《貯煙蟲(chóng)害生物防治技術(shù)規(guī)程烯蟲(chóng)酯法》技術(shù)報(bào)告項(xiàng)目概述1.1煙草蟲(chóng)害與防治概述據(jù)中國(guó)煙草總公司1990年至1991年對(duì)貯煙害蟲(chóng)危害情況的調(diào)查統(tǒng)計(jì)[1,2]，全國(guó)年貯存煙葉大約3800萬(wàn)擔(dān)，每年因貯煙害蟲(chóng)造成的重量損失約為62.3萬(wàn)擔(dān)，重量損失率約為1.64%，經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)3億元。對(duì)儲(chǔ)煙昆蟲(chóng)群落的研究表明[3]，在儲(chǔ)煙害蟲(chóng)中，鞘翅目蟲(chóng)種占絕對(duì)優(yōu)勢(shì)，其次是鱗翅目。常見(jiàn)的蟲(chóng)種有：煙草甲[Lasiodermaserricorne(Fabricius)]、煙草粉螟［Ephestiaelutella（Hubner）］、大谷盜[Tenebroidesmauritanicus(Linnaeus)]、赤擬谷盜［Trboliumcastaneum（Herbst）］等，以前兩種最常見(jiàn)，危害也最大。煙草粉螟適應(yīng)溫帶氣候，分布于北半球，它主要危害貯存煙草，由于對(duì)高溫缺乏抵抗力，熱帶沒(méi)有分布。而煙草甲蟲(chóng)特別適應(yīng)熱帶氣候，感染和危害全生產(chǎn)過(guò)程中各種形態(tài)的煙草，每年對(duì)貯存煙草造成上億元的損失。由于煙草甲危害加工過(guò)程各個(gè)階段的煙葉，包括卷煙，因此在煙葉貯存庫(kù)、加工機(jī)械、煙末、成品庫(kù)，甚至零售點(diǎn)及自動(dòng)售煙機(jī)上均為有害。這些危害不僅造成煙葉重量的損失，由于蟲(chóng)孔的存在，導(dǎo)致煙葉成絲率的降低，害蟲(chóng)排泄物還造成煙葉品質(zhì)的下降等。為了生產(chǎn)無(wú)害蟲(chóng)、無(wú)蟲(chóng)尸或蟲(chóng)糞（分泌物和油漬斑）污染的優(yōu)質(zhì)卷煙，需要對(duì)害蟲(chóng)進(jìn)行防治。目前，儲(chǔ)煙害蟲(chóng)防治方法可分為非藥劑防治和藥劑防治兩類[4]。前者常見(jiàn)的方法包括物理防治（低溫殺蟲(chóng)、高溫殺蟲(chóng)、電離輻射防治）、保管技術(shù)防治（密封除氧、改變空氣成分、改變濕度、防蟲(chóng)袋）等。其中，低溫殺蟲(chóng)在我國(guó)北方地區(qū)應(yīng)是一項(xiàng)行之有效的殺蟲(chóng)措施，而高溫殺蟲(chóng)常是利于復(fù)烤過(guò)程中的高溫殺死貯煙害蟲(chóng)，制絲前的真空回潮也可殺蟲(chóng)。鄭州煙草研究院1985年用鈷60-γ射線輻射防治煙草甲蟲(chóng)和煙草粉螟，效果不錯(cuò)，但目前實(shí)際推行還有一定的困難。人為地改變空氣中的氣體成分(如向密封的煙垛充二氧化碳或氮?dú)獾?能夠抑制害蟲(chóng)的發(fā)生，利用除氧劑防治貯煙害蟲(chóng)也屬這一范疇。常德卷煙廠用CT-Ⅲ型除氧劑封存煙葉1年至1年半，不僅有效防止了貯煙蟲(chóng)害的發(fā)生和發(fā)展，還防止了煙葉霉變及破碎。藥劑防治包括使用熏蒸劑、煙葉防護(hù)劑和激素類農(nóng)藥等。目前，國(guó)內(nèi)主要用（磷化鋁、溴甲烷）、有機(jī)磷（敵敵畏）等熏蒸劑來(lái)熏殺害蟲(chóng)，也有人開(kāi)始使用除蟲(chóng)菊酯類藥劑（如敵殺死等），但由于國(guó)內(nèi)多數(shù)倉(cāng)庫(kù)密閉性欠佳，全倉(cāng)密閉熏蒸不能殺死各個(gè)蟲(chóng)態(tài)的害蟲(chóng)。