細菌感染的檢查方法與防治原則實驗室診斷細菌學診斷:致病菌、抗原、產(chǎn)物或核酸血清學診斷：特異性抗體細菌學診斷標本的采集和送檢原則避免雜菌污染不同期不同標本用抗生素以前運送注意保存標本必須新鮮致病菌的檢驗程序藥物敏感試驗標本直接涂片檢查分離培養(yǎng)生化試驗血清學試驗動物試驗明確診斷初步診斷分子生物學技術(shù)其他檢測技術(shù)（二）致病菌的檢驗程序1．直接涂片染色鏡檢

直接涂片染色鏡檢法可在顯微鏡下直接觀察致病菌的形態(tài)、大小、排列方式和染色特點。

（如痰中查見抗酸性細長桿菌，初步診斷為結(jié)核分枝桿菌。）優(yōu)點：簡便、快速、價廉，為臨床檢驗所常用缺點：敏感性不及分離培養(yǎng)法2．分離培養(yǎng)

有的細菌在形態(tài)學上難以區(qū)分,可進行細菌的分離培養(yǎng)，這是確診細菌感染性疾病最可靠的方法（金標準）。血液、腦脊液等標本，可直接接種至營養(yǎng)豐富的液體或固體培養(yǎng)基；接種至選擇或鑒別培養(yǎng)基。對純培養(yǎng)物進行形態(tài)特征、生化試驗和血清學試驗鑒定。優(yōu)點：陽性率要比直接涂片鏡檢高缺點：需時較久5．動物試驗（動物實驗一般不作為常規(guī)細菌學診斷。）可進行致病菌的分離與鑒定、細菌毒力的檢測等。常用實驗動物有小鼠、豚鼠和家兔等。方法：接種途徑有注射（皮內(nèi)、皮下、腹腔、肌肉、靜脈、腦內(nèi)）和灌胃等。6．基因診斷技術(shù)優(yōu)點：核酸雜交和PCR技術(shù)不需分離培養(yǎng)，只需檢測標本中致病菌的特異性核酸片段，即可鑒定出致病菌，具有特異性強、敏感度高、快速等特點。（1）核酸雜交技術(shù)：（2）PCR技術(shù)：（3）DNA芯片（DNAarray）技術(shù)原理血清學診斷

雙份血清標本，恢復期血清中抗體效價比急性期血清中抗體效價升高≥4倍者方有意義

用已知的細菌或其特異性抗原檢測患者體液中有無相應(yīng)特異性抗體和其效價的動態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。

(抗原→未知抗體)標本細菌感染性疾病的血清學診斷血清學試驗應(yīng)用舉例直接凝集試驗傷寒副傷寒（肥達試驗）、立克次體病（外斐試驗）凝集試驗流感嗜血桿菌和腦膜炎奈瑟菌感染引起的腦膜炎、新生隱球菌感染、梅毒（VDRL、RPR試驗）冷凝集試驗支原體性原發(fā)性非典型肺炎沉淀試驗白喉毒素（Elek平板毒力試驗）對流免疫電泳流行性腦脊髓膜炎補體結(jié)合試驗Q熱中和試驗風濕熱（抗O試驗）免疫印跡試驗萊姆病免疫熒光試驗梅毒（FTA-ABS試驗）ELISA多種病原體及其毒素、特異性抗體的檢測致病菌的檢驗程序標本直接涂片染色鏡檢分離培養(yǎng)與鑒定病原菌抗原檢測

其它檢測形態(tài)、結(jié)構(gòu)、染色性涂片鏡檢菌落特征生化反應(yīng)藥敏試驗血清學反應(yīng)沉淀反應(yīng)協(xié)同凝集免疫熒光對流免疫電泳酶免疫測定免疫印跡細菌代謝產(chǎn)物（氣相色譜）細菌核酸（PCR）噬菌體分離細菌素測定分子生物學技術(shù)血清學診斷動物試驗獲得性免疫產(chǎn)生的方式主動免疫自然免疫患病、隱性感染

