當(dāng)歸不同藥用部位6種化學(xué)成分及含量分析摘要：目的：通過當(dāng)歸不同藥用部位6種化學(xué)成分的含量測定，得出成分含量差異，為當(dāng)歸臨床用藥提供理論依據(jù)。方法：采用超聲波提取當(dāng)歸不同藥用部位6種化學(xué)成分，用HPLC法對不同藥用部位6種化學(xué)成分的含量測定分析。結(jié)果：當(dāng)歸不同藥用部位中歸尾阿魏酸含量最高（1.6485mg/g），歸身次之，歸頭含量最低（0.9949mg/g）；歸尾阿魏酸松柏酯含量最高（0.3548mg/g），歸頭次之，歸身含量最低（0.107mg/g）；歸尾總阿魏酸含量最高（2.003mg/g），歸頭次之，歸身含量最低（1.121mg/g）；藁本內(nèi)酯、歸尾、歐當(dāng)歸內(nèi)酯A、洋川芎內(nèi)酯A和洋川芎內(nèi)酯I含量均在歸尾為最高，分別為23.137mg/g、0.0303mg/g、0.0819mg/g和0.0155mg/g，歸頭含量次之，歸身含量最低，分別為13.5625mg/g、0.0157mg/g、0.0482mg/g和0.0071mg/g。結(jié)論：傳統(tǒng)藥材古籍文獻(xiàn)記載當(dāng)歸歸頭、歸身和歸尾功效各異，本研究成分分析顯示不同藥用部位6種化學(xué)成分含量和分布也有一定差異，建議臨床入藥時(shí)應(yīng)注意根據(jù)病人的病情，辨證用藥，以使當(dāng)歸更好地發(fā)揮藥效。關(guān)鍵詞：當(dāng)歸不同藥用部位化學(xué)成分含量差異前言當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸Angelicasinensic(oliv).Diel的干燥根，又被叫做秦歸、岷當(dāng)歸。全國大部分地區(qū)都有種植，但以甘肅岷縣及周邊地區(qū)種植的當(dāng)歸，質(zhì)量最優(yōu)，療效確切，因此也被稱為“中國當(dāng)歸之鄉(xiāng)”。當(dāng)歸首次記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，藥性甘、辛、溫，歸肝、心、脾經(jīng)，具有補(bǔ)血活血，調(diào)經(jīng)止痛，滑腸通便等功效，其主要用于治療血虛諸癥、月經(jīng)不調(diào)、腸燥便秘等。現(xiàn)代藥理研究結(jié)果顯示當(dāng)歸有抗腫瘤、增強(qiáng)免疫、抗血栓等系列藥理功效REF_Ref40773159\r\h[1]。當(dāng)歸以根入藥，根性狀近似于圓柱形，稱為“全歸”，根上端膨大的部分為“歸頭”，主根粗短為“歸身”，歸根下面的支根為“歸尾”或“歸梢”。古代文獻(xiàn)中元代《湯液本草》：有“頭止血、身和血、梢破血”和明代《本草通玄》：有“頭止血而上行、梢破血而下行、身養(yǎng)血而守中、全活血而不定”的記載。有研究者提出“用著不分，不如不使”。以上論述均提示當(dāng)歸臨床用藥時(shí)應(yīng)根據(jù)病情需要選擇不同的藥用部位。但目前藥材市場出售的當(dāng)歸并沒有按歸頭、歸身、歸尾出售，臨床用藥也是全歸用藥。至今，研究者從當(dāng)歸中提取分離了很多的化學(xué)成分：如揮發(fā)油類、有機(jī)酸類、多糖類、黃酮類、多種氨基酸類和微量元素等[2]。也有文獻(xiàn)報(bào)道當(dāng)歸不同藥用部位成分含量的差異，但所報(bào)道大多為藁本內(nèi)酯和游離阿魏酸在不同藥用部位的含量差異，成分單一，缺少全面性[3,4]。