高中生物選修一生物技術(shù)實(shí)踐知識(shí)點(diǎn)總結(jié)1、發(fā)酵：通過(guò)微生物技術(shù)的培養(yǎng)來(lái)生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過(guò)程。2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵無(wú)氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖酶孢子生殖4、在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。CHO＋6O→6CO+2122626酶5、在無(wú)氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。CHO→2CHOH＋2CO6、20℃左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時(shí)一般將溫度控制在18℃-25℃7、在葡萄酒自然發(fā)酵的過(guò)程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌。在發(fā)酵過(guò)程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長(zhǎng)繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無(wú)法適8、醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌(原核生物),代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂9、當(dāng)氧氣、糖源都充足時(shí)，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時(shí)，醋酸菌酶將乙醇變?yōu)橐胰?，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?CHOH+4O→CHCOOH＋6HO10、控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對(duì)氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時(shí)，即使只是短時(shí)間中斷通入氧氣，也會(huì)引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長(zhǎng)使發(fā)酵時(shí)間縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會(huì)。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。11、實(shí)驗(yàn)流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒(→醋酸發(fā)酵→12、酒精檢驗(yàn)：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來(lái)檢驗(yàn)。在——鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2mL，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的HSO滴，振蕩試3滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3管，觀(guān)察顏色是在酒精發(fā)、充氣口是在醋酸發(fā)酵時(shí)連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排13長(zhǎng)而酵時(shí)用來(lái)取樣的。排氣口要通過(guò)一個(gè)的；出料口是用來(lái)排出二氧化碳開(kāi)口向下防止空氣中微生物的污染。彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是使用該裝置制酒時(shí)，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時(shí)，應(yīng)該充的目的是有利于二氧化碳的排出。氣口連接氣泵，輸入氧氣。疑難解答）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？（1，以避免除去枝梗時(shí)引起葡萄破損，增加被雜菌污染的先沖洗，然后再除去枝梗應(yīng)該機(jī)會(huì)。2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？（如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進(jìn)行酒精消毒；每次排氣時(shí)只需擰松瓶蓋，不要完全揭開(kāi)瓶蓋等。～303）制葡萄酒時(shí)，為什么要將溫度控制在1825℃?制葡萄醋時(shí)，為什么要將溫度控制在35℃?℃左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控20溫度是酵母菌生長(zhǎng)和發(fā)酵的重要條件?！?因此要將溫度控35制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是適溫菌，最適生長(zhǎng)溫度為30～制在30～35℃。課題、多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是1。生殖方式是孢子生殖。營(yíng)腐生。毛霉是一種絲狀真菌。代謝類(lèi)型是異養(yǎng)需氧型毛霉生活。蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；2、原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。3、實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐上長(zhǎng)出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制4、釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進(jìn)行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。前期發(fā)酵的主要作用：1.創(chuàng)造條件讓毛霉生長(zhǎng)。2.使毛酶形成菌膜包住豆后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過(guò)程。通過(guò)各種輔料與酶的緩解作用，生成腐乳的香氣。水分過(guò)多則腐乳不易成形樣品水分含量（%）計(jì)算公式：(烘干前容器和樣品質(zhì)量-烘干后容器和樣品質(zhì)量)/烘干前樣品質(zhì)量并保持一定的溫度。來(lái)源：1.來(lái)自空氣中的毛霉孢子2.直接接種優(yōu)良毛霉菌種時(shí)間：些。加鹽腌制的時(shí)間約為8天左右。生長(zhǎng)，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過(guò)高會(huì)影響腐乳的口味變硬，在后期制作過(guò)程中不易酥爛3.調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌絲配制鹵湯：鹵湯直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。酒的作用：1.防止雜菌污染以防腐2.與有機(jī)酸結(jié)合形成酯，賦予腐乳風(fēng)的高低與腐乳后期發(fā)酵時(shí)間的長(zhǎng)短有很大關(guān)系，酒精含量越高，對(duì)蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長(zhǎng)；酒精含量過(guò)低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)香辛料的作用：1.調(diào)味作用2.殺菌防腐作用3.參與并促進(jìn)發(fā)酵過(guò)程防止雜菌污染：①用來(lái)腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶時(shí)，操作要迅速小心。整齊地?cái)[放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時(shí)，最好將瓶疑難解答．)利用所學(xué)的生物學(xué)知識(shí)，解釋豆腐長(zhǎng)白毛是怎么一回事？（1豆腐生長(zhǎng)的白毛是毛霉（）常吃的豆腐，哪種適合用來(lái)做腐乳？左右的豆腐適于作腐乳。用含水量高的豆腐這層“皮”是怎樣形成的呢？它對(duì)人體有（3害嗎？它的作用是什么？·制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代謝類(lèi)型是異養(yǎng)厭氧型。在無(wú)氧條為乳酸。分裂方式是二分裂。