2025年核酸檢測(cè)筆試題及答案

一、單項(xiàng)選擇題（共10題，每題2分，共20分）

1.核酸檢測(cè)的基本原理是：

A.檢測(cè)病毒表面的蛋白質(zhì)

B.檢測(cè)病毒的遺傳物質(zhì)

C.檢測(cè)人體產(chǎn)生的抗體

D.檢測(cè)病毒引起的炎癥反應(yīng)

2.RT-PCR技術(shù)中，"RT"代表的是：

A.ReverseTranscriptase（逆轉(zhuǎn)錄酶）

B.RealTime（實(shí)時(shí)）

C.ReactionTime（反應(yīng)時(shí)間）

D.RoomTemperature（室溫）

3.新冠病毒核酸檢測(cè)中最常檢測(cè)的靶基因是：

A.N基因

B.E基因

C.S基因

D.RdRp基因

4.核酸提取過程中，加入異丙醇的主要目的是：

A.滅活病毒

B.沉淀核酸

C.增加反應(yīng)體系穩(wěn)定性

D.提高檢測(cè)靈敏度

5.PCR反應(yīng)體系中，Taq酶的主要功能是：

A.逆轉(zhuǎn)錄RNA為DNA

B.擴(kuò)增DNA片段

C.標(biāo)記探針

D.降解雜質(zhì)

6.核酸檢測(cè)的Ct值是指：

A.循環(huán)閾值

B.臨界溫度

C.濃度閾值

D.時(shí)間閾值

7.以下哪種樣本不適合進(jìn)行新冠病毒核酸檢測(cè)：

A.咽拭子

B.血液

C.痰液

D.尿液

8.核酸檢測(cè)假陽性的主要原因可能是：

A.樣本中病毒載量過低

B.實(shí)驗(yàn)室污染

C.采樣不當(dāng)

D.試劑失效

9.在核酸檢測(cè)質(zhì)量控制中，陽性對(duì)照的作用是：

A.檢測(cè)樣本中是否存在目標(biāo)核酸

B.評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度

C.確保試劑有效性

D.以上都是

10.核酸檢測(cè)報(bào)告通常的有效期是：

A.24小時(shí)

B.48小時(shí)

C.72小時(shí)

D.7天

二、填空題（共5題，每題2分，共10分）

1.核酸檢測(cè)的"金標(biāo)準(zhǔn)"是指________技術(shù)。

2.PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟是變性、________和延伸。

3.新冠病毒是一種________病毒，其遺傳物質(zhì)為單股正鏈RNA。

4.核酸檢測(cè)中，內(nèi)參基因的作用是________。

5.核酸提取過程中，加入氯仿的目的是________。

三、判斷題（共5題，每題2分，共10分）

1.核酸檢測(cè)可以完全排除病毒感染的可能性。（）

2.所有病毒都可以通過核酸檢測(cè)進(jìn)行診斷。（）

3.核酸檢測(cè)的靈敏度與樣本中病毒載量成正比。（）

4.核酸檢測(cè)報(bào)告可以無限期使用。（）

5.核酸檢測(cè)過程中，只要操作規(guī)范，就不會(huì)出現(xiàn)假陽性結(jié)果。（）

四、多項(xiàng)選擇題（共2題，每題2分，共4分）

1.以下哪些因素會(huì)影響核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性？（）

A.樣本采集質(zhì)量

B.運(yùn)輸條件

C.保存時(shí)間

D.實(shí)驗(yàn)室環(huán)境

2.核酸檢測(cè)中常用的樣本類型包括（）

A.咽拭子

B.鼻拭子

C.血清

D.痰液

五、簡(jiǎn)答題（共2題，每題5分，共10分）

1.簡(jiǎn)述核酸檢測(cè)的基本流程。

2.解釋核酸檢測(cè)中Ct值的含義及其臨床意義。

參考答案及解析

一、單項(xiàng)選擇題

1.答案：B

解析：核酸檢測(cè)的基本原理是檢測(cè)病毒的遺傳物質(zhì)（RNA或DNA），而不是病毒表面的蛋白質(zhì)（如抗原檢測(cè)）或人體產(chǎn)生的抗體（如血清學(xué)檢測(cè)）。新冠病毒核酸檢測(cè)主要檢測(cè)其RNA基因組。

