ICS67

X04

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T5189.10—2020

天然植物提取物中危害成分檢測(cè)

第10部分：辣椒紅中赭曲霉毒素A的測(cè)定

2020-06-28發(fā)布2020-07-28實(shí)施

河北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB13/T5189.10—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的測(cè)定》共分12個(gè)部分：

——第1部分：亞硝酸鹽的測(cè)定；

——第2部分：二氧化硫的測(cè)定；

——第3部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇5種有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定；

——第4部分：辣椒提取物中砷、鉛、鎘、鉻、汞的測(cè)定；

——第5部分：萬(wàn)壽菊提取物中對(duì)氧基苯胺的測(cè)定；

——第6部分：萬(wàn)壽菊提取物中乙氧基喹啉的測(cè)定；

——第7部分：天然番茄紅中苯并[α]芘的測(cè)定；

——第8部分：辣椒提取物中蘇丹紅的測(cè)定；

——第9部分：辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚的測(cè)定；

——第10部分：辣椒紅中赭曲霉毒素A的測(cè)定；

——第11部分：葉黃素中苯的測(cè)定；

——第12部分：甜菊糖苷中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定。

本部分為DB13/T5189的第10部分。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省市場(chǎng)監(jiān)督管理局提出并歸口。

本部分起草單位：晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司、河北省食品檢驗(yàn)研究院、石家莊海關(guān)技術(shù)中

心、清河食品藥品檢驗(yàn)所。

本部分主要起草人：高偉、張玉芬、張巖、劉登帥、韓艷超、艾連峰、欒樂華。

I

DB13/T5189.10—2020

天然植物提取物中危害成分檢測(cè)

第10部分：辣椒紅中赭曲霉毒素A的測(cè)定

1范圍

本部分規(guī)定了辣椒紅中赭曲霉毒素A的高效液相色譜-熒光檢測(cè)器測(cè)定方法。

本部分適用于辣椒紅中赭曲霉毒素A的測(cè)定。

2規(guī)范性引用文件

下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改單）適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3原理

試樣經(jīng)提取液提取、離心、過濾后，用反相高效液相色譜分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的

保留時(shí)間定性，采用單點(diǎn)校正，外標(biāo)法定量。

4試劑或材料

警告：赭曲霉毒素A是一種已知的強(qiáng)致癌物質(zhì)，測(cè)定時(shí)應(yīng)特別注意安全防護(hù)。

除非另有說(shuō)明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

4.1試劑

4.1.1乙腈（C2H3N）：色譜純。

4.1.2甲醇（CH4O）：色譜純。

4.1.3冰醋酸（C2H4O2）。

4.1.4氯化鈉（NaCl）。

4.1.5磷酸氫二鉀（K2HPO4）。

4.1.6磷酸二氫鉀（KH2PO4）。

4.1.7氯化鉀（KCl）。

4.1.8濃鹽酸（HCl）。

4.2試劑配制

1

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PBS緩沖溶液：稱取7.9g氯化鈉，1.8g磷酸氫二鉀，0.24g磷酸二氫鉀，0.2g氯化鉀，900mL

水溶解，然后用濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0，最后用水稀釋至1000mL，保存于4℃?zhèn)溆茫墒褂?天。

4.3標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

赭曲霉毒素A：（C20H18ClNO6，CAS:303-47-9）：純度≥99%，或具有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書。

4.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

4.4.1赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1mg/L）：取赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)適量，用甲醇—乙腈：1+1

（體積比）稀釋至濃度1mg/L，搖勻，保存于-20℃?zhèn)溆茫梢员４?個(gè)月。

4.4.2赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：根據(jù)使用需要，準(zhǔn)確吸取一定量的赭曲霉毒素A儲(chǔ)備液，用流動(dòng)

相乙腈—水—冰乙酸：495+495+10（體積比）稀釋，配成10μg/L的標(biāo)準(zhǔn)工作液，4℃保存，可使用

7天。

5儀器和設(shè)備

5.1高效液相色譜儀：配有熒光檢測(cè)器。

5.2高速均質(zhì)機(jī)。

5.3分析天平：感量為0.1mg和0.01mg。

5.4渦旋混勻器。

5.5超聲波清洗器。

5.6離心機(jī)。

5.7精密pH酸度計(jì)。

6試驗(yàn)步驟

6.1樣品液制備

稱取試樣1g（精確至0.1mg）于50mL離心管中，加入甲醇10mL，超聲10min，渦旋2min，離

心5min，轉(zhuǎn)速5000r/min。取上清液5mL置于50mL容量瓶中，用PBS溶液定容，混勻，用玻璃纖維

濾紙過濾，濾液過0.22μm有機(jī)濾膜，供液相色譜檢測(cè)。

6.2測(cè)定

6.2.1色譜參考條件

色譜參考條件如下：

a)色譜柱：C18，250mm×4.6mm，5μm，或性能相當(dāng)者；

b)流動(dòng)相：乙腈—水—冰乙酸：495+495+10（體積比）等度洗脫；

c)柱溫：40℃；

d)激發(fā)波長(zhǎng)：333nm；發(fā)射波長(zhǎng)：477nm；

e)流速：1.0mL/min；

2

DB13/T5189.10—2020

f)進(jìn)樣量：10μL。

6.2.2測(cè)定

分別檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)使用溶液和制備的樣品液，以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量，色譜圖見附錄A。

6.2.3空白試驗(yàn)

除不加試樣外，均按上述測(cè)定條件和步驟進(jìn)行。

7試驗(yàn)結(jié)果

試樣中赭曲霉毒素A含量按式（1）計(jì)算。

AcsV

X………………（1）

AMs

式中：

X—試樣中赭曲霉毒素A的含量，單位為微克每千克（g/kg）；

A—樣液中赭曲霉毒素A的色譜峰面積；

cs—標(biāo)準(zhǔn)工作液中赭曲霉毒素A的濃度，單位為微克每升（μg/L）；

V—樣品的最終稀釋體積，單位毫升（mL）；

As—標(biāo)準(zhǔn)工作液中赭曲霉毒素A的色譜峰面積；

M—試樣質(zhì)量，單位為克（g）。

計(jì)算結(jié)果需扣除空白值，計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，

保留三位有效數(shù)字。

8精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

9檢出限和定量限

檢出限為10.0μg/kg，定量限為30.0μg/kg。

3

DB13/T5189.10—2020

AA

附錄A

（資料性附錄）

高效液相色譜圖

A.1赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖，見圖A.1所示。

數(shù)據(jù)文件名:STD-OTA4.lcd

mV

12.5檢測(cè)器AEx:333nm,Em:477nm

10.0赭曲霉毒素A

7.5

5.0

2.5

0.0

0.01.02.03.04.05.06.07.08.09.010.011.012.013.0min

圖A.1赭曲霉毒素A標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜圖

A.2樣品中的赭曲霉毒素A檢測(cè)色譜圖，如圖A.2所示。

數(shù)據(jù)文件名:Y1-0110-190409.lc