反應(yīng)式為：CHO2CHO+能量常見(jiàn)的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。·亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑?！ど攀持械膩喯跛猁}一般不會(huì)危害人體健康，國(guó)家規(guī)定30mg/kg，醬腌菜中不超過(guò)20mg/kg，嬰兒奶粉中不超過(guò)2mg/kg。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。*測(cè)定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對(duì)氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑）后，制成瓊——脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)，可以形成肉眼可見(jiàn)的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則常用于觀(guān)察微生物的運(yùn)動(dòng)及菌種保藏等。是用成分已知的化學(xué)培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培成，其中成分的種類(lèi)比例明確，常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。是指在培養(yǎng)。選擇培養(yǎng)基·按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基鑒別基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長(zhǎng)，促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)。是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒培養(yǎng)基別不同類(lèi)別的微生物?！づ囵B(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源、生長(zhǎng)因子等。等無(wú)機(jī)碳源；糖類(lèi)、石、NaHCO·碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO。油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳（無(wú)機(jī)氮源）蛋白、NON、NH、NH·氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如4233。只有固氮微生物才能利用N質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機(jī)氮源）等。乳酸桿pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)·培養(yǎng)基還要滿(mǎn)足微生物生長(zhǎng)對(duì)是需，培養(yǎng)細(xì)菌pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)菌時(shí)需要在培養(yǎng)基中添加維生素霉菌時(shí)須將培養(yǎng)基的的條件厭氧型微生物是則需要提供無(wú)氧要將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)下幾個(gè)方面：①對(duì)實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消精燈火焰附近進(jìn)行。③為避免周?chē)h(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在——④實(shí)驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周?chē)奈锲废嘟佑|?！o(wú)菌技術(shù)除了用來(lái)防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來(lái)微生物污染外，還答：無(wú)菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對(duì)人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對(duì)于一些不耐高溫劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線(xiàn)消毒。則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌滅菌灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。方法有接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；②玻璃器皿、金④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線(xiàn)滅菌法，所用器械是紫外燈。方法步驟2）倒平板操作的步驟：(①將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過(guò)火焰。③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開(kāi)一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)20mL基（約10～）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。。然后，將平板倒過(guò)來(lái)放置，使培養(yǎng)皿蓋在④等待平板冷卻凝固，大約需5~10min下、皿底在上?！さ蛊桨宀僮鞯挠懻撆囵B(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時(shí)，才能用來(lái)倒平板。你用什么辦法來(lái)估計(jì)培養(yǎng)基的溫度？1.盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺(jué)錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時(shí)，提示：可以用手觸摸就可以進(jìn)行倒平板了。為什么需要使錐形瓶的瓶口通過(guò)火焰？2.答：通過(guò)灼燒滅平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。在倒平板的過(guò)程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個(gè)平板還能用來(lái)培養(yǎng)微生物4.嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，的方法最常用的是平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法。（逐在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線(xiàn)的操作。將聚集的菌種）平板劃線(xiàn)法是通過(guò)接種環(huán)（2分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線(xiàn)后培養(yǎng)，可以分離到由一個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的肉眼步稀釋——可見(jiàn)的子細(xì)胞群體，這就是菌落。，然后將不同稀釋度的菌液分別涂）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作)用平板劃線(xiàn)法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個(gè)4細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個(gè)的菌落，以便于純化菌種。5（）平板劃線(xiàn)法操作步驟：接種環(huán)，并打開(kāi)棉放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻①將接種環(huán)————塞。③將試管口通過(guò)火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。⑤將試管通過(guò)火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開(kāi)一條縫隙，右手將沾有菌種的接培養(yǎng)皿。⑦灼燒接種種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線(xiàn)，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠崎_(kāi)始往第二區(qū)域內(nèi)劃線(xiàn)。重復(fù)以上操作，在三、末端環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線(xiàn)的。⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱不要將最后一區(qū)的劃線(xiàn)與第一區(qū)相連四、五區(qū)域內(nèi)劃線(xiàn)。注意操作的討論為什么在操作的第一步以及每次劃線(xiàn)之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線(xiàn)操作結(jié)束時(shí)，答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線(xiàn)前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線(xiàn)結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線(xiàn)加，使每次劃線(xiàn)留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線(xiàn)？2.答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3.在作第二次以及其后的劃線(xiàn)操作時(shí)，為什么總是從上一次劃線(xiàn)的末端開(kāi)始劃線(xiàn)？答：劃線(xiàn)后，線(xiàn)條末端細(xì)菌的數(shù)目比線(xiàn)條起始處要少，每次從上一次劃線(xiàn)始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線(xiàn)次數(shù)的增加而逐步減細(xì)菌繁殖而來(lái)的菌落?！賹⑼坎计鹘谑⒂芯凭臒?。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線(xiàn)與系列稀釋的無(wú)提示：應(yīng)從操作的各個(gè)細(xì)節(jié)保證“無(wú)菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離菌種的保存（1）對(duì)于頻繁使用的菌種，可以采用臨時(shí)保藏的方法。①臨時(shí)保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長(zhǎng)成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6個(gè)月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。②缺點(diǎn)：這種方法保存的時(shí)間不長(zhǎng)，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對(duì)于需要長(zhǎng)期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘——油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。疑難解答（1）生物的營(yíng)養(yǎng)人及動(dòng)物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、糖類(lèi)、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類(lèi)。植物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類(lèi)。微生物的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、無(wú)機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)五類(lèi)。（2）確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2天，無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。課題二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因?yàn)樗麄兡芎铣呻迕改蛩刈畛跏菑娜说哪蛞褐邪l(fā)現(xiàn)的篩選菌株（1）實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。（2）選擇性培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許特定種類(lèi)的微生物生長(zhǎng)，同時(shí)抑制或阻止其他種類(lèi)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)基，稱(chēng)作選擇培養(yǎng)基。（3）配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目（1）測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(zhǎng)的一個(gè)菌落，來(lái)源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌。通過(guò)統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測(cè)出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個(gè)平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌采用此方法的注意事項(xiàng)：1.一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)2.為了防止菌落蔓延，影響計(jì)數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC3.本法僅限于形成菌落的微生物（1）土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種潮濕、pH≈7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層?。?）樣品的稀釋?zhuān)簶悠返南♂尦潭葘⒅苯佑绊懫桨迳仙L(zhǎng)的菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌微生物的培養(yǎng)與觀(guān)察不同種類(lèi)的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時(shí)間。細(xì)菌30~37℃放線(xiàn)菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天每隔24小時(shí)統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時(shí)間不足而導(dǎo)致一樓菌落的數(shù)目。一般來(lái)說(shuō)，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、唯獨(dú)及培養(yǎng)時(shí)間），同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征（形狀、大小、隆起程度、顏色）疑難解答個(gè)平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均3統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì)．值每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積（mlM代表稀釋倍數(shù)課題三分解纖維素的微生物的分離纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐質(zhì)?！w維素與纖維素酶（1）棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也（2）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C酶、C酶和葡萄糖苷前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長(zhǎng)提供營(yíng)養(yǎng)。纖維素分解菌的篩選（1）篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過(guò)顏色反應(yīng)直接對(duì)微生物進(jìn)行篩——（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們?cè)诤欣w維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時(shí)，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無(wú)法形成，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過(guò)是否產(chǎn)生透明圈來(lái)篩選纖維素分解菌。