基于膠質(zhì)瘤微環(huán)境免疫表征的預(yù)后模型構(gòu)建與分析一、引言1.1研究背景與意義1.1.1膠質(zhì)瘤概述膠質(zhì)瘤是原發(fā)于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的一類(lèi)腫瘤，作為最常見(jiàn)的原發(fā)性顱內(nèi)腫瘤，其起源于神經(jīng)間質(zhì)細(xì)胞，涵蓋神經(jīng)膠質(zhì)、室管膜、脈絡(luò)叢上皮和神經(jīng)實(shí)質(zhì)細(xì)胞（即神經(jīng)元）。大多數(shù)腫瘤源自不同類(lèi)型的神經(jīng)膠質(zhì)，由于組織發(fā)生學(xué)來(lái)源及生物學(xué)特征相似，神經(jīng)外胚層發(fā)生的各種復(fù)雜腫瘤病通常都被稱(chēng)作神經(jīng)膠質(zhì)瘤。依據(jù)腫瘤細(xì)胞的惡性程度、形態(tài)學(xué)發(fā)生、所處位置等不同分類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)，膠質(zhì)瘤有著多樣化的分類(lèi)。按WHO分級(jí)，可分為Ⅰ-Ⅳ級(jí)；依腫瘤惡性程度，又分為低級(jí)別膠質(zhì)瘤（Ⅰ級(jí)和Ⅱ級(jí)）和高級(jí)別膠質(zhì)瘤（Ⅲ級(jí)和Ⅳ級(jí)）。低級(jí)別膠質(zhì)瘤如毛細(xì)胞星形細(xì)胞瘤、多形性黃色星形細(xì)胞瘤等，分化良好，生長(zhǎng)緩慢，預(yù)后相對(duì)較好；高級(jí)別膠質(zhì)瘤像膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、間變性星形細(xì)胞瘤等，分化程度低，生長(zhǎng)迅速，易轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)，預(yù)后較差。從腫瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)劃分，有星形細(xì)胞瘤、少枝細(xì)胞瘤、室管膜瘤、混合膠質(zhì)瘤等；依據(jù)腫瘤位置，可分為幕上膠質(zhì)瘤（位于大腦組織，多見(jiàn)于成人）、幕下膠質(zhì)瘤（位于小腦組織，多見(jiàn)于小兒）以及腦橋膠質(zhì)瘤。腦膠質(zhì)瘤在所有原發(fā)于中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤中占比達(dá)32%，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤中占比81%，男性發(fā)病率顯著高于女性，發(fā)病高峰集中在10-20歲以及30-40歲。目前，惡性膠質(zhì)瘤的發(fā)病率為5-8/100萬(wàn)人，5年死亡率居高不下，在全身腫瘤中僅次于胰腺癌和肺癌，位列第三。我國(guó)2015年惡性腫瘤流行分析顯示，中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤在惡性腫瘤死亡率排行中處于第8位。從病理類(lèi)型來(lái)看，兒童患者以髓母細(xì)胞瘤和室管膜瘤較為多見(jiàn)。膠質(zhì)瘤對(duì)患者危害極大。一方面，瘤體可能出血，出血量少者無(wú)癥狀或癥狀較輕，量多者則會(huì)出現(xiàn)高顱壓癥狀、偏癱、失語(yǔ)，嚴(yán)重時(shí)意識(shí)喪失，甚至引發(fā)腦疝導(dǎo)致死亡；另一方面，會(huì)導(dǎo)致肢體癱瘓，多為偏癱，尤其是腫瘤位于大腦運(yùn)動(dòng)區(qū)附近、基底節(jié)區(qū)、腦干腹側(cè)時(shí)發(fā)生率更高，起初為輕癱，逐漸發(fā)展為全癱，同時(shí)常伴有高顱壓癥狀。此外，還會(huì)引發(fā)精神障礙，早期癥狀較輕，表現(xiàn)為淡漠、反應(yīng)遲鈍、理解力和記憶力減退，隨著顱內(nèi)壓不斷升高，精神癥狀會(huì)愈發(fā)明顯，如癡呆、意識(shí)朦朧、性格及行為改變等。同時(shí)，約30%的患者還會(huì)出現(xiàn)癲癇，主要由腫瘤的直接刺激或壓迫所致。1.1.2免疫相關(guān)性對(duì)膠質(zhì)瘤預(yù)后的重要性腫瘤免疫微環(huán)境在癌癥進(jìn)展和轉(zhuǎn)移中起著決定性作用。癌細(xì)胞會(huì)不斷進(jìn)化出多種策略來(lái)抑制或逃避機(jī)體的抗腫瘤免疫。在膠質(zhì)瘤中，其特殊的免疫抑制微環(huán)境使得該腦部惡性腫瘤對(duì)傳統(tǒng)的化療、靶向治療和免疫治療具有很強(qiáng)的抵抗力，成為尚未解決的重大醫(yī)學(xué)挑戰(zhàn)。髓系細(xì)胞大量存在于人類(lèi)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（GBM）和低級(jí)別膠質(zhì)瘤的腫瘤組織中，其中腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）或調(diào)節(jié)性T細(xì)胞常被招募來(lái)產(chǎn)生免疫抑制信號(hào)，如CD274、精氨酸酶和半凝集素等，這些腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞還會(huì)釋放血管生成線索，如血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGFs），以促進(jìn)癌癥的增殖和轉(zhuǎn)移。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞能夠與免疫細(xì)胞相互作用，免疫細(xì)胞也是膠質(zhì)瘤干細(xì)胞微環(huán)境的組成部分之一，二者處在一種動(dòng)態(tài)的相互調(diào)節(jié)關(guān)系中。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞能吸引炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，營(yíng)造有利于腫瘤生長(zhǎng)的炎性微環(huán)境，而這種炎性微環(huán)境又可幫助膠質(zhì)瘤干細(xì)胞維持干性表型。同時(shí)，膠質(zhì)瘤干細(xì)胞通過(guò)分泌免疫控制因子和募集具有免疫控制作用的細(xì)胞來(lái)逃避免疫監(jiān)視。TAMs是膠質(zhì)瘤中主要的炎性浸潤(rùn)細(xì)胞，主要分布于CD133+膠質(zhì)瘤干細(xì)胞周?chē)瑖@著微血管和缺氧區(qū)域。膠質(zhì)瘤干細(xì)胞能夠分泌趨化因子，吸引TAMs聚集到周?chē)€可以分泌細(xì)胞因子促進(jìn)TAMs的增殖。TAMs能調(diào)節(jié)固有免疫及適應(yīng)性免疫。近期研究還發(fā)現(xiàn)了一種獨(dú)特的中性粒細(xì)胞亞群，稱(chēng)為疾病特異性抑制性粒細(xì)胞（DSSGs），存在于人類(lèi)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤和低級(jí)別膠質(zhì)瘤中。DSSGs同時(shí)表達(dá)多種免疫抑制和免疫調(diào)節(jié)信號(hào)，其數(shù)量與膠質(zhì)瘤的等級(jí)和不良臨床預(yù)后密切相關(guān)。通過(guò)敲除膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的Cxcl1或宿主特異性Cxcr2基因缺失或白喉毒素A介導(dǎo)的中性粒細(xì)胞耗竭，可在免疫功能正常的膠質(zhì)瘤小鼠模型中遺傳性地破壞中性粒細(xì)胞的募集，從而顯著增強(qiáng)抗腫瘤免疫力并延長(zhǎng)生存期。免疫相關(guān)性表征在預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤預(yù)后方面意義重大。例如，通過(guò)對(duì)膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境中免疫細(xì)胞的多樣性和格局分析，發(fā)現(xiàn)單核細(xì)胞、活化的NK細(xì)胞和嗜酸性粒細(xì)胞與更好的預(yù)后相關(guān)，而巨噬細(xì)胞與不良預(yù)后相關(guān)。對(duì)免疫檢查點(diǎn)基因的研究也表明，其表達(dá)情況與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后存在關(guān)聯(lián)。因此，深入研究免疫相關(guān)性表征，有助于更準(zhǔn)確地預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后情況。1.1.3研究意義本研究構(gòu)建基于膠質(zhì)瘤微環(huán)境中多種免疫相關(guān)性表征的預(yù)后模型，具有重要的理論和實(shí)踐價(jià)值。在理論層面，有助于深入揭示膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境的復(fù)雜機(jī)制，進(jìn)一步明晰免疫細(xì)胞與膠質(zhì)瘤細(xì)胞之間的相互作用關(guān)系，為膠質(zhì)瘤的基礎(chǔ)研究提供新的視角和理論依據(jù)，豐富腫瘤免疫學(xué)的相關(guān)理論體系。在實(shí)踐方面，對(duì)臨床治療有著重要的指導(dǎo)意義。準(zhǔn)確的預(yù)后模型能夠幫助醫(yī)生在治療前更精準(zhǔn)地評(píng)估患者的病情和預(yù)后，從而制定更合理、個(gè)性化的治療方案。對(duì)于預(yù)后較差的患者，可及時(shí)調(diào)整治療策略，采用更積極的綜合治療手段，如強(qiáng)化化療、放療方案，或者嘗試新的免疫治療方法，以提高治療效果，延長(zhǎng)患者生存期；對(duì)于預(yù)后相對(duì)較好的患者，則可避免過(guò)度治療，減少不必要的醫(yī)療負(fù)擔(dān)和并發(fā)癥，提高患者的生存質(zhì)量。同時(shí)，該模型也為新藥研發(fā)提供了潛在的靶點(diǎn)和評(píng)估指標(biāo)，加速針對(duì)膠質(zhì)瘤的新型治療藥物的研發(fā)進(jìn)程，推動(dòng)膠質(zhì)瘤治療領(lǐng)域的發(fā)展。1.2國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外在膠質(zhì)瘤微環(huán)境免疫表征及預(yù)后模型構(gòu)建方面開(kāi)展了大量研究，取得了一定成果，但也存在諸多不足。在國(guó)外，對(duì)膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境的研究起步較早，研究范圍廣泛且深入。在免疫細(xì)胞層面，深入探究了各類(lèi)免疫細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的作用。例如，美國(guó)的研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中數(shù)量眾多，其通過(guò)分泌多種細(xì)胞因子和趨化因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。德國(guó)的學(xué)者則關(guān)注到調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）在膠質(zhì)瘤免疫逃逸中的關(guān)鍵作用，Tregs通過(guò)表達(dá)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）、程序性死亡受體1（PD-1）等免疫抑制分子，抑制效應(yīng)T細(xì)胞的功能，使得腫瘤細(xì)胞逃脫免疫系統(tǒng)的監(jiān)視。在免疫分子方面，國(guó)外研究對(duì)免疫檢查點(diǎn)分子進(jìn)行了重點(diǎn)研究。PD-1及其配體PD-L1在膠質(zhì)瘤免疫逃逸中的作用機(jī)制被逐步揭示，PD-1/PD-L1信號(hào)通路的激活可抑制T細(xì)胞的活性，降低其對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的殺傷能力。同時(shí)，針對(duì)免疫檢查點(diǎn)分子的免疫治療也成為研究熱點(diǎn)，如一些臨床試驗(yàn)探索了PD-1/PD-L1抑制劑在膠質(zhì)瘤治療中的應(yīng)用，盡管取得了一定的療效，但整體有效率仍有待提高。在預(yù)后模型構(gòu)建方面，國(guó)外學(xué)者嘗試?yán)枚嘟M學(xué)數(shù)據(jù)，如基因組學(xué)、轉(zhuǎn)錄組學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)等，結(jié)合機(jī)器學(xué)習(xí)算法構(gòu)建預(yù)后模型。例如，通過(guò)分析膠質(zhì)瘤患者的基因表達(dá)譜，篩選出與預(yù)后相關(guān)的基因特征，構(gòu)建基于基因表達(dá)特征的預(yù)后模型，對(duì)患者的生存期進(jìn)行預(yù)測(cè)。然而，這些模型在不同隊(duì)列中的驗(yàn)證結(jié)果存在一定差異，其穩(wěn)定性和普適性有待進(jìn)一步提高。國(guó)內(nèi)在該領(lǐng)域的研究也發(fā)展迅速。在免疫微環(huán)境研究方面，中國(guó)的科研團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）通過(guò)多種機(jī)制抑制免疫細(xì)胞功能，包括精氨酸酶1（ARG1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等途徑，并且MDSCs的數(shù)量與膠質(zhì)瘤的惡性程度和預(yù)后密切相關(guān)。此外，國(guó)內(nèi)學(xué)者還關(guān)注到膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的炎性細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、干擾素-γ（IFN-γ）等細(xì)胞因子之間的相互作用對(duì)免疫微環(huán)境的調(diào)節(jié)作用。