人工免疫

疫苗、類毒素

被動免疫自然免疫胎盤、初乳

人工免疫

抗毒素、丙球人工免疫：采用人工方法將疫苗、類毒素等或含有某種特異性抗體、細胞免疫制劑等接種于人體，以增強宿主體的抗病能力

生物制品：人工免疫的免疫原、免疫血清、細胞制劑及診斷制劑的生物性制劑兩種人工免疫的比較區(qū)別要點人工主動免疫人工被動免疫免疫物質(zhì)抗原抗體或細胞因子等接種次數(shù)1-3次1次免疫出現(xiàn)時間慢（注射后2-4W）快（注射后立刻出現(xiàn)）免疫維持時間長（數(shù)月~數(shù)年）短（2-3W）用途多用于預防多用于治療或應(yīng)急預防細菌感染的治療抗生素（Antibiotic）是某些微生物在代謝過程中產(chǎn)生的一類抗菌物質(zhì)，極微量即能選擇性地抑制或殺死某些病原微生物。抗生素大多由放線菌和絲狀真菌產(chǎn)生。半合成抗生素，在抗生素母核中加入不同側(cè)鏈或通過母核結(jié)構(gòu)改造而獲得?；瘜W合成抗菌藥物，完全化學合成抗生素種類1.β-內(nèi)酰胺類：青霉素、頭孢菌素2.大環(huán)內(nèi)酯類：紅霉素、阿奇霉素3.氨基糖甙類：鏈霉素、慶大霉素4.四環(huán)素類：四環(huán)素、土霉素5.氯霉素：6.人工合成的抗菌藥物：磺胺類：SMZ;喹諾酮：氟派酸、環(huán)丙沙星抗菌藥物殺菌機制

第二十四章病毒感染的檢查方法與防治原則標本的采集與送檢標本采集時間

在發(fā)病初期（急性期）采集標本

標本類型

最好在感染部位采取

標本運輸

放入冷藏包內(nèi)盡快送檢

標本的處理與儲存采集標本時要注意無菌操作病毒分離（一）細胞培養(yǎng)(cellculture)細胞培養(yǎng)類型：原代細胞、二倍體細胞、傳代細胞系等病毒在細胞內(nèi)增殖的指征：

細胞致病作用(cytopathogeniceffect,CPE)、紅細胞吸附、干擾現(xiàn)象病毒在細胞內(nèi)增殖的指標CPE細胞病變效應(yīng)（CPE）：病毒在細胞內(nèi)增殖引起細胞退形性變,細胞腫脹、變圓、縮小、堆積成葡萄串狀；溶解、脫落；形成多核巨細胞、包涵體①細胞變圓、聚集、壞死、溶解或脫落細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)麻疹病毒感染細胞呼吸道合胞病毒感染細胞②形成多核巨細胞或稱融合細胞細胞病變效應(yīng)(cytopathiceffect,CPE)病毒感染性的定量測定：

空斑形成單位(plaque-formingunit,PFU)

50%致死量（LD50）50%組織細胞感染（TCID50）（二）動物接種（三）雞胚接種

病毒抗原的直接檢出免疫熒光法（immunofluorescentassay）酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssays,ELISA）SolidPhaseYAgImmobilizedYAbinPatient’ssampleLabeledAnti-IgSolidPhaseYAgImmobilizedYAginPatient’ssampleLabeledAbELISA病毒抗體的直接檢出

病毒+雞RBC=凝集（血凝試驗）病毒+特異性抗體+雞RBC=不凝集（血凝抑制試驗）檢測病毒核酸核酸雜交技術(shù)(nucleioacidhybridizationtechnique)PCR技術(shù)基因芯片病毒感染的快速診斷光鏡-----包涵體電鏡免疫熒光ELISA分子生物學技術(shù)雜交WesternblotSouthernblotPCRNorthernblot