分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來(lái)確定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落（1）土壤采集選擇富含纖維素的環(huán)境。（2）剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板（3）剛果紅染色法種類(lèi)一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時(shí)就加入剛果紅?！n題延伸對(duì)分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測(cè)定方法，一般是對(duì)纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖疑難解答由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對(duì)提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)（2）將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對(duì)聚集，實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤（3）兩種剛果紅染色法的比較方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會(huì)使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點(diǎn)是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，不存在菌落混雜問(wèn)題，缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類(lèi)物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽(yáng)性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點(diǎn)是：有些微生物具有降解色素的能力，它們?cè)陂L(zhǎng)時(shí)間培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營(yíng)養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。植物組織培養(yǎng)的基本過(guò)程細(xì)胞分化：在生物個(gè)體發(fā)育過(guò)程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過(guò)程?！x體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時(shí)間以后，會(huì)通過(guò)細(xì)胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無(wú)規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無(wú)定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過(guò)程，稱(chēng)為植物細(xì)胞的脫分化，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個(gè)過(guò)程叫做再分化。再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的植物體。植物細(xì)胞工程具有某種生物全套遺傳信息的任何一個(gè)活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個(gè)體的能力，即每個(gè)生物細(xì)胞都具有全能性。但在生物體的生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中并不表現(xiàn)出來(lái)，這是因?yàn)樵谔囟ǖ臅r(shí)mm植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有：實(shí)現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖；培育脫毒作物；胞產(chǎn)物的工廠(chǎng)化生產(chǎn)等?！苟嗉?xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT(mén)化，有利于提高各種生理功能比較根尖分生組織和愈傷組織的異同組織類(lèi)細(xì)胞來(lái)源細(xì)胞形細(xì)胞結(jié)細(xì)胞排細(xì)胞去向型態(tài)構(gòu)列根尖受精卵高正方無(wú)液泡緊密分化成多種影響植物組織培養(yǎng)的條件分生組織不同的植物組織，培養(yǎng)的難差別很大。植物材料直接關(guān)系到試驗(yàn)的成度分化形高度液泡細(xì)胞組織再分化成新愈傷組敗。植物的種類(lèi)、材料的年齡和保存時(shí)間的長(zhǎng)短等都會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開(kāi)花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來(lái)說(shuō)，容易進(jìn)行無(wú)性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長(zhǎng)旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分——營(yíng)養(yǎng)：離體的植物組織和細(xì)胞，對(duì)營(yíng)養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對(duì)特殊，需要配制適宜的培，微量元Mg、Ca、K、S、P、N培養(yǎng)基，其中含有的大量素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖激素：植物激素中生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素是啟動(dòng)細(xì)胞分裂、脫分化和再分化在生長(zhǎng)素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢(shì)。在培養(yǎng)基中需要添加生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量環(huán)生長(zhǎng)素／細(xì)胞分裂素比值與結(jié)實(shí)驗(yàn)結(jié)果使用順序境果有利于分裂但不分細(xì)胞分，先生長(zhǎng)素后條促根分化，抑芽形裂素化比值高時(shí)件成生后素分細(xì)先胞裂，細(xì)胞既分裂也分化：促芽分化，抑根形長(zhǎng)素比值低時(shí)PH成分化頻率提高同時(shí)使用、促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)比值適中溫度、光等環(huán)境條件。左不同的植物對(duì)各種條件的要求往往不同。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)，一般將控制在5.8pH.每日用日光燈4、操作流程（培養(yǎng)基母MS配制固體培養(yǎng)基濃縮液：配制各種母液：有機(jī)物和植物激素的·配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入的物質(zhì)有并用蒸餾水定容到母液1000——?？梢圆惶砑又参锛に卦蚴蔷栈ㄇo——培養(yǎng)基中各種營(yíng)養(yǎng)物素和微量元素提供植物細(xì)胞所必需的無(wú)機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿(mǎn)足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營(yíng)養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)。外植體的消毒外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時(shí)，要取生長(zhǎng)旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中搖動(dòng)2~3次，持續(xù)6~7s，立即將外植體取出，在無(wú)菌水中清洗。取出后仍用無(wú)菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中1~2min。取出后，在無(wú)菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。