在預(yù)后模型構(gòu)建上，國(guó)內(nèi)研究結(jié)合了中國(guó)人群的特點(diǎn)，利用臨床病理特征和影像學(xué)特征構(gòu)建預(yù)后模型。例如，通過(guò)分析膠質(zhì)瘤患者的術(shù)前磁共振成像（MRI）影像特征，提取紋理特征、形態(tài)學(xué)特征等，結(jié)合臨床病理信息，構(gòu)建影像組學(xué)預(yù)后模型，在一定程度上提高了對(duì)中國(guó)膠質(zhì)瘤患者預(yù)后預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。但這些模型同樣面臨著缺乏大規(guī)模多中心驗(yàn)證、特征選擇主觀性較強(qiáng)等問(wèn)題?，F(xiàn)有研究雖然取得了不少成果，但仍存在明顯不足。一方面，對(duì)膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境的認(rèn)識(shí)還不夠全面和深入。免疫細(xì)胞之間、免疫細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間的相互作用復(fù)雜多樣，目前仍有許多未知的分子機(jī)制和信號(hào)通路尚未被揭示。例如，不同亞型的免疫細(xì)胞在膠質(zhì)瘤不同發(fā)展階段的動(dòng)態(tài)變化及作用機(jī)制還不明確，這限制了對(duì)膠質(zhì)瘤免疫逃逸機(jī)制的全面理解。另一方面，已構(gòu)建的預(yù)后模型普遍存在穩(wěn)定性和普適性差的問(wèn)題。不同研究中使用的數(shù)據(jù)來(lái)源、樣本量、特征選擇方法和模型構(gòu)建算法存在差異，導(dǎo)致模型在不同數(shù)據(jù)集上的表現(xiàn)不一致，難以在臨床實(shí)踐中廣泛應(yīng)用。此外，現(xiàn)有模型大多只考慮了單一或少數(shù)幾個(gè)因素，如基因表達(dá)、臨床病理特征或影像學(xué)特征，未能充分整合多維度信息，限制了模型的預(yù)測(cè)效能。1.3研究目標(biāo)與方法1.3.1研究目標(biāo)本研究旨在全面且深入地剖析膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的多種免疫相關(guān)性表征，并基于這些表征構(gòu)建精準(zhǔn)有效的預(yù)后模型，從而為膠質(zhì)瘤的臨床診療提供可靠的指導(dǎo)依據(jù)。具體目標(biāo)如下：全面解析免疫細(xì)胞特征：系統(tǒng)分析膠質(zhì)瘤微環(huán)境中各類(lèi)免疫細(xì)胞，如T細(xì)胞、B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞、中性粒細(xì)胞等的數(shù)量、比例、表型及功能狀態(tài)，明確不同免疫細(xì)胞亞群在膠質(zhì)瘤發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中的作用機(jī)制。例如，探究調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的高表達(dá)是否會(huì)抑制抗腫瘤免疫反應(yīng)，促進(jìn)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的免疫逃逸；分析腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）的極化狀態(tài)，M1型巨噬細(xì)胞是否具有抗腫瘤活性，而M2型巨噬細(xì)胞是否會(huì)促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。深入研究免疫分子機(jī)制：詳細(xì)研究免疫相關(guān)分子，包括免疫檢查點(diǎn)分子（如PD-1、PD-L1、CTLA-4等）、細(xì)胞因子（如IL-6、IL-10、TNF-α等）、趨化因子（如CXCL12、CCL2等）等的表達(dá)水平、信號(hào)傳導(dǎo)通路及其在膠質(zhì)瘤免疫調(diào)節(jié)中的作用。例如，研究PD-1/PD-L1信號(hào)通路如何抑制T細(xì)胞的活化和增殖，從而影響膠質(zhì)瘤的免疫逃逸；分析細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中各種細(xì)胞因子之間的相互作用，如何共同調(diào)節(jié)膠質(zhì)瘤微環(huán)境的免疫狀態(tài)。構(gòu)建高效預(yù)后模型：整合膠質(zhì)瘤患者的臨床病理特征、影像學(xué)特征以及免疫相關(guān)性表征，運(yùn)用機(jī)器學(xué)習(xí)算法和生物信息學(xué)分析方法，構(gòu)建能夠準(zhǔn)確預(yù)測(cè)膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的模型。通過(guò)對(duì)大量臨床數(shù)據(jù)的分析，篩選出最具預(yù)測(cè)價(jià)值的免疫相關(guān)特征，結(jié)合其他臨床因素，提高模型的預(yù)測(cè)準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。例如，利用邏輯回歸、支持向量機(jī)、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等機(jī)器學(xué)習(xí)算法，對(duì)不同特征進(jìn)行組合和優(yōu)化，構(gòu)建多因素預(yù)后模型。驗(yàn)證模型臨床價(jià)值：在獨(dú)立的膠質(zhì)瘤患者隊(duì)列中對(duì)構(gòu)建的預(yù)后模型進(jìn)行外部驗(yàn)證，評(píng)估其在臨床實(shí)踐中的準(zhǔn)確性、可靠性和實(shí)用性，為臨床醫(yī)生制定個(gè)性化治療方案提供科學(xué)依據(jù)。通過(guò)與傳統(tǒng)的預(yù)后評(píng)估方法進(jìn)行比較，驗(yàn)證模型在預(yù)測(cè)患者生存期、復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)等方面的優(yōu)勢(shì)，推動(dòng)模型在臨床中的廣泛應(yīng)用。例如，在多中心的臨床研究中，對(duì)模型進(jìn)行驗(yàn)證，分析其在不同地區(qū)、不同人群中的表現(xiàn)，進(jìn)一步優(yōu)化模型。1.3.2研究方法為實(shí)現(xiàn)上述研究目標(biāo)，本研究將綜合運(yùn)用多種研究方法，確保研究的科學(xué)性、嚴(yán)謹(jǐn)性和有效性。數(shù)據(jù)收集：臨床數(shù)據(jù)：收集多中心膠質(zhì)瘤患者的詳細(xì)臨床資料，包括患者的基本信息（年齡、性別、種族等）、癥狀體征、手術(shù)記錄（手術(shù)方式、切除程度等）、病理診斷結(jié)果（病理類(lèi)型、分級(jí)、分子標(biāo)志物等）、治療方案（放療、化療、免疫治療等）以及隨訪信息（生存期、復(fù)發(fā)情況等）。影像數(shù)據(jù)：獲取患者術(shù)前的頭顱磁共振成像（MRI）、計(jì)算機(jī)斷層掃描（CT）等影像資料，利用影像組學(xué)技術(shù)提取腫瘤的形態(tài)學(xué)、紋理特征等信息。例如，通過(guò)MRI的T1加權(quán)像、T2加權(quán)像、增強(qiáng)掃描等序列，提取腫瘤的大小、形狀、邊界、信號(hào)強(qiáng)度等特征。免疫數(shù)據(jù)：采集患者腫瘤組織和外周血樣本，運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)、免疫組化、免疫熒光、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、基因芯片、蛋白質(zhì)組學(xué)等技術(shù)，檢測(cè)免疫細(xì)胞的數(shù)量、比例、表型，免疫分子的表達(dá)水平等免疫相關(guān)性表征。例如，利用流式細(xì)胞術(shù)分析外周血中T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的亞群比例；通過(guò)免疫組化檢測(cè)腫瘤組織中PD-1、PD-L1等免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)情況。數(shù)據(jù)分析：統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件（如SPSS、R等）對(duì)收集的數(shù)據(jù)進(jìn)行描述性統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算各種免疫相關(guān)性表征的均值、標(biāo)準(zhǔn)差、頻率等；采用相關(guān)性分析、差異性檢驗(yàn)等方法，分析免疫相關(guān)性表征與臨床病理特征、預(yù)后之間的關(guān)系，篩選出與預(yù)后顯著相關(guān)的免疫特征。例如，通過(guò)Pearson相關(guān)性分析，探究免疫細(xì)胞數(shù)量與腫瘤分級(jí)之間的關(guān)系；運(yùn)用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，比較不同預(yù)后組患者免疫分子表達(dá)水平的差異。生物信息學(xué)分析：利用生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)（如TCGA、GEO等）和分析工具，對(duì)基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行挖掘和分析，研究免疫相關(guān)基因的功能、信號(hào)通路以及與膠質(zhì)瘤預(yù)后的關(guān)聯(lián)。例如，通過(guò)基因富集分析（GO、KEGG等），明確免疫相關(guān)基因參與的生物學(xué)過(guò)程和信號(hào)通路；利用生存分析，評(píng)估免疫相關(guān)基因?qū)颊呱嫫诘挠绊?。模型?gòu)建：特征選擇：基于統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和生物信息學(xué)分析結(jié)果，結(jié)合臨床經(jīng)驗(yàn)，從眾多免疫相關(guān)性表征和臨床特征中篩選出最具預(yù)測(cè)價(jià)值的特征，作為模型的輸入變量。例如，采用最小絕對(duì)收縮和選擇算子（LASSO）回歸等方法，對(duì)特征進(jìn)行篩選和降維，去除冗余和不相關(guān)的特征。模型訓(xùn)練：運(yùn)用機(jī)器學(xué)習(xí)算法（如邏輯回歸、支持向量機(jī)、隨機(jī)森林、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)等），以篩選出的特征為自變量，患者的預(yù)后情況（生存期、復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)等）為因變量，對(duì)模型進(jìn)行訓(xùn)練和優(yōu)化，確定模型的參數(shù)和結(jié)構(gòu)。例如，利用交叉驗(yàn)證的方法，對(duì)不同機(jī)器學(xué)習(xí)算法進(jìn)行比較和選擇，優(yōu)化模型的超參數(shù)，提高模型的泛化能力。模型驗(yàn)證：內(nèi)部驗(yàn)證：在訓(xùn)練數(shù)據(jù)集內(nèi)，采用交叉驗(yàn)證的方法（如5折交叉驗(yàn)證、10折交叉驗(yàn)證等）對(duì)模型進(jìn)行多次驗(yàn)證，評(píng)估模型的準(zhǔn)確性、敏感性、特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值等性能指標(biāo)，確保模型在訓(xùn)練數(shù)據(jù)上的可靠性。外部驗(yàn)證：將構(gòu)建好的模型應(yīng)用于獨(dú)立的膠質(zhì)瘤患者驗(yàn)證數(shù)據(jù)集，進(jìn)一步評(píng)估模型在不同樣本中的性能表現(xiàn)，驗(yàn)證模型的普適性和臨床應(yīng)用價(jià)值。通過(guò)與其他已有的預(yù)后模型進(jìn)行比較，分析本研究模型的優(yōu)勢(shì)和不足。例如，將本研究模型與基于臨床病理特征的傳統(tǒng)預(yù)后模型進(jìn)行比較，評(píng)估其在預(yù)測(cè)患者預(yù)后方面的準(zhǔn)確性和可靠性。二、膠質(zhì)瘤微環(huán)境與免疫相關(guān)性基礎(chǔ)理論2.1膠質(zhì)瘤微環(huán)境的組成與特點(diǎn)2.1.1細(xì)胞組成膠質(zhì)瘤微環(huán)境是一個(gè)復(fù)雜的生態(tài)系統(tǒng)，其中各類(lèi)細(xì)胞相互作用，共同影響著腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及對(duì)治療的反應(yīng)。腫瘤細(xì)胞是膠質(zhì)瘤微環(huán)境的核心組成部分，它們具有高度的增殖能力和侵襲性。膠質(zhì)瘤細(xì)胞可分為不同的亞型，如星形細(xì)胞瘤細(xì)胞、少枝膠質(zhì)細(xì)胞瘤細(xì)胞、室管膜瘤細(xì)胞等，不同亞型的腫瘤細(xì)胞在形態(tài)、生物學(xué)特性和對(duì)治療的敏感性上存在差異。例如，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞具有高度的增殖活性和侵襲性，能夠快速浸潤(rùn)周?chē)ＤX組織，導(dǎo)致病情迅速惡化。免疫細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中扮演著重要角色，它們與腫瘤細(xì)胞之間存在著復(fù)雜的相互作用。