2025年生物技術(shù)應(yīng)用職業(yè)資格考試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（共20題，每題1.5分，共30分）1.下列關(guān)于CRISPRCas9基因編輯系統(tǒng)的描述中，錯(cuò)誤的是（）A.Cas9蛋白依賴向?qū)NA（gRNA）識別靶序列B.靶序列下游必須存在PAM序列（如NGG）C.可同時(shí)編輯多個(gè)基因位點(diǎn)D.只能用于原核生物的基因編輯2.在PCR擴(kuò)增反應(yīng)中，若引物二聚體大量形成，最可能的原因是（）A.模板DNA濃度過高B.引物濃度過高或設(shè)計(jì)不合理C.退火溫度過高D.Taq酶活性過低3.動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)中，為維持培養(yǎng)液pH穩(wěn)定，通常需通入（）A.O?B.N?C.CO?D.H?4.下列屬于次級代謝產(chǎn)物的是（）A.細(xì)菌的氨基酸B.酵母的乙醇C.青霉菌的青霉素D.大腸桿菌的蛋白質(zhì)5.重組蛋白在原核表達(dá)系統(tǒng)（如大腸桿菌）中常形成包涵體，主要原因是（）A.原核細(xì)胞缺乏內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體B.目標(biāo)蛋白表達(dá)量過低C.培養(yǎng)基營養(yǎng)不足D.誘導(dǎo)劑濃度過高6.用于檢測特定RNA分子的雜交技術(shù)是（）A.SouthernBlotB.NorthernBlotC.WesternBlotD.ELISA7.固定化酶與游離酶相比，優(yōu)勢不包括（）A.可重復(fù)使用B.穩(wěn)定性提高C.底物特異性改變D.便于產(chǎn)物分離8.合成生物學(xué)中，“生物磚”（BioBrick）的核心定義是（）A.具有特定功能的標(biāo)準(zhǔn)化DNA片段B.人工合成的完整基因組C.用于細(xì)胞融合的載體D.編碼熒光蛋白的基因9.植物體細(xì)胞雜交的關(guān)鍵步驟是（）A.原生質(zhì)體融合B.愈傷組織誘導(dǎo)C.試管苗移栽D.花粉培養(yǎng)10.下列關(guān)于單克隆抗體制備的描述，錯(cuò)誤的是（）A.需用抗原免疫小鼠以獲得B淋巴細(xì)胞B.細(xì)胞融合使用的是骨髓瘤細(xì)胞與B淋巴細(xì)胞C.篩選雜交瘤細(xì)胞需用HAT培養(yǎng)基D.單克隆抗體只能通過體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞獲得11.發(fā)酵過程中，若溶氧濃度持續(xù)低于臨界值，最可能導(dǎo)致（）A.菌體生長加快B.產(chǎn)物合成受阻C.培養(yǎng)基pH上升D.泡沫減少12.基因治療中，腺相關(guān)病毒（AAV）載體的主要優(yōu)點(diǎn)是（）A.感染分裂期細(xì)胞能力強(qiáng)B.免疫原性高C.可整合至宿主基因組D.安全性高且能感染非分裂細(xì)胞13.下列屬于第二代測序技術(shù)（NGS）的是（）A.Sanger測序B.納米孔測序C.邊合成邊測序（Illumina）D.單細(xì)胞測序14.工業(yè)生產(chǎn)中，利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)檸檬酸時(shí)，通常選用的菌種是（）A.枯草芽孢桿菌B.黑曲霉C.釀酒酵母D.大腸桿菌15.植物組織培養(yǎng)中，愈傷組織分化出根和芽的關(guān)鍵因素是（）A.光照強(qiáng)度B.培養(yǎng)基中生長素與細(xì)胞分裂素的比例C.溫度D.培養(yǎng)基滲透壓16.下列關(guān)于蛋白質(zhì)純化技術(shù)的描述，正確的是（）A.離子交換層析基于分子大小差異B.凝膠過濾層析基于電荷差異C.親和層析利用特異性分子間相互作用D.疏水層析適用于變性蛋白質(zhì)復(fù)性17.生物安全實(shí)驗(yàn)室中，BSL3級實(shí)驗(yàn)室的核心要求是（）A.普通開放實(shí)驗(yàn)臺B.全排式通風(fēng)系統(tǒng)，人員需穿防護(hù)服C.