CCSB42T/HBIQA0001.16—2023本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起本文件為T(mén)/HBIQA0001的第16部分。T/HBIQA0001已經(jīng)發(fā)布了以下部分：——T/HBIQA0001.1-2023：獸藥制劑中非法添加3種氯霉素類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.2-2023：獸藥制劑中非法添加5種硝基呋喃類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.3-2023：獸藥制劑中非法添加22種阝-受體激動(dòng)劑類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.4-2023：獸藥制劑中非法添加8種硝基咪唑類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.5-2023：獸藥制劑中非法添加14種蛋白同化激素類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.6-2023：獸藥制劑中非法添加5種雌激素類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.7-2023：獸藥制劑中非法添加9種糖皮質(zhì)激素類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.8-2023：獸藥制劑中非法添加藥物安眠酮和唑吡坦的測(cè)定；——T/HBIQA0001.9-2023：獸藥制劑中非法添加4種吩噻嗪類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.10-2023：獸藥制劑中非法添加4種巴比妥類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.11-2023：獸藥制劑中非法添加19種非甾體類(lèi)抗炎藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.12-2023：獸藥制劑中非法添加4種喹噁啉類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.13-2023：獸藥制劑中非法添加9種抗病毒類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.14-2023：獸藥制劑中非法添加22種阝-內(nèi)酰胺類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.15-2023：獸藥制劑中非法添加4種四環(huán)素類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.16-2023：獸藥制劑中非法添加25種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.17-2023：獸藥制劑中非法添加19種喹諾酮類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.18-2023：獸藥制劑中非法添加7種大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.19-2023：獸藥制劑中非法添加5種多肽類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.20-2023：獸藥制劑中非法添加6種聚醚類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.21-2023：獸藥制劑中非法添加藥物泰妙菌素和沃尼妙林的測(cè)定；——T/HBIQA0001.22-2023：獸藥制劑中非法添加8種苯并咪唑類(lèi)藥物的測(cè)定；——T/HBIQA0001.23-2023：獸藥制劑中非法添加可樂(lè)定和賽庚啶的測(cè)定；——T/HBIQA0001.24-2023：獸藥制劑中非法添加3種林可酰胺類(lèi)藥物的測(cè)定。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專(zhuān)利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專(zhuān)利的責(zé)任。本文件由河北省檢驗(yàn)檢疫學(xué)會(huì)提出并歸口。本文件起草單位：石家莊海關(guān)技術(shù)中心、中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所、河北省生態(tài)環(huán)境監(jiān)測(cè)中心、河北省動(dòng)物微生態(tài)制劑產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院。本文件主要起草人：艾連峰、康占省、孫雷、李珊、王建昌、項(xiàng)佳林。T/HBIQA0001.16—20235.2溶液配制獸藥制劑中非法添加25種磺胺類(lèi)藥物的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件規(guī)定了獸藥制劑中非法添加25種磺胺類(lèi)藥物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)和確證方法。本文件適用于獸藥制劑中非法添加磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪、磺胺甲氧噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺異惡唑、磺胺苯酰、磺胺喹噁啉、磺胺醋酰、三甲氧芐氨嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺胍、磺胺惡唑、磺胺索嘧啶、磺胺（甲苯）吡唑、二甲氧芐氨嘧啶和二甲氧甲基芐氨嘧啶25種磺胺類(lèi)藥物含量的測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。中華人民共和國(guó)獸藥典。