鹽酸氨丁三醇檢驗(yàn)操作規(guī)程鹽酸氨丁三醇（THAM）作為靜脈用酸堿平衡調(diào)節(jié)劑，其質(zhì)量直接影響急危重癥救治效果。檢驗(yàn)環(huán)節(jié)既要保證結(jié)果準(zhǔn)確，又要兼顧檢驗(yàn)周期與成本控制，因此必須建立一套覆蓋原輔料、中間體、成品及穩(wěn)定性留樣的全鏈條標(biāo)準(zhǔn)化操作程序。以下規(guī)程依據(jù)《中國藥典》2020年版二部、ICHQ2（R1）驗(yàn)證指南及GMP附錄《質(zhì)量控制》要求制定，適用于化學(xué)合成法與酶催化法兩種工藝來源的原料藥，同時(shí)可供注射級(jí)與滴眼液級(jí)成品內(nèi)控參考。一、檢驗(yàn)前準(zhǔn)備1、文件與記錄檢驗(yàn)指令單、批生產(chǎn)記錄、請(qǐng)驗(yàn)單、穩(wěn)定性考察方案、儀器使用日志、標(biāo)準(zhǔn)品證書、試劑配制記錄、原始數(shù)據(jù)本、OOS調(diào)查表須在實(shí)驗(yàn)開始前統(tǒng)一放置于固定文件架，避免實(shí)驗(yàn)過程中臨時(shí)尋找造成操作中斷或數(shù)據(jù)遺漏。2、人員資質(zhì)主檢人需具備藥物分析或化學(xué)相關(guān)專業(yè)大專及以上學(xué)歷，經(jīng)崗位考核合格并持“質(zhì)量控制上崗證”滿一年；復(fù)核人須具備中級(jí)以上職稱或同等能力確認(rèn)。任何人員在上崗前24小時(shí)內(nèi)不得飲酒或服用影響中樞神經(jīng)的藥物，防止因手抖、判斷失誤導(dǎo)致誤差。3、環(huán)境要求天平室溫度控制在20至25攝氏度，相對(duì)濕度45%至65%，每小時(shí)換氣次數(shù)不小于15次；紅外鑒別室需保持相對(duì)濕度低于60%，防止溴化鉀片吸潮；高效液相色譜（HPLC）室地面鋪設(shè)防靜電膠墊，避免靜電積聚導(dǎo)致基線漂移。所有實(shí)驗(yàn)區(qū)域每日用75%乙醇與0.1%季銨鹽消毒劑交替擦拭一次，防止微生物交叉污染。4、儀器與量具分析天平感量0.1毫克，每年由計(jì)量機(jī)構(gòu)檢定；HPLC系統(tǒng)需包含四元泵、自動(dòng)進(jìn)樣器、柱溫箱、可變波長檢測器，性能確認(rèn)每半年一次；紅外分光光度計(jì)（IR）波數(shù)準(zhǔn)確度用聚苯乙烯薄膜校準(zhǔn)，誤差不超過±1厘米-1；酸度計(jì)用pH7.00與10.01標(biāo)準(zhǔn)緩沖液兩點(diǎn)校準(zhǔn)，斜率≥95%。所有計(jì)量器具貼有“綠、黃、紅”三色標(biāo)識(shí)，紅色停用、黃色限用、綠色合格，防止誤拿。5、標(biāo)準(zhǔn)品與試劑鹽酸氨丁三醇對(duì)照品含量≥99.5%，使用前先在105攝氏度干燥2小時(shí)，置硅膠干燥器冷卻至室溫；雜質(zhì)A（三羥甲基氨基甲烷二聚體）與雜質(zhì)B（甲酸酯衍生物）對(duì)照品濃度以干燥品計(jì)，避光儲(chǔ)存于-20攝氏度冰箱。試劑級(jí)磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉、乙腈為色譜純，水為重蒸餾水，電導(dǎo)率≤1微西門子每厘米；所有有機(jī)試劑開封后使用期限不超過3個(gè)月，逾期統(tǒng)一回收焚燒處理。二、鑒別試驗(yàn)1、紅外光譜法取干燥供試品約1毫克，加溴化鉀200毫克，研勻壓片。記錄4000至400厘米-1范圍光譜，與對(duì)照品圖譜比對(duì)，特征峰位包括：3300至3500厘米-1寬峰（羥基伸縮振動(dòng)）、1570厘米-1附近強(qiáng)峰（氨基彎曲振動(dòng)）、1040厘米-1附近峰（C-O伸縮）。兩圖譜峰位誤差不超過±2厘米-1，且相對(duì)強(qiáng)度應(yīng)一致，若出現(xiàn)額外峰需進(jìn)行OOS調(diào)查。2、紫外光譜法精密稱取供試品適量，加水溶解并稀釋成每毫升含20微克的溶液，以水為空白，在200至400納米掃描。