無需嚴(yán)格限制人員進(jìn)出D.僅需處理低致病性微生物18.用于檢測轉(zhuǎn)基因作物中外源基因表達(dá)產(chǎn)物的常用方法是（）A.PCRB.實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qPCR）C.WesternBlotD.基因組測序19.下列關(guān)于干細(xì)胞的描述，錯(cuò)誤的是（）A.胚胎干細(xì)胞具有全能性B.間充質(zhì)干細(xì)胞屬于多能干細(xì)胞C.誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（iPS）可通過體細(xì)胞重編程獲得D.成體干細(xì)胞只能分化為所在組織的細(xì)胞類型20.酶工程中，定向進(jìn)化技術(shù)的核心是（）A.理性設(shè)計(jì)酶的活性中心B.隨機(jī)突變結(jié)合高通量篩選C.固定化酶提高穩(wěn)定性D.克隆酶編碼基因二、多項(xiàng)選擇題（共10題，每題2分，共20分。每題至少有2個(gè)正確選項(xiàng)，錯(cuò)選、漏選均不得分）21.基因工程中常用的工具酶包括（）A.限制性核酸內(nèi)切酶B.DNA連接酶C.TaqDNA聚合酶D.逆轉(zhuǎn)錄酶22.動物細(xì)胞培養(yǎng)的基本條件包括（）A.無菌環(huán)境B.適宜的溫度（37℃左右）C.含血清的培養(yǎng)基D.5%CO?培養(yǎng)箱23.下列屬于發(fā)酵工程中過程控制參數(shù)的是（）A.溶氧（DO）B.攪拌轉(zhuǎn)速C.pHD.產(chǎn)物濃度24.植物基因工程中，常用的轉(zhuǎn)化方法有（）A.農(nóng)桿菌介導(dǎo)法B.基因槍法C.電穿孔法D.花粉管通道法25.蛋白質(zhì)工程的主要研究內(nèi)容包括（）A.分析蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系B.設(shè)計(jì)并改造蛋白質(zhì)的氨基酸序列C.克隆蛋白質(zhì)編碼基因D.提高蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性或活性26.生物制藥中，屬于治療性抗體的是（）A.單克隆抗體B.多克隆抗體C.納米抗體D.抗體藥物偶聯(lián)物（ADC）27.下列關(guān)于生物安全的描述，正確的是（）A.轉(zhuǎn)基因生物釋放需進(jìn)行環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)評估B.實(shí)驗(yàn)室廢棄物需分類處理（如高壓滅菌、化學(xué)消毒）C.BSL4級實(shí)驗(yàn)室可處理埃博拉病毒等高度危險(xiǎn)病原體D.個(gè)人防護(hù)裝備（PPE）僅在BSL3及以上實(shí)驗(yàn)室使用28.合成生物學(xué)的應(yīng)用領(lǐng)域包括（）A.人工合成微生物基因組B.設(shè)計(jì)生物傳感器C.生產(chǎn)可再生生物燃料D.構(gòu)建疾病模型細(xì)胞29.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的常見類型有（）A.直接法B.間接法C.雙抗體夾心法D.競爭法30.下列關(guān)于細(xì)胞工程的描述，正確的是（）A.植物體細(xì)胞雜交可克服遠(yuǎn)緣雜交不親和障礙B.動物細(xì)胞融合可用于制備單克隆抗體C.核移植技術(shù)可用于克隆動物（如多莉羊）D.干細(xì)胞培養(yǎng)需添加特定細(xì)胞因子維持未分化狀態(tài)三、判斷題（共10題，每題1分，共10分。正確填“√”，錯(cuò)誤填“×”）31.限制性內(nèi)切酶切割DNA時(shí)，只能識別并切割雙鏈DNA的特定回文序列。（）32.酵母雙雜交技術(shù)可用于研究蛋白質(zhì)與DNA的相互作用。（）33.發(fā)酵過程中，對數(shù)生長期的菌體代謝最旺盛，是產(chǎn)物合成的最佳時(shí)期。（）34.植物組織培養(yǎng)中，外植體需經(jīng)過嚴(yán)格消毒以避免微生物污染。（）35.基因治療中，病毒載體的免疫原性可能導(dǎo)致宿主產(chǎn)生排斥反應(yīng)。