，收集中段尿液于無菌容器中，避免污染。清潔中段尿采集使用專用防腐容器，記錄總尿量并混勻后取部分送檢，需嚴(yán)格避免樣本遺漏或污染。24小時(shí)尿液收集針對無法自主排尿的患者，需由醫(yī)護(hù)人員通過導(dǎo)尿或膀胱穿刺獲取樣本，確保無菌操作。導(dǎo)尿與穿刺采集收集方法規(guī)范冷藏保存根據(jù)檢測項(xiàng)目選擇硼酸、甲苯或甲醛等防腐劑，抑制微生物生長并穩(wěn)定尿液成分?；瘜W(xué)防腐劑添加分裝與標(biāo)記長期保存需分裝至凍存管，標(biāo)注患者信息及采集時(shí)間，避免反復(fù)凍融影響檢測結(jié)果。若樣本無法在2小時(shí)內(nèi)檢測，需置于4℃冰箱保存，但不超過24小時(shí)，以防細(xì)菌繁殖或成分降解。防腐與保存措施化學(xué)與微生物檢測準(zhǔn)備檢測尿沉渣時(shí)需以1500-2000rpm離心5分鐘，取沉淀物鏡檢，上清液用于生化分析。離心處理高濃度樣本需過濾或稀釋后檢測，避免試劑干擾，如蛋白尿需稀釋后測微量白蛋白。過濾與稀釋接種前需混勻樣本，必要時(shí)進(jìn)行革蘭染色預(yù)判，選擇合適培養(yǎng)基以提高檢出率。微生物培養(yǎng)前處理03組織樣本處理PART活檢與固定流程無菌操作規(guī)范活檢過程中需嚴(yán)格遵循無菌原則，使用消毒器械和容器，避免樣本污染。對于不同組織類型（如腫瘤、炎癥或正常組織），需針對性選擇取樣部位以確保診斷準(zhǔn)確性。030201固定液選擇與處理常用固定劑如10%中性緩沖福爾馬林，需確保組織與固定液體積比為1:10以上。固定時(shí)間需根據(jù)組織厚度調(diào)整，通常不超過24小時(shí)，以避免過度交聯(lián)影響后續(xù)檢測。樣本標(biāo)記與記錄每份樣本需標(biāo)注患者信息、取材部位及時(shí)間，并同步錄入病理信息系統(tǒng)，確保追溯性。特殊樣本（如微小組織）需單獨(dú)標(biāo)注以防丟失。包埋與切片技術(shù)脫水與透明化處理組織需經(jīng)過梯度乙醇脫水（70%至100%），再經(jīng)二甲苯透明化，以徹底去除水分并增強(qiáng)石蠟滲透性。此過程需嚴(yán)格控制時(shí)間，避免組織脆化或收縮。切片厚度與平整度常規(guī)切片厚度為4-5微米，需使用一次性刀片或定期更換刀片以減少劃痕。切片后需漂浮于溫水浴中展平，避免褶皺影響染色。石蠟包埋方向控制包埋時(shí)需根據(jù)診斷需求調(diào)整組織方向（如腫瘤切面需包含最大病灶面積），并使用冷臺快速固化石蠟，確保包埋塊硬度均勻。染色與顯微檢查準(zhǔn)備常規(guī)HE染色步驟依次進(jìn)行蘇木精染色（核染色）、分化液返藍(lán)、伊紅染色（胞質(zhì)染色），最后脫水封片。染色時(shí)間需根據(jù)室溫及試劑批次微調(diào)，確保核質(zhì)對比清晰。特殊染色應(yīng)用針對特定成分（如膠原纖維、黏液等）可選擇Masson三色、PAS等染色法。需嚴(yán)格對照陽性對照樣本，避免假陰性或假陽性結(jié)果。封片與鏡檢前處理封片時(shí)使用中性樹膠，避免氣泡產(chǎn)生。鏡檢前需校準(zhǔn)顯微鏡光源和焦距，并按照從低倍到高倍的順序系統(tǒng)觀察，重點(diǎn)關(guān)注組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞形態(tài)異常。04痰液與呼吸道樣本處理PART采集誘導(dǎo)方法自然咳痰法支氣管肺泡灌洗術(shù)（BAL）霧化吸入誘導(dǎo)法指導(dǎo)患者清晨空腹漱口后深咳，采集下呼吸道分泌物，避免唾液污染，樣本需在2小時(shí)內(nèi)送檢以保證病原體活性。對于咳痰困難患者，采用高滲鹽水霧化刺激支氣管分泌，嚴(yán)格監(jiān)控患者血氧飽和度，防止支氣管痙攣等不良反應(yīng)。通過纖維支氣管鏡注入無菌生理鹽水并回收灌洗液，適用于肺部感染病原學(xué)診斷，需注意操作中避免氣道黏膜損傷。培養(yǎng)與接種標(biāo)準(zhǔn)選擇性培養(yǎng)基應(yīng)用根據(jù)疑似病原體選擇血瓊脂、巧克力瓊脂或麥康凱培養(yǎng)基，針對結(jié)核分枝桿菌需使用羅氏培養(yǎng)基并延長培養(yǎng)周期。厭氧菌處理流程樣本需立即轉(zhuǎn)入?yún)捬蹀D(zhuǎn)運(yùn)瓶，接種至預(yù)還原培養(yǎng)基，并在厭氧環(huán)境下培養(yǎng)，防止氧氣暴露導(dǎo)致假陰性。