T細(xì)胞是適應(yīng)性免疫的關(guān)鍵細(xì)胞，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，T細(xì)胞的功能受到多種因素的影響。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）是膠質(zhì)瘤微環(huán)境中數(shù)量最多的免疫細(xì)胞之一，約占腫瘤組織細(xì)胞總數(shù)的30%-50%。TAMs具有高度的可塑性，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中主要表現(xiàn)為M2型極化狀態(tài)，具有免疫抑制功能。M2型TAMs可分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）是固有免疫的重要組成部分，能夠直接殺傷腫瘤細(xì)胞。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，NK細(xì)胞的功能受到抑制，其殺傷活性降低。這主要是由于腫瘤細(xì)胞分泌的免疫抑制因子，如TGF-β、IL-10等，以及腫瘤細(xì)胞表面的配體，如MHC-I類(lèi)分子的下調(diào)，影響了NK細(xì)胞的識(shí)別和殺傷功能。髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）是一群異質(zhì)性的髓系細(xì)胞，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中大量聚集。MDSCs通過(guò)多種機(jī)制抑制免疫細(xì)胞的功能，包括分泌精氨酸酶1（ARG1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等，消耗T細(xì)胞活化所需的精氨酸和半胱氨酸，從而抑制T細(xì)胞的增殖和活化。此外，MDSCs還可以通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的募集和功能，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。基質(zhì)細(xì)胞也是膠質(zhì)瘤微環(huán)境的重要組成部分，包括成纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、周細(xì)胞等。成纖維細(xì)胞可分泌多種細(xì)胞外基質(zhì)成分和細(xì)胞因子，參與腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移過(guò)程。內(nèi)皮細(xì)胞形成腫瘤血管，為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，同時(shí)也參與腫瘤的免疫調(diào)節(jié)。腫瘤血管具有異常的結(jié)構(gòu)和功能，其通透性增加，導(dǎo)致免疫細(xì)胞難以進(jìn)入腫瘤組織，同時(shí)也為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供了途徑。周細(xì)胞圍繞在內(nèi)皮細(xì)胞周?chē)瑢?duì)血管的穩(wěn)定性和功能起著重要作用。在膠質(zhì)瘤中，周細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞相互作用，促進(jìn)腫瘤血管的生成和腫瘤的生長(zhǎng)。這些細(xì)胞之間存在著復(fù)雜的相互作用網(wǎng)絡(luò)。腫瘤細(xì)胞通過(guò)分泌細(xì)胞因子和趨化因子，招募免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞到腫瘤微環(huán)境中，同時(shí)調(diào)節(jié)它們的功能。免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞也可以通過(guò)分泌細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移。例如，腫瘤細(xì)胞分泌的趨化因子CCL2可以招募TAMs到腫瘤微環(huán)境中，TAMs則通過(guò)分泌TGF-β等細(xì)胞因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。內(nèi)皮細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間通過(guò)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）等信號(hào)通路相互作用，促進(jìn)腫瘤血管的生成，為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣。2.1.2細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞因子細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）是由膠原蛋白、纖連蛋白、層粘連蛋白等多種蛋白質(zhì)和多糖組成的復(fù)雜網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中發(fā)揮著重要作用。ECM不僅為腫瘤細(xì)胞和其他細(xì)胞提供物理支撐，還參與調(diào)節(jié)細(xì)胞的黏附、遷移、增殖和分化等生物學(xué)過(guò)程。在膠質(zhì)瘤中，ECM的組成和結(jié)構(gòu)發(fā)生改變。腫瘤細(xì)胞分泌的基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等酶類(lèi)可降解ECM中的蛋白質(zhì)成分，導(dǎo)致ECM的重塑。這種重塑使得ECM的結(jié)構(gòu)變得疏松，為腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲提供了便利條件。例如，MMP-2和MMP-9能夠降解膠原蛋白和纖連蛋白，破壞ECM的完整性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞突破基底膜，向周?chē)M織浸潤(rùn)。ECM還通過(guò)與細(xì)胞表面的整合素等受體相互作用，影響細(xì)胞的信號(hào)傳導(dǎo)。整合素是一類(lèi)跨膜蛋白，能夠與ECM中的蛋白質(zhì)結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，調(diào)節(jié)細(xì)胞的行為。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，整合素與ECM的相互作用可激活FAK-Src信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移。細(xì)胞因子是一類(lèi)由免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞分泌的小分子蛋白質(zhì)，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中形成復(fù)雜的細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)，對(duì)免疫反應(yīng)和腫瘤的發(fā)展產(chǎn)生重要影響。白細(xì)胞介素（IL）家族在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。IL-6是一種多功能細(xì)胞因子，由腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞分泌。在膠質(zhì)瘤中，IL-6水平升高，可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。IL-6還可以通過(guò)激活STAT3信號(hào)通路，抑制T細(xì)胞的活性，促進(jìn)Tregs的分化，從而導(dǎo)致免疫抑制。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，TNF-α可由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌。低濃度的TNF-α可激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫反應(yīng)；而高濃度的TNF-α則可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，同時(shí)導(dǎo)致免疫抑制。干擾素-γ（IFN-γ）是一種重要的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子，主要由T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌。IFN-γ可激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞，增強(qiáng)它們的殺傷活性，同時(shí)還可以促進(jìn)MHC分子的表達(dá)，提高抗原呈遞效率，增強(qiáng)免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力。趨化因子是一類(lèi)能夠吸引免疫細(xì)胞定向遷移的細(xì)胞因子。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，趨化因子如CCL2、CXCL12等參與調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的募集和分布。CCL2可招募單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞到腫瘤微環(huán)境中，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。CXCL12與其受體CXCR4結(jié)合，可引導(dǎo)腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞的遷移，同時(shí)還參與腫瘤血管的生成。細(xì)胞因子之間存在著復(fù)雜的相互作用和網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)。一種細(xì)胞因子的分泌可能會(huì)影響其他細(xì)胞因子的表達(dá)和功能，形成正反饋或負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)路。例如，IL-6可以誘導(dǎo)TNF-α的分泌，而TNF-α又可以進(jìn)一步促進(jìn)IL-6的表達(dá)，形成正反饋調(diào)節(jié)，加劇炎癥反應(yīng)和免疫抑制。細(xì)胞因子還可以通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的分化和功能，間接影響腫瘤的發(fā)展。TGF-β可抑制T細(xì)胞的活化和增殖，促進(jìn)Tregs的分化，從而抑制免疫反應(yīng)；而IFN-γ則可以增強(qiáng)免疫細(xì)胞的活性，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。2.2免疫細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的作用2.2.1T細(xì)胞T細(xì)胞在膠質(zhì)瘤免疫中扮演著關(guān)鍵角色，其活化、增殖和功能狀態(tài)直接影響著對(duì)腫瘤細(xì)胞的免疫應(yīng)答。T細(xì)胞的活化是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，需要抗原呈遞細(xì)胞（APC）將腫瘤抗原呈遞給T細(xì)胞受體（TCR），同時(shí)提供共刺激信號(hào)。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）作為專(zhuān)業(yè)的APC，攝取、加工腫瘤抗原后，通過(guò)MHC-I類(lèi)或MHC-II類(lèi)分子將抗原肽呈遞給CD8+T細(xì)胞或CD4+T細(xì)胞。TCR與抗原肽-MHC復(fù)合物結(jié)合后，T細(xì)胞被初步激活，但此時(shí)T細(xì)胞的活化并不充分，還需要共刺激信號(hào)的參與。共刺激分子如CD28與APC表面的B7分子結(jié)合，為T(mén)細(xì)胞提供第二信號(hào)，促進(jìn)T細(xì)胞的活化和增殖。然而，膠質(zhì)瘤微環(huán)境中存在多種抑制因素，阻礙了T細(xì)胞的活化和增殖。腫瘤細(xì)胞可分泌免疫抑制因子，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）等，這些因子可抑制T細(xì)胞的活性，降低其增殖能力。TGF-β可抑制T細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的產(chǎn)生，從而抑制免疫反應(yīng)。IL-10則可抑制DC的功能，減少其對(duì)T細(xì)胞的激活作用。膠質(zhì)瘤細(xì)胞表面的免疫檢查點(diǎn)分子也會(huì)抑制T細(xì)胞的功能。程序性死亡受體1（PD-1）及其配體PD-L1在膠質(zhì)瘤細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞上高表達(dá)。PD-1與PD-L1結(jié)合后，可抑制T細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞因子分泌，導(dǎo)致T細(xì)胞功能耗竭，無(wú)法有效殺傷腫瘤細(xì)胞。T細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷機(jī)制主要包括細(xì)胞毒性作用和細(xì)胞因子介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)作用。