3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理試樣中的25種磺胺用乙腈提取，提取液經(jīng)稀釋?zhuān)靡合嗌V-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測(cè)，基質(zhì)標(biāo)外標(biāo)法定量。5試劑和材料5.1試劑除另有規(guī)定外，試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。5.1.1乙腈（CH3CN），色譜純。5.1.2甲醇（CH4O），色譜純。5.1.3甲酸（CH2O2），色譜純。T/HBIQA0001.16—20235.2.10.1%甲酸水溶液：量取1.0mL甲酸（5.1.3），用水定容至1000mL。5.2.20.1%甲酸水-乙腈溶液（9:1,v/v量取900mL0.1%甲酸水溶液（5.2.1加100mL乙腈（5.1.1）5.3標(biāo)準(zhǔn)品5.3.1磺胺嘧啶、磺胺噻唑、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺間甲氧嘧啶、磺胺甲二唑、磺胺對(duì)甲氧嘧啶、磺胺氯噠嗪標(biāo)準(zhǔn)品、磺胺甲氧噠嗪、磺胺鄰二甲氧嘧啶、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺異惡唑、磺胺苯酰、磺胺喹噁啉、磺胺醋酰、三甲氧芐氨嘧啶、磺胺苯吡唑、磺胺胍、磺胺惡唑、磺胺索嘧啶、磺胺（甲苯）吡唑、二甲氧芐氨嘧啶、二甲氧甲基芐氨嘧啶25種磺胺類(lèi)藥物，純度均大于等于95%，各化合物基本信息詳見(jiàn)附錄A表A.15.4標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制5.4.1標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL）：分別稱取25種磺胺標(biāo)準(zhǔn)品（5.3.1）各10mg（精確至0.1mg）于100mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）溶解，并定容至刻度，-20℃冷凍保存。5.4.2混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（1μg/mL準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（5.4.1）各0.10mL，置于10mL容量瓶中，用甲醇（5.1.2）稀釋至刻度，搖勻，配制成1μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間液，2℃~8℃冷藏保存。5.4.3基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作液的配制：準(zhǔn)確量取混合標(biāo)準(zhǔn)中間液（5.4.2用8.2中得到的空白基質(zhì)液進(jìn)行配制。5.5材料5.5.1微孔濾膜：0.22μm，有機(jī)系。6儀器和設(shè)備6.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子源（ESI）。6.2離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。6.3超聲波清洗器。6.4天平：感量為0.01g和0.1mg。7試樣制備與保存7.1試樣制備從原始樣品中取出部分有代表性樣品，片劑、顆粒等固體樣品，經(jīng)搗碎混勻后全部過(guò)三號(hào)篩，然后用四分法縮分出適量試樣，均分成兩份，裝入清潔容器內(nèi)，密封后作出標(biāo)記，一份作為試樣，一份作為留樣。液體樣品混勻后取出部分作為試樣，其余樣品作為留樣。7.2試樣保存按產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)規(guī)定的條件保存。注1：在取樣、制樣的操作過(guò)程中，應(yīng)防止樣品受到污染或發(fā)生分析物含量的變化。T/HBIQA0001.16—20238分析步驟8.1提取固體樣品：稱取試樣1.00g（精確到0.01g）置于50mL具塞離心管中，加乙腈提取液10mL，超聲20min，然后4000r/min離心5min。上清液過(guò)0.22μm濾膜后，再用0.1%甲酸水-乙腈溶液（5.2.2稀釋5倍，混合均勻過(guò)0.22μm濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。液體樣品：稱取試樣1.00g（精確到0.01g）置于10mL容量瓶中，直接加乙腈至約10mL，超聲20min，冷卻至室溫，然后用乙腈定容至刻度，混勻，移入離心管中，4000r/min離心5min。上清液過(guò)0.22μm濾膜后，再用0.1%甲酸水-乙腈溶液（5.2.2）稀釋5倍，混合均勻，過(guò)0.22μm濾膜后，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。8.2液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜參考條件8.2.1參考色譜條件a)色譜柱：KinetexF5，50mm×3.0mm，2.6μm，或相當(dāng)者；b)流動(dòng)相：0.1%甲酸水溶液（A）+乙腈（B），梯度洗脫，洗脫條件見(jiàn)表1；c)柱溫：25℃;d)進(jìn)樣量：10μL。表1梯度洗脫條件時(shí)間(min)流速(mL/min)AB00.40510.4050.4090.40400.4000.4050.4058.2.2參考質(zhì)譜條件a)離子化方式：電噴霧正離子掃描模式（ESI+）；b)質(zhì)譜掃描方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；c)其他參考質(zhì)譜條件見(jiàn)附錄A中的表A.1。