高效液相色譜儀校準與維護指南高效液相色譜儀（HPLC）作為分離分析的核心設備，廣泛應用于制藥、環(huán)境監(jiān)測、食品檢測等領域。儀器的精準度直接影響分析結(jié)果的可靠性，因此定期校準與科學維護是保障設備穩(wěn)定運行的關鍵。本文結(jié)合行業(yè)實踐與技術規(guī)范，系統(tǒng)闡述HPLC的校準要點與維護策略，為實驗室人員提供實用參考。一、高效液相色譜儀的校準要點（一）校準依據(jù)與周期依據(jù)《JJG____液相色譜儀檢定規(guī)程》或?qū)嶒炇覂?nèi)部標準操作程序（SOP），結(jié)合儀器使用頻率與環(huán)境條件，常規(guī)校準周期建議每季度開展關鍵項目核查，每年進行全面校準。若儀器經(jīng)歷搬遷、維修或數(shù)據(jù)異常，需及時校準。（二）核心校準項目與方法1.流量準確性校準采用稱量法驗證泵的流量精度：將流動相出口連接至已稱重的容量瓶，設定流速（如1.0mL/min），持續(xù)收集30分鐘（或更長時間以提高精度），稱重后計算實際流速（流速=質(zhì)量/（時間×流動相密度））。多次重復（至少3次），要求流速相對標準偏差（RSD）≤2%，且與設定值偏差≤±2%。2.波長準確性校準利用鈥玻璃濾光片（紫外區(qū)）或氘燈特征譜線（如656.1nm、486.0nm）校準紫外-可見檢測器。將濾光片置于樣品池，掃描波長范圍（如____nm），記錄特征吸收峰的波長值，與標準值（如鈥玻璃在240.0nm、278.0nm、333.0nm、360.0nm的吸收峰）偏差應≤±1nm。3.柱溫箱精度校準使用標準溫度計（精度0.1℃）或溫度驗證儀，將傳感器置于柱溫箱內(nèi)（模擬色譜柱位置），設定溫度（如30℃、40℃、50℃），待溫度穩(wěn)定后（通常需30分鐘以上），記錄實際溫度。要求溫度波動≤±0.5℃，均勻性≤±0.3℃。4.進樣精度與重復性校準配制濃度適中的標準溶液（如咖啡因溶液），使用進樣針（或自動進樣器）重復進樣6次，記錄峰面積或峰高。計算RSD，要求進樣量≤10μL時RSD≤3%，進樣量>10μL時RSD≤2%。二、高效液相色譜儀的維護策略（一）日常維護：防患于未然1.流動相管理流動相應經(jīng)0.22μm濾膜過濾（水系或有機系適配）并超聲脫氣（至少10分鐘），避免顆粒堵塞管路或氣泡干擾檢測。梯度洗脫時，需確保流動相互溶，且定期更換（一般不超過48小時），防止滋生微生物（尤其含水相時）。2.進樣系統(tǒng)維護手動進樣針：每次進樣后用甲醇-水（1:1）或流動相沖洗，每周用5%硝酸溶液浸泡30分鐘（去除金屬殘留），自然晾干后保存。自動進樣器：定期清潔進樣針外壁（用無塵布蘸甲醇擦拭），檢查進樣針密封墊（若出現(xiàn)漏液或進樣量偏差，及時更換），每周運行“清洗程序”（用強溶劑沖洗進樣閥）。3.色譜柱維護使用前：用10倍柱體積的流動相平衡色譜柱（流速0.5mL/min），避免溶劑突變導致柱床塌陷。使用后：反相柱用10-20倍柱體積的甲醇-水（9:1）沖洗（去除樣品殘留），正相柱用正己烷-異丙醇（9:1）沖洗，最后保存在純甲醇（反相）或正己烷（正相）中，柱兩端密封，避免干涸。（二）定期維護：深度保障性能1.泵系統(tǒng)維護密封墊：每____小時運行時間（或每季度）檢查泵頭密封墊，若出現(xiàn)漏液、壓力波動大，及時更換（不同品牌密封墊型號需匹配）。單向閥：每月超聲清洗單向閥（用甲醇或異丙醇，功率≤100W，時間5分鐘），去除結(jié)晶或顆粒，恢復液體單向通過性。2.檢測器維護流通池：每半年用10%硝酸溶液（或?qū)Ｓ们逑匆海_洗流通池（低流速，如0.1mL/min，持續(xù)30分鐘），去除蛋白質(zhì)、色素等殘留；若檢測基線噪聲大，檢查氘燈壽命（一般壽命2000小時左右，可通過能量測試判斷是否更換）。3.管路與接頭維護每月檢查管路接頭（尤其是泵出口、進樣閥、柱溫箱進出口），用扳手適度擰緊（避免過緊損壞接頭），若發(fā)現(xiàn)管路老化（變硬、開裂），及時更換同規(guī)格的PEEK管或不銹鋼管。（三）故障排查：快速定位與解決1.壓力異常：壓力過高：檢查色譜柱是否堵塞（可通過反沖或更換柱芯判斷）、管路是否有死體積（如接頭未擰緊）、流動相濾膜是否堵塞（更換濾膜）。壓力過低：檢查泵密封墊是否漏液、單向閥是否失效、流動相瓶是否空瓶（補充流動相）。2.基線噪聲大：依次排查：氘燈是否老化（更換）、流通池是否污染（清洗）、接地是否良好（檢查地線）、電源是否穩(wěn)定（接穩(wěn)壓電源）。3.峰形異常（拖尾、分叉）：可能是色譜柱污染（用強溶劑沖洗或更換柱芯）、進樣量過大（減少進樣體積）、流動相pH不適（調(diào)整pH至色譜柱耐受范圍）。結(jié)語高效液相色譜儀的校準與維護是一項系統(tǒng)性工作，需結(jié)