ICS65.020.20

CCSB05

DB1308

承德市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1308/T376—2025

杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

2025-01-06發(fā)布2025-01-15實施

承德市市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB1308/T376—2025

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由承德市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：河北平泉食用菌產(chǎn)業(yè)技術(shù)研究院。

本文件主要起草人：郭旭彥、王秀清、吳昊、劉桂娟、秦振祎、呂正斌、孫娜、劉潔、孫彥平、孫

嘉鎂、趙云云、劉海峰、蘇容彥、袁征。

I

DB1308/T376—2025

杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)技術(shù)的生產(chǎn)環(huán)境、前期準(zhǔn)備、生產(chǎn)流程、操作方法、菌種質(zhì)量檢

驗以及檔案記錄等內(nèi)容。

本文件適用于杏鮑菇液體菌種生產(chǎn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB5009.3食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中水分的測定

GB5749生活飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)

NY/T528食用菌菌種生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程

NY862杏鮑菇和白靈菇菌種

NY/T1846食用菌菌種檢驗規(guī)程

NY/T2375食用菌生產(chǎn)技術(shù)規(guī)范

3術(shù)語和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。

4生產(chǎn)環(huán)境

4.1廠址選擇

符合?NY/T?528?的規(guī)定。

4.2廠房

廠房符合?NY/T?2375?要求。廠房內(nèi)部設(shè)置培養(yǎng)基配置室、滅菌室、冷卻室、接種室、搖瓶液體菌種

培養(yǎng)室、發(fā)酵罐液體菌種培養(yǎng)室等，布局合理。其中培養(yǎng)基配制室、冷卻室、搖瓶菌種培養(yǎng)室、發(fā)酵罐

菌種培養(yǎng)室空間潔凈度達(dá)到萬級以上；接種室空間潔凈度達(dá)到百級。生產(chǎn)車間地面耐磨、防水、防腐蝕、

防滑、易清洗，墻角為圓角，墻壁和天花板防潮、防霉、防水、易清洗。

4.3生產(chǎn)用水

符合?GB?5749?的規(guī)定。

5前期準(zhǔn)備

1

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5.1設(shè)備

發(fā)酵罐、恒溫?fù)u床、空氣壓縮機(jī)、空氣過濾器、冷干機(jī)、干燥吸附機(jī)、儲氣罐、高壓蒸汽滅菌鍋、

蒸汽鍋爐、超凈工作臺、恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡、冰箱，及配套附屬設(shè)備。

5.2器具

玻璃三角瓶、試管、培養(yǎng)皿、量杯、玻璃漏斗、接種工具及相關(guān)輔助器具。

6生產(chǎn)流程

母種活化→接種→培養(yǎng)→發(fā)酵罐準(zhǔn)備→接種→培養(yǎng)。

7操作方法

7.1母種活化

使用品種和種源符合?NY/T?528?的規(guī)定。母種質(zhì)量符合?NY?862?的規(guī)定。接種前取出斜面試管母種，

在室溫條件下放置1?d～2?d。

7.2接種

7.2.1培養(yǎng)基配制

7.2.1.1配方

可選擇以下配方的一種配置培養(yǎng)基：

——馬鈴薯（浸出汁）?200?g、葡萄糖?20?g、磷酸二氫鉀?1?g、硫酸鎂?0.5?g、維生素B1?10?mg、水?1000?mL，

pH自然；

——葡萄糖?20?g、蛋白胨?3?g、磷酸二氫鉀?1?g、硫酸鎂?0.5?g、維生素B1?5?mg、水?1000?mL，pH自

然；

——蔗糖?11.1?g、豆粕粉?2.07?g、磷酸二氫鉀?0.67?g、硫酸鎂?0.67?g、水?1000?mL，pH自然。

7.2.1.2配置

按照7.2.1.1配制培養(yǎng)基，培養(yǎng)基裝量為玻璃三角瓶的1/3～1/5，采用通氧砂芯硅膠塞封口。

7.2.2滅菌

高壓蒸汽滅菌，壓力?0.105?Mpa～0.125?Mpa，溫度121?℃～123.5?℃，滅菌?30?min～40?min。

7.2.3接種

將滅菌后的液體培養(yǎng)基放入接種室內(nèi)超凈工作臺中，冷卻至?20?℃～25?℃進(jìn)行接種。按照無菌操作

22

要求接種，每瓶接種?0.25?cm?～0.5?cm?瓊脂斜面母種塊?6?塊～8?塊。

7.3培養(yǎng)

2

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接種后的玻璃三角瓶移至恒溫?fù)u床上，在溫度?20?℃～25?℃和暗光條件下靜置?24?h后，啟動搖床，

轉(zhuǎn)速?140?r/min～160?r/min，溫度?20?℃～25?℃，定期檢查，及時去除污染或異常的菌種。培養(yǎng)?6?d～7?d，

檢驗搖瓶液體菌種質(zhì)量合格后備用。

7.4發(fā)酵罐準(zhǔn)備

7.4.1發(fā)酵罐檢查

檢查發(fā)酵罐是否具有特種設(shè)備檢驗合格證，發(fā)酵罐閥門和管路等是否完好，工作正常。

7.4.2發(fā)酵罐空消

發(fā)酵罐初次及空置后使用、出現(xiàn)污染和更換品種時進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，壓力?0.105?Mpa～0.125?Mpa，

溫度?121?℃～123.5?℃，滅菌時間30min～40?min，空罐滅菌。

7.4.3投料與定容

7.4.3.1培養(yǎng)基配方：蔗糖1.5%、豆粕粉0.4%、酵母浸膏0.3%、磷酸二氫鉀0.1%、硫酸鎂0.05%、

消泡劑0.03%。???