（）36.固定化酶的最適pH和最適溫度通常與游離酶相同。（）37.二代測序（NGS）的特點(diǎn)是高通量、短讀長，適合全基因組測序。（）38.動物細(xì)胞無血清培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)是成分明確、避免血清批次差異，但可能需添加生長因子。（）39.單倍體育種可通過花藥培養(yǎng)獲得，其優(yōu)點(diǎn)是縮短育種年限。（）40.生物信息學(xué)的核心是利用計(jì)算機(jī)技術(shù)分析生物數(shù)據(jù)（如基因組、蛋白質(zhì)組）。（）四、案例分析題（共2題，每題15分，共30分）案例1：重組人胰島素生產(chǎn)問題分析某生物制藥公司采用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)生產(chǎn)重組人胰島素，近期發(fā)現(xiàn)發(fā)酵后目標(biāo)蛋白表達(dá)量顯著下降，且純化后產(chǎn)物中雜蛋白比例升高。經(jīng)檢測，發(fā)酵液pH在對數(shù)生長期后期由7.0降至5.5，溶氧（DO）在誘導(dǎo)后3小時(shí)內(nèi)從30%降至10%以下。問題：（1）分析發(fā)酵過程中pH下降和溶氧不足的可能原因。（5分）（2）提出提高目標(biāo)蛋白表達(dá)量和降低雜蛋白的具體措施。（10分）案例2：基因編輯作物的安全性評價(jià)某公司研發(fā)了一種通過CRISPRCas9技術(shù)編輯的抗蟲水稻（目標(biāo)基因?yàn)锽t毒蛋白基因），需申請農(nóng)業(yè)轉(zhuǎn)基因生物安全證書。問題：（1）簡述該轉(zhuǎn)基因水稻需進(jìn)行的環(huán)境安全性評價(jià)內(nèi)容。（8分）（2）若檢測到編輯位點(diǎn)附近出現(xiàn)脫靶突變，應(yīng)如何處理？（7分）五、綜合應(yīng)用題（共1題，10分）設(shè)計(jì)一個(gè)利用植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)紫杉醇（一種抗癌次生代謝物）的工藝流程，要求包含以下關(guān)鍵步驟：細(xì)胞系篩選、培養(yǎng)基優(yōu)化、培養(yǎng)條件控制、產(chǎn)物提取與純化。需詳細(xì)說明各步驟的操作要點(diǎn)和注意事項(xiàng)。參考答案及解析一、單項(xiàng)選擇題1.D（CRISPRCas9可用于原核、真核生物的基因編輯）2.B（引物濃度過高或設(shè)計(jì)不合理易導(dǎo)致引物二聚體）3.C（CO?與培養(yǎng)基中的碳酸氫鹽緩沖體系維持pH）4.C（青霉素是青霉菌的次級代謝產(chǎn)物）5.A（原核細(xì)胞無內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，無法正確折疊真核蛋白）6.B（NorthernBlot用于RNA檢測）7.C（固定化酶的底物特異性通常不變）8.A（生物磚是標(biāo)準(zhǔn)化的功能DNA片段）9.A（原生質(zhì)體融合是體細(xì)胞雜交的關(guān)鍵）10.D（單克隆抗體也可通過小鼠腹腔注射雜交瘤細(xì)胞獲得）11.B（溶氧不足會抑制好氧微生物的代謝和產(chǎn)物合成）12.D（AAV載體安全性高，可感染非分裂細(xì)胞）13.C（Illumina屬于NGS技術(shù)）14.B（黑曲霉是檸檬酸生產(chǎn)的常用菌種）15.B（生長素/細(xì)胞分裂素比例決定根、芽分化）16.C（親和層析利用特異性結(jié)合，如抗原抗體）17.B（BSL3實(shí)驗(yàn)室需全排式通風(fēng)和嚴(yán)格防護(hù)）18.C（WesternBlot檢測蛋白質(zhì)表達(dá)產(chǎn)物）19.D（成體干細(xì)胞在特定條件下可跨系分化）20.B（定向進(jìn)化通過隨機(jī)突變和篩選優(yōu)化酶性能）二、多項(xiàng)選擇題21.ABCD（均為基因工程常用工具酶）22.ABCD（動物細(xì)胞培養(yǎng)需無菌、適溫、血清、CO?）23.ABC（產(chǎn)物濃度是結(jié)果參數(shù)，非過程控制參數(shù)）24.ABCD（均為植物基因轉(zhuǎn)化方法）25.ABD（克隆基因?qū)儆诨蚬こ谭懂牐?6.ACD（多克隆抗體一般不用于治療）27.ABC（PPE在BSL2及以上實(shí)驗(yàn)室均需使用）28.ABCD（合成生物學(xué)覆蓋多領(lǐng)域）29.ABCD（均為ELISA常見類型）30.ABCD（均為細(xì)胞工程的典型應(yīng)用）三、判斷題31.