實驗動物學(xué)腫瘤生物學(xué)研究方案一、實驗動物學(xué)腫瘤生物學(xué)研究方案概述

腫瘤生物學(xué)研究是探索癌癥發(fā)生、發(fā)展和治療的重要領(lǐng)域。實驗動物模型在腫瘤研究中具有不可替代的作用，能夠模擬人類腫瘤的病理生理過程，評估藥物療效和機(jī)制。本方案旨在建立一套系統(tǒng)化的實驗動物腫瘤生物學(xué)研究流程，涵蓋模型構(gòu)建、實驗操作、數(shù)據(jù)分析等關(guān)鍵環(huán)節(jié)，確保研究結(jié)果的科學(xué)性和可靠性。

二、實驗動物模型的選擇與構(gòu)建

（一）模型選擇原則

1.實驗?zāi)康拿鞔_：根據(jù)研究需求選擇合適的腫瘤模型（如遺傳背景、腫瘤類型等）。

2.動物物種與品系：常用小鼠、大鼠，根據(jù)腫瘤特異性選擇近交系或轉(zhuǎn)基因品系。

3.可重復(fù)性：優(yōu)先選擇標(biāo)準(zhǔn)化模型，確保實驗結(jié)果的可比性。

（二）常見腫瘤模型構(gòu)建方法

1.遺傳性腫瘤模型：

(1)轉(zhuǎn)基因小鼠：通過顯微注射或胚胎干細(xì)胞技術(shù)導(dǎo)入致癌基因（如Kras、Trp53突變）。

(2)敲除小鼠：利用CRISPR技術(shù)敲除抑癌基因（如PTEN）。

2.化學(xué)誘導(dǎo)模型：

(1)甲基化氮雜環(huán)氧化物（MNNG）誘導(dǎo)胃腫瘤。

(2)7,12-二甲基苯并蒽（DMBA）誘導(dǎo)皮膚或乳腺腫瘤。

3.物理誘導(dǎo)模型：

(1)紫外光照射誘導(dǎo)皮膚黑色素瘤。

(2)甲基亞硝基脲（MNU）誘導(dǎo)白血病。

三、實驗操作流程

（一）實驗準(zhǔn)備

1.動物設(shè)施：使用SPF級動物房，保持溫度（20±2℃）、濕度（40%-60%）和通風(fēng)。

2.實驗分組：隨機(jī)分為對照組和實驗組，每組10-20只，記錄動物編號、性別、體重。

3.藥物與試劑：確保試劑純度≥98%，藥物濃度根據(jù)文獻(xiàn)和預(yù)實驗確定（如抗癌藥物劑量范圍50-500mg/kg）。

（二）實驗實施步驟

1.腫瘤建立：

(1)移植瘤模型：皮下注射癌細(xì)胞懸液（細(xì)胞密度1×10^6-1×10^7/mL）。

(2)腹水瘤模型：腹腔注射癌細(xì)胞懸液（1×10^8/mL）。

2.干預(yù)措施：

(1)藥物處理：每日灌胃或腹腔注射（體積≤10%體重）。

(2)免疫治療：聯(lián)合使用PD-1抑制劑（劑量0.1-1mg/kg）。

3.監(jiān)測指標(biāo)：

(1)腫瘤體積測量：每周用游標(biāo)卡尺記錄長徑（a）和短徑（b），計算體積（V=0.5ab^2）。

(2)生存期觀察：記錄動物存活時間，繪制Kaplan-Meier生存曲線。

（三）樣本采集與分析

1.樣本類型：腫瘤組織、血清、骨髓等。

2.采集方法：麻醉后無菌條件下取材，腫瘤組織用10%甲醛固定。

3.檢測技術(shù)：

(1)免疫組化（IHC）：檢測Ki-67、p53等蛋白表達(dá)。

(2)WesternBlot：分析信號通路蛋白（如AKT、Erk）。

四、數(shù)據(jù)分析與結(jié)果解讀

（一）統(tǒng)計方法

1.腫瘤生長曲線：使用GraphPadPrism計算IC50值（抑制率50%的劑量）。

2.生存分析：采用Log-rank檢驗比較組間差異（P<0.05為顯著）。

（二）結(jié)果呈現(xiàn)