應(yīng)在270納米處無吸收峰，若出現(xiàn)吸收提示存在苯環(huán)雜質(zhì)；在192納米附近有末端吸收，與對(duì)照品比值差不超過±0.02，否則判為不合格。3、化學(xué)反應(yīng)取供試品0.1克，加水5毫升溶解，加5%高碘酸鈉溶液1毫升，室溫放置10分鐘，再加品紅亞硫酸試液0.5毫升，若出現(xiàn)藍(lán)紫色表明含α-二醇結(jié)構(gòu)，為陽性反應(yīng)；另取供試品0.1克，加硝酸鈰銨試液2毫升，若溶液由黃色變?yōu)槌燃t色，提示含醇羥基，進(jìn)一步佐證結(jié)構(gòu)正確。三、檢查項(xiàng)目與限度1、酸堿度取供試品1.0克，加新沸冷水20毫升溶解，用酸度計(jì)測定，pH值應(yīng)為7.0至9.0。若pH低于7.0，提示合成工藝中鹽酸殘留；高于9.0，可能因游離氨丁三醇過多，均須啟動(dòng)偏差調(diào)查。2、溶液澄清度與顏色取供試品2.5克，加水25毫升溶解，照《中國藥典》澄清度檢查法，與同體積對(duì)照液比較，不得更濃；顏色檢查用黃色1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)液為參照，供試品不得更深。若出現(xiàn)乳光，先確認(rèn)是否由鈣鎂離子引起，可加草酸銨試液驗(yàn)證，出現(xiàn)白色沉淀則判為鈣鹽超標(biāo)。3、氯化物取供試品0.5克，加水30毫升溶解，加稀硝酸10毫升，照氯化物檢查法，與標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液5毫升制成的對(duì)照液比較，不得更濃（≤0.01%）。若超標(biāo)，提示成鹽反應(yīng)終點(diǎn)控制不當(dāng)，需回溯結(jié)晶工序pH曲線。4、硫酸鹽取供試品1.0克，加水40毫升溶解，加稀鹽酸2毫升，照硫酸鹽檢查法，與標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液2毫升制成的對(duì)照液比較，不得更濃（≤0.02%）。若出現(xiàn)渾濁，需排查是否因硫酸洗滌殘留。5、重金屬取供試品2.0克，置坩堝中，低溫炭化，550攝氏度灼燒至白，殘?jiān)欲}酸2毫升與水15毫升，照重金屬檢查第一法，與標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液2毫升比較，不得更深（≤10毫克每千克）。若結(jié)果超標(biāo)，需檢查原料乙醇是否含鉛抗爆劑。6、有關(guān)物質(zhì)（HPLC法）色譜條件：C18柱（4.6毫米×250毫米，5微米），流動(dòng)相A為0.05摩爾每升磷酸緩沖液（pH3.0），流動(dòng)相B為乙腈，梯度洗脫0至5分鐘B從5%升至15%，5至20分鐘B保持15%，流速1毫升每分鐘，檢測波長210納米，柱溫30攝氏度。供試品溶液濃度為每毫升含10毫克，雜質(zhì)A與雜質(zhì)B峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的0.1%，其他單雜不得大于0.05%，總雜不得大于0.3%。若雜質(zhì)A超標(biāo)，提示縮合反應(yīng)溫度過高；雜質(zhì)B超標(biāo)，則與酯化副反應(yīng)相關(guān)，需調(diào)整淬滅方式。7、殘留溶劑（GC法）采用頂空進(jìn)樣，色譜柱為6%氰丙基苯基-94%二甲基聚硅氧烷（30米×0.53毫米×3微米），程序升溫40攝氏度保持5分鐘，以每分鐘10攝氏度升至180攝氏度，保持3分鐘，F(xiàn)ID檢測器溫度250攝氏度。乙醇、丙酮、二氯甲烷限度分別為0.5%、0.5%、0.06%，若二氯甲烷超標(biāo)，需檢查離心洗滌是否充分。8、干燥失重取供試品1克，置105攝氏度烘箱干燥4小時(shí)，減失重量不得過0.3%。若結(jié)果偏高，需確認(rèn)是否因包裝密封不良吸潮。9、熾灼殘?jiān)」┰嚻?克，800攝氏度±25攝氏度熾灼至恒重，殘?jiān)坏眠^0.1%。若殘?jiān)瑯?biāo)，提示無機(jī)鹽雜質(zhì)或催化劑殘留。