綜上，關(guān)于當(dāng)歸用藥部位，古代醫(yī)籍與目前臨床用藥實(shí)際不一致，臨床全歸用藥方式可能會損失當(dāng)歸的特定藥效功能，因此本研究測定當(dāng)歸兩大類重要藥效物質(zhì)有機(jī)酸類（阿魏酸和阿魏酸松柏酯類）和揮發(fā)油類（藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯A、洋川芎內(nèi)酯I和歐當(dāng)歸內(nèi)酯A）在當(dāng)歸不同部位的含量分布差異，并結(jié)合當(dāng)歸另一類主要藥效成分當(dāng)歸多糖含量測定與分布文獻(xiàn)研究結(jié)果，初步探討當(dāng)歸藥效物質(zhì)含量分布與功效的關(guān)系，當(dāng)歸藥材的加工、炮制、質(zhì)量分級和當(dāng)歸臨床用藥提供參考依據(jù)。1材料與儀器1.1儀器表1試驗(yàn)儀器及型號儀器名稱型號生產(chǎn)廠家高效液相色譜儀DAD檢測器1620美國Agilent公司數(shù)控超聲波清洗儀KQ-500DE昆山市超聲儀器有限公司電子天平BT125D北京賽多利斯儀器有限公司超純水機(jī)Milli-Q上海靖虎機(jī)電科技有限公司中藥粉碎機(jī)QE-10A武義縣屹立工具有限公司1.2試劑和對照品試劑：甲醇和乙腈為色譜純、乙酸為分析純、水為超純水。表2試驗(yàn)試劑和對照品名稱批號生產(chǎn)廠家純度阿魏酸0773-9910中國藥品生物制品鑒定所>98%阿魏酸松柏酯151102上海如吉生物科技公司>98%洋川芎內(nèi)酯A151914天津士蘭科技有限公司>97%洋川芎內(nèi)酯IY-085-150825成都瑞芬思生物科技公司>96%藁本內(nèi)酯151024天津士蘭科技有限公司>98%歐當(dāng)歸內(nèi)酯AO-002-150730成都瑞芬思生物科技公司>97%1.3試驗(yàn)用藥本試驗(yàn)當(dāng)歸藥材品種為“岷歸1號”，種植地點(diǎn)位于當(dāng)歸道地產(chǎn)區(qū)甘肅岷縣西寨鎮(zhèn)（海拔2

380m,

北緯

34°49;,

東經(jīng)104°08）。2019年4月行常規(guī)施肥（

N：156kg/ha,

P：144kg/ha

，K：60

kg/ha）后移栽種苗，之后行田間常規(guī)管理。2019年11月采挖當(dāng)歸，抖落泥土。將藥材放入有干冰的保溫箱（防止當(dāng)歸的揮發(fā)性化學(xué)成分丟失），運(yùn)回至實(shí)驗(yàn)室，用自來水除去藥材表面的泥土，洗干凈后陰干，作為供試藥材。2方法2.1供試品溶液的制備精心挑選10支大小均勻的當(dāng)歸，用剪刀把全當(dāng)歸按照不同藥用部位分離成歸頭、歸身、歸尾，供試品見圖1。分別用粉碎機(jī)粉碎，過二號篩，粉末顏色深淺歸頭、歸身、歸尾都有不同。用實(shí)驗(yàn)室電子天平精確稱取不同藥用部位粉末0.500g,放在150mL磨口具塞錐形瓶中，加入70%的甲醇溶液20ml后稱其重量，用封口膜密封錐形瓶的瓶口，并將其固定于超聲波清洗儀器內(nèi)，設(shè)定220W、80Hz條件下超聲40min，冷卻至室溫時(shí)小心取出稱重量，用70%甲醇補(bǔ)到原來的重量后搖勻REF_Ref40774849\r\h[3]，抽取混勻溶液后用微孔濾膜過濾，將制備好供試品溶液裝在試劑瓶里貼好標(biāo)簽。并放在冰箱中4℃儲藏圖1當(dāng)歸不同藥用部位注：從左往右為當(dāng)歸、歸頭、歸身、歸尾。2.2對照品溶液制備用實(shí)驗(yàn)室電子天平細(xì)心稱取定量的對照品：阿魏酸1.54mg；藁本內(nèi)酯5.56mg；洋川芎內(nèi)酯A3.2mg；洋川芎內(nèi)酯I0.58mg；歐當(dāng)歸內(nèi)酯A：1.10mg；阿魏酸松柏酯0.27mg。