緩擇熏蒸、間歇熏蒸及混合熏蒸等技術(shù)的發(fā)展對(duì)于改善熏蒸效果有現(xiàn)實(shí)意義。菲·莫公司使用植物性殺蟲(chóng)劑除蟲(chóng)菊酯控制貯煙害蟲(chóng),貴州省用敵殺死防治貯煙害蟲(chóng)。目前除了化學(xué)防護(hù)劑受到普遍重視外，天然植物性殺蟲(chóng)劑的研究也日益受到重視。據(jù)報(bào)道[5-8]，菖蒲、土荊芥對(duì)煙草甲蟲(chóng)具有較高的毒性，一些胡椒抽提物、橙樹(shù)的皮和油對(duì)煙草甲蟲(chóng)、雜擬谷盜、米象、四紋豆象具有忌避毒性。激素類農(nóng)藥的應(yīng)用主要涉及性誘捕劑和保幼激素類似物兩個(gè)方面。煙草甲蟲(chóng)雄性激素是日本的T.Chuman等人從雄性煙草甲蟲(chóng)中分離出來(lái)的[9]，確定其有效成分為4S，6S，7S-4、6-二甲基-7-羥基—3—壬酮(Serriconine)，并人工合成了該化合物(旋光異構(gòu)體混合物)。由于超微量的性激素即可顯出強(qiáng)烈的效果，具有種群特異性高且無(wú)毒的特點(diǎn)，此類化合物被開(kāi)始廣泛應(yīng)用于害蟲(chóng)防治的各個(gè)方面[10-15]。其中，最普遍的應(yīng)用是在種群監(jiān)測(cè)上，利用信息素干擾害蟲(chóng)交配也取得一些進(jìn)展。昆蟲(chóng)信息素作為測(cè)報(bào)手段和防治技術(shù)獲得相當(dāng)?shù)某晒ΑＤ壳埃澜缟弦延卸嗉夜旧a(chǎn)多種昆蟲(chóng)信息素的緩釋劑型、散發(fā)器、誘捕器等。對(duì)使用聚集信息素的害蟲(chóng)，大量誘殺非常有效，利用信息素防治害蟲(chóng)必須將誘捕技術(shù)、殺滅技術(shù)、交配干擾技術(shù)等相結(jié)合才能達(dá)到較好的效果。在我國(guó)河南等省利用性誘劑防治4.67×104hm2煙田煙青蟲(chóng)，獲得了良好效果[16,17]。1992年駐馬店煙草公司在煙田中利用性誘劑誘捕煙草夜蛾，取得初步效果。從1994年開(kāi)始，湖北、湖南、云南、福建等煙區(qū)相繼開(kāi)始了利用性誘劑防治煙草夜蛾的試驗(yàn)，均取得了良好的防治效果[18]。但是上述殺蟲(chóng)方法普遍存在著抗藥性、殺傷天敵、污染環(huán)境、有殘毒、有效期短、對(duì)人畜不安全等缺點(diǎn)，順勢(shì)發(fā)展起的生物農(nóng)藥克服了以上缺點(diǎn)，正逐步為人們所用。在開(kāi)發(fā)高效、高選擇性殺蟲(chóng)劑的過(guò)程中，昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(InsectGrowthRegulators,簡(jiǎn)稱IGRs)的發(fā)現(xiàn)是一個(gè)重大突破。這類藥劑是作用于昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的關(guān)鍵階段，阻礙昆蟲(chóng)的發(fā)育進(jìn)程，其作用于昆蟲(chóng)所特有的蛻皮、變態(tài)發(fā)育過(guò)程，因而具有很高的選擇性，對(duì)人畜十分安全，如果使用得當(dāng)，對(duì)害蟲(chóng)的天敵影響較小，具有明顯的選擇毒性，因此適合于害蟲(chóng)的綜合治理策略，前景客觀。由于此類藥劑作用機(jī)理不同于以往作用于神經(jīng)系統(tǒng)的傳統(tǒng)殺蟲(chóng)劑，它們毒性低、污染少、對(duì)天敵和有益生物影響小，有助于可持續(xù)農(nóng)業(yè)的發(fā)展，有利于無(wú)公害綠色食品生產(chǎn)，有益于人類健康，因此被譽(yù)為“第三代農(nóng)藥”。1967年，Williams提出以保幼激素（JH）及蛻皮激素（MH）為主的IGRs作為第三代殺蟲(chóng)劑。