ICS67

X04

DB13

河北省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB13/T5189.9—2020

天然植物提取物中危害成分檢測(cè)

第9部分：辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚的

測(cè)定

2020-06-28發(fā)布2020-07-28實(shí)施

河北省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB13/T5189.9—2020

前言

本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。

DB13/T5189《天然植物提取物中危害成分的測(cè)定》共分12個(gè)部分：

——第1部分：亞硝酸鹽的測(cè)定；

——第2部分：二氧化硫的測(cè)定；

——第3部分：正己烷、丙酮、乙酸乙酯、甲醇和乙醇5種有機(jī)溶劑殘留的測(cè)定；

——第4部分：辣椒提取物中砷、鉛、鎘、鉻、汞的測(cè)定；

——第5部分：萬壽菊提取物中對(duì)氧基苯胺的測(cè)定；

——第6部分：萬壽菊提取物中乙氧基喹啉的測(cè)定；

——第7部分：天然番茄紅中苯并[α]芘的測(cè)定；

——第8部分：辣椒提取物中蘇丹紅的測(cè)定；

——第9部分：辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚的測(cè)定；

——第10部分：辣椒紅中赭曲霉毒素A的測(cè)定；

——第11部分：葉黃素中苯的測(cè)定；

——第12部分：甜菊糖苷中鄰苯二甲酸酯的測(cè)定。

本部分為DB13/T5189的第9部分。

本標(biāo)準(zhǔn)由河北省市場監(jiān)督管理局提出。

本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：河北省食品檢驗(yàn)研究院、晨光生物科技集團(tuán)股份有限公司、石家莊海關(guān)技術(shù)中

心、清河縣食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心。

本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：王紅、張鳳霞、焦良、李揮、田俊生、卜麗雙、艾連峰。

I

DB13/T5189.9—2020

天然植物提取物中危害成分檢測(cè)

第9部分：辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚的測(cè)定

1范圍

本部分規(guī)定了辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚的測(cè)定方法。

本部分適用于辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚的測(cè)定。

2原理

辣椒提取物中叔丁基對(duì)苯二酚經(jīng)環(huán)己烷-乙酸乙酯溶解后，使用凝膠滲透色譜（GPC）凈化，采用

反相C18（4.6mm×250mm，5μm）色譜柱，以乙腈-1.0%乙酸水（40+60）為流動(dòng)相，等度洗脫，熒光檢

測(cè)器檢測(cè)，根據(jù)色譜峰的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。

3試劑或材料

除非另有說明，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的一級(jí)水。

3.1試劑

3.1.1甲醇（CH3OH）：色譜純。

3.1.2乙腈（C2H3N）：色譜純。

3.1.3冰醋酸（CH3COOH）。

3.1.4環(huán)己烷（C6H12）

3.1.5乙酸乙酯（C4H8O2）

3.2試劑配制

環(huán)己烷-乙酸乙酯（1+1，V/V）：量取500mL環(huán)己烷與500mL乙酸乙酯混合均勻。

3.3標(biāo)準(zhǔn)品

叔丁基對(duì)苯二酚（Tertbutylhydroquinone，C10H14O2，CAS:1948-33-0）標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，純度≥99%，

或采用具有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)證書的叔丁基對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)溶液。

3.4標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

3.4.1叔丁基對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（1000mg/L）：準(zhǔn)確稱取叔丁基對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)100.00mg，

用甲醇定容至100mL，搖勻，0℃～4℃避光保存，有效期6個(gè)月。

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3.4.2叔丁基對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)使用溶液（10mg/L）：準(zhǔn)確量取1000mg/L叔丁基對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液

1mL，于100mL容量瓶中，用甲醇溶解，定容于100mL，0℃～4℃避光保存，有效期6個(gè)月。

3.4.3叔丁基對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)系列工作溶液：分別吸取叔丁基對(duì)苯二酚標(biāo)準(zhǔn)使用溶液0mL、0.1mL、

0.5mL、1.0mL、2.0mL、5.0mL、10.0mL，用甲醇定容至10mL，配制成質(zhì)量濃度分別為0mg/L、0.1mg/L、

0.5mg/L、1.0mg/L、2.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)使用液，現(xiàn)用現(xiàn)配。

4儀器和設(shè)備

4.1高效液相色譜儀：配有熒光檢測(cè)器。

4.2凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)（GPC）。

4.3分析天平：感量0.1mg和0.01mg。

4.4渦旋混勻器。

4.5超聲波清洗器。

4.6離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥3000r/min

4.7旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

5試驗(yàn)步驟

5.1提取

準(zhǔn)確稱取樣品1g（精確至0.0001g）于10mL容量瓶中，加入環(huán)己烷-乙酸乙酯（1：1，V/V）混合

溶液溶解，定容，搖勻，上清液過0.45μm有機(jī)濾膜后作待凈化液。

5.2凈化

取待凈化液于GPC樣品管中，進(jìn)行GPC凈化，進(jìn)樣量5mL，收集洗脫液，于40℃下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干。

殘?jiān)?.0mL甲醇超聲溶解，過0.45μm有機(jī)濾膜，供液相色譜檢測(cè)。

凝膠滲透色譜凈化參考條件：

a)凝膠滲透色譜凈化系統(tǒng)；

b)凝膠柱規(guī)格400mm×25mm（內(nèi)徑）；

c)色譜柱填料Bio-BeadsS-X3（38-75μm）；

d)流動(dòng)相：環(huán)己烷-乙酸乙酯（1+1，V/V）；

e)流速：4.7mL/min；

f)收集時(shí)間：25-35min。

5.3測(cè)定

5.3.1色譜參考條件

a)色譜柱：C18，粒徑5μm，250mm×4.6mm（內(nèi)徑），或性能相當(dāng)者；

b)流動(dòng)相：乙腈-1.0%乙酸水（40+60）等度洗脫；

c)柱溫：40oC；

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d)激發(fā)波長：293nm；發(fā)射波長：332nm；

e)流速：1.0mL/min；

f)進(jìn)樣量：20μL。

5.3.2測(cè)定

根據(jù)樣液中叔丁基對(duì)苯二酚含量情況，選定與樣液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)使用溶液，標(biāo)準(zhǔn)使用溶液和樣

液中的叔丁基對(duì)苯二酚響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍內(nèi)，如果樣液中叔丁基對(duì)苯二酚含量超出檢

測(cè)的線性范圍，則稀釋至適當(dāng)倍數(shù)后后再進(jìn)樣。以保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。叔丁基對(duì)苯二酚液相

色譜圖參見附錄A。

按上述條件，同時(shí)做空白試驗(yàn)。

6試驗(yàn)結(jié)果

試樣中叔丁基對(duì)苯二酚含量按式（1）計(jì)算。

（cc0）V1000

Xf………………（1）

m1000

式中：

X—試樣中叔丁基對(duì)苯二酚的含量，單位為毫克每千克，mg/kg；

c—試樣溶液中叔丁基對(duì)苯二酚的濃度，mg/L；

c0—空白試樣溶液中叔丁基對(duì)苯二酚的濃度，mg/L；

V—樣液最終定容體積，單位為毫升，mL；

f—稀釋倍數(shù)；

m—試樣溶液代表試樣的質(zhì)量，g。

計(jì)算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

7精密度

在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)差值不得超過算術(shù)平均值的10%。

8檢出限和定量限

檢出限為0.02mg/kg，定量限為0.06mg/kg。

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AA

附錄A