稱完放入小燒杯中，加入甲醇用玻璃棒攪拌使固體溶解，然后轉(zhuǎn)移到容量為5mL容量瓶中，再次加甲醇溶液并定容至刻度線，最后搖勻。裝在試劑瓶里貼好標(biāo)簽。用移液管吸取以上6種對照品溶液各1mL于燒杯中輕輕晃動使其混勻，轉(zhuǎn)移至10mL的容量瓶中加甲醇并定容至刻度線，混合對照品溶液制備成功。裝在試劑瓶里貼好標(biāo)簽。并放在冰箱中設(shè)置溫度4℃冷藏。2.3色譜條件色譜柱:MerkRP-C18柱（250mm×4.6mm,5μm）；流動相:：1%乙酸（A）-乙腈（B），梯度洗脫（見表3）；流速：1.0mL/min；檢測波長：280nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量20μL?；旌蠈φ掌放c供試品的色譜圖，見圖2。表3梯度洗脫程序時(shí)間（time)/min流動相比例（ratioofmobilephase）0.1%乙酸（A）乙腈（B）0~2081%19%20~6081%~5%19%~95%60~755%~0%95%~100%BABA圖2混合對照品（A）和當(dāng)歸樣品（B）HPLC圖譜注：圖2-B從上到下分別為歸尾、歸身、歸頭。1.阿魏酸；2.洋川芎內(nèi)酯I；4.阿魏酸松柏酯；5.洋川芎內(nèi)酯A；6.藁本內(nèi)酯；8.歐當(dāng)歸內(nèi)酯A。2.4線性關(guān)系2.4.16種對照品不同濃度溶液的配置用移液管吸取一定量配置好的對照品混合溶液，用甲醇稀釋成系列濃度的混合對照品溶液。得到7個(gè)系列的濃度，結(jié)果（見表4）。表4當(dāng)歸6種對照品系列濃度化學(xué)成分系列濃度(mg.mL-1)1234567阿魏酸0.129110.064520.048300.032320.016220.008130.00401洋川芎內(nèi)酯A0.048630.042310.031720.021150.101570.005280.00264洋川芎內(nèi)酯I0.015220.007590.005620.003750.001870.000930.00046阿魏酸松柏酯0.060210.030150.022570.015050.007520.003760.00188藁本內(nèi)酯A1.100010.55000.412510.275030.137510.068750.03437歐當(dāng)歸內(nèi)酯A0.007680.003840.002880.001920.000960.000480.000242.4.26種對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制將系列濃度的混合對照品分別在2.3色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣測量，每種濃度的對照品進(jìn)樣三次，記錄峰面積，取平均值。以對照品濃度為橫坐標(biāo)(X)，峰面積為縱坐標(biāo)(Y),在excel表格中繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(見圖3)，得到六種當(dāng)歸對照品的線性回歸方程，結(jié)果見表5。表5當(dāng)歸6種對照品線性關(guān)系化學(xué)成分回歸方程R2阿魏酸y=14874x-11.5090.9982洋川芎內(nèi)酯Ay=16880x-7.30090.9999洋川芎內(nèi)酯Iy=209000x-25.480.9997阿魏酸松柏酯y=28181x-11.8870.9998藁本內(nèi)酯y=9486.8x-45.140.9998歐當(dāng)歸內(nèi)酯Ay=87253x-0.59430.9986圖3:六種對照品標(biāo)準(zhǔn)曲線2.5方法學(xué)考察2.5.1空白試驗(yàn)精密吸取甲醇溶液20uL作為空白溶液，在2.3色譜條件下進(jìn)樣測定，結(jié)果表明空白溶液對高效液相色譜檢測無影響。