玉米及其碾磨加工品中伏馬毒素的快速檢測膠體金免疫層析法國家市場監(jiān)督管理總局發(fā)布1本方法規(guī)定了玉米及其碾磨加工品中伏馬毒素B?、伏馬毒素B2、伏馬毒素B?(以下簡寫為FB?、FB2、FB?)快速檢測膠體金免疫層析法。本方法適用于玉米及其碾磨加工品中伏馬毒素(以FB?、FB2、FB?總量計)的快速定性測定。本方法根據(jù)競爭抑制免疫層析原理。樣品中的伏馬毒素(FB?、FB2、FB?)經(jīng)乙腈-水溶液提取，提取液經(jīng)樣品稀釋液稀釋后，與膠體金標記的特異性抗體結(jié)合，抑制抗體和試紙條中檢測線(T線)上抗原結(jié)合，從而導致試紙條檢測線(T線)顏色變化。通過檢測線(T線)與控制線(C線)顏色深淺比較，對樣品中伏馬毒素(以FB?、FB?、FB?總量計)進行定性判定。3試劑與材料除另有規(guī)定外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。3.1.2三羥甲基氨基甲烷(C?H?NO?),又名Tris堿。3.1.3鹽酸(HCl,37%)。3.1.4吐溫-20(C?H?O?6)。伏馬毒素參考物質(zhì)的中文名稱、英文名稱、CAS號、分子式、相對分子質(zhì)量見表1,純度≥95%。注：或等同可溯源物質(zhì)。中文名稱CAS號伏馬毒素B?3.3.1乙腈-水溶液(50+50):分別量取100mL乙腈(3.1.1)和100mL水，混合均勻。23.3.3樣品稀釋液：稱取12.1gTris堿(3.1.2)于800mL水中，攪拌溶解后，加入適量稀鹽酸溶液效期6個月。效期6個月。效期6個月。溶液密封后避光4℃保存。有效期6個月。4.8孵育器：可控溫20℃~25℃。溫度15℃~35℃,相對濕度≤80%。將樣品按四分法縮分至約1kg,用粉碎器磨碎至全部通過網(wǎng)孔尺寸小于13準確稱取試樣5g(精確至0.01g)于50mL離5min或渦漩提取2min,于4000r/min離心3min或靜置5min使固液分層，立即取一定量上清液與乙腈-水溶液(3.3.1)以1:1體積混合均勻，再取100μL混合溶液加入到裝有600μL樣品稀釋液20℃~25℃孵育3min,將試紙條下端插入到金標微孔溶液底部，于孵育器中20℃~25℃反應(yīng)獲取同類基質(zhì)的空白試樣，經(jīng)參比方法檢測伏馬毒素(以FB?、FB2、FB?總量計)含量小于6.4.3加標質(zhì)控試驗：準確稱取空白試樣5g(精確至0.01g)于50mL離心管中，玉米樣品中加入玉米碾磨加工品樣品中加入250μL混合標準工作溶液(3.4.4),使FB?、FB?、FB?的含量分別為1.4mg/kg、0.4mg/kg、0.2mg/kg。按照6.2和6.3步驟根據(jù)伏馬毒素膠體金免疫層析試劑盒選用判讀方法。采用目視法對結(jié)果進圖如圖1和圖2所示。檢測線(T線)不顯色或檢測線(T線)顏色比控制線(C線)顏色淺，表明樣品中伏4檢測線(T線)顏色比控制線(C線)顏色深或者檢測線(T線)顏色與控制線(C線)顏色相當，表明樣品中伏馬毒素總含量低于方法檢測限，判為陰性。無效陰性陽性圖1目視判定示意圖(比色法)控制線(C線)不顯色，表明錯誤操作或試紙條無效?？刂凭€(C線)顯色，檢測線(T線)不顯色，表明樣品中伏馬毒素總含量高于方法檢測限，判為陽性。檢測線(T線)與控制線(C線)均顯色，表明樣品中伏馬毒素總含量低于方法檢測限，判為陰性。無效陰性陽性圖2目視判定示意圖(消線法)9.1性能指標計算方法按照附錄A執(zhí)行。本方法參比方法為GB5009.240—2016《食品安全國家標準(規(guī)范性)快速檢測方法性能指標計算表性能指標計算方法見表A.1。表A.1性能指標計算方法陽性陰性陽性陰性顯著性差異(x2)自由度(df)=1pf-=Ni?/N.×100=100—靈敏度pf+=N??/N?×100=100一特異性有的第一行，N.2表示所有的第二列；N??表示第一行，第二列?！坝蓞⒈确椒z驗得到的結(jié)果或者樣品中實際的公議值結(jié)果。”由待確認方法檢驗得到的結(jié)果。靈敏度的計算使用確認后的結(jié)°為方法的檢測結(jié)果相對準確性的結(jié)果，與一致性分析和濃度檢測趨勢情況綜合評價。本方法負責起草單位：江西省食品檢驗檢測研究院