×（部分限制性內(nèi)切酶識別非回文序列）32.×（酵母雙雜交研究蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)相互作用）33.×（產(chǎn)物合成期多在穩(wěn)定期）34.√（外植體消毒是關(guān)鍵步驟）35.√（病毒載體可能引發(fā)免疫反應(yīng)）36.×（固定化可能改變酶的最適pH和溫度）37.√（NGS高通量、短讀長，適合全基因組測序）38.√（無血清培養(yǎng)基需添加生長因子）39.√（單倍體加倍后為純合體，縮短育種年限）40.√（生物信息學(xué)核心是分析生物數(shù)據(jù)）四、案例分析題案例1參考答案：（1）pH下降可能原因：大腸桿菌代謝產(chǎn)生有機(jī)酸（如乙酸），或碳源（如葡萄糖）過量導(dǎo)致酸性副產(chǎn)物積累；溶氧不足可能原因：菌體密度過高消耗大量氧氣，攪拌轉(zhuǎn)速或通氣量不足，或培養(yǎng)基黏度增加影響傳氧。（2）措施：①優(yōu)化培養(yǎng)基：減少葡萄糖初始濃度，采用補(bǔ)料分批培養(yǎng)（流加葡萄糖），避免碳源過量；②控制發(fā)酵條件：提高攪拌轉(zhuǎn)速或通氣量維持溶氧≥20%，通過流加氨水或NaOH調(diào)節(jié)pH至6.87.2；③優(yōu)化誘導(dǎo)條件：延遲誘導(dǎo)時(shí)間（如對數(shù)中期誘導(dǎo)），降低誘導(dǎo)劑（如IPTG）濃度，減少包涵體形成；④改進(jìn)純化工藝：增加離子交換層析或親和層析步驟，提高目標(biāo)蛋白純度；⑤菌種改造：引入分子伴侶基因或折疊酶基因，促進(jìn)蛋白正確折疊。案例2參考答案：（1）環(huán)境安全性評價(jià)內(nèi)容：①基因漂移風(fēng)險(xiǎn)：評估抗蟲基因向近緣野生植物轉(zhuǎn)移的可能性；②對非靶標(biāo)生物的影響：如對蜜蜂、寄生蜂等益蟲的毒性；③生態(tài)位改變：轉(zhuǎn)基因水稻是否可能成為入侵物種；④土壤微生物群落影響：Bt蛋白在土壤中的殘留及對微生物多樣性的影響；⑤抗蟲性進(jìn)化：靶標(biāo)害蟲（如二化螟）是否會產(chǎn)生抗性。（2）處理措施：①驗(yàn)證脫靶突變的位置和功能：通過全基因組測序確認(rèn)脫靶位點(diǎn)，分析是否影響重要功能基因；②評估脫靶突變的安全性：若脫靶位點(diǎn)為非編碼區(qū)或無功能區(qū)，且不產(chǎn)生有毒蛋白，可接受；③若脫靶導(dǎo)致有害性狀（如產(chǎn)生毒素、抗除草劑），需重新設(shè)計(jì)gRNA，篩選無脫靶的編輯株系；④補(bǔ)充安全性數(shù)據(jù)：針對脫靶突變株系進(jìn)行額外的毒理學(xué)、營養(yǎng)學(xué)評價(jià)，提交監(jiān)管部門審核。五、綜合應(yīng)用題參考答案工藝流程設(shè)計(jì)：1.細(xì)胞系篩選：操作要點(diǎn)：選取紅豆杉幼嫩莖尖或葉片作為外植體，經(jīng)75%乙醇（30秒）+0.1%HgCl?（810分鐘）消毒后，接種于MS基礎(chǔ)培養(yǎng)基（含2,4D2mg/L、6BA0.5mg/L）誘導(dǎo)愈傷組織；23周后，挑取生長快、顏色鮮艷（如淡綠色）的愈傷組織，通過懸浮培養(yǎng)建立細(xì)胞系；采用HPLC檢測紫杉醇含量，篩選高產(chǎn)細(xì)胞系（紫杉醇含量＞0.1%干重）。注意事項(xiàng)：嚴(yán)格無菌操作，避免污染；多次繼代篩選以穩(wěn)定細(xì)胞系性狀。2.培養(yǎng)基優(yōu)化：操作要點(diǎn)：以B5培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，調(diào)整碳源（如蔗糖3