ICS11.220

CCSB41

DB1302

唐山市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB1302/T522-2020

生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟快速檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

2020-12-28發(fā)布2021-01-10實(shí)施

唐山市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

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前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由唐山市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局提出并歸口。

本文件起草單位：唐山市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所、唐山市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心、唐山怡安生物工程有限

公司。

本文件主要起草人：劉潤(rùn)東、張玉新、李潤(rùn)、李杏媛、韓澤雨、高英、劉志勇、楊思源、崔榮飛、

畢紅全、王大偉、梁寶、李敬陽(yáng)、代廣、張英杰、趙艷華、朱秋艷、徐麗、康曉曉、肖文同。

I

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生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟快速檢測(cè)技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了生豬屠宰場(chǎng)(點(diǎn)）非洲豬瘟快速檢測(cè)活動(dòng)的檢測(cè)室建設(shè)、采樣、檢測(cè)、生物安全和檔

案管理等。

本文件適用于生豬屠宰場(chǎng)(點(diǎn)）非洲豬瘟快速檢測(cè)，其它環(huán)節(jié)非洲豬瘟快速檢測(cè)也可參照?qǐng)?zhí)行。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

農(nóng)牧發(fā)〔2019〕2號(hào)生豬屠宰檢疫規(guī)程

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

3.1

非洲豬瘟快速檢測(cè)

指利用實(shí)時(shí)熒光PCR的方法，核酸提取、擴(kuò)增檢測(cè)均在同一封閉、便攜式儀器上完成，樣本上機(jī)

后至結(jié)果報(bào)告過(guò)程，無(wú)需任何手工操作，通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的累計(jì)過(guò)程中熒光信號(hào)的變化，

在90min內(nèi)完成對(duì)非洲豬瘟病毒特異性核酸片段的快速檢測(cè)。

4檢測(cè)室建設(shè)

4.1基本要求

4.1.1檢測(cè)室應(yīng)設(shè)在相對(duì)獨(dú)立的區(qū)域，與其它不相容的區(qū)域進(jìn)行有效隔離，防止交叉污染。

4.1.2檢測(cè)室應(yīng)分為試劑貯存和配制、樣品制備和擴(kuò)增2個(gè)獨(dú)立工作區(qū)域，有明晰的標(biāo)識(shí)，檢測(cè)操作

和人流物流按照單一方向流動(dòng)。

4.1.3應(yīng)配備給水、排水、電力、通風(fēng)、消毒及無(wú)害化處理設(shè)施。

4.1.4地面平整防滑、墻面、頂棚平整，易清潔消毒。

4.1.5工作臺(tái)表面應(yīng)耐熱、耐腐蝕，可反復(fù)清洗消毒。

4.2儀器設(shè)備配置

4.2.1試劑貯存和配制區(qū)

配備超凈工作臺(tái)（通風(fēng)櫥）、冰箱、微量移液器（10μL、100μL）。

4.2.2樣品制備和擴(kuò)增區(qū)

1

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配備熒光定量PCR儀、二級(jí)生物安全柜（可選）、高速離心機(jī)（可選）、核酸提取儀（可選）、

組織破碎儀、微量移液器（10μL、100μL、1000μL）。

4.3檢測(cè)人員

檢測(cè)人員應(yīng)取得健康合格證明并在省定點(diǎn)屠宰管理辦公室登記備案。

5采樣

5.1采樣人員

采樣由經(jīng)過(guò)專業(yè)技術(shù)機(jī)構(gòu)培訓(xùn)、掌握采樣技術(shù)的生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）人員實(shí)施。

5.2器具及試劑

放血刀具（可選）、離心管（5mL）、一次性混合血樣容器、一次性手套、一次性注射器（10mL）、

攪拌棒、編號(hào)筆、消毒液容器、抗凝劑（檸檬酸鈉:水=1:10）、消毒劑等。

5.3抽樣

5.3.1屠宰生豬以運(yùn)輸車輛為批次全部采集血液樣品，每頭生豬采集血液2mL。

5.3.2生豬血樣采集在生豬入場(chǎng)前、待宰圈、放血后進(jìn)行，采樣部位為生豬耳緣靜脈或前腔靜脈。

5.3.3采樣人員戴一次性手套，使用容量為5mL的離心管接取血液，倒入混合血樣容器內(nèi)。

5.4混樣

5.4.1生豬的血樣混合同批不高于50頭。

5.4.2混合血樣添加10mL抗凝劑，殘豬、急宰豬按每頭0.5mL添加抗凝劑，用攪拌棒攪拌均勻，

使用一次性注射器從混合均勻的血液中抽取5mL血液送檢。

5.5編號(hào)、記錄、送樣

5.5.1對(duì)每個(gè)混合血樣進(jìn)行編號(hào)，同日內(nèi)所有混合血樣編號(hào)不得重復(fù)。用于檢測(cè)的樣品、備份留存的

樣品應(yīng)統(tǒng)一用防水記號(hào)筆對(duì)應(yīng)編號(hào)，清晰標(biāo)記于采樣容器上，其編號(hào)應(yīng)與生豬的檢疫證明號(hào)碼相對(duì)應(yīng)。