采用10μL接種環(huán)分區(qū)劃線，確保單菌落分離，避免交叉污染，同時(shí)記錄菌落形態(tài)特征輔助鑒定。定量接種技術(shù)分子檢測預(yù)處理核酸提取優(yōu)化采用硅膠膜吸附柱法或磁珠法提取RNA/DNA，添加溶菌酶破解結(jié)核分枝桿菌細(xì)胞壁，提高核酸得率。抑制劑去除策略同步檢測內(nèi)參基因（如人類β-actin）確認(rèn)樣本質(zhì)量，設(shè)置陰性對照和陽性對照監(jiān)控?cái)U(kuò)增效率，確保結(jié)果可靠性。樣本中加入蛋白酶K消化粘蛋白，配合離心柱純化步驟，消除痰液中多糖和色素對PCR反應(yīng)的干擾。多重PCR質(zhì)控05糞便樣本處理PART收集與保存規(guī)范防腐劑應(yīng)用針對寄生蟲檢測可添加10%福爾馬林或PVA固定液；細(xì)菌培養(yǎng)需避免使用防腐劑，直接冷藏保存以維持微生物存活率。采樣量與時(shí)間要求采集拇指大小的糞便樣本（約5-10g），優(yōu)先選擇含黏液或血絲部分。樣本需在排出后1小時(shí)內(nèi)送檢，若延遲需冷藏保存（2-8℃），但不超過24小時(shí)以維持病原體活性。無菌容器選擇使用專用防漏、密封性良好的無菌容器收集樣本，避免污染或泄漏，確保樣本完整性。容器材質(zhì)需耐腐蝕且不含抑菌成分，防止影響后續(xù)檢測結(jié)果。寄生蟲篩查技術(shù)直接涂片鏡檢生理鹽水或碘液涂片后高倍鏡檢，快速識別蟲卵、幼蟲或原蟲滋養(yǎng)體，適用于阿米巴、賈第鞭毛蟲等常見寄生蟲的初步篩查。濃縮法檢測采用甲醛-乙酸乙酯沉淀法或蔗糖浮聚法，提高低載量蟲卵的檢出率，尤其適用于鉤蟲、蛔蟲等腸道線蟲感染的診斷。免疫學(xué)檢測通過ELISA或膠體金試紙條檢測寄生蟲特異性抗原（如隱孢子蟲、血吸蟲），靈敏度高且可區(qū)分活動性感染與既往感染。選擇性培養(yǎng)基應(yīng)用針對沙門氏菌、志賀氏菌等腸道致病菌，使用SS瓊脂或麥康凱瓊脂進(jìn)行分離培養(yǎng)，抑制正常菌群生長以提高目標(biāo)菌檢出率。病原體培養(yǎng)流程厭氧菌培養(yǎng)條件艱難梭菌等厭氧菌需在厭氧罐或?qū)Ｓ门囵B(yǎng)箱中（含5%氫氣、10%二氧化碳、85%氮?dú)猓┡囵B(yǎng)48-72小時(shí)，輔以毒素檢測確認(rèn)致病性。病毒分離技術(shù)輪狀病毒或諾如病毒需通過離心富集后接種于特定細(xì)胞系（如MA104細(xì)胞），觀察細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE）并結(jié)合PCR驗(yàn)證。06通用原則與安全PART消毒與廢棄物處理使用有效消毒劑（如含氯消毒液或75%酒精）對工作臺面及器械進(jìn)行定期消毒，醫(yī)療廢棄物需分類密封后由專業(yè)機(jī)構(gòu)集中處置。個(gè)人防護(hù)裝備使用實(shí)驗(yàn)人員必須穿戴符合標(biāo)準(zhǔn)的防護(hù)服、手套、口罩及護(hù)目鏡，確保在處理臨床樣本時(shí)避免直接接觸潛在有害物質(zhì)，降低感染風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)室分區(qū)管理嚴(yán)格劃分清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)，樣本處理應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，防止氣溶膠擴(kuò)散和交叉污染。生物安全防護(hù)措施確保采集容器無菌、抗凝劑比例準(zhǔn)確，避免溶血或脂血干擾檢測結(jié)果，嚴(yán)格記錄采集時(shí)間與患者信息。質(zhì)量控制要點(diǎn)樣本采集標(biāo)準(zhǔn)化根據(jù)不同樣本類型（如血液、尿液、組織）制定離心速度、溫度及保存條件，防止細(xì)胞破裂或成分降解影響分析準(zhǔn)確性。預(yù)處理流程規(guī)范定期對離心機(jī)、分光光度計(jì)等設(shè)備進(jìn)行校準(zhǔn)，每批次實(shí)驗(yàn)需同步運(yùn)行陰性質(zhì)控品和陽性質(zhì)控品以監(jiān)控系統(tǒng)誤差。儀器校準(zhǔn)與質(zhì)控品檢測樣本需置于防漏初級容器中，外加吸濕材料和中層密封袋，