1.表格：列出各組腫瘤體積、體重變化等數(shù)據(jù)。

2.圖表：繪制柱狀圖（比較藥物組與對照組）、折線圖（展示動態(tài)變化）。

五、質(zhì)量控制與倫理要求

（一）實驗規(guī)范

1.動物福利：遵循3R原則（替代、減少、優(yōu)化），減少非必要操作。

2.數(shù)據(jù)記錄：使用電子表格記錄所有實驗參數(shù)，避免手寫。

（二）安全防護(hù)

1.操作防護(hù)：佩戴手套、口罩，實驗后用75%酒精消毒。

2.廢物處理：腫瘤組織等生物樣本需高壓滅菌后焚燒。

六、方案總結(jié)

本方案通過標(biāo)準(zhǔn)化模型構(gòu)建、規(guī)范化操作和科學(xué)數(shù)據(jù)分析，為腫瘤生物學(xué)研究提供可靠工具。后續(xù)可結(jié)合基因組測序、代謝組學(xué)等技術(shù)，進(jìn)一步深化機(jī)制研究。

**三、實驗操作流程**

（一）實驗準(zhǔn)備

1.**動物設(shè)施與環(huán)境控制：**

*使用符合標(biāo)準(zhǔn)的SPF（SpecificPathogen-Free，無特定病原體）級動物屏障系統(tǒng)，包括獨立的通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)（HVAC）、過濾系統(tǒng)（初效、中效、高效過濾器）、獨立的飼料和飲水供應(yīng)系統(tǒng)。

*確保動物房溫度維持在20±2℃，相對濕度控制在40%-60%，保持空氣流通，換氣次數(shù)≥15次/小時。

*照明模擬自然光周期，12小時明/12小時暗，光照強度均勻且穩(wěn)定。

*定期進(jìn)行環(huán)境監(jiān)測，包括空氣潔凈度、微生物指標(biāo)（如細(xì)菌總數(shù)、真菌總數(shù)、支原體、螺旋體等）、壓力梯度等，確保持續(xù)符合SPF級標(biāo)準(zhǔn)。

*動物飼養(yǎng)籠具材質(zhì)符合生物安全要求，易于清潔和消毒，定期（如每周至少一次）進(jìn)行籠具清洗、消毒（如使用70%乙醇噴灑或浸泡）和干燥。

2.**實驗動物選擇與接收：**

*根據(jù)具體的腫瘤模型和研究目的，選擇合適的實驗動物物種（常用小鼠、大鼠）和品系（如近交系、轉(zhuǎn)基因品系、突變品系）。明確動物的遺傳背景、性別比例（通常為雌雄各半或根據(jù)研究需要調(diào)整）、年齡范圍（如6-8周齡）和體重范圍（如雌性20-25g，雄性30-35g，具體根據(jù)品系調(diào)整）。

*從信譽良好的供應(yīng)商處采購動物，索取動物來源證明、遺傳背景檢測報告和檢疫合格證明。

*動物運抵后，在隔離觀察室（IsolationRoom）飼養(yǎng)至少1-2周，進(jìn)行健康檢查和適應(yīng)性喂養(yǎng)，觀察其行為、飲食、飲水、糞便等狀態(tài)，確保動物健康無異常后方可移入實驗飼養(yǎng)區(qū)。

3.**實驗分組與標(biāo)識：**

*根據(jù)實驗設(shè)計（如對照組、不同劑量藥物組、不同干預(yù)組）和樣本量要求，進(jìn)行隨機(jī)分組。推薦使用隨機(jī)數(shù)字表或統(tǒng)計軟件進(jìn)行分組，以保證分組的隨機(jī)性和均衡性。

*每組動物數(shù)量應(yīng)充足，通常每組至少需要10只動物，以考慮個體差異和實驗結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)可靠性。建議設(shè)置2-3個平行組。

*對每只動物進(jìn)行唯一標(biāo)識，常用方法包括：耳緣打孔、植入微芯片、剪尾號等。標(biāo)識應(yīng)清晰、持久、不影響動物生理狀態(tài)。

4.**飼料與飲水管理：**

*使用符合實驗動物營養(yǎng)需求的標(biāo)準(zhǔn)化全價飼料（如SPF級飼料），確保飼料來源穩(wěn)定、質(zhì)量合格，包裝完好，防止污染。開封后的飼料需儲存在干燥、清潔、避光的飼料柜中，并標(biāo)注開封日期。