注意：對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒時(shí)，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植接種：接種過(guò)程中插入外植體時(shí)形態(tài)學(xué)上端朝上，每個(gè)錐形瓶接種7～8個(gè)外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無(wú)菌和光照（12h）移栽：栽前應(yīng)先打開(kāi)培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長(zhǎng)幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過(guò)毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時(shí)間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。栽培外植體在培養(yǎng)過(guò)程中可能會(huì)被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。被子植物的花粉發(fā)育被子植物的雄蕊通常包含花絲、花藥兩部分。花藥為囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)部含有許多花粉。花粉是由花粉母細(xì)胞經(jīng)過(guò)減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖——花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時(shí)期、單核期和雙核期等階段。在小孢子在一起，進(jìn)入單核期時(shí)，四分體的4個(gè)單倍體細(xì)胞彼此分離，形成4個(gè)具核居中期）。隨著細(xì)胞不斷長(zhǎng)大，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)（單核靠邊殖細(xì)胞，一個(gè)是營(yíng)養(yǎng)細(xì)胞。生殖細(xì)胞將在分裂一次，形成兩個(gè)精子。注意：①成熟的花粉粒有兩類(lèi)，一類(lèi)是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核，二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的；另一類(lèi)是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖細(xì)胞就進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，此花粉粒中含有兩個(gè)精子核和一個(gè)花粉管核（營(yíng)養(yǎng)核）②花粉發(fā)育過(guò)程中的四分體和動(dòng)物細(xì)胞減數(shù)分裂的四分體不同?；ǚ郯l(fā)育過(guò)程中的四分體是花粉母細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂形成的4個(gè)連在一起的單倍體細(xì)胞；而動(dòng)物細(xì)胞減數(shù)分裂過(guò)程中的四分體是聯(lián)會(huì)配對(duì)后的一對(duì)同源染色體，由于含有四條染色單體而稱(chēng)為四分體。③同一生殖細(xì)胞形成的兩個(gè)精子，其基因組產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過(guò)花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑之間并沒(méi)有絕對(duì)的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類(lèi)及其濃度配比。注意：①無(wú)論哪種產(chǎn)生方式，都要先誘導(dǎo)生芽，再誘導(dǎo)生根②胚狀體：導(dǎo)產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚非常類(lèi)似的結(jié)構(gòu)，其發(fā)育也與受精卵發(fā)育成的胚類(lèi)似，有胚芽、胚根、胚軸等完整結(jié)構(gòu)，就像一粒種子，又稱(chēng)為影響花藥培養(yǎng)的因素誘導(dǎo)花粉能否成功及誘導(dǎo)成功率的高低，受多種因素影響，其中材料——的選擇與培養(yǎng)基的組成是主要的影響因素·親本的生理狀況：花粉早期是的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株，選·合適的花粉發(fā)育時(shí)期：一般來(lái)說(shuō)，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高·親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度等對(duì)誘導(dǎo)成功率都有一定影響·材料的選?。哼x擇花藥時(shí)，一般要通過(guò)鏡檢來(lái)確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期?！_定花粉發(fā)育時(shí)期的最常用的方法是醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著藍(lán)黑色色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成·材并立即將花藥接種到培（否則接種后容易從受傷部位長(zhǎng)生愈傷組盡量不損傷花藥養(yǎng)基上。在剝離花藥時(shí)，要，因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成，徹底去除花絲織同時(shí)還要幼小植株形成后才需不需要光照.左右7通常每瓶接種花藥～10個(gè),培養(yǎng)溫度控制在25℃,長(zhǎng)出愈傷組織或形成胚狀體。將愈傷會(huì)發(fā)現(xiàn),花藥開(kāi)裂,要光照.一般經(jīng)過(guò)20～30天培養(yǎng)后組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。如果花藥開(kāi)裂釋放出胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開(kāi)裂后盡快將幼小植株分開(kāi)，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開(kāi)。還需要對(duì)培養(yǎng)出來(lái)的植株做進(jìn)一步的鑒定和篩選。植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無(wú)菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于：花藥需事先摸索時(shí)期適宜的花蕾；花藥裂開(kāi)后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時(shí)更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對(duì)培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。DNA和蛋白質(zhì)技術(shù)專(zhuān)題五DNA的粗提取與鑒定課題一DNA的溶解性原理包括哪些方面？·提取不溶于酒精。DNADNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；需要使溶解，溶液中溶解度有何特點(diǎn)？要用什么濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？溶解；在DNA0.14mol/L時(shí)溶解度最小；較高濃度可使可使DNA析出。0.14mol/L分子析出的方法是向DNA時(shí)，人們通常選用·在溶解細(xì)胞中的DNA2mol/LNaCl溶液；將溶液。酒精是一種常用有機(jī)溶劑，溶液中緩慢注入蒸餾水，以稀釋NaClNaClDNA溶有的％冷卻酒精但細(xì)胞中蛋白質(zhì)可溶于酒精。95卻不能溶于酒精（特別是DNA但．防止DNA降解；二是降低分子運(yùn)動(dòng)，易于形成沉淀析出；三是低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。將DNA和蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。·提取DNA還可以利用DNA對(duì)酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理。利用該原溫度值為60～80℃,因?yàn)樵摐囟戎档鞍踪|(zhì)變性沉淀，而DNA不會(huì)變性。補(bǔ)充：DNA的變性是指DNA分子在高溫下解螺旋，其溫度在80℃以上，如在PCR技術(shù)中DNA變性溫度在95℃。洗滌劑將細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，從而瓦解細(xì)胞膜。在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色。原理總結(jié)：通過(guò)利用不同濃度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以從細(xì)