2.答案：A

解析：RT-PCR技術(shù)中，"RT"代表ReverseTranscriptase（逆轉(zhuǎn)錄酶），用于將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，然后再進(jìn)行PCR擴(kuò)增。RealTime（實(shí)時(shí)）是指實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)（qPCR）。

3.答案：A

解析：新冠病毒核酸檢測(cè)中最常檢測(cè)的靶基因是N基因（核衣殼蛋白基因），因?yàn)樗诓《净蚪M中相對(duì)保守且拷貝數(shù)較多，有利于提高檢測(cè)靈敏度。E基因、S基因和RdRp基因也是常見的檢測(cè)靶點(diǎn)。

4.答案：B

解析：在核酸提取過程中，加入異丙醇的主要目的是使核酸從溶液中沉淀出來，便于后續(xù)的洗滌和純化。氯仿用于去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，而乙醇也可用于沉淀核酸。

5.答案：B

解析：PCR反應(yīng)體系中，Taq酶是一種耐熱的DNA聚合酶，其主要功能是在引物的引導(dǎo)下，按照模板鏈的序列合成新的DNA片段，即擴(kuò)增DNA。逆轉(zhuǎn)錄功能由逆轉(zhuǎn)錄酶完成，探針標(biāo)記由專門的標(biāo)記酶完成。

6.答案：A

解析：Ct值（Cyclethreshold）是指在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，熒光信號(hào)達(dá)到預(yù)設(shè)閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。Ct值與樣本中目標(biāo)核酸的初始量成反比，Ct值越小表示病毒載量越高。

7.答案：D

解析：新冠病毒主要通過呼吸道傳播，因此咽拭子、鼻拭子、痰液等呼吸道樣本是理想的檢測(cè)樣本。血液樣本可用于血清學(xué)檢測(cè)，而尿液通常不用于新冠病毒核酸檢測(cè)。

8.答案：B

解析：核酸檢測(cè)假陽性的主要原因是實(shí)驗(yàn)室污染，包括樣本間的交叉污染、擴(kuò)增產(chǎn)物污染或試劑污染等。樣本中病毒載量過低會(huì)導(dǎo)致假陰性，采樣不當(dāng)和試劑失效也可能導(dǎo)致假陰性。

9.答案：D

解析：陽性對(duì)照在核酸檢測(cè)質(zhì)量控制中具有多重作用：檢測(cè)樣本中是否存在目標(biāo)核酸、評(píng)估檢測(cè)系統(tǒng)的靈敏度、確保試劑有效性等。陽性對(duì)照應(yīng)為已知含有目標(biāo)核酸的樣本。

10.答案：B

解析：根據(jù)國(guó)家衛(wèi)健委相關(guān)規(guī)定，新冠病毒核酸檢測(cè)報(bào)告通常的有效期為48小時(shí)。這是因?yàn)椴《据d量可能隨時(shí)間變化，且檢測(cè)結(jié)果可能受到采樣、運(yùn)輸?shù)榷喾N因素的影響。

二、填空題

1.答案：RT-PCR

解析：RT-PCR（逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)）技術(shù)是目前核酸檢測(cè)的"金標(biāo)準(zhǔn)"，具有高特異性和高靈敏度的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于病毒感染的診斷。

2.答案：退火

解析：PCR反應(yīng)的三個(gè)基本步驟是：①變性（高溫使DNA雙鏈解開為單鏈）；②退火（低溫使引物與模板DNA結(jié)合）；③延伸（適宜溫度下DNA聚合酶合成新的DNA鏈）。

3.答案：冠狀病毒

解析：新冠病毒（SARS-CoV-2）屬于冠狀病毒科，是一種具有包膜的正鏈RNA病毒，其遺傳物質(zhì)為單股正鏈RNA，長(zhǎng)約30kb。

4.答案：監(jiān)控實(shí)驗(yàn)過程質(zhì)量

解析：內(nèi)參基因（如人類基因β-actin、GAPDH等）在核酸檢測(cè)中作為對(duì)照，用于監(jiān)控樣本采集、核酸提取、PCR擴(kuò)增等實(shí)驗(yàn)過程的質(zhì)量，確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。

5.答案：去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì)

解析：在核酸提取過程中，加入氯仿（或酚:氯仿混合液）的目的是使蛋白質(zhì)變性并從水相中分離出來，從而去除樣本中的蛋白質(zhì)等雜質(zhì)，提高核酸純度。