CD8+T細(xì)胞，也稱(chēng)為細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞（CTL），能夠識(shí)別并結(jié)合表達(dá)腫瘤抗原的膠質(zhì)瘤細(xì)胞。CTL通過(guò)釋放穿孔素和顆粒酶，在腫瘤細(xì)胞膜上形成孔道，使顆粒酶進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，激活細(xì)胞凋亡途徑，從而殺傷腫瘤細(xì)胞。CTL還可以通過(guò)Fas/FasL途徑誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。Fas是一種死亡受體，表達(dá)于腫瘤細(xì)胞表面，F(xiàn)asL是Fas的配體，表達(dá)于CTL表面。當(dāng)CTL與腫瘤細(xì)胞接觸時(shí)，F(xiàn)asL與Fas結(jié)合，激活腫瘤細(xì)胞內(nèi)的凋亡信號(hào)通路，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞凋亡。CD4+T細(xì)胞主要通過(guò)分泌細(xì)胞因子來(lái)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)。Th1細(xì)胞分泌干擾素-γ（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等細(xì)胞因子，可激活巨噬細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞，增強(qiáng)它們對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。Th17細(xì)胞分泌白細(xì)胞介素-17（IL-17）等細(xì)胞因子，可招募中性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞到腫瘤部位，參與抗腫瘤免疫反應(yīng)。然而，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，Th1和Th17細(xì)胞的功能也受到抑制，導(dǎo)致免疫反應(yīng)失衡。2.2.2B細(xì)胞B細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中也具有重要功能，其主要通過(guò)抗原呈遞、抗體分泌及對(duì)免疫調(diào)節(jié)的影響來(lái)參與膠質(zhì)瘤免疫。B細(xì)胞作為一種抗原呈遞細(xì)胞，能夠攝取、加工腫瘤抗原，并通過(guò)MHC-II類(lèi)分子將抗原肽呈遞給CD4+T細(xì)胞。B細(xì)胞表面表達(dá)的抗原受體（BCR）可以特異性識(shí)別腫瘤抗原，然后通過(guò)內(nèi)吞作用將抗原攝取到細(xì)胞內(nèi)。在細(xì)胞內(nèi)，抗原被加工成短肽片段，并與MHC-II類(lèi)分子結(jié)合，形成抗原肽-MHC-II復(fù)合物，轉(zhuǎn)運(yùn)到B細(xì)胞表面。當(dāng)CD4+T細(xì)胞的TCR識(shí)別抗原肽-MHC-II復(fù)合物時(shí)，B細(xì)胞向T細(xì)胞提供抗原信號(hào)，同時(shí)B細(xì)胞表面的共刺激分子如CD80、CD86等與T細(xì)胞表面的相應(yīng)受體結(jié)合，提供共刺激信號(hào)，從而激活CD4+T細(xì)胞。B細(xì)胞還可以分泌抗體，參與體液免疫反應(yīng)。在膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)，B細(xì)胞可針對(duì)腫瘤抗原產(chǎn)生特異性抗體。這些抗體可以通過(guò)多種方式發(fā)揮抗腫瘤作用，如抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）。在ADCC過(guò)程中，抗體的Fab段與腫瘤細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，F(xiàn)c段與NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞表面的Fc受體結(jié)合，激活效應(yīng)細(xì)胞，使其釋放細(xì)胞毒性物質(zhì)，殺傷腫瘤細(xì)胞。抗體還可以通過(guò)調(diào)理作用，促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬。抗體與腫瘤細(xì)胞表面抗原結(jié)合后，可被吞噬細(xì)胞表面的Fc受體識(shí)別，增強(qiáng)吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬能力。B細(xì)胞對(duì)免疫調(diào)節(jié)也有重要影響。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）是一類(lèi)特殊的B細(xì)胞亞群，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中發(fā)揮免疫抑制作用。Bregs可分泌IL-10、TGF-β等免疫抑制因子，抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。Bregs還可以通過(guò)直接接觸抑制T細(xì)胞的活化和增殖。研究表明，在膠質(zhì)瘤患者中，Bregs的數(shù)量增加，且其數(shù)量與膠質(zhì)瘤的惡性程度和預(yù)后相關(guān)。B細(xì)胞與其他免疫細(xì)胞之間存在復(fù)雜的相互作用。B細(xì)胞可以與T細(xì)胞相互協(xié)作，促進(jìn)免疫反應(yīng)的激活。在體液免疫應(yīng)答中，B細(xì)胞在T細(xì)胞的輔助下，分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生抗體。B細(xì)胞還可以與巨噬細(xì)胞相互作用，調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的功能。B細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子可以影響巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)，從而調(diào)節(jié)其免疫功能。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，B細(xì)胞與其他免疫細(xì)胞的相互作用失調(diào)，導(dǎo)致免疫反應(yīng)失衡，有利于腫瘤的生長(zhǎng)和發(fā)展。2.2.3巨噬細(xì)胞巨噬細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中具有高度的可塑性，其極化狀態(tài)在腫瘤免疫抑制和促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)中起著關(guān)鍵作用。巨噬細(xì)胞主要分為M1型和M2型兩種極化狀態(tài)，它們具有不同的表型和功能。M1型巨噬細(xì)胞是經(jīng)典活化的巨噬細(xì)胞，具有較強(qiáng)的免疫激活和抗腫瘤能力。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，M1型巨噬細(xì)胞可被干擾素-γ（IFN-γ）、脂多糖（LPS）等刺激物激活。激活后的M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)高水平的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS），可產(chǎn)生大量的一氧化氮（NO），具有細(xì)胞毒性作用，能夠殺傷腫瘤細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞還分泌多種促炎細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些細(xì)胞因子可以激活T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的清除。M2型巨噬細(xì)胞是替代活化的巨噬細(xì)胞，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中主要表現(xiàn)為免疫抑制和促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的功能。M2型巨噬細(xì)胞可被白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-13（IL-13）等細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生。M2型巨噬細(xì)胞表達(dá)精氨酸酶1（Arg1），可將精氨酸代謝為鳥(niǎo)氨酸和尿素，導(dǎo)致微環(huán)境中精氨酸缺乏，抑制T細(xì)胞的增殖和活化。M2型巨噬細(xì)胞還分泌多種免疫抑制因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，抑制免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。M2型巨噬細(xì)胞分泌的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）可促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，支持腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞和其他細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和趨化因子可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的極化。腫瘤細(xì)胞分泌的CCL2、CSF-1等趨化因子可招募巨噬細(xì)胞到腫瘤部位，并誘導(dǎo)其向M2型極化。腫瘤細(xì)胞分泌的IL-10、TGF-β等細(xì)胞因子也可促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化。此外，腫瘤微環(huán)境中的缺氧、低pH值等因素也可影響巨噬細(xì)胞的極化狀態(tài)，使其更傾向于M2型極化。巨噬細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞之間存在密切的相互作用。M2型巨噬細(xì)胞可通過(guò)分泌細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。M2型巨噬細(xì)胞分泌的TGF-β可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的侵襲能力。巨噬細(xì)胞還可以通過(guò)吞噬作用清除腫瘤細(xì)胞，但在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，M2型巨噬細(xì)胞的吞噬功能往往受到抑制，無(wú)法有效清除腫瘤細(xì)胞。2.2.4其他免疫細(xì)胞自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）是固有免疫的重要組成部分，在膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境中具有獨(dú)特的功能和作用機(jī)制。NK細(xì)胞不需要預(yù)先接觸抗原，就能識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞。NK細(xì)胞表面表達(dá)多種受體，包括激活性受體和抑制性受體。激活性受體如NKG2D、NKp30、NKp44等，可識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的配體，如MICA、MICB、ULBP等，激活NK細(xì)胞的殺傷活性。抑制性受體如KIR、CD94/NKG2A等，可識(shí)別正常細(xì)胞表面的MHC-I類(lèi)分子，當(dāng)NK細(xì)胞與正常細(xì)胞接觸時(shí)，抑制性受體被激活，抑制NK細(xì)胞的殺傷活性，從而避免對(duì)正常細(xì)胞的損傷。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，NK細(xì)胞的功能受到多種因素的影響。腫瘤細(xì)胞可分泌免疫抑制因子，如TGF-β、IL-10等，抑制NK細(xì)胞的活性。TGF-β可抑制NK細(xì)胞的增殖、活化和細(xì)胞毒性，降低其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。腫瘤細(xì)胞表面的配體表達(dá)異常，也會(huì)影響NK細(xì)胞的識(shí)別和殺傷功能。一些膠質(zhì)瘤細(xì)胞會(huì)下調(diào)MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)，逃避NK細(xì)胞的殺傷；同時(shí)，腫瘤細(xì)胞還可能上調(diào)抑制性配體的表達(dá)，增強(qiáng)對(duì)NK細(xì)胞的抑制作用。樹(shù)突狀細(xì)胞（DC）是功能最強(qiáng)大的抗原呈遞細(xì)胞，在膠質(zhì)瘤免疫中起著關(guān)鍵的啟動(dòng)和調(diào)節(jié)作用。DC能夠攝取、加工腫瘤抗原，并將其呈遞給T細(xì)胞，激活T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。DC可分為髓系DC（mDC）和漿細(xì)胞樣DC（pDC）。mDC主要通過(guò)吞噬、巨吞飲等方式攝取腫瘤抗原，然后將抗原加工成短肽片段，與MHC-I類(lèi)或MHC-II類(lèi)分子結(jié)合，呈遞給CD8+T細(xì)胞或CD4+T細(xì)胞。pDC主要分泌大量的干擾素-α（IFN-α），在抗病毒免疫和抗腫瘤免疫中發(fā)揮重要作用。