2/4第一節(jié)生物成分的分離與測定技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握電泳法分離大分子的原理。2.運(yùn)用常用的方法提取和分離蛋白質(zhì)。3.了解芳香油的特點，知道提取芳香油的原理及會設(shè)計簡單的實驗裝置進(jìn)行提取。學(xué)習(xí)重、難點重點1.掌握電泳法分離大分子的原理。2.運(yùn)用常用的方法提取和分離蛋白質(zhì)。3.了解芳香油的特點，知道提取芳香油的原理及會設(shè)計簡單的實驗裝置進(jìn)行提取。難點運(yùn)用常用的方法提取和分離蛋白質(zhì)。學(xué)習(xí)要點梳理一、蛋白質(zhì)的分離方法1.薄膜透析法：（1）原理：蛋白質(zhì)水溶液具有親水膠體溶液性質(zhì)，不能透過半透膜。（2）目的：去除小分子化合物雜質(zhì)，如無機(jī)鹽、單糖、二糖、氨基酸等。（3）常用的半透膜：腸衣、玻璃紙等。（4）步驟：將待純化的蛋白質(zhì)溶液裝入透析袋內(nèi)，再把透析袋放入透析液中即可。2.離心沉降法：（1）原理：在離心力的作用下，分子大小、密度不同的分子沉降速度不同，從而被分離。（2）目的：使分子大小、密度不同的不同種類的蛋白質(zhì)彼此分離。3.電泳：（1）概念：帶電顆粒在電場作用下向著與其電性相反的電極移動的現(xiàn)象。（2）原理：不同的物質(zhì)所帶電荷不同，顆粒的大小、性狀不同，因此，在電場中的泳動速度不同。（3）影響泳動速度的因素：帶電顆粒的性質(zhì)，即顆粒的大小、形狀和所帶電荷的多少；此外還有電場強(qiáng)度、溶液的pH等因素。（4）泳動規(guī)律：帶電顆粒直徑越小，越接近于球形，所帶靜電荷越多，則在電場中的泳動速度越快；反之，則越慢。（5）常用方法：支持物電泳。（6）支持物：濾紙、醋酸纖維薄膜、大分子凝膠等。思維拓展瓊脂凝膠電泳和聚丙烯酰胺凝膠電泳的方法優(yōu)勢（1）瓊脂凝膠電泳操作簡單，電泳速度快，樣品不需要事先處理；電泳后區(qū)帶易染色，樣品極易洗脫，便于定量測定。（2）測定蛋白質(zhì)的相對分子質(zhì)量常用聚丙烯酰胺凝膠電泳，這是因為在一定濃度范圍內(nèi)，聚丙烯酰胺對熱穩(wěn)定性強(qiáng)，可以用檢測儀直接測定。二、血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳1.特點（1）電泳后區(qū)帶界限清晰。（2）通電時間較短（60min~90min）。（3）它對各種蛋白質(zhì)都幾乎完全不吸附，因此無拖尾現(xiàn)象。（4）對染料也沒有吸附，因此不結(jié)合的染料能完全洗掉，無樣品處幾乎完全無色。2.關(guān)鍵步驟及其技術(shù)要求：點樣是本實驗的關(guān)鍵步驟。點樣前，應(yīng)將薄膜表面多余的緩沖液用濾紙吸去，以免引起樣品擴(kuò)散；但不宜太干，否則樣品不易進(jìn)入膜內(nèi)，造成點樣起始參差不齊，影響分離效果。3.結(jié)果及其分析：（1）結(jié)果：（2）結(jié)果分析：從電泳圖譜示意圖中可以看出：①血清蛋白主要包括五種蛋白質(zhì)，且含量最多的是清蛋白，其他依次是：γ-球蛋白＞α1-球蛋白＞α2-球蛋白＞β-球蛋白。②由五種蛋白質(zhì)所處的位置可判斷出它們均帶負(fù)電荷，四種球蛋白在電場中的泳動速度由快到慢依次為α1-球蛋白＞α2-球蛋白＞β-球蛋白＞γ-球蛋白。思維拓展醋酸纖維薄膜電泳所具有的優(yōu)點：簡單、快速、分離清晰、靈敏度高、樣品用量少、沒有吸附現(xiàn)象，電泳后區(qū)帶界限清晰等。三、橘皮精油提取實驗裝置、操作及注意事項1.蒸餾裝置如圖所示，整套蒸餾裝置可分為左、中、右三部分，其中左邊的部分通過加熱進(jìn)行蒸餾，中部將蒸餾物冷凝，右邊的部分用來接收冷凝后的蒸餾物。（1）加熱裝置：包括鐵架臺、酒精燈、鐵圈、石棉網(wǎng)、蒸餾燒瓶、鐵夾、單孔塞及溫度計。①溫度計裝置：溫度計水銀球應(yīng)與蒸餾燒瓶的支管口下保持水平；②加熱時要防爆沸：墊石棉網(wǎng)，向液體中加入幾片碎石或瓷片；③燒瓶內(nèi)液體量：燒瓶容積的1/3~2/3.（2）冷凝裝置：由鐵架臺和冷凝管組成，冷凝管中水流應(yīng)從下方進(jìn)水，上方出水，與蒸汽流向相反。（3）接收裝置：由接液管和接收器（通常用錐形瓶）組成，收集冷凝后的液體。2.具體實驗操作：安裝儀器一般都按照自上而下、自左而右的順序。拆卸儀器的順序與安裝時相反。具體安裝順序和方法如下：（1）固定熱源——酒精燈。（2）固定蒸餾瓶，保持蒸餾瓶軸心與鐵架臺的水平面垂直。（3）安裝蒸餾頭，使蒸餾頭的橫截面與鐵架臺平行。（4）連接冷凝管。保證上端出水口向上，通過橡皮管與水池相連；下端進(jìn)水口向下，通過橡皮管與水龍頭相連。（5）連接接液管。（6）將接收瓶瓶口對準(zhǔn)接液管出口。常壓蒸餾一般用錐形瓶而不用燒杯作接收器，接收瓶應(yīng)在實驗前稱重，并做好記錄。（7）將溫度計固定在蒸餾頭上，使溫度計水銀球的上限與蒸餾頭側(cè)管的下限處于同一水平線上。易錯提醒（1）用蒸餾法分離植物有效成分時，溫度會影響植物成分的性質(zhì)，因此需要嚴(yán)格控制溫度，溫度過高會破壞植物成分的結(jié)構(gòu)，溫度過低則會導(dǎo)致分離不出植