*提供清潔、衛(wèi)生的飲用水，通常使用去離子水或純化水，通過自動飲水器供應(yīng)。定期檢查飲水系統(tǒng)，確保供水暢通和水質(zhì)符合要求。

5.**試劑與藥物準(zhǔn)備：**

*根據(jù)實驗方案，準(zhǔn)備所有所需的試劑和藥物。確保試劑純度符合實驗要求（通?！?8%或更高），并查閱其安全數(shù)據(jù)說明書（SDS）。

*藥物需從正規(guī)渠道購買，具有完整的批號和效期信息。如需配制，應(yīng)嚴(yán)格遵循說明書或文獻(xiàn)方法，使用精確的稱量儀器（如萬分之一分析天平）和溶劑（如生理鹽水、DMSO等）。配制好的藥物需精確計算濃度和體積，并進(jìn)行無菌過濾（如0.22μm濾膜）。

*藥物儲存應(yīng)按照其理化性質(zhì)要求進(jìn)行，如避光、冷藏等。配制好的藥物應(yīng)標(biāo)注名稱、濃度、配制日期、有效期和操作人。

6.**實驗人員培訓(xùn)與準(zhǔn)備：**

*所有參與實驗操作的人員必須接受專業(yè)培訓(xùn)，內(nèi)容包括動物福利原則與操作規(guī)范（如抓取、保定、注射技術(shù)）、實驗動物解剖學(xué)、實驗方案理解、試劑藥物使用安全、生物安全防護(hù)措施、數(shù)據(jù)記錄方法等。

*熟悉并嚴(yán)格遵守實驗室的生物安全操作規(guī)程，根據(jù)操作涉及的風(fēng)險等級穿戴相應(yīng)的個人防護(hù)裝備（PPE），如實驗服、手套、護(hù)目鏡、口罩等。

（二）實驗實施步驟

1.**腫瘤模型建立：**

***皮下移植瘤模型（SubcutaneousXenograft）：**

*(1)**細(xì)胞準(zhǔn)備：**提前培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞，傳代至合適passages（如P2-P6），用胰蛋白酶消化后制成單細(xì)胞懸液。通過細(xì)胞計數(shù)板或細(xì)胞計數(shù)儀測定細(xì)胞濃度，用無血清培養(yǎng)基或生理鹽水調(diào)整細(xì)胞懸液濃度至所需范圍（常用1×10^6-1×10^7cells/mL）。

*(2)**麻醉：**對實驗動物進(jìn)行麻醉，常用方法有腹腔注射水合氯醛（如450-500mg/kg）、戊巴比妥（如35-50mg/kg）或吸入性麻醉劑（如異氟烷）。麻醉深度需適宜，以動物反應(yīng)消失、角膜反射遲鈍為準(zhǔn)。

*(3)**注射操作：**在動物背部或腋下等部位進(jìn)行無菌操作，選取合適大小的注射器（如1mL或0.5mL），在皮膚表面作小切口，將設(shè)定濃度的細(xì)胞懸液緩慢注入皮下形成的皮丘中。注射量通常為100-200μL。注射后輕輕按摩注射部位以促進(jìn)細(xì)胞擴(kuò)散。

*(4)**術(shù)后護(hù)理：**麻醉恢復(fù)后，觀察動物活動、呼吸是否正常。必要時給予抗生素預(yù)防感染（如連續(xù)3天肌注青霉素）。

***原位/自發(fā)腫瘤模型：**

*此類模型通?；谔囟ㄟz傳背景的腫瘤易感動物，在特定條件下（如化學(xué)誘導(dǎo)、病毒感染等）自然發(fā)生腫瘤。需根據(jù)具體品系和研究目的，按照文獻(xiàn)或標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程進(jìn)行誘導(dǎo)處理。例如，DMBA誘導(dǎo)皮膚癌需在動物皮膚涂布藥物后，配合紫外線照射。