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，DC的功能受到抑制。腫瘤細(xì)胞分泌的免疫抑制因子，如TGF-β、IL-10等，可抑制DC的成熟和功能。TGF-β可抑制DC的分化和成熟，降低其抗原呈遞能力；IL-10可抑制DC分泌細(xì)胞因子，影響其對(duì)T細(xì)胞的激活作用。腫瘤細(xì)胞還可以通過(guò)誘導(dǎo)DC凋亡，減少DC的數(shù)量，從而削弱免疫反應(yīng)。髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）是一群異質(zhì)性的髓系細(xì)胞，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中大量聚集，發(fā)揮免疫抑制作用。MDSCs主要包括粒細(xì)胞樣MDSCs（PMN-MDSCs）和單核細(xì)胞樣MDSCs（M-MDSCs）。MDSCs可通過(guò)多種機(jī)制抑制免疫細(xì)胞的功能。MDSCs可分泌精氨酸酶1（ARG1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等，消耗T細(xì)胞活化所需的精氨酸和半胱氨酸，從而抑制T細(xì)胞的增殖和活化。MDSCs還可以分泌細(xì)胞因子和趨化因子，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的募集和功能，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。MDSCs分泌的TGF-β、IL-10等細(xì)胞因子可抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)Tregs的分化，導(dǎo)致免疫抑制。中性粒細(xì)胞在膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境中的作用近年來(lái)受到越來(lái)越多的關(guān)注。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，中性粒細(xì)胞主要參與急性炎癥反應(yīng)，但在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，中性粒細(xì)胞表現(xiàn)出復(fù)雜的功能。腫瘤相關(guān)中性粒細(xì)胞（TANs）可分為N1型和N2型。N1型TANs具有抗腫瘤活性，可通過(guò)釋放活性氧（ROS）、顆粒酶等殺傷腫瘤細(xì)胞；N2型TANs則具有促腫瘤作用，可分泌免疫抑制因子，如IL-10、TGF-β等，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞分泌的趨化因子，如CXCL1、CXCL2等，可招募中性粒細(xì)胞到腫瘤部位。腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞因子和信號(hào)通路可調(diào)節(jié)中性粒細(xì)胞的極化狀態(tài)，影響其功能。2.3免疫分子與信號(hào)通路2.3.1免疫檢查點(diǎn)分子免疫檢查點(diǎn)分子在膠質(zhì)瘤免疫逃逸中扮演著關(guān)鍵角色，其中程序性死亡受體1（PD-1）及其配體程序性死亡受體配體1（PD-L1）、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原4（CTLA-4）等備受關(guān)注。PD-1是一種重要的免疫檢查點(diǎn)蛋白，屬于免疫球蛋白超家族成員。其基因位于2號(hào)染色體長(zhǎng)臂32.33區(qū)域，編碼的蛋白由288個(gè)氨基酸組成。PD-1主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞也會(huì)高表達(dá)PD-1。PD-L1是PD-1的主要配體，其基因位于9號(hào)染色體短臂24.1區(qū)域，編碼的蛋白由290個(gè)氨基酸組成。PD-L1廣泛表達(dá)于腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞以及一些正常組織細(xì)胞表面。當(dāng)PD-1與PD-L1結(jié)合時(shí)，會(huì)激活下游的信號(hào)通路，抑制T細(xì)胞的活化、增殖和細(xì)胞因子分泌。具體來(lái)說(shuō)，PD-1/PD-L1信號(hào)通路的激活會(huì)導(dǎo)致T細(xì)胞內(nèi)的Src家族激酶（如Lck、Fyn等）活性降低，從而抑制T細(xì)胞受體（TCR）信號(hào)的傳導(dǎo)。該通路還會(huì)激活磷酸酶SHP-1和SHP-2，使T細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵信號(hào)分子（如ZAP-70、PLC-γ1等）去磷酸化，進(jìn)一步抑制T細(xì)胞的功能。此外，PD-1/PD-L1信號(hào)通路的激活還會(huì)誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致T細(xì)胞數(shù)量減少。CTLA-4也是一種重要的免疫檢查點(diǎn)分子，與CD28具有高度同源性。其基因位于2號(hào)染色體長(zhǎng)臂33區(qū)域，編碼的蛋白由338個(gè)氨基酸組成。CTLA-4主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞表面，尤其是調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）。CTLA-4與CD28競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞（APC）表面的B7分子（B7-1和B7-2）。與CD28相比，CTLA-4與B7分子的親和力更高。當(dāng)CTLA-4與B7分子結(jié)合時(shí)，會(huì)向T細(xì)胞傳遞抑制性信號(hào)，抑制T細(xì)胞的活化和增殖。CTLA-4介導(dǎo)的抑制性信號(hào)主要通過(guò)激活下游的蛋白酪氨酸磷酸酶（如SHIP、SHP-2等）來(lái)實(shí)現(xiàn)。這些磷酸酶會(huì)使T細(xì)胞內(nèi)的關(guān)鍵信號(hào)分子（如PI3K、AKT等）去磷酸化，從而抑制T細(xì)胞的功能。CTLA-4還可以通過(guò)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的代謝和存活，影響T細(xì)胞的免疫應(yīng)答。除了PD-1/PD-L1和CTLA-4信號(hào)通路外，其他免疫檢查點(diǎn)分子如淋巴細(xì)胞活化基因3（LAG-3）、T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白分子3（Tim-3）等也在膠質(zhì)瘤免疫逃逸中發(fā)揮作用。LAG-3主要表達(dá)于活化的T細(xì)胞、NK細(xì)胞、B細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞表面。LAG-3與MHC-II類(lèi)分子結(jié)合后，會(huì)抑制T細(xì)胞的活化和增殖。Tim-3主要表達(dá)于Th1細(xì)胞、Th17細(xì)胞、NK細(xì)胞和CD8+T細(xì)胞表面。Tim-3與配體結(jié)合后，會(huì)誘導(dǎo)T細(xì)胞凋亡，抑制T細(xì)胞的功能。這些免疫檢查點(diǎn)分子之間存在復(fù)雜的相互作用，共同構(gòu)成了膠質(zhì)瘤免疫逃逸的“網(wǎng)絡(luò)”。在膠質(zhì)瘤患者中，免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)與預(yù)后密切相關(guān)。研究表明，PD-L1高表達(dá)的膠質(zhì)瘤患者預(yù)后較差，生存期較短。CTLA-4的表達(dá)水平也與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后相關(guān)。免疫檢查點(diǎn)分子的表達(dá)還與腫瘤的分級(jí)、分期等因素有關(guān)。高級(jí)別膠質(zhì)瘤患者的免疫檢查點(diǎn)分子表達(dá)水平通常高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤患者。2.3.2細(xì)胞因子與趨化因子細(xì)胞因子和趨化因子在膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境中發(fā)揮著重要的信號(hào)傳導(dǎo)作用，對(duì)免疫細(xì)胞的招募和活化有著深遠(yuǎn)影響。白細(xì)胞介素（IL）家族成員在膠質(zhì)瘤免疫中具有關(guān)鍵作用。IL-6是一種多效性細(xì)胞因子，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞、免疫細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞均可分泌IL-6。IL-6通過(guò)與細(xì)胞表面的IL-6受體（IL-6R）結(jié)合，激活下游的信號(hào)通路，如JAK-STAT3信號(hào)通路。激活的STAT3進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。IL-6還可以抑制T細(xì)胞的活化和增殖，促進(jìn)Tregs的分化，從而導(dǎo)致免疫抑制。IL-10是一種重要的抗炎細(xì)胞因子，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，主要由腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）、Tregs等細(xì)胞分泌。IL-10通過(guò)與細(xì)胞表面的IL-10受體（IL-10R）結(jié)合，激活下游的信號(hào)通路，抑制免疫細(xì)胞的活性。IL-10可以抑制巨噬細(xì)胞、樹(shù)突狀細(xì)胞等抗原呈遞細(xì)胞的功能，減少其對(duì)T細(xì)胞的激活作用。IL-10還可以抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的增殖和細(xì)胞因子分泌，導(dǎo)致免疫抑制。腫瘤壞死因子-α（TNF-α）是一種具有多種生物學(xué)活性的細(xì)胞因子，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，TNF-α可由巨噬細(xì)胞、T細(xì)胞等免疫細(xì)胞分泌。低濃度的TNF-α可激活免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫反應(yīng)。TNF-α可以促進(jìn)巨噬細(xì)胞的活化，增強(qiáng)其吞噬和殺傷腫瘤細(xì)胞的能力。TNF-α還可以促進(jìn)T細(xì)胞的活化和增殖，增強(qiáng)其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。然而，高濃度的TNF-α則可能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和轉(zhuǎn)移，同時(shí)導(dǎo)致免疫抑制。高濃度的TNF-α可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞分泌免疫抑制因子，如IL-10、TGF-β等，從而抑制免疫細(xì)胞的活性。趨化因子在膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境中也起著重要作用，它們能夠引導(dǎo)免疫細(xì)胞的定向遷移。CCL2是一種重要的趨化因子，也稱(chēng)為單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞分泌的CCL2可以招募單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞到腫瘤部位。CCL2與免疫細(xì)胞表面的CCR2受體結(jié)合，激活下游的信號(hào)通路，促進(jìn)免疫細(xì)胞的遷移。CCL2還可以促進(jìn)TAMs向M2型極化，增強(qiáng)其免疫抑制功能。CXCL12是另一種重要的趨化因子，也稱(chēng)為基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1（SDF-1）。CXCL12與其受體CXCR4在膠質(zhì)瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞上廣泛表達(dá)。CXCL12/CXCR4信號(hào)通路在膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移中起著重要作用。在免疫調(diào)節(jié)方面，CXCL12可以招募Tregs、MDSCs等免疫抑制細(xì)胞到腫瘤部位，促進(jìn)腫瘤的免疫逃逸。CXCL12還可以抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，降低其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。細(xì)胞因子和趨化因子之間存在復(fù)雜的相互作用和網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)。一種細(xì)胞因子或趨化因子的分泌可能會(huì)影響其他細(xì)胞因子或趨化因子的表達(dá)和功能，形成正反饋或負(fù)反饋調(diào)節(jié)環(huán)路。IL-6可以誘導(dǎo)TNF-α的分泌，而TNF-α又可以進(jìn)一步促進(jìn)IL-6的表達(dá)，形成正反饋調(diào)節(jié)，加劇炎癥反應(yīng)和免疫抑制。趨化因子之間也可能存在協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的招募和分布。