8.3液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定8.3.1定性測(cè)定在同樣的測(cè)試條件下，試樣溶液的保留時(shí)間在基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時(shí)間±0.1min之內(nèi)保留時(shí)間小于2min的藥物，保留時(shí)間偏差在5%之內(nèi)）；試樣溶液中的離子相對(duì)豐度在基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液離子相對(duì)豐度±40%之內(nèi)。8.3.2定量測(cè)定T/HBIQA0001.16—2023取試樣溶液和相應(yīng)的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液，作單點(diǎn)或多點(diǎn)校準(zhǔn)。試樣溶液中待測(cè)物的響應(yīng)值應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)。在上述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜條件下，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液中各特征離子質(zhì)量色譜圖見(jiàn)附錄B。8.3.3空白實(shí)驗(yàn)除不加樣品外，按上述相同條件和步驟進(jìn)行。注2：化學(xué)獸藥制劑和非法添加的藥物可能會(huì)造成相應(yīng)項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)污染，應(yīng)加強(qiáng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境的控制以及所用器皿、儀器的維護(hù)清洗。9結(jié)果計(jì)算試樣中25種磺胺類(lèi)藥物的含量由色譜數(shù)據(jù)處理軟件計(jì)算，或按式（1）計(jì)算：X——試樣中被測(cè)物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；A——樣品溶液中被測(cè)物的峰面積；As——標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)物的峰面積；C——標(biāo)準(zhǔn)溶液中被測(cè)物的質(zhì)量濃度，單位為納克每毫升（ng/mL）；V1——提取溶劑總體積，單位為毫升（mL）；V2——吸取出用于凈化的提取溶液的體積，單位為毫升（mL）；V3——樣品溶液定容體積，單位為毫升（mL）；m——試料的質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字，當(dāng)結(jié)果大于1mg/kg時(shí)保留三位有效數(shù)字。10檢測(cè)方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和精密度10.1靈敏度本方法檢出限為0.05mg/kg，定量限為0.1mg/kg。10.2準(zhǔn)確度本方法對(duì)針劑、粉劑和酊劑中25種磺胺類(lèi)藥物在0.1mg/kg~1.0mg/kg添加濃度的回收率范圍為10.3精密度本方法相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差≤20%。T/HBIQA0001.16—2023參考質(zhì)譜條件參考質(zhì)譜條件1)：a)氣簾氣CUR：30psi；b)離子化電壓IS：5500V；c)源溫度：550℃;e)輔助加熱器GS2：60psi；f)噴撞氣CAD：中速；g)質(zhì)譜采集時(shí)間：0.7-9.0min；h)其他參數(shù)見(jiàn)表A.1。表A.1被測(cè)物的參考保留時(shí)間、監(jiān)測(cè)離子對(duì)和裂解能量物質(zhì)名稱英文名CAS號(hào)保留時(shí)間(min)母離子子離子碰撞電壓CE磺胺嘧啶Sulfadiazine68-35-93.01251.122251.1磺胺噻唑Sulfathiazole72-14-03.5625622256磺胺吡啶Sulfapyridine3.57250.123250.124磺胺甲基嘧啶Sulfamerazine4.01265.225265.225磺胺二甲嘧啶Sulfamethazine57-68-14.86279.127279.123磺胺間甲氧嘧啶Sulfamonomethoxine5.98281.125281.1磺胺甲二唑Sulfamethizole5.2127121271磺胺對(duì)甲氧嘧啶Sulfameter651-06-95.01281.125281.1磺胺氯噠嗪Sulfachloropyridazine80-32-05.61285.122285.1磺胺甲氧噠嗪Sulfamethoxypyridazine80-35-35.3528125281磺胺鄰二甲氧嘧啶Sulfadoxine2447-57-66.19311.11)非商業(yè)性聲明：附錄A所列參考質(zhì)譜條件是在ABSCIEX6500型液質(zhì)聯(lián)用儀上完成的，此處列出試驗(yàn)用儀器型號(hào)僅為提供參考，并不涉及商業(yè)目的，鼓勵(lì)標(biāo)準(zhǔn)使用者嘗試不同廠家或型號(hào)的儀器。T/HBIQA0001.16—2023物質(zhì)名稱英文名CAS號(hào)保留時(shí)間(min)母離子子離子碰撞電壓CE311.1磺胺二甲氧嘧啶Sulfadimethoxine7.72311.128311.1磺胺甲噁唑Sulfamethoxazole723-46-65.92254.122254.1磺胺異惡唑Sulfisoxazoleurazole6.25268.122268.125磺胺苯酰Sulfabenzamide6.63277.1277.1磺胺喹噁啉Sulfaquinoxaline59-40-57.79301.124301.1磺胺醋酰Sulphacetamide2.2421521529三甲氧芐氨嘧啶Trimethoprim738-70-55.25291.1291.1261磺胺苯吡唑Sulfaphenazole526-08-97.153152731522226磺胺胍Sulfaguanidine57-67-021521528磺胺惡唑Sulfamoxole729-99-76.25267.820267.820磺胺索嘧