DB22T18182013蛋白質(zhì)飼料中脲醛聚合物的測(cè)定1范圍本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了蛋白質(zhì)飼料中脲醛聚合物測(cè)定的原理、試劑、儀器設(shè)備、分析步驟、結(jié)果計(jì)算和精密度要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于以豆粕、棉籽粕、菜籽粕等植物蛋白為主要原料的蛋白質(zhì)飼料中脲醛聚合物含量的測(cè)定。本方法的檢出限為0.05g/kg，定量限為0.15g/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T6003.1試驗(yàn)篩技術(shù)要求和檢驗(yàn)第1部分：金屬絲編織網(wǎng)試驗(yàn)篩GB/T14699.1飼料采樣方法3原理試樣中的脲醛聚合物在酸性條件下水解，釋放出甲醛，甲醛與2,4二硝基苯肼在酸性介質(zhì)中反應(yīng)2,4二硝基苯腙，該化合物在堿性條件下顯酒紅色，于480nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，吸光度與甲醛含量成正比，通過計(jì)算得出脲醛聚合物的含量。4試劑與材料除非另有說明，在分析中僅使用確認(rèn)為分析純的試劑和符合GB/T6682規(guī)定的三級(jí)水。4.1鹽酸溶液（1+1）：將鹽酸（ρ20=1.19g/mL）與水等體積混合。4.2氫氧化鈉溶液（200g/L）：稱取20g氫氧化鈉，溶于水中并稀釋至100mL。4.32,4二硝基苯肼溶液（1g/L）：稱取0.1g2,4二硝基苯肼，溶于100mL鹽酸溶液（1+11）中，棕色瓶保存，有效期一周。4.4甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1mg/mL）：吸取2.8mL甲醛溶液（含量約37%~40%）于1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。用碘量法標(biāo)定其準(zhǔn)確濃度。4.5甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（10μg/mL）：吸取10.00mL甲醛標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（4.4）于1000mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻。臨用時(shí)配制。5儀器設(shè)備5.1分光光度計(jì)：配有1cm比色皿，波長(zhǎng)范圍400800nm。5.2分析天平：感量0.0001g。5.3恒溫水浴鍋：控溫精度±1℃。5.4電動(dòng)振蕩器：頻率100200次/min。5.5離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。5.6試驗(yàn)篩：符合GB/T6003.1要求，孔徑0.45mm。5.7具塞比色管：25mL、50mL。5.8容量瓶：50mL、100mL、1000mL。5.9移液管：1mL、2mL、5mL、10mL、25mL。5.10錐形瓶：250mL。5.11燒杯：50mL、100mL、250mL。6試樣的制備與保存6.1按照GB/T14699.1規(guī)定的方法采集具有代表性的樣品，樣品量不少于500g。6.2將采集的樣品充分混勻，用四分法縮分至約100g。6.3將縮分后的樣品粉碎，全部通過0.45mm試驗(yàn)篩，混勻后裝入潔凈干燥的密封容器中，室溫下保存?zhèn)溆谩?.4試樣應(yīng)盡快分析，如需保存，應(yīng)在04℃條件下冷藏，保存期不超過7天。7分析步驟7.1試樣處理將振蕩后的溶液轉(zhuǎn)移至離心管中，以4000r/min離心10min，取上清液備用。若上清液渾濁，需用定性濾紙過濾。7.2水解反應(yīng)準(zhǔn)確移取10.00mL試樣處理液于50mL具塞比色管中，加入5mL鹽酸溶液（1+1），混勻后置于70℃恒溫水浴鍋中加熱水解30min，取出冷卻至室溫。7.3顯色反應(yīng)向水解后的溶液中加入5mL2,4二硝基苯肼溶液（1g/L），混勻后置于40℃恒溫水浴鍋中加熱15min，取出冷卻至室溫。加入5mL氫氧化鈉溶液（200g/L），混勻后用水稀釋至刻度，搖勻。放置10min后待測(cè)。7.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制分別吸取0.00mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL、6.00mL甲醛標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（10μg/mL）于一系列50mL具塞比色管中，用水稀釋至10mL。7.4測(cè)定以試劑空白為參比，用1cm比色皿在480nm波長(zhǎng)處測(cè)定試樣溶液的吸光度。