***其他模型（如移植性白血病、腹水瘤等）：**遵循類似原則，根據(jù)具體模型類型調(diào)整細(xì)胞接種途徑（如尾靜脈注射、腹腔注射）和接種物濃度。

2.**干預(yù)措施實施：**

***藥物/化合物處理：**

*(1)**給藥途徑：**根據(jù)藥物性質(zhì)和作用靶點選擇合適的給藥途徑，常用方法包括：

***灌胃（Gavage）：**適用于口服藥物。需準(zhǔn)備灌胃針，掌握正確的保定方法和灌胃量（一般不超過10%體重）。動作需輕柔，避免損傷食道。

***腹腔注射（IP）：**適用于需要快速起效或避免首過效應(yīng)的藥物。常用部位為下腹壁，刺入腹腔后回抽無氣體，再緩慢注入藥物。

***皮下注射（SC）：**適用于需要持續(xù)釋放的藥物。選擇后肢或肩部皮下脂肪豐富處進(jìn)針。

***靜脈注射（IV）：**適用于需要直接進(jìn)入血液循環(huán)的藥物。常用尾靜脈，需練習(xí)定位和穿刺技巧。

***局部給藥：**如涂抹于皮膚、注射于關(guān)節(jié)腔等。

*(2)**給藥劑量與頻率：**嚴(yán)格按照實驗方案設(shè)定的劑量和給藥頻率進(jìn)行操作。劑量通常以mg/kg體重表示。確保每天給藥時間相對固定。

*(3)**溶劑選擇：**藥物溶解或稀釋的溶劑需對實驗動物和腫瘤無明顯毒性。常用生理鹽水、DMSO（溶解脂溶性藥物）、PBS等。注意DMSO濃度一般不超過1%-5%。

***其他干預(yù)：**

***免疫治療/疫苗：**如使用抗體進(jìn)行被動免疫或細(xì)胞因子進(jìn)行調(diào)節(jié)，需遵循相應(yīng)的給藥方案（如IP注射抗體，皮下注射細(xì)胞因子）。

***基因治療：**如使用病毒載體進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)，需進(jìn)行載體制備、動物麻醉、注射操作（如肌肉注射、瘤內(nèi)注射）等。

***飲食干預(yù)：**如給予特定成分的飼料或水溶液，需精確配制并確保動物攝入。

3.**腫瘤監(jiān)測與生長評估：**

***監(jiān)測頻率：**定期（通常每周1-2次）對腫瘤生長情況進(jìn)行測量和記錄。監(jiān)測應(yīng)在固定時間、由同一人操作，以減少人為誤差。

***測量方法（皮下移植瘤）：**

*(1)使用游標(biāo)卡尺分別測量腫瘤的長度（a）和最大寬度（b），精確到0.1mm。

*(2)計算腫瘤體積（V）：使用公式V=0.5×a×b2。記錄測量結(jié)果及腫瘤外觀變化（大小、硬度、顏色、有無破潰等）。

*(3)對于體積過大的腫瘤，需注意防止其對動物正常生理功能（如呼吸、進(jìn)食）造成嚴(yán)重影響。

***其他評估指標(biāo)：**

*(1)**腫瘤重量：**在動物處死前或處死時完整剝離腫瘤，用電子天平稱重，記錄數(shù)據(jù)。

*(2)**生存期觀察：**每日對實驗動物進(jìn)行觀察，記錄其行為狀態(tài)（如活動、進(jìn)食、飲水）、體重變化。詳細(xì)記錄每只動物的死亡時間。對于生存期較長的實驗，可能需要持續(xù)數(shù)周或數(shù)月。

*(3)**影像學(xué)監(jiān)測（可選）：**對于需要更精確或非侵入性監(jiān)測的模型，可使用活體成像系統(tǒng)（Bioluminescence或Fluorescence）或小動物CT、MRI等進(jìn)行定期掃描，評估腫瘤負(fù)荷和分布。

***數(shù)據(jù)記錄：**設(shè)計標(biāo)準(zhǔn)化記錄表格，詳細(xì)記錄每次測量的日期、動物編號、腫瘤體積/重量、體重、動物狀態(tài)、麻醉用藥等所有相關(guān)信息。

4.**樣本采集與處理：**

***處死時機(jī)：**根據(jù)實驗設(shè)計（如腫瘤達(dá)到特定體積、動物出現(xiàn)嚴(yán)重癥狀、完成預(yù)定觀察期）確定處死時機(jī)。處死方法需符合動物福利要求，常用方法有二氧化碳窒息、過量麻醉劑注射等，需由經(jīng)過培訓(xùn)的人員操作。