7.4.3.2以罐體總?cè)莘e60%～70%計算投料總量，按照培養(yǎng)基配方和比例稱量原料。

7.4.3.3先將所有原料加適量水?dāng)嚢杈鶆?，制備成懸浮液，倒入或用泵抽入發(fā)酵罐中，再加水定容至

罐體總?cè)莘e的60%～70%，擰緊上料口蓋。

7.4.4發(fā)酵罐實消

高壓蒸汽滅菌，壓力?0.105?Mpa～0.125?Mpa，溫度?121?℃～123.5?℃，滅菌時間60min～80?min。

7.4.5冷卻

滅菌結(jié)束后，關(guān)閉蒸汽進(jìn)氣閥門，罐溫冷卻至100℃，提前打開空氣進(jìn)氣閥門，罐壓保持在0.04

Mpa～0.05Mpa。開啟冷水閥門將冷水通入發(fā)酵罐夾?層，?罐溫冷卻至25℃，關(guān)閉冷水閥門。??

7.5接種

調(diào)節(jié)排氣閥，使罐內(nèi)壓力降至?0.01?Mpa，采用火焰圈法接種，將檢驗合格的搖瓶菌種接種至發(fā)酵罐

內(nèi)，接種量為1:500～1:1000。接種結(jié)束后，罐壓調(diào)節(jié)至?0.04?Mpa～0.05?Mpa。

7.6培養(yǎng)

接種后發(fā)酵罐內(nèi)通氣量為料液體積與空氣體積比為?1：0.1?～0.2，罐壓保持在?0.04?Mpa～0.05?Mpa，

罐內(nèi)溫度?21?℃～23?℃，培養(yǎng)?6?d～7?d，檢驗發(fā)酵罐液體菌種質(zhì)量合格后即可。

8菌種質(zhì)量檢驗

8.1質(zhì)量要求

8.1.1搖瓶液體菌種

8.1.1.1感官指標(biāo)

表1給出了搖瓶液體菌種感官指標(biāo)。

3

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表1杏鮑菇搖瓶液體菌種感官指標(biāo)

項目要求

發(fā)酵液呈淡黃色，粘稠不分層，具有特殊苦杏仁的香味，無酸、臭或酒精等異味

菌絲體菌球大小均勻，顏色潔白，表面有毛刺，懸浮于液體培養(yǎng)基

8.1.1.2理化指標(biāo)

表2給出了搖瓶液體菌種理化指標(biāo)。

表2杏鮑菇搖瓶液體菌種理化指標(biāo)

項目要求

pH值5.5～6.4

顯微鏡下菌絲形態(tài)和雜菌鑒別菌絲粗壯，無霉菌、酵母、細(xì)菌等活菌體

留存樣品無菌檢驗無霉菌、酵母、細(xì)菌等活菌體

接種后萌發(fā)時間≤24h

8.1.2發(fā)酵罐液體菌種

8.1.2.1感官指標(biāo)

表3給出了發(fā)酵罐液體菌種感官指標(biāo)。

表3杏鮑菇發(fā)酵罐液體菌種感官指標(biāo)

項目要求

呈淡黃色，粘稠不分層，具有特殊苦杏仁的香味，無酸、臭或酒精等異味，發(fā)酵

發(fā)酵液

罐排氣口氣味正常

菌絲體大小均勻，球狀菌絲體顏色潔白，表面有毛刺

8.1.2.2理化指標(biāo)

表4給出了發(fā)酵罐液體菌種理化指標(biāo)。

表4杏鮑菇發(fā)酵罐液體菌種理化指標(biāo)

項目要求

pH值5.5～6.2

生物量（菌絲干重）g/L10～15

顯微鏡下菌絲形態(tài)和雜菌鑒別菌絲粗壯，無霉菌、酵母和細(xì)菌等活菌體

留存樣品無菌檢驗無霉菌、酵母、細(xì)菌等活菌體

接種后萌發(fā)時間≤24h

8.2檢驗方法

4

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8.2.1取樣

發(fā)酵罐液體菌種放罐前24h對液體菌種進(jìn)行批次抽樣檢測，首先用酒精火焰球灼燒取樣閥30s～

40s后，棄掉最初流出的少量?液?體菌種，然后用酒精火焰封口直接放入經(jīng)滅菌的三角瓶中，塞緊棉?塞?。

用?作感官指標(biāo)和理化指標(biāo)檢驗。

8.2.2感官指標(biāo)檢驗

按照NY/T1846中的規(guī)定對樣品進(jìn)行檢驗。肉眼觀察菌絲有無其他色澤及異常，有無螨類，必要時

用5倍放大?鏡觀?察；?在無菌條件下拔出棉塞，將三角瓶置于距鼻5cm～10cm處，屏住呼吸，用清洗干

凈?、?酒精棉球擦拭過的手在試管口上方輕輕煽動，順風(fēng)鼻聞。???

8.2.3理化指標(biāo)檢驗

8.2.3.1pH值

pH計或pH試紙測定。

8.2.3.2生物量（菌絲干重）

量取液體菌種10mL，按照GB5009.3中規(guī)定的方法烘干，然后稱量菌絲干重。

8.2.3.3顯微鏡下菌絲形態(tài)和雜菌鑒別

按照無菌操作從取樣閥取少量發(fā)酵液，采用顯微鏡觀察菌絲生長狀況和有無雜菌污染。

8.2.3.4留存樣品無菌檢驗

8.2.3.4.1培養(yǎng)基可選用以下一種配方：

——PD培養(yǎng)基（馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基）。馬鈴薯（浸出汁）200g、葡萄糖20g、水1000mL，pH

自然；??????

——營養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基（牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基）。牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