2.5.2精密度試驗(yàn)用移液管吸取配置好的混合對照品，在2.3色譜條件下連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計(jì)算RSD值。結(jié)果見表6，說明高效液相色譜的儀器精密度良好。表6對照品精密度RSD值對照品RSD(%)阿魏酸1.7阿魏酸松柏酯1.5洋川芎內(nèi)酯A1.2洋川芎內(nèi)酯I0.7藁本內(nèi)酯2.0歐當(dāng)歸內(nèi)酯A1.82.5.3穩(wěn)定性試驗(yàn)用移液管吸取配置好的混合對照品，在2.3色譜條件下，分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣測量。記錄峰面積，計(jì)算RSD值，結(jié)果見表7，說明6種對照品在24小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。表7對照品精密度RSD值對照品RSD(%)阿魏酸1.9阿魏酸松柏酯1.6洋川芎內(nèi)酯A1.3洋川芎內(nèi)酯I1.5藁本內(nèi)酯2.0歐當(dāng)歸內(nèi)酯A0.92.5.4重復(fù)性試驗(yàn)細(xì)心稱取當(dāng)歸粉末6份，按照2.1配置供試品溶液的方法制備，按照2.3的色譜條件進(jìn)行進(jìn)樣測定，記錄6種化學(xué)成分的峰面積，算其RSD值，結(jié)果見表8，說明檢測方法重復(fù)性好。表8當(dāng)歸粉末重復(fù)性RSD值化學(xué)成分RSD(%)阿魏酸2.1阿魏酸松柏酯1.8洋川芎內(nèi)酯A2.0洋川芎內(nèi)酯I1.2藁本內(nèi)酯0.7歐當(dāng)歸內(nèi)酯A1.63結(jié)果3.1不同當(dāng)歸部位6種化學(xué)成分的含量設(shè)定2.3規(guī)定的色譜條件，將制備當(dāng)歸不同藥用部位的供試品溶液，依次用注射器吸取20uL注入進(jìn)樣口，每個(gè)供試品測定三次。記錄峰面積，算平均值。記錄出峰時(shí)間，6種當(dāng)歸成分的色譜圖與對照品色譜圖作比較，相同位置確定成分。結(jié)果見表9。表9當(dāng)歸不同部位6種成分含量（mg/g）結(jié)果化學(xué)成分藥用部位歸頭歸身歸尾阿魏酸0.994±0.05341.0139±0.03271.6484±0.0655阿魏酸松柏酯0.3287±0.05730.1070±0.01610.3548±0.1158洋川芎內(nèi)酯A0.0759±0.00100.0482±0.00020.0819±0.0009洋川芎內(nèi)酯I0.0132±0.00040.0071±0.00030.1555±0.0002藁本內(nèi)酯16.1025±0.333313.5625±0.175323.1670±0.2571歐當(dāng)歸內(nèi)酯A0.0161±0.00030.0157±0.00050.0303±0.00053.2當(dāng)歸不同藥用部位總阿魏酸的含量由于阿魏酸松柏酯性質(zhì)不穩(wěn)定，可以分解阿魏酸和松柏酯。為了更好的體現(xiàn)中藥的質(zhì)量，有人提出了“游離阿魏酸”和“總阿魏酸”的概念，游離的阿魏酸是指本來植物體內(nèi)原有的阿魏酸，總阿魏酸是游離阿魏酸和其他途徑生成的阿魏酸之和REF_Ref41035757\r\h[6]。因此為了體現(xiàn)當(dāng)歸中阿魏酸的含量，測定了阿魏酸和阿魏酸松柏酯。結(jié)果見圖4。