DB22T4152005熟食制品中山梨酸、苯甲酸的測定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了熟食制品中山梨酸、苯甲酸含量的測定方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于香腸、火腿、醬鹵肉、油炸肉制品等各類熟食制品中山梨酸、苯甲酸含量的測定。本標(biāo)準(zhǔn)中山梨酸的檢出限為0.005g/kg，定量限為0.015g/kg；苯甲酸的檢出限為0.005g/kg，定量限為0.015g/kg。2原理試樣經(jīng)甲醇水溶液提取，用高效液相色譜法分離，紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。根據(jù)保留時間定性，峰面積定量。3試劑與材料除非另有說明，本標(biāo)準(zhǔn)所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級水。3.1甲醇：色譜純。3.2乙酸銨：優(yōu)級純。3.3乙酸：優(yōu)級純。3.4山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99.0%。3.5苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99.0%。3.6甲醇水溶液（1+1）：將甲醇與水按體積比1:1混合均勻。3.7乙酸銨溶液（0.02mol/L）：稱取1.54g乙酸銨，溶于1000mL水中，用乙酸調(diào)節(jié)pH至4.5。3.8山梨酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱取0.1000g山梨酸標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100mL。3.9苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱取0.1000g苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)品，用甲醇溶解并定容至100mL。3.10混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別吸取山梨酸、苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液適量，用甲醇水溶液（1+1）稀釋成系列濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。4儀器與設(shè)備4.1高效液相色譜儀：配有紫外檢測器或二極管陣列檢測器。4.2分析天平：感量0.0001g和0.01g。4.3組織搗碎機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于10000r/min。4.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速不低于4000r/min。4.5旋渦混合器。4.6超聲波清洗器：功率不低于250W。4.7恒溫水浴鍋：控溫精度±1℃。4.8微孔濾膜：0.45μm，有機(jī)系。4.9容量瓶：10mL、25mL、50mL、100mL。4.10移液管：1mL、2mL、5mL、10mL。4.11具塞刻度試管：10mL、25mL。4.12離心管：50mL。5試樣制備與保存5.1取樣按GB/T9695.19規(guī)定的方法取樣，取樣量不少于500g。5.2試樣制備5.3試樣保存6分析步驟6.1試樣處理稱取5.00g（精確至0.01g）均勻試樣于50mL離心管中，加入20mL甲醇水溶液（1+1），用旋渦混合器混合1min，超聲提取20min，以4000r/min離心10min。將上清液轉(zhuǎn)移至25mL容量瓶中，用少量甲醇水溶液（1+1）洗滌殘?jiān)喜⑾匆?，用甲醇水溶液?+1）定容至刻度，搖勻。取適量溶液經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾，濾液供液相色譜分析。6.2.1色譜柱：C18柱，250mm×4.6mm，5μm，或相當(dāng)者。6.2.2流動相：甲醇乙酸銨溶液（0.02mol/L）（15+85）。6.2.3流速：1.0mL/min。6.2.4柱溫：30℃。6.2.5檢測波長：230nm。6.2.6進(jìn)樣量：10μL。6.3標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別吸取混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液10μL注入液相色譜儀，測定峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。6.4試樣測定取10μL試樣溶液注入液相色譜儀，測定峰面積，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出試樣溶液中山梨酸、苯甲酸的濃度。7結(jié)果計(jì)算7.1試樣中山梨酸、苯甲酸的含量按式（1）計(jì)算：X=(c×V×f)/m式中：X——試樣中山梨酸或苯甲酸的含量，單位為克每千克（g/kg）；c——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出的試樣溶液中山梨酸或苯甲酸的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；V——試樣溶液定容體積，單位為毫升（mL）；f——稀釋倍數(shù)；m——試樣質(zhì)量，單位為克（g）。計(jì)算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。8精密度8.1重復(fù)性在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。8.2再現(xiàn)性在再現(xiàn)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的15%。9回收率9.1山梨酸在添加濃度為0.05g/kg、0.10g/kg、0.50g/kg時，回收率范圍為85%~105%。9.2苯甲酸在添加濃度為0.05g/kg、0.10g/kg、0.50g/kg時，回收率范圍為85%~105%。10色譜圖圖1山梨酸、苯