快速診斷主要是指從含有病毒的標本及感染機體的血清中檢測病毒顆粒、蛋白抗原、IgM抗體和核酸等，往往在數(shù)小時內(nèi)即可得出結(jié)果。

ELISAforHIVantibodyMicroplateELISAforHIVantibody:colouredwellsindicatereactivity蛋白印跡轉(zhuǎn)移WesternBlot同時檢出P24和gp120Ab

人工主動免疫：接種抗原類物質(zhì)，作用產(chǎn)生較晚，維持時間長

人工被動免疫：接種抗體、細胞因子等物質(zhì)，作用產(chǎn)生較早，維持時間短

第二節(jié)病毒感染的免疫預防

人工主動免疫減毒活疫苗(attenuatedvaccine,orlivingvaccine)Sabin脊髓灰質(zhì)炎、HAV、麻疹的減毒活疫苗等死疫苗：

Salk脊髓灰質(zhì)炎乙型腦炎、狂犬病、流感等滅活疫苗。

減毒活疫苗與死疫苗優(yōu)缺點比較特點減毒活疫苗死疫苗制備方法通過非正常培養(yǎng)減毒株通過化學物理方法使感染失活免疫接種一般為一次性多次免疫疫苗的穩(wěn)定性相對不穩(wěn)定相對穩(wěn)定免疫的類型體液免疫和細胞免疫體液免疫毒力回升有可能不可能安全性對免疫缺陷者有危險安全性好生產(chǎn)和成本生產(chǎn)較復雜、成本高生產(chǎn)簡單、成本低其他疫苗亞單位疫苗(subunitvaccine)合成肽病毒疫苗(synthesizedpeptideviralvaccine)基因工程疫苗(geneengineringvaccine)核酸疫苗(nucleicacidvaccine)

DNAVaccinesplasmidMusclecellGeneforantigenMusclecellexpressesprotein-antibodymadeCTLresponse

人工被動免疫

人工被動免疫：輸入含有特異性抗體免疫血清或制備好的免疫細胞或細胞因子，使機體立即獲得免疫力的過程，稱人工被動免疫。

可用于某些急性傳染病的應(yīng)急預防和治療，但維持時間短?？共《局委?antiviraltherapy)

化學藥物治療(chemotherapy)

抑制病毒穿入、脫殼及病毒釋放

抑制病毒核酸復制及mRNA合成

核苷類藥物非核苷類似物免疫治療干擾素和干擾素誘生劑免疫細胞的修飾與回輸治療性疫苗antibodyNewmethodsAnti-idiotypevaccineepitopeAntibodywithepitopebindingsiteVirusantibodyAnti-idiotypevaccineMakeantibodyagainstantibodyidiotypeAnti-

idiotype

antibodyAnti-idiotypeantibodymimicstheepitopeAnti-anti-idiotype

antibodyAnti-idiotypeantibodyUseanti-idiotypeantibodyasinjectablevaccineAntibodytoanti-idiotype

antibodyBindsandneutralizesvirusAnti-idiotype

antibody

Anti-anti-idiotype

antibodyAnti-anti-idiotype

antibodyUseasvaccine中草藥防治病毒感染黃芪、板藍根、大青葉、貫眾、螃蜞菊、甘草和大蒜提取物等

基因治療反義寡核苷酸（antisenseoligonucleotide）干擾RNA（shortinterferingRNA，siRNA）

掌握：正常菌群、機會性致病菌、菌群失調(diào)、菌群失調(diào)癥的概念；機會性致病菌的致病條件；細菌的毒力；細菌內(nèi)、外毒素的主要區(qū)別；胞外菌感染、胞內(nèi)菌感染及外毒素致病的免疫特點；標本的采集原則和檢驗程序；常用的血清學診斷方法。熟悉：宿主的固有免疫的組成；吞噬細胞吞噬作用的后果；適應(yīng)性免疫的獲得方式；人工免疫的概念和常用的免疫制劑。

了解：抗菌藥物殺菌機制，細菌耐藥性。