圖4：當(dāng)歸不同藥用部位的總阿魏酸含量3.3當(dāng)歸不同藥用部位揮發(fā)油的含量揮發(fā)油類的含量為藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯A、洋川芎內(nèi)酯I和歐當(dāng)歸內(nèi)酯A之和。結(jié)果見圖5。圖5：當(dāng)歸不同藥用部位揮發(fā)油含量3.3.1藁本內(nèi)酯占揮發(fā)油的比例揮發(fā)油成分中的藁本內(nèi)酯含量最多，也是揮發(fā)油的主要成分之一，計(jì)算不同藥用部位藁本內(nèi)酯占揮發(fā)油的比列。結(jié)果如圖6。圖6:藁本內(nèi)酯占揮發(fā)油的比列3討論通過用高效液相色譜測量當(dāng)歸不同藥用部位6種化學(xué)成分，結(jié)果顯示不同藥用部位的含量不同。阿魏酸和阿魏酸松柏酯屬于當(dāng)歸化學(xué)成分有機(jī)酸類。阿魏酸松柏酯為近些年從當(dāng)歸提取分離出的化合物，王濤等人研究川芎在干燥中阿魏酸松柏酯跟藥材含水量呈正相關(guān)，隨著藥材干燥過程中水量減少阿魏酸松柏酯水解成為阿魏酸REF_Ref41035757\r\h[6]因此本實(shí)驗(yàn)為了測總阿魏酸含量，測定了游離阿魏酸和阿魏酸松柏酯(結(jié)合態(tài))。給小鼠注入阿魏酸鈉發(fā)現(xiàn)，可以抑制缺氧性肺動脈小鼠血小板聚集，作用機(jī)制可能與阿魏酸可以調(diào)節(jié)TXA2(血栓素B2)和PGI2(前列環(huán)素)平衡有關(guān)系。TXA2可以使血小板聚集，相反的是PGI2可以抑制小鼠血液中的血小板聚集REF_Ref40470130\r\h[7]。傳統(tǒng)的中醫(yī)認(rèn)為“血瘀”與血小板聚集狀態(tài)有關(guān)，活血化瘀與抑制血液中血小板聚集也有關(guān)系。歸尾破血與抑制血小板的聚集有關(guān)系，所以歸尾阿魏酸含量比其他部位高，歸頭止血與血小板的聚集有關(guān)，所以其阿魏酸含量最低。這古人所講“歸尾破血”理論相統(tǒng)一，因此阿魏酸在不同藥用部位的含量歸尾>歸身>歸頭有一定的關(guān)聯(lián)性。藥理學(xué)研究顯示阿魏酸松柏酯具有可以舒張血管的作用REF_Ref41250458\r\h[8]藁本內(nèi)酯、洋川芎內(nèi)酯I、洋川芎內(nèi)酯A、歐當(dāng)歸內(nèi)酯屬于苯酚化合物。藁本內(nèi)酯在苯酚化合物中也是含量最高的。藁本內(nèi)酯可以改善紅細(xì)胞的聚集狀態(tài)，使血流速度加快REF_Ref40475445\r\hREF_Ref40475445\r\h[9]，與中醫(yī)認(rèn)為的“活血化瘀”一樣。歸尾破血與抑制血小板的聚集有關(guān)系，所以歸尾藁本內(nèi)酯含量比其他部位高，歸頭止血與血小板的聚集有關(guān)，所以其藁本內(nèi)酯含量最低。所以藁本內(nèi)酯在不同藥用部位的含量歸尾>歸身>歸頭。歐當(dāng)歸內(nèi)酯A是藁本內(nèi)酯的二聚體，和藁本內(nèi)酯的含量有相關(guān)性，在一定的條件下歐當(dāng)歸內(nèi)酯可以轉(zhuǎn)化為藁本內(nèi)酯REF_Ref40477790\r\h[10]，因此有人推斷歐當(dāng)歸內(nèi)酯A有類似藁本內(nèi)酯的藥理作用。洋川芎內(nèi)酯I為藁本內(nèi)酯、的代謝產(chǎn)物REF_Ref40477826\r\h[11]。洋川芎內(nèi)酯I和洋川芎內(nèi)酯A藥理作用不明。揮發(fā)油中藁本內(nèi)酯的含量最高。揮發(fā)油在當(dāng)歸不同藥用部位的含量歸尾最多，歸頭次之，歸身最少，在藥材粉碎后發(fā)現(xiàn)歸尾的粉末顏色較其它當(dāng)歸藥用部位深，而且歸尾有棕色的點(diǎn)狀分泌腔?？