從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)的甲醛含量。8結(jié)果計(jì)算8.1計(jì)算公式試樣中脲醛聚合物的含量按公式（1）計(jì)算：\[X=\frac{(m_1m_0)\timesV\timesK}{m\timesV_1}\times1000\]式中：\(X\)——試樣中脲醛聚合物的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）；\(m_1\)——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的試樣溶液中甲醛的質(zhì)量，單位為微克（μg）；\(m_0\)——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的空白溶液中甲醛的質(zhì)量，單位為微克（μg）；\(V\)——試樣處理液總體積，單位為毫升（mL）；\(V_1\)——測(cè)定時(shí)移取試樣處理液的體積，單位為毫升（mL）；\(m\)——試樣質(zhì)量，單位為克（g）；\(K\)——甲醛換算為脲醛聚合物的系數(shù)，取值為3.2。8.2結(jié)果表示取兩次平行測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值作為測(cè)定結(jié)果，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。9精密度9.1重復(fù)性在同一實(shí)驗(yàn)室，由同一操作者使用相同設(shè)備，按相同的測(cè)試方法，并在短時(shí)間內(nèi)對(duì)同一被測(cè)對(duì)象相互獨(dú)立進(jìn)行的測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于重復(fù)性限（r）。重復(fù)性限（r）按表1規(guī)定：表1重復(fù)性限|脲醛聚合物含量范圍/（mg/kg）|重復(fù)性限（r）/（mg/kg）|||||0.15~1.00|0.10||1.00~10.00|0.50||10.00~100.00|5.00||>100.00|10.00|9.2再現(xiàn)性在不同實(shí)驗(yàn)室，由不同操作者使用不同設(shè)備，按相同的測(cè)試方法，對(duì)同一被測(cè)對(duì)象相互獨(dú)立進(jìn)行的測(cè)試獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不大于再現(xiàn)性限（R）。再現(xiàn)性限（R）按表2規(guī)定：表2再現(xiàn)性限|脲醛聚合物含量范圍/（mg/kg）|再現(xiàn)性限（R）/（mg/kg）|||||0.15~1.00|0.20||1.00~10.00|1.00||10.00~100.00|10.00||>100.00|20.00|10檢驗(yàn)報(bào)告a)樣品名稱、規(guī)格型號(hào)、批號(hào)；b)送檢單位、送檢日期；c)檢驗(yàn)依據(jù)（本標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)）；d)檢驗(yàn)結(jié)果：脲醛聚合物含量，mg/kg；e)檢驗(yàn)結(jié)論；f)檢驗(yàn)人員、審核人員、批準(zhǔn)人員簽字；g)檢驗(yàn)日期；h)檢驗(yàn)單位蓋章。11質(zhì)量控制11.1空白試驗(yàn)每批樣品測(cè)定應(yīng)同時(shí)進(jìn)行空白試驗(yàn)，空白值應(yīng)低于方法檢出限。若空白值異常，應(yīng)查找原因并重新測(cè)定。11.2加標(biāo)回收率每批樣品應(yīng)進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，加標(biāo)回收率應(yīng)在85%~115%之間。若回收率超出此范圍，應(yīng)重新測(cè)定。11.3標(biāo)準(zhǔn)曲線每次測(cè)定應(yīng)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，相關(guān)系數(shù)（r）應(yīng)不小于0.999。若相關(guān)系數(shù)不符合要求，應(yīng)重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。11.4平行樣測(cè)定每批樣品應(yīng)進(jìn)行平行樣測(cè)定，平行樣測(cè)定結(jié)果的相對(duì)偏差應(yīng)不大于10%。若相對(duì)偏差超出此范圍，應(yīng)重新測(cè)定。12注意事項(xiàng)12.12,4二硝基苯肼溶液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，如發(fā)現(xiàn)溶液變色或有沉淀，應(yīng)重新配制。12.2