5.5.2血液樣品抽取后做好采樣記錄，采樣記錄內(nèi)容包括采樣日期、采樣地點(diǎn)、采樣頭數(shù)、對(duì)應(yīng)檢疫

證號(hào)碼、樣品類型、樣品編號(hào)、采樣人員等。采樣記錄樣式見(jiàn)附錄A。

5.5.3混合后的血樣應(yīng)立即送檢測(cè)室進(jìn)行檢測(cè)，特殊情況下混合血樣現(xiàn)場(chǎng)放置時(shí)間不超過(guò)30min。

5.6樣品留存

檢測(cè)樣品應(yīng)留存?zhèn)浞荩?20℃保存1個(gè)月以上。

6檢測(cè)

6.1檢測(cè)方法

采用農(nóng)業(yè)農(nóng)村部批準(zhǔn)的商品化試劑盒檢測(cè)，檢測(cè)操作步驟按照試劑盒及PCR儀操作說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

6.2結(jié)果分析

依據(jù)試劑盒操作說(shuō)明書(shū)，通過(guò)Ct值判定：陽(yáng)性/陰性。

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6.3結(jié)果處置

檢測(cè)結(jié)束后，如實(shí)填寫檢測(cè)報(bào)告，檢測(cè)報(bào)告樣式見(jiàn)附錄B。結(jié)果處置按《生豬屠宰檢疫規(guī)程》中

7.1和農(nóng)業(yè)農(nóng)村部實(shí)時(shí)發(fā)布的非洲豬瘟疫情防控相關(guān)文件執(zhí)行。

7生物安全

7.1采樣工具用流動(dòng)的清水沖洗干凈，并用消毒劑消毒，取完一個(gè)批次的樣品后進(jìn)行更換、消毒；一

次性手套、離心管、混合血樣容器在取完一個(gè)批次的樣品后更換，采樣產(chǎn)生的廢棄物放入密封、無(wú)滲漏

的容器內(nèi)，應(yīng)進(jìn)行無(wú)害化處理。GB19489給出了無(wú)害化處理的方法。

7.2檢測(cè)室內(nèi)保持整潔干凈，嚴(yán)禁擺放與檢測(cè)無(wú)關(guān)的物品，不得在檢測(cè)室內(nèi)進(jìn)行與檢測(cè)無(wú)關(guān)的活動(dòng)。

7.3檢測(cè)操作前開(kāi)啟紫外燈至少照射30min，對(duì)室內(nèi)空間、工作臺(tái)面、地面及設(shè)備儀器等表面進(jìn)行消

毒。

7.4檢測(cè)人員進(jìn)入檢測(cè)區(qū)域應(yīng)做好人員防護(hù)。

7.5檢測(cè)產(chǎn)生的廢棄物、剩余樣品及使用過(guò)的移液槍頭、一次性手套、口罩、帽子等應(yīng)進(jìn)行無(wú)害化處

理。GB19489給出了無(wú)害化處理的方法。

7.6需樣品制備及核酸提取的，應(yīng)在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行。

7.7檢測(cè)結(jié)束后應(yīng)采取紫外照射或消毒液噴灑等措施對(duì)環(huán)境進(jìn)行消毒。

7.8擴(kuò)增后裝有反應(yīng)產(chǎn)物的PCR反應(yīng)管禁止開(kāi)蓋，立即消毒，檢測(cè)結(jié)束與其它高壓滅菌后的廢棄物送

出檢測(cè)室。

7.9檢測(cè)室發(fā)現(xiàn)污染應(yīng)停止檢測(cè)活動(dòng)。

8檔案管理

8.1應(yīng)建立人員培訓(xùn)、采樣檢測(cè)記錄、檢測(cè)報(bào)告等相關(guān)檔案。

8.2檔案保存不少于12個(gè)月。

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附錄A

(資料性）

生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟檢測(cè)采樣記錄表

表A.1給出了生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟檢測(cè)采樣記錄表的樣式

表A.1生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟檢測(cè)采樣記錄表

編號(hào)：（年月日+3位數(shù)順序號(hào)）

序采樣采樣樣品

日期對(duì)應(yīng)檢疫證號(hào)碼樣品編號(hào)采樣人（簽字）備注

號(hào)地點(diǎn)頭數(shù)類型

注：1、采樣地點(diǎn)填寫入場(chǎng)前、待宰圈或屠宰線；

2、采樣頭數(shù)為1頭或多頭，相應(yīng)的樣品編號(hào)為1個(gè)號(hào)碼或號(hào)段；

3、樣品類型為血樣、脾、淋巴結(jié)或腎等。

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附錄B

(資料性）

生豬屠宰宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟自檢報(bào)告

表B.1給出了生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟自檢報(bào)告的樣式

表B.1生豬屠宰場(chǎng)（點(diǎn)）非洲豬瘟自檢報(bào)告

編號(hào)：（年月日+3位數(shù)順序號(hào)）

采樣表編號(hào)檢測(cè)生豬數(shù)

樣品編號(hào)

對(duì)應(yīng)檢疫證號(hào)碼

試劑名稱生產(chǎn)廠家有效期至

混樣記錄

檢測(cè)方法

檢測(cè)結(jié)果（詳細(xì)

記錄陰陽(yáng)性情況

及對(duì)應(yīng)檢疫證號(hào)

碼）

屠宰場(chǎng)檢測(cè)人（簽名）：日期：年月日

屠宰場(chǎng)負(fù)責(zé)人（簽名并蓋章）：

官方獸醫(yī)確認(rèn)（簽名）：日期