***樣本選擇：**根據(jù)后續(xù)實驗?zāi)康?，選擇采集相應(yīng)的樣本，最常見的是腫瘤組織、血清、骨髓、脾臟、肝臟、淋巴結(jié)等。

***腫瘤組織處理：**

*(1)**原位固定：**對于需要做病理組織的腫瘤，需立即用10%中性緩沖甲醛（NBF）溶液進(jìn)行原位固定。固定時間通常為24-48小時，確保固定充分。

*(2)**稱重與保存：**稱量腫瘤濕重。部分樣本需立即用于后續(xù)實驗（如蛋白提取、RNA提?。?，部分需繼續(xù)固定或進(jìn)行冷凍保存（-80℃）。

***血清采集：**在處死前，對麻醉的動物進(jìn)行心臟采血或斷頭采血，血液收集于預(yù)冷的肝素化采血管或EDTA管中。靜置或離心（如3000rpm,10min,4℃）分離血清，分裝于EP管中，-20℃或-80℃凍存。

***其他器官/組織處理：**按需進(jìn)行固定、稱重、冷凍或液氮速凍保存。

***樣本標(biāo)識與記錄：**所有樣本必須清晰標(biāo)注動物編號、樣本類型、采集時間、處理方法和保存條件。詳細(xì)記錄樣本采集和處理過程。

（三）樣本采集與分析

1.**樣本類型詳述：**

***腫瘤組織：**是研究腫瘤生物學(xué)特性、發(fā)生機(jī)制、藥物作用靶點等的核心材料?？捎糜诓±韺W(xué)觀察（H&E染色）、免疫組化（IHC，檢測蛋白表達(dá)）、原位雜交（ISH）、WesternBlot（檢測蛋白表達(dá)與修飾）、RNA提?。╭PCR、RNA-Seq）、基因組測序（如NGS）等。

***血清：**富含多種生物活性分子（如生長因子、細(xì)胞因子、代謝物、藥物代謝產(chǎn)物），是進(jìn)行生化檢測、蛋白質(zhì)組學(xué)分析、抗體藥物療效評估、藥物動力學(xué)研究的重要樣本。

***骨髓：**可用于分析骨髓轉(zhuǎn)移情況、進(jìn)行細(xì)胞學(xué)分析、提取單個核細(xì)胞（MNC）進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析（檢測細(xì)胞表面標(biāo)志物、細(xì)胞周期、凋亡等）。

***脾臟/淋巴結(jié)：**可用于評估腫瘤的免疫微環(huán)境、分析免疫細(xì)胞浸潤情況、進(jìn)行免疫功能相關(guān)研究。

***肝臟：**可用于評估藥物代謝、肝功能指標(biāo)檢測、分析肝臟轉(zhuǎn)移情況。

2.**樣本采集方法細(xì)化：**

***腫瘤組織：**

*(1)**完整剝離：**對于皮下或原位腫瘤，在無菌條件下完整剝離腫瘤，避免擠壓和污染。

*(2)**多點取樣：**對于內(nèi)部結(jié)構(gòu)復(fù)雜的腫瘤或多發(fā)腫瘤，可進(jìn)行多點取樣以獲取更全面的樣本。

*(3)**新鮮組織：**部分實驗需新鮮組織，應(yīng)立即用于實驗或液氮速凍。

*(4)**冰凍樣本：**若需提取RNA或進(jìn)行某些蛋白質(zhì)實驗，應(yīng)在-80℃凍存。切片前需在-20℃預(yù)冷。

***血清：**

*(1)**心臟采血：**經(jīng)典方法，需打開胸腔，用預(yù)冷注射器從心臟抽取血液。注意止血。

*(2)**斷頭采血：**操作快速，將動物斷頭，血液自行流出或用毛細(xì)血管吸取。適用于需要快速處死或動物較小的情況。

***采血后處理：**立即顛倒混勻，室溫靜置30分鐘-1小時（允許紅細(xì)胞沉降），然后3000rpm離心10分鐘（4℃），小心分離上層血清，轉(zhuǎn)移至新的EP管。若需長期保存，建議-20℃或-80℃凍存。

***骨髓：**

*(1)**股骨穿刺：**常用方法。麻醉后，在股骨大轉(zhuǎn)子下方定位，用消毒針頭逐級擴(kuò)大骨膜，然后插入注射器吸取骨髓液?？芍貜?fù)抽取數(shù)次。

