微生物檢驗技師抗生素敏感性試驗操作規(guī)范抗生素敏感性試驗是臨床微生物檢驗的核心環(huán)節(jié)，旨在確定分離菌株對抗生素的敏感性，為臨床合理用藥提供依據(jù)。規(guī)范的試驗操作是保證結(jié)果準確可靠的前提。本文詳細闡述抗生素敏感性試驗的操作規(guī)范，涵蓋試驗原理、菌株準備、培養(yǎng)基制備、試驗方法、結(jié)果判讀及質(zhì)量控制等方面。一、試驗原理抗生素敏感性試驗通過測定細菌在特定濃度抗生素的培養(yǎng)基中生長情況，評估菌株對抗生素的敏感性。常用方法包括紙片擴散法（K-B法）、肉湯稀釋法、微孔稀釋法和自動化系統(tǒng)法。其中，紙片擴散法應用最廣泛，操作簡便，適用于常規(guī)臨床實驗室。二、菌株準備1.菌株純化臨床分離菌株需經(jīng)純化培養(yǎng)，確保試驗菌株純度。挑取單菌落接種于血平板或麥康凱平板，37℃培養(yǎng)18-24小時，形態(tài)學確認后備用。2.菌懸液制備用麥康凱平板挑取典型菌落，加入0.9%無菌生理鹽水，制成麥氏濁度0.5的菌懸液（約1.5×10?CFU/mL）。用0.1%結(jié)晶紫復溶菌懸液，調(diào)整濁度至標準比濁管一致。3.接種要求接種需在無菌環(huán)境下進行，避免污染。常用接種工具為接種環(huán)或接種針，確保菌液均勻涂抹于整個平板表面。三、培養(yǎng)基制備1.Mueller-Hinton（MH）瓊脂常用抗生素敏感性試驗培養(yǎng)基。稱取23gMH瓊脂粉末，加入950mL蒸餾水，攪拌溶解，調(diào)節(jié)pH7.2-7.4（使用精密pH計）。加熱至完全溶解后，分裝于滅菌皿或培養(yǎng)皿中，每皿15-20mL。高壓蒸汽滅菌121℃15分鐘，冷卻后備用。2.M-H肉湯用于肉湯稀釋法試驗。稱取17gMH粉末，加入830mL蒸餾水，溶解后調(diào)節(jié)pH，高壓滅菌。四、紙片擴散法（K-B法）操作規(guī)范1.平板準備將已凝固的MH瓊脂平板置于水平工作臺，避免傾斜。2.菌液接種用無菌吸管吸取調(diào)整好的0.5麥氏濁度菌懸液，均勻涂布于MH瓊脂表面。靜置30分鐘，使菌液滲入瓊脂。3.抗生素紙片貼放使用無菌鑷子夾取抗生素紙片，均勻分布在瓊脂表面，間距≥24mm，避免紙片接觸邊緣。每皿可貼放12-14張紙片。4.孵育置37℃孵育18-24小時，厭氧菌需微氧環(huán)境（5%CO?）。五、肉湯稀釋法操作規(guī)范1.梯度稀釋將菌株接種于M-H肉湯，進行系列10倍梯度稀釋（如1:100至1:1024）。2.抗生素加入各管加入預定量抗生素，設置空白對照管（不含抗生素）。3.孵育與計數(shù)37℃孵育18-24小時，用顯微鏡計數(shù)最低抑菌濃度（MIC），即細菌生長抑制的最低抗生素濃度。六、結(jié)果判讀1.紙片擴散法根據(jù)CLSI（臨床實驗室標準化研究所）標準，測量紙片周圍抑菌圈直徑（mm）。與標準菌株（如大腸桿菌ATCC25922）對比，判斷菌株敏感性分類：-敏感（S）：≥抑菌圈標準值-耐藥（R）：＜抑菌圈標準值-中介（I）：介于S與R之間2.肉湯稀釋法直接讀取MIC值，與藥敏標準對比分類。七、質(zhì)量控制1.標準菌株檢測每月使用ATCC25922、E.coliATCC35266等標準菌株驗證試驗系統(tǒng)準確性。2.重復性試驗同一菌株重復試驗，結(jié)果一致性應＞90%。3.環(huán)境控制試驗環(huán)境需保持潔凈，避免交叉污染。八、注意事項1.抗生素紙片需新鮮，開封后4小時內(nèi)使用。2.菌懸液濃度