四、含量測定1、非水滴定法（仲裁法）精密稱取供試品約0.2克，加冰醋酸30毫升溶解，加結(jié)晶紫指示液2滴，用0.1摩爾每升高氯酸滴定液滴定至溶液由紫色變?yōu)樗{(lán)綠色為終點(diǎn)，并將結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。每毫升高氯酸滴定液相當(dāng)于12.11毫克鹽酸氨丁三醇，按干燥品計(jì)算含量應(yīng)為98.5%至101.0%。滴定過程需快速攪拌，防止局部過酸生成乙?；碑a(chǎn)物。2、HPLC外標(biāo)法（常規(guī)放行）色譜條件同有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下，取對(duì)照品與供試品各約20毫克，精密稱定，置20毫升量瓶，加水溶解并稀釋至刻度，進(jìn)樣20微升，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。系統(tǒng)適用性要求：理論板數(shù)按鹽酸氨丁三醇峰計(jì)不低于3000，拖尾因子0.8至1.2，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差不得過1.0%。若含量低于98.5%，需復(fù)測并啟動(dòng)OOS；若高于101.0%，應(yīng)檢查是否未扣除水分或雜質(zhì)。五、微生物限度（注射級(jí)）取供試品10克，加pH7.0氯化鈉蛋白胨緩沖液100毫升溶解，照《中國藥典》非無菌產(chǎn)品微生物限度檢查法，細(xì)菌數(shù)不得過100菌落形成單位每克，霉菌和酵母菌不得過10菌落形成單位每克，大腸埃希菌不得檢出。若細(xì)菌數(shù)超標(biāo)，先確認(rèn)是否因取樣過程污染，再進(jìn)行復(fù)測；仍超標(biāo)則判為不合格，并追溯生產(chǎn)環(huán)境監(jiān)控?cái)?shù)據(jù)。六、穩(wěn)定性考察檢驗(yàn)加速試驗(yàn)：40攝氏度±2攝氏度、相對(duì)濕度75%±5%條件下放置6個(gè)月，于0、1、2、3、6月取樣，按全檢方案測定。若有關(guān)物質(zhì)總雜增加≥0.1%或含量下降≥1%，需立即啟動(dòng)穩(wěn)定性偏差調(diào)查，并評(píng)估是否需要變更儲(chǔ)存條件或有效期。長期試驗(yàn)：25攝氏度±2攝氏度、相對(duì)濕度60%±10%條件下放置36個(gè)月，前12個(gè)月每3個(gè)月取樣一次，之后每6個(gè)月取樣，趨勢(shì)分析采用回歸模型，置信區(qū)間95%，若含量預(yù)測下限在有效期內(nèi)低于98.0%，則不得放行。七、結(jié)果判定與放行所有項(xiàng)目符合上述限度方可判為合格；若出現(xiàn)單項(xiàng)超標(biāo)，立即啟動(dòng)OOS調(diào)查，包括儀器、試劑、人員、樣品、環(huán)境五個(gè)維度，48小時(shí)內(nèi)完成初步根本原因分析。若確認(rèn)實(shí)驗(yàn)室錯(cuò)誤，可復(fù)測一次；若排除實(shí)驗(yàn)室錯(cuò)誤，則擴(kuò)大同批次抽樣量至三倍，仍不合格即判整批不合格，并通知生產(chǎn)、質(zhì)量、注冊(cè)、供應(yīng)鏈部門，啟動(dòng)產(chǎn)品召回評(píng)估。合格報(bào)告經(jīng)QC主任審核、QA放行人在檢驗(yàn)報(bào)告書簽字后，方可入庫待包裝。八、注意事項(xiàng)與持續(xù)改進(jìn)①鹽酸氨丁三醇易吸潮，稱量時(shí)須使用帶蓋稱量瓶，操作時(shí)間控制在2分鐘內(nèi)；②非水滴定廢液集中收集，用碳酸鈉中和至pH7后統(tǒng)一處理，防止高氯酸與有機(jī)物接觸爆炸；③HPLC流動(dòng)相含鹽，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后先用10%乙腈水沖洗30分鐘，再用90%乙腈保存，避免鹽析堵塞管路；