***其他部位：**如脛骨、肋骨等，根據(jù)實驗需求選擇。

***細(xì)胞處理：**吸取的骨髓液可立即用于流式細(xì)胞術(shù)（需加入抗凝劑如肝素），或離心分離單個核細(xì)胞（MNC）后凍存或用于其他實驗。

***脾臟/淋巴結(jié)：**麻醉后，在相應(yīng)解剖位置暴露并完整剝離。脾臟通常置于組織培養(yǎng)皿中，用無菌剪刀剪碎；淋巴結(jié)則根據(jù)大小選擇完整剝離或剪成小塊。

3.**檢測技術(shù)詳解：**

***免疫組化（IHC）：**

*(1)**樣本制備：**腫瘤組織經(jīng)10%NBF固定（24-48h），梯度乙醇脫水，石蠟包埋，制作4μm連續(xù)切片。

*(2)**染色流程：**脫蠟水化→蛋白質(zhì)抗原修復(fù)（如熱修復(fù)或酶修復(fù)）→內(nèi)源性過氧化物酶阻斷→非特異性結(jié)合位點封閉→一抗孵育（4℃過夜）→二抗孵育→生物素化酶/辣根過氧化物酶標(biāo)記→顯色（DAB或EnVision等系統(tǒng)）→復(fù)染（蘇木素）→脫水透明→封片。

*(3)**結(jié)果判讀：**在顯微鏡下觀察目標(biāo)抗原的表達(dá)位置（細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞膜）和強度（根據(jù)染色深淺分級）。使用已知陽性對照和陰性對照進(jìn)行質(zhì)控。

***WesternBlot：**

*(1)**樣本制備：**新鮮或凍存腫瘤組織稱重，加裂解緩沖液（含PMSF等蛋白酶抑制劑）勻漿，冰上裂解30分鐘，離心收集上清。使用BCA法測定蛋白濃度。

*(2)**電泳與轉(zhuǎn)膜：**上清液與LoadingBuffer混合，煮沸變性。進(jìn)行SDS（聚丙烯酰胺凝膠電泳）分離蛋白。電泳結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移到PVDF或NC膜上。

*(3)**封閉與孵育：**膜用TBST洗滌后，用5%脫脂奶粉或BSA封閉1-2小時。洗滌后，加入一抗（如兔抗人p53抗體，稀釋度1:1000），4℃孵育過夜。洗滌后，加入HRP標(biāo)記的二抗（如山羊抗兔IgG，稀釋度1:5000），室溫孵育1小時。洗滌后，加入化學(xué)發(fā)光底物（如ECL），使用化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)檢測條帶。

*(4)**結(jié)果分析：**使用內(nèi)參蛋白（如β-actin、GAPDH）進(jìn)行條帶灰度值標(biāo)準(zhǔn)化，比較不同實驗組蛋白表達(dá)水平的差異。

***其他技術(shù)（根據(jù)需要補充）：**

***qPCR：**用于檢測mRNA表達(dá)水平，需提取總RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行實時熒光定量PCR擴(kuò)增。

***RNA-Seq：**高通量測序技術(shù)，用于全面分析轉(zhuǎn)錄組，研究基因表達(dá)譜變化。

***流式細(xì)胞術(shù)：**分析細(xì)胞表面標(biāo)記、細(xì)胞周期、凋亡等表型。

***蛋白質(zhì)組學(xué)：**如質(zhì)譜（MS）技術(shù)，用于鑒定和定量腫瘤組織中的蛋白質(zhì)。

4.**數(shù)據(jù)分析與結(jié)果解讀：**

***定量分析：**使用ImageJ等軟件對IHC切片、WesternBlot條帶進(jìn)行半定量或定量分析。使用GraphPadPrism等統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。

***統(tǒng)計方法：**

*(1)**腫瘤生長曲線：**比較不同組間腫瘤體積/重量變化的差異，使用單因素方差分析（ANOVA）或t檢驗。繪制生長曲線，計算中位生存期（MST）。

*(2)**生存分析：*