一、目的規(guī)范無菌檢驗操作流程，保證檢驗結果的準確性、可靠性，為產品無菌性判定提供科學依據。二、適用范圍適用于[企業(yè)/機構名稱]的無菌檢查，涵蓋原料、半成品、成品及其他需無菌驗證的樣品（如醫(yī)療器械、生物制品等）。三、職責分工檢驗人員：嚴格遵循本指導書操作，如實記錄檢驗過程，確保操作合規(guī)、結果真實可追溯。復核人員：對檢驗流程及結果進行復核，確認操作符合要求、數據邏輯自洽。質量管理人員：監(jiān)督流程執(zhí)行，處理檢驗異常，審核檢驗報告并判定最終結論。四、檢驗依據現行《中華人民共和國藥典》（四部）<無菌檢查法>通則，結合產品質量標準、相關法規(guī)（如GMP、ISO____等）要求。五、儀器設備與材料（一）儀器設備無菌檢測儀（或薄膜過濾裝置）、雙溫區(qū)恒溫培養(yǎng)箱（30-35℃/20-25℃）、ClassII生物安全柜、高壓滅菌器、校準后pH計、電子天平（精度0.01g）。（二）材料與試劑培養(yǎng)基：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基（FT）、胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基（TSB）、真菌培養(yǎng)基（按需）；試驗菌：金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌（標準菌株，經復蘇/傳代驗證活性）；沖洗液：pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液、無菌純化水（適配樣品特性）；耗材：無菌濾膜（孔徑0.45μm/0.22μm）、注射器、移液管、培養(yǎng)管、封口膜等。六、環(huán)境要求無菌操作區(qū)：潔凈度達ISO5級（百級），操作前30分鐘開啟層流，每月監(jiān)測懸浮粒子、沉降菌（90mm培養(yǎng)皿，暴露30分鐘）。溫濕度：室溫20-25℃、濕度45%-65%；培養(yǎng)箱溫度波動≤±1℃。七、檢驗操作流程（一）培養(yǎng)基適用性檢查（每批必做）1.接種試驗菌：FT培養(yǎng)基：接種金黃色葡萄球菌（需氧）、生孢梭菌（厭氧，表面覆5mm液體石蠟），30-35℃培養(yǎng)；TSB培養(yǎng)基：接種銅綠假單胞菌、白色念珠菌，20-25℃培養(yǎng)。2.結果判斷：18-24小時（厭氧菌可延至48小時）內，試驗菌應生長良好（培養(yǎng)基渾濁、菌膜/菌落形成）；生長不良則重新制備培養(yǎng)基。（二）供試品處理優(yōu)先選擇薄膜過濾法（減少抑菌性干擾），特殊樣品（如無抑菌性、小體積）可采用直接接種法。1.直接接種法取供試品適量（液體10mL，固體研磨后加10mL稀釋液），直接接種至FT（2管，需氧/厭氧）和TSB（2管，需氧）培養(yǎng)基中。2.薄膜過濾法裝置組裝：生物安全柜內組裝過濾裝置，濾膜經121℃滅菌30分鐘（或用一次性無菌濾膜）。樣品過濾：供試品轉移至濾器，開啟真空泵過濾；若有抑菌性，過濾后用沖洗液（如pH7.0緩沖液）沖洗濾膜3次（每次100mL，流速≤100mL/min）。濾膜轉移：濾膜分2份，分別剪入FT（厭氧管覆石蠟）和TSB培養(yǎng)基中（真菌檢測另取濾膜接種真菌培養(yǎng)基）。（三）培養(yǎng)與觀察培養(yǎng)條件：FT（30-35℃，14天）、TSB（20-25℃，14天）；觀察頻率：每日觀察（第1、3、7、14天記錄），關注培養(yǎng)基渾濁、菌膜/菌落、顏色變化（如FT由紫變黃提示產酸）。疑似菌處理：發(fā)現菌生長時，取培養(yǎng)液涂片、革蘭染色鏡檢，初步判斷污染/供試品帶菌。八、結果判斷1.對照試驗：陽性對照（接種試驗菌）：培養(yǎng)基應生長良好（驗證方法有效性）；陰性對照（未接種培養(yǎng)基）：應無菌生長（驗證環(huán)境/耗材無污染）。2.供試品判定：供試品管（FT、TSB）均無菌生長，且對照合格→無菌檢查合格；供試品管有菌生長→排查操作污染（如環(huán)境監(jiān)測、耗材滅菌記錄）；排除污染則判不合格，懷疑污染可重新取樣檢驗（需說明原因）。九、異常情況處理污染處理：陰性對照/培養(yǎng)基適用性失敗時，停止檢驗，排查環(huán)境、耗材、培養(yǎng)基污染原因，整改后重新驗證。結果異常：供試品檢出菌時，結合生產過程（滅菌記錄、環(huán)境監(jiān)控）分析，必要時菌型鑒定，判斷固有菌/污染菌。十、記錄與報告（一）檢驗記錄記錄內容：樣品信息（批號、名稱）、檢驗日期、儀器編號、培養(yǎng)基批次、處理方法、觀察結果（含對照）、異常處理、檢驗人簽名。（二）檢驗報告報告格式：檢驗項目、依據標準、樣品信息、結果（含對照）、結論、復核/審核人簽名、報告日期。報告經質量部門審核后發(fā)放。十一、注意事項人員要求：檢驗人員經無菌操作培訓，考核合格上崗；操作時穿潔凈服、戴口罩/手套，避免人員污染。環(huán)境監(jiān)測：無菌室每周監(jiān)測沉降菌，每月監(jiān)測懸浮粒子、表面微生物（工作臺、設備表面）。設備維護：培養(yǎng)箱、高壓滅菌器每年校準，生物安全柜每半年檢測風速、高效過濾器。廢棄物處理：含菌廢棄物經121℃滅菌30分鐘后處理，避免生物安全風險。抑菌性驗證：樣品有抑菌性時，驗證沖洗次數（陽性對照回收率≥70%）。修訂