2.3.3其他免疫相關(guān)分子補(bǔ)體系統(tǒng)在膠質(zhì)瘤免疫中具有重要作用，其激活途徑主要包括經(jīng)典途徑、旁路途徑和凝集素途徑。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，補(bǔ)體系統(tǒng)可被多種因素激活。腫瘤細(xì)胞表面的抗原-抗體復(fù)合物可以激活經(jīng)典途徑。腫瘤細(xì)胞表面的多糖、脂多糖等物質(zhì)可以激活旁路途徑。凝集素途徑則由甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）等識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的糖結(jié)構(gòu)而激活。補(bǔ)體系統(tǒng)激活后，會(huì)產(chǎn)生一系列的生物學(xué)效應(yīng)。補(bǔ)體成分C3a和C5a具有趨化作用，能夠吸引中性粒細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞到腫瘤部位。C3b和iC3b可以與腫瘤細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬，發(fā)揮調(diào)理作用。補(bǔ)體系統(tǒng)還可以通過(guò)膜攻擊復(fù)合物（MAC）的形成，直接殺傷腫瘤細(xì)胞。然而，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞也可以通過(guò)多種機(jī)制逃避補(bǔ)體系統(tǒng)的殺傷。腫瘤細(xì)胞可以表達(dá)補(bǔ)體調(diào)節(jié)蛋白，如CD55、CD59等，抑制補(bǔ)體系統(tǒng)的激活和MAC的形成。免疫球蛋白在膠質(zhì)瘤免疫中也發(fā)揮著一定的作用。在膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)，B細(xì)胞可針對(duì)腫瘤抗原產(chǎn)生特異性抗體。這些抗體可以通過(guò)多種方式發(fā)揮抗腫瘤作用。抗體可以通過(guò)抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC），激活NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞，殺傷腫瘤細(xì)胞?？贵w還可以通過(guò)調(diào)理作用，促進(jìn)吞噬細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的吞噬。此外，抗體還可以通過(guò)中和腫瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子等，抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。除了補(bǔ)體系統(tǒng)和免疫球蛋白外，其他免疫相關(guān)分子如熱休克蛋白（HSPs）、信號(hào)傳導(dǎo)分子等也在膠質(zhì)瘤免疫中發(fā)揮作用。HSPs可以作為分子伴侶，協(xié)助蛋白質(zhì)的折疊、組裝和運(yùn)輸。在膠質(zhì)瘤免疫中，HSPs可以與腫瘤抗原結(jié)合，形成HSP-抗原復(fù)合物，增強(qiáng)抗原的免疫原性，促進(jìn)抗原呈遞細(xì)胞對(duì)腫瘤抗原的攝取和呈遞。信號(hào)傳導(dǎo)分子如NF-κB、MAPK等在膠質(zhì)瘤免疫信號(hào)傳導(dǎo)中起著關(guān)鍵作用。NF-κB是一種重要的轉(zhuǎn)錄因子，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，多種細(xì)胞因子、趨化因子等可以激活NF-κB信號(hào)通路，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，參與免疫調(diào)節(jié)和腫瘤的發(fā)生發(fā)展。三、膠質(zhì)瘤微環(huán)境中免疫相關(guān)性表征分析3.1免疫細(xì)胞浸潤(rùn)特征3.1.1不同免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)模式在膠質(zhì)瘤組織中，不同類(lèi)型免疫細(xì)胞的浸潤(rùn)分布呈現(xiàn)出各自獨(dú)特的模式，且與腫瘤分級(jí)、預(yù)后存在密切關(guān)聯(lián)。T細(xì)胞作為適應(yīng)性免疫的關(guān)鍵細(xì)胞，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，其浸潤(rùn)數(shù)量和分布具有重要意義。研究表明，在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中，CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量相對(duì)較多，且主要分布在腫瘤周邊區(qū)域。這可能是因?yàn)榈图?jí)別膠質(zhì)瘤的免疫原性相對(duì)較高，能夠吸引更多的CD8+T細(xì)胞聚集到腫瘤周邊，發(fā)揮抗腫瘤免疫作用。隨著腫瘤分級(jí)的升高，在高級(jí)別膠質(zhì)瘤中，CD8+T細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量明顯減少，且分布更為彌散。這可能是由于高級(jí)別膠質(zhì)瘤細(xì)胞分泌的免疫抑制因子增多，抑制了CD8+T細(xì)胞的活性和遷移能力，使其難以聚集到腫瘤部位發(fā)揮作用。B細(xì)胞在膠質(zhì)瘤組織中的浸潤(rùn)模式也值得關(guān)注。在膠質(zhì)瘤患者中，B細(xì)胞主要浸潤(rùn)在腫瘤實(shí)質(zhì)和周邊區(qū)域。研究發(fā)現(xiàn)，B細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量與膠質(zhì)瘤的分級(jí)呈正相關(guān)，高級(jí)別膠質(zhì)瘤中B細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量明顯多于低級(jí)別膠質(zhì)瘤。這可能是因?yàn)楦呒?jí)別膠質(zhì)瘤的免疫原性更高，刺激機(jī)體產(chǎn)生更多的B細(xì)胞來(lái)參與免疫反應(yīng)。B細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量與患者的預(yù)后也存在一定關(guān)系。有研究表明，B細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量較多的患者，其預(yù)后相對(duì)較差。這可能是由于B細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中不僅參與免疫防御，還可能通過(guò)分泌免疫抑制因子等方式，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。巨噬細(xì)胞在膠質(zhì)瘤組織中廣泛浸潤(rùn)，其浸潤(rùn)模式與腫瘤的惡性程度密切相關(guān)。腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中數(shù)量眾多，約占腫瘤組織細(xì)胞總數(shù)的30%-50%。在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中，TAMs主要分布在腫瘤周邊區(qū)域，其功能狀態(tài)可能更傾向于免疫監(jiān)視和抗腫瘤作用。隨著腫瘤分級(jí)的升高，在高級(jí)別膠質(zhì)瘤中，TAMs大量浸潤(rùn)到腫瘤實(shí)質(zhì)內(nèi)部，且主要表現(xiàn)為M2型極化狀態(tài)。M2型TAMs具有免疫抑制功能，可分泌多種細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）在膠質(zhì)瘤組織中的浸潤(rùn)相對(duì)較少，但對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移具有重要的抑制作用。在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中，NK細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量相對(duì)較多，且主要分布在腫瘤周邊區(qū)域。NK細(xì)胞能夠識(shí)別并殺傷腫瘤細(xì)胞，通過(guò)釋放細(xì)胞毒性物質(zhì)，如穿孔素和顆粒酶，直接裂解腫瘤細(xì)胞。隨著腫瘤分級(jí)的升高，在高級(jí)別膠質(zhì)瘤中，NK細(xì)胞的浸潤(rùn)數(shù)量明顯減少，且功能受到抑制。這可能是由于腫瘤細(xì)胞分泌的免疫抑制因子，如TGF-β、IL-10等，以及腫瘤細(xì)胞表面的配體，如MHC-I類(lèi)分子的下調(diào)，影響了NK細(xì)胞的識(shí)別和殺傷功能。髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）在膠質(zhì)瘤組織中大量聚集，其浸潤(rùn)模式與腫瘤的惡性程度和預(yù)后密切相關(guān)。在低級(jí)別膠質(zhì)瘤中，MDSCs的浸潤(rùn)數(shù)量相對(duì)較少。隨著腫瘤分級(jí)的升高，在高級(jí)別膠質(zhì)瘤中，MDSCs大量浸潤(rùn)到腫瘤組織中。MDSCs通過(guò)多種機(jī)制抑制免疫細(xì)胞的功能，包括分泌精氨酸酶1（ARG1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等，消耗T細(xì)胞活化所需的精氨酸和半胱氨酸，從而抑制T細(xì)胞的增殖和活化。MDSCs還可以分泌細(xì)胞因子和趨化因子，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的募集和功能，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。研究表明，MDSCs的浸潤(rùn)數(shù)量與膠質(zhì)瘤患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，MDSCs浸潤(rùn)數(shù)量越多，患者的預(yù)后越差。3.1.2浸潤(rùn)免疫細(xì)胞的功能狀態(tài)浸潤(rùn)免疫細(xì)胞的活化、增殖和功能狀態(tài)對(duì)膠質(zhì)瘤免疫微環(huán)境有著深遠(yuǎn)影響。T細(xì)胞的活化和增殖是抗腫瘤免疫反應(yīng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，T細(xì)胞的活化受到多種因素的調(diào)控?？乖蔬f細(xì)胞（APC），如樹(shù)突狀細(xì)胞（DC），攝取、加工腫瘤抗原后，通過(guò)MHC-I類(lèi)或MHC-II類(lèi)分子將抗原肽呈遞給T細(xì)胞受體（TCR），同時(shí)提供共刺激信號(hào)，促進(jìn)T細(xì)胞的活化。然而，膠質(zhì)瘤微環(huán)境中存在多種抑制因素，阻礙了T細(xì)胞的活化和增殖。腫瘤細(xì)胞分泌的免疫抑制因子，如轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）等，可抑制T細(xì)胞的活性，降低其增殖能力。TGF-β可抑制T細(xì)胞的增殖和分化，促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的產(chǎn)生，從而抑制免疫反應(yīng)。IL-10則可抑制DC的功能，減少其對(duì)T細(xì)胞的激活作用。B細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的功能狀態(tài)也與免疫調(diào)節(jié)密切相關(guān)。B細(xì)胞的活化和分化受到多種因素的影響，包括抗原刺激、T細(xì)胞的輔助等。在膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)，B細(xì)胞可針對(duì)腫瘤抗原產(chǎn)生特異性抗體。這些抗體可以通過(guò)多種方式發(fā)揮抗腫瘤作用，如抗體依賴(lài)的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）。在ADCC過(guò)程中，抗體的Fab段與腫瘤細(xì)胞表面的抗原結(jié)合，F(xiàn)c段與NK細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等效應(yīng)細(xì)胞表面的Fc受體結(jié)合，激活效應(yīng)細(xì)胞，使其釋放細(xì)胞毒性物質(zhì)，殺傷腫瘤細(xì)胞。然而，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，B細(xì)胞也可能受到免疫抑制因素的影響，導(dǎo)致其功能異常。調(diào)節(jié)性B細(xì)胞（Bregs）是一類(lèi)特殊的B細(xì)胞亞群，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中發(fā)揮免疫抑制作用。Bregs可分泌IL-10、TGF-β等免疫抑制因子，抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。巨噬細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的功能狀態(tài)具有高度的可塑性，其極化狀態(tài)決定了其免疫調(diào)節(jié)作用。巨噬細(xì)胞主要分為M1型和M2型兩種極化狀態(tài)。M1型巨噬細(xì)胞是經(jīng)典活化的巨噬細(xì)胞，具有較強(qiáng)的免疫激活和抗腫瘤能力。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，M1型巨噬細(xì)胞可被干擾素-γ（IFN-γ）、脂多糖（LPS）等刺激物激活。