三、判斷題

1.答案：×

解析：核酸檢測(cè)雖然具有高靈敏度，但仍存在假陰性的可能，如樣本采集不當(dāng)、病毒載量過低、試劑質(zhì)量問題等，因此不能完全排除病毒感染的可能性。

2.答案：×

解析：并非所有病毒都可以通過核酸檢測(cè)進(jìn)行診斷。對(duì)于某些病毒，如朊病毒（只有蛋白質(zhì)，沒有核酸），核酸檢測(cè)不適用。此外，某些病毒在血液中含量極低，直接核酸檢測(cè)可能靈敏度不足。

3.答案：√

解析：核酸檢測(cè)的靈敏度與樣本中病毒載量成正比。病毒載量越高，檢測(cè)到的可能性越大，Ct值越低；病毒載量越低，檢測(cè)難度越大，可能出現(xiàn)假陰性。

4.答案：×

解析：核酸檢測(cè)報(bào)告通常有有效期限制，一般為48小時(shí)。這是因?yàn)椴《据d量可能隨時(shí)間變化，且檢測(cè)結(jié)果可能受到采樣、運(yùn)輸?shù)榷喾N因素的影響，超過有效期后結(jié)果可能不準(zhǔn)確。

5.答案：×

解析：即使操作規(guī)范，核酸檢測(cè)仍可能出現(xiàn)假陽性結(jié)果，主要原因包括實(shí)驗(yàn)室污染（如樣本間的交叉污染、擴(kuò)增產(chǎn)物污染）、試劑污染等。因此，實(shí)驗(yàn)室需嚴(yán)格分區(qū)操作，并設(shè)置適當(dāng)?shù)膶?duì)照。

四、多項(xiàng)選擇題

1.答案：ABCD

解析：核酸檢測(cè)的準(zhǔn)確性受多種因素影響：樣本采集質(zhì)量（如采樣部位、深度、保存方式等）、運(yùn)輸條件（如溫度、時(shí)間等）、保存時(shí)間（樣本采集后至檢測(cè)的時(shí)間間隔）以及實(shí)驗(yàn)室環(huán)境（如溫度、濕度、潔凈度等）都會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。

2.答案：ABD

解析：新冠病毒核酸檢測(cè)常用的樣本類型包括咽拭子、鼻拭子、痰液等呼吸道樣本。血清主要用于抗體檢測(cè)，而不是核酸檢測(cè)。血液樣本可用于檢測(cè)病毒RNA，但靈敏度通常低于呼吸道樣本。

五、簡(jiǎn)答題

1.答案：

核酸檢測(cè)的基本流程包括：

(1)樣本采集：使用咽拭子、鼻拭子等采集患者呼吸道樣本；

(2)樣本運(yùn)輸：將樣本置于適當(dāng)?shù)谋４嬉褐?，并按?guī)定條件運(yùn)輸；

(3)核酸提?。簭臉颖局刑崛〔《綬NA；

(4)逆轉(zhuǎn)錄：將RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA；

(5)PCR擴(kuò)增：使用特異性引物擴(kuò)增目標(biāo)基因片段；

(6)結(jié)果判讀：根據(jù)擴(kuò)增曲線和Ct值判斷結(jié)果是否為陽性。

解析：核酸檢測(cè)是一個(gè)復(fù)雜的過程，從樣本采集到結(jié)果判讀需要多個(gè)步驟。每個(gè)步驟的質(zhì)量控制都至關(guān)重要，直接影響最終結(jié)果的準(zhǔn)確性。樣本采集應(yīng)確保足夠的病毒載量；核酸提取應(yīng)保證核酸的純度和完整性；PCR擴(kuò)增應(yīng)確保特異性和靈敏度；結(jié)果判讀應(yīng)結(jié)合臨床資料綜合判斷。

2.答案：

Ct值（Cyclethreshold）是指在實(shí)時(shí)熒光定量PCR中，熒光信號(hào)達(dá)到預(yù)設(shè)閾值時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。其臨床意義包括：

(1)Ct值與樣本中病毒載量成反比，Ct值越小表示病毒載量越高；

(2)Ct值可用于評(píng)估傳染性強(qiáng)弱，通常Ct值越低，傳染性越強(qiáng)；

(3)Ct