赏茢喑霎?dāng)歸歸尾揮發(fā)油的含量最多，這也測得的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相吻合。當(dāng)歸多糖(ASP)也是當(dāng)歸的重要成分，為水溶性成分。研究表明當(dāng)歸多糖具有補(bǔ)血的藥理作用，實(shí)驗(yàn)證明當(dāng)歸多糖對血虛型老鼠有補(bǔ)血的作用，主要機(jī)制是當(dāng)歸多糖能促進(jìn)模型小鼠的造血干細(xì)胞的增值與分化。對于人能夠治療貧血，改善人體血虛等。除此之外當(dāng)歸多糖有抗凝血和止血的作用，而且當(dāng)歸多糖多凝血有雙向調(diào)節(jié)，即可抑制小鼠體內(nèi)血小板聚集也可促進(jìn)血小板的聚集REF_Ref41051509\r\h[12]。通過對當(dāng)歸多糖的提取和含量的測定，發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸多糖在歸身的含量最多REF_Ref41181590\r\h[13]，而現(xiàn)代藥理研究當(dāng)歸多糖有補(bǔ)血的作用，這古人所講“歸身養(yǎng)血”理論相統(tǒng)一，古今一致。當(dāng)歸多糖還有可以人身體的免疫力，抑制腫瘤細(xì)胞的生長，對機(jī)體肝損傷有一定的保護(hù)作用REF_Ref41181617\r\h[14]。本研究在粉碎藥材時(shí)發(fā)現(xiàn)相對于歸尾，歸身和歸頭尤其是歸身粉粒粒徑和黏度明顯增大，提示其多糖含量高，但是沒有對不同部位多糖的含量和分布進(jìn)一步研究。當(dāng)歸作為臨床常用的中藥，有“十方九歸”和“婦科之藥”之美稱。不同的藥用部位有不同的藥效，近些年來當(dāng)歸不以不同藥用部位入方，而選擇全歸入藥。我們應(yīng)該學(xué)習(xí)古人自古以來的用藥方式。當(dāng)歸不同藥用部位成分含量有一定差異，當(dāng)歸入藥時(shí)應(yīng)注意合理選用，以使當(dāng)歸更好的發(fā)揮藥效。當(dāng)歸和許多中藥是我們民族幾千年智慧結(jié)晶，經(jīng)過許多醫(yī)藥醫(yī)藥學(xué)家不斷的深入發(fā)掘、繼承、創(chuàng)新、總結(jié)。才形成了今天的完整的中藥體系。我們應(yīng)該用現(xiàn)在科學(xué)技術(shù)與古代的傳統(tǒng)理論結(jié)合起來研究中藥，就像屠呦呦教授曾利用中藥古籍作為研究，發(fā)現(xiàn)從青蒿中提取青蒿素來治療瘧疾的方法，這一發(fā)現(xiàn)解決了困擾人類社會很久的瘧疾問題，也使得屠呦呦教授一舉榮獲了諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)。中醫(yī)藥在今年的新型冠狀肺炎大放異彩，在沒有疫苗的情況下，中西醫(yī)結(jié)合并重，使疫情得到控制，感染者恢復(fù)健康。這都使得中國乃至世界上更多的人也逐漸認(rèn)識到了中醫(yī)藥的價(jià)值，我相信隨著科學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，人們會更加全面的認(rèn)識中藥作用機(jī)理，分離提取出新的成分，發(fā)現(xiàn)新的藥理作用。全方面的開發(fā)中藥，造福人類。參考文獻(xiàn)國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社,2015:133-134.曹顏東.當(dāng)歸化學(xué)成分及藥理作用的分析[J].世界最新醫(yī)學(xué)信息文摘,2019,19(2)：93-95.黃榮.當(dāng)歸不同藥用部位活性成分含量的分析研