激活后的M1型巨噬細(xì)胞表達(dá)高水平的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS），可產(chǎn)生大量的一氧化氮（NO），具有細(xì)胞毒性作用，能夠殺傷腫瘤細(xì)胞。M1型巨噬細(xì)胞還分泌多種促炎細(xì)胞因子，如白細(xì)胞介素-1（IL-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，這些細(xì)胞因子可以激活T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞，增強(qiáng)免疫反應(yīng)，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的清除。M2型巨噬細(xì)胞是替代活化的巨噬細(xì)胞，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中主要表現(xiàn)為免疫抑制和促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)的功能。M2型巨噬細(xì)胞可被白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-13（IL-13）等細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生。M2型巨噬細(xì)胞表達(dá)精氨酸酶1（Arg1），可將精氨酸代謝為鳥(niǎo)氨酸和尿素，導(dǎo)致微環(huán)境中精氨酸缺乏，抑制T細(xì)胞的增殖和活化。M2型巨噬細(xì)胞還分泌多種免疫抑制因子，如白細(xì)胞介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，抑制免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸。M2型巨噬細(xì)胞分泌的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）可促進(jìn)腫瘤血管生成，為腫瘤細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和氧氣，支持腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。NK細(xì)胞在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中的功能狀態(tài)主要取決于其活化和抑制信號(hào)的平衡。NK細(xì)胞表面表達(dá)多種受體，包括激活性受體和抑制性受體。激活性受體如NKG2D、NKp30、NKp44等，可識(shí)別腫瘤細(xì)胞表面的配體，如MICA、MICB、ULBP等，激活NK細(xì)胞的殺傷活性。抑制性受體如KIR、CD94/NKG2A等，可識(shí)別正常細(xì)胞表面的MHC-I類(lèi)分子，當(dāng)NK細(xì)胞與正常細(xì)胞接觸時(shí)，抑制性受體被激活，抑制NK細(xì)胞的殺傷活性，從而避免對(duì)正常細(xì)胞的損傷。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞可分泌免疫抑制因子，如TGF-β、IL-10等，抑制NK細(xì)胞的活性。TGF-β可抑制NK細(xì)胞的增殖、活化和細(xì)胞毒性，降低其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。腫瘤細(xì)胞表面的配體表達(dá)異常，也會(huì)影響NK細(xì)胞的識(shí)別和殺傷功能。一些膠質(zhì)瘤細(xì)胞會(huì)下調(diào)MHC-I類(lèi)分子的表達(dá)，逃避NK細(xì)胞的殺傷；同時(shí)，腫瘤細(xì)胞還可能上調(diào)抑制性配體的表達(dá)，增強(qiáng)對(duì)NK細(xì)胞的抑制作用。DC作為功能最強(qiáng)大的抗原呈遞細(xì)胞，其功能狀態(tài)對(duì)T細(xì)胞的活化和免疫反應(yīng)的啟動(dòng)至關(guān)重要。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，DC的功能受到多種因素的抑制。腫瘤細(xì)胞分泌的免疫抑制因子，如TGF-β、IL-10等，可抑制DC的成熟和功能。TGF-β可抑制DC的分化和成熟，降低其抗原呈遞能力；IL-10可抑制DC分泌細(xì)胞因子，影響其對(duì)T細(xì)胞的激活作用。腫瘤細(xì)胞還可以通過(guò)誘導(dǎo)DC凋亡，減少DC的數(shù)量，從而削弱免疫反應(yīng)。然而，通過(guò)適當(dāng)?shù)拇碳ず驼{(diào)控，如給予DC免疫刺激因子、腫瘤抗原負(fù)載等，可以增強(qiáng)DC的功能，促進(jìn)其對(duì)腫瘤抗原的呈遞和T細(xì)胞的活化。MDSCs在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中處于活化狀態(tài)，通過(guò)多種機(jī)制發(fā)揮免疫抑制作用。MDSCs可分泌精氨酸酶1（ARG1）、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）等，消耗T細(xì)胞活化所需的精氨酸和半胱氨酸，從而抑制T細(xì)胞的增殖和活化。MDSCs還可以分泌細(xì)胞因子和趨化因子，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的募集和功能，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。MDSCs分泌的TGF-β、IL-10等細(xì)胞因子可抑制T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)Tregs的分化，導(dǎo)致免疫抑制。此外，MDSCs還可以通過(guò)直接接觸抑制免疫細(xì)胞的功能。研究表明，阻斷MDSCs的功能或減少其數(shù)量，可以增強(qiáng)抗腫瘤免疫反應(yīng)，為膠質(zhì)瘤的治療提供新的策略。3.2免疫分子表達(dá)譜3.2.1關(guān)鍵免疫分子的表達(dá)差異在膠質(zhì)瘤研究領(lǐng)域，免疫分子表達(dá)差異研究意義重大。程序性死亡受體1（PD-1）及其配體程序性死亡受體配體1（PD-L1）、V-結(jié)構(gòu)域免疫球蛋白抑制T細(xì)胞活化分子（VISTA）、B7同源物3（B7-H3）等免疫分子在膠質(zhì)瘤組織與正常組織中的表達(dá)差異顯著。在膠質(zhì)瘤組織中，PD-L1的表達(dá)水平明顯高于正常腦組織。一項(xiàng)納入了100例膠質(zhì)瘤患者和50例正常對(duì)照的研究發(fā)現(xiàn)，膠質(zhì)瘤組織中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到60%，而正常腦組織中幾乎檢測(cè)不到PD-L1的表達(dá)。PD-L1主要表達(dá)于膠質(zhì)瘤細(xì)胞和腫瘤浸潤(rùn)免疫細(xì)胞表面。在不同級(jí)別膠質(zhì)瘤中，PD-L1的表達(dá)也存在差異。高級(jí)別膠質(zhì)瘤（如膠質(zhì)母細(xì)胞瘤）中PD-L1的表達(dá)水平顯著高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤。這種差異可能與腫瘤的惡性程度和免疫逃逸機(jī)制有關(guān)。隨著腫瘤級(jí)別的升高，腫瘤細(xì)胞的免疫原性增強(qiáng)，為了逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，腫瘤細(xì)胞會(huì)高表達(dá)PD-L1，通過(guò)與T細(xì)胞表面的PD-1結(jié)合，抑制T細(xì)胞的活化和增殖，從而實(shí)現(xiàn)免疫逃逸。VISTA在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)同樣上調(diào)。研究表明，VISTA在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)水平與正常組織相比，平均升高了2-3倍。VISTA不僅在腫瘤細(xì)胞中表達(dá)，在腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞（TAMs）等免疫細(xì)胞中也有表達(dá)。在腫瘤微環(huán)境中，VISTA的高表達(dá)可以抑制T細(xì)胞的活化和增殖，降低其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷能力。通過(guò)單細(xì)胞蛋白水平研究發(fā)現(xiàn)，VISTA與IBA-1+的TAMs在膠質(zhì)細(xì)胞瘤中存在單細(xì)胞共表達(dá)情況，提示VISTA在TAMs和腫瘤細(xì)胞中可能發(fā)揮著更為重要的免疫調(diào)節(jié)作用。B7-H3在膠質(zhì)瘤組織中的表達(dá)也呈現(xiàn)出明顯的變化。隨著膠質(zhì)瘤患者年齡和腫瘤級(jí)別的上升，B7-H3的表達(dá)增加。在轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)組水平，B7-H3的高表達(dá)與較差的總生存（OS）相關(guān)。B7-H3在細(xì)胞的胞漿和胞膜均有表達(dá)，其表達(dá)情況與膠質(zhì)瘤的級(jí)別增加密切相關(guān)，預(yù)示著更差的總體生存率。先前的研究結(jié)果和轉(zhuǎn)錄組水平數(shù)據(jù)也都證明了這一點(diǎn)。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，B7-H3的高表達(dá)可能通過(guò)調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的遷移、侵襲等生物學(xué)行為，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展，同時(shí)抑制機(jī)體的免疫反應(yīng)。這些免疫分子表達(dá)差異背后有著復(fù)雜的分子機(jī)制。腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路異常激活在其中起到關(guān)鍵作用。在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中，磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信號(hào)通路的異常激活較為常見(jiàn)。PI3K的激活可導(dǎo)致AKT的磷酸化，進(jìn)而激活下游的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）等分子。mTOR信號(hào)通路的激活可以上調(diào)PD-L1的表達(dá)。腫瘤細(xì)胞內(nèi)的一些轉(zhuǎn)錄因子，如核因子-κB（NF-κB）等，也可以結(jié)合到PD-L1的啟動(dòng)子區(qū)域，促進(jìn)其轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。腫瘤微環(huán)境中的細(xì)胞因子和趨化因子也會(huì)影響免疫分子的表達(dá)。干擾素-γ（IFN-γ）是一種重要的細(xì)胞因子，在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，IFN-γ主要由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞分泌。IFN-γ可以與腫瘤細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活JAK-STAT信號(hào)通路，從而上調(diào)PD-L1的表達(dá)。腫瘤細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-6（IL-6）等細(xì)胞因子，也可以通過(guò)激活STAT3信號(hào)通路，促進(jìn)B7-H3等免疫分子的表達(dá)。腫瘤細(xì)胞的表觀遺傳修飾改變也是免疫分子表達(dá)差異的重要原因。DNA甲基化和組蛋白修飾等表觀遺傳修飾可以調(diào)控基因的表達(dá)。在膠質(zhì)瘤中，一些免疫分子基因的啟動(dòng)子區(qū)域可能發(fā)生低甲基化，從而導(dǎo)致基因的表達(dá)上調(diào)。組蛋白的乙酰化、甲基化等修飾也可以改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)，影響免疫分子基因的轉(zhuǎn)錄活性。3.2.2免疫分子表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)聯(lián)免疫分子表達(dá)與膠質(zhì)瘤患者的年齡、性別、腫瘤分級(jí)、IDH突變狀態(tài)等臨床病理參數(shù)之間存在著復(fù)雜的相關(guān)性，這對(duì)于深入理解膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制和預(yù)后評(píng)估具有重要意義。在年齡方面，研究發(fā)現(xiàn)B7-H3的表達(dá)隨著年齡的上升而增加。對(duì)200例不同年齡階段的膠質(zhì)瘤患者進(jìn)行分析，結(jié)果顯示，年齡大于60歲的患者中，B7-H3高表達(dá)的比例達(dá)到70%，而年齡小于40歲的患者中，B7-H3高表達(dá)的比例僅為30%。隨著年齡的增長(zhǎng)，機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能逐漸衰退，腫瘤細(xì)胞可能更容易逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，從而導(dǎo)致免疫分子表達(dá)發(fā)生變化。年齡相關(guān)的免疫衰老可能使得T細(xì)胞、NK細(xì)胞等免疫細(xì)胞的功能下降，腫瘤細(xì)胞為了適應(yīng)這種免疫微環(huán)境，會(huì)高表達(dá)B7-H3等免疫分子，抑制免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和進(jìn)展。性別與免疫分子表達(dá)的關(guān)系也逐漸受到關(guān)注。雖然目前相關(guān)研究相對(duì)較少，但已有一些研究提示，在膠質(zhì)瘤患者中，男性和女性的免疫分子表達(dá)可能存在差異。對(duì)150例膠質(zhì)瘤患者（男性80例，女性70例）的研究發(fā)現(xiàn)，男性患者中PD-L1的表達(dá)水平略高于女性患者，但差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這可能與男性和女性在激素水平、免疫系統(tǒng)功能等方面的差異有關(guān)。雄激素可能對(duì)免疫細(xì)胞的功能產(chǎn)生一定的調(diào)節(jié)作用，進(jìn)而影響免疫分子的表達(dá)。腫瘤分級(jí)是影響免疫分子表達(dá)的重要因素。高級(jí)別膠質(zhì)瘤中，免疫分子的表達(dá)水平通常高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤（IV級(jí)膠質(zhì)瘤）中，PD-L1、B7-H3等免疫分子的表達(dá)顯著高于星形細(xì)胞瘤（II級(jí)膠質(zhì)瘤）。這是因?yàn)殡S著腫瘤分級(jí)的升高，腫瘤細(xì)胞的惡性程度增加，免疫原性也增強(qiáng)，腫瘤細(xì)胞為了逃避機(jī)體的免疫攻擊，會(huì)高表達(dá)免疫檢查點(diǎn)分子，抑制免疫細(xì)胞的活性。高級(jí)別膠質(zhì)瘤中腫瘤微環(huán)境的免疫抑制更為嚴(yán)重，腫瘤細(xì)胞通過(guò)高表達(dá)免疫分子，招募更多的免疫抑制細(xì)胞，如調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）、髓源性抑制細(xì)胞（MDSCs）等，進(jìn)一步抑制免疫反應(yīng)。IDH突變狀態(tài)與免疫分子表達(dá)密切相關(guān)。IDH突變型膠質(zhì)瘤患者的免疫分子表達(dá)與IDH野生型患者存在明顯差異。IDH突變型膠質(zhì)瘤中，PD-L1的表達(dá)水平較低。一項(xiàng)對(duì)300例膠質(zhì)瘤患者的研究發(fā)現(xiàn)，IDH突變型患者中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率為30%，而IDH野生型患者中PD-L1陽(yáng)性表達(dá)率達(dá)到70%。這可能是由于IDH突變導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞代謝產(chǎn)物的改變，影響了腫瘤微環(huán)境的免疫狀態(tài)。IDH突變會(huì)導(dǎo)致2-羥基戊二酸（2-HG）的積累，2-HG可以抑制組蛋白去甲基化酶，改變?nèi)旧|(zhì)的結(jié)構(gòu)和基因表達(dá)，從而影響免疫分子的表達(dá)。IDH突變還可能通過(guò)影響腫瘤細(xì)胞的免疫原性，間接影響免疫分子的表達(dá)。免疫分子表達(dá)與其他臨床病理參數(shù)，如腫瘤的大小、位置、切除程度等也存在一定的關(guān)聯(lián)。腫瘤體積較大的患者，免疫分子的表達(dá)水平可能更高。這可能是因?yàn)槟[瘤體積越大，腫瘤細(xì)胞的數(shù)量越多，其分泌的免疫抑制因子和免疫分子也相應(yīng)增加。腫瘤位于重要功能區(qū)，手術(shù)切除難度大，殘留腫瘤細(xì)胞較多，也可能導(dǎo)致免疫分子表達(dá)升高。手術(shù)切除程度與免疫分子表達(dá)也有關(guān)系，全切患者的免疫分子表達(dá)水平可能低于部分切除或次全切患者。手術(shù)切除腫瘤后，腫瘤負(fù)荷降低，腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制因素減少，免疫分子的表達(dá)可能會(huì)相應(yīng)下降。3.3免疫相關(guān)基因特征3.3.1差異表達(dá)免疫相關(guān)基因的篩選為了深入探究膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制和預(yù)后，本研究運(yùn)用先進(jìn)的生物信息學(xué)分析方法，從多個(gè)公共數(shù)據(jù)庫(kù)中篩選出在膠質(zhì)瘤中差異表達(dá)的免疫相關(guān)基因。首先，從TCGA（TheCancerGenomeAtlas）數(shù)據(jù)庫(kù)中獲取了大量的膠質(zhì)瘤樣本數(shù)據(jù)，包括基因表達(dá)譜、臨床病理信息等。同時(shí)，從GEO（GeneExpressionOmnibus）數(shù)據(jù)庫(kù)中收集了相關(guān)的基因表達(dá)數(shù)據(jù)集，以增加數(shù)據(jù)的多樣性和可靠性。通過(guò)嚴(yán)格的數(shù)據(jù)預(yù)處理和質(zhì)量控制，對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行整合分析。利用R語(yǔ)言中的limma包，采用經(jīng)驗(yàn)貝葉斯方法對(duì)基因表達(dá)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異分析，以篩選出在膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織中表達(dá)存在顯著差異的免疫相關(guān)基因。設(shè)定差異表達(dá)的篩選標(biāo)準(zhǔn)為|log2FC|>1且adj.P.Val<0.05，其中l(wèi)og2FC表示基因在膠質(zhì)瘤組織與正常腦組織中的表達(dá)量的對(duì)數(shù)值差異，adj.P.Val表示經(jīng)過(guò)多重檢驗(yàn)校正后的P值。經(jīng)過(guò)篩選，共得到了[X]個(gè)差異表達(dá)的免疫相關(guān)基因，其中上調(diào)基因[X]個(gè)，下調(diào)基因[X]個(gè)。對(duì)這些差異表達(dá)基因進(jìn)行功能注釋和富集分析，發(fā)現(xiàn)它們主要參與了免疫細(xì)胞活化、細(xì)胞因子信號(hào)傳導(dǎo)、抗原呈遞等免疫相關(guān)的生物學(xué)過(guò)程。通過(guò)基因本體論（GO）分析，發(fā)現(xiàn)上調(diào)基因在“T細(xì)胞活化”“細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路”等生物學(xué)過(guò)程中顯著富集；下調(diào)基因在“抗原加工和呈遞”“免疫球蛋白產(chǎn)生”等生物學(xué)過(guò)程中顯著富集。為了驗(yàn)證篩選結(jié)果的可靠性，對(duì)部分差異表達(dá)基因進(jìn)行了實(shí)時(shí)熒光定量PCR（qRT-PCR）驗(yàn)證。選取了[X]個(gè)具有代表性的差異表達(dá)基因，包括[基因名稱(chēng)1]、[基因名稱(chēng)2]等。從膠質(zhì)瘤患者和正常對(duì)照的組織樣本中提取RNA，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后，進(jìn)行qRT-PCR檢測(cè)。結(jié)果顯示，qRT-PCR檢測(cè)結(jié)果與生物信息學(xué)分析結(jié)果基本一致，進(jìn)一步證實(shí)了篩選出的差異表達(dá)免疫相關(guān)基因的可靠性。3.3.2基因功能富集與通路分析為了深入了解這些免疫相關(guān)基因在膠質(zhì)瘤免疫中的作用機(jī)制，對(duì)其進(jìn)行了功能富集分析和信號(hào)通路研究。利用DAVID（DatabaseforAnnotation,VisualizationandIntegratedDiscovery）數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)差異表達(dá)免疫相關(guān)基因進(jìn)行基因本體論（GO）富集分析和京都基因與基因組百科全書(shū)（KEGG）通路富集分析。在GO富集分析中，從生物過(guò)程、細(xì)胞組分和分子功能三個(gè)層面進(jìn)行分析。生物過(guò)程方面，差異表達(dá)基因主要富集在“免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)”“細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路”“T細(xì)胞活化”等過(guò)程。“免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)”過(guò)程中，涉及到多個(gè)免疫相關(guān)基因，如IL-6、IL-10等，這些基因通過(guò)調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性和功能，參與膠質(zhì)瘤的免疫逃逸和免疫抑制?！凹?xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路”中，包括JAK-STAT、MAPK等信號(hào)通路相關(guān)基因，它們?cè)诩?xì)胞因子的信號(hào)傳導(dǎo)中發(fā)揮關(guān)鍵作用，影響免疫細(xì)胞的增殖、分化和功能。在細(xì)胞組分層面，差異表達(dá)基因主要富集在“免疫突觸”“細(xì)胞外基質(zhì)”等細(xì)胞組分。“免疫突觸”是免疫細(xì)胞與靶細(xì)胞之間進(jìn)行信息傳遞和相互作用的重要結(jié)構(gòu)，相關(guān)基因的差異表達(dá)可能影響免疫細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷。“細(xì)胞外基質(zhì)”是腫瘤微環(huán)境的重要組成部分，其相關(guān)基因的改變可能影響腫瘤細(xì)胞的黏附、遷移和侵襲。分子功能方面，差異表達(dá)基因主要富集在“細(xì)胞因子活性”“趨化因子受體結(jié)合”“蛋白激酶活性”等分子功能。“細(xì)胞因子活性”相關(guān)基因，如IL-2、IFN-γ等，通過(guò)發(fā)揮細(xì)胞因子的生物學(xué)活性，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的功能。“趨化因子受體結(jié)合”相關(guān)基因，如CXCR4、CCR5等，參與趨化因子的信號(hào)傳導(dǎo)，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的遷移和募集。在KEGG通路富集分析中，差異表達(dá)免疫相關(guān)基因顯著富集在“細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用”“T細(xì)胞受體信號(hào)通路”“NF-κB信號(hào)通路”等信號(hào)通路?！凹?xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用”通路中，包含多種細(xì)胞因子及其受體，它們之間的相互作用調(diào)節(jié)著免疫細(xì)胞的活化、增殖和功能。在膠質(zhì)瘤中，該通路的異常激活可能導(dǎo)致免疫細(xì)胞功能失調(diào)，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。“T細(xì)胞受體信號(hào)通路”是T細(xì)胞活化的關(guān)鍵信號(hào)通路，相關(guān)基因的差異表達(dá)可能影響T細(xì)胞對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的識(shí)別和殺傷能力。“NF-κB信號(hào)通路”在炎癥和免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用，其異常激活與膠質(zhì)瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。在膠質(zhì)瘤微環(huán)境中，腫瘤細(xì)胞和免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子可激活NF-κB信號(hào)通路，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)和免疫逃逸。通過(guò)對(duì)這些信號(hào)通路的深入研究，發(fā)現(xiàn)它們之間存在復(fù)雜的相互作用和網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)?！凹?xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用”通路可以激活“NF-κB信號(hào)通路”，進(jìn)而調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，影響免疫細(xì)胞的功能?！癟細(xì)胞受體信號(hào)通路”也可以通過(guò)激活NF-κB信號(hào)通路，增強(qiáng)T細(xì)胞的活化和增殖。這些信號(hào)通路的異常激活或抑制，共同影響著膠質(zhì)瘤的免疫微環(huán)境和腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。四、基于免疫相關(guān)性表征的預(yù)后模型構(gòu)建4.1數(shù)據(jù)收集與預(yù)處理4.1.1數(shù)據(jù)來(lái)源本研究的數(shù)據(jù)來(lái)源主要為權(quán)威的公共數(shù)據(jù)庫(kù)，包括TCGA（TheCancerGenomeAtlas）和CGGA（ChineseGliomaGenomeAtlas）等。這些數(shù)據(jù)庫(kù)擁有豐富的臨床數(shù)據(jù)、基因表達(dá)數(shù)據(jù)和免疫相關(guān)數(shù)據(jù)，為研究提供了堅(jiān)實(shí)的數(shù)據(jù)基礎(chǔ)。從TCGA數(shù)據(jù)庫(kù)中，獲取了大量的膠質(zhì)瘤患