1985年趙善歡認(rèn)為IGRs應(yīng)包括保幼激素（JHA）、蛻皮激素（MH）及其類似物、抗保幼激素、幾丁質(zhì)合成抑制劑、植物源次生物的拒食劑、昆蟲(chóng)源信息素、引誘劑等干擾害蟲(chóng)行為及抑制生長(zhǎng)發(fā)育特異性作用的緩效型“軟農(nóng)藥”，從而拓寬了IGRs的范疇[19]。保幼激素類似物（JHA）是指以昆蟲(chóng)體內(nèi)保幼激素為先導(dǎo)化合物開(kāi)發(fā)的具有保幼激素活性的化合物。保幼激素及其類似物的發(fā)展較快，其作用主要是控制害蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育，使幼蟲(chóng)不能變蛹或蛹不能變?yōu)槌上x(chóng)，產(chǎn)生生理形態(tài)上的變化，形成超齡若蟲(chóng)或幼蟲(chóng)，使其不能成熟而死亡。這類化合物與幾丁質(zhì)合成抑制劑及蛻皮類活性物質(zhì)相比較，對(duì)昆蟲(chóng)顯示藥劑活性的生理期更短。因此，要獲得最佳殺蟲(chóng)效果必須選擇最佳施藥時(shí)期。因而在昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑中，該類化合物的商品化品種較少，第一個(gè)商業(yè)化品種是1995年美國(guó)環(huán)保局推出的烯蟲(chóng)酯（Methoprene）[20]。烯蟲(chóng)酯的化學(xué)名稱是11-甲氧基-3,7,11-三甲基-2E,4E-十二碳二烯酸異丙酯，結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖式1。aR=OMe,R=CH(CH3)2(ZR-0515，烯蟲(chóng)酯)bR=H,R=C2H5(ZR-0512)cR=H,R=CH2CCH(ZR-0512)dR=OH,R=C2H5(ZR-0777)eR=OH,R=CH(CH3)2圖1-1脂肪族類保幼激素的化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure1-1Chemicalstructureofaliphaticjuvenilehormones1.2保幼激素應(yīng)用研究進(jìn)展具有保幼激素活性的昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(IGR)能抑制昆蟲(chóng)卵的孵化，促進(jìn)發(fā)育早期的胚胎死亡，甚至還可以阻礙雌性個(gè)體卵的產(chǎn)生。使用極少量保幼激素，對(duì)鱗翅目、半翅目、鞘翅目和直翅目等昆蟲(chóng)就能產(chǎn)生很大的毒效，引起昆蟲(chóng)的不育甚至死亡。此外，昆蟲(chóng)卵即使接觸極微量的保幼激素類似物也會(huì)使孵化率降低和胚胎發(fā)育不正常，可起到殺卵劑的作用，其生物活性作用主要表現(xiàn)在：1)抑制卵孵化；2)阻礙幼蟲(chóng)變態(tài)；3)阻礙蛹羽化；4)對(duì)生殖產(chǎn)生影響，使雌成蟲(chóng)產(chǎn)卵數(shù)量減少，且使所產(chǎn)的卵孵化率降低。保幼激素類農(nóng)藥應(yīng)用最廣的是蒙五一五（Methoprene）[21-22]，它是一種昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，可以打斷目標(biāo)昆蟲(chóng)的生活史，對(duì)煙草甲蟲(chóng)和煙草粉螟均有特效。其作用機(jī)理是阻止幼蟲(chóng)發(fā)育為成蟲(chóng)。在處理煙草和未處理煙草上，煙草甲蟲(chóng)均可產(chǎn)卵，并孵化為幼蟲(chóng)，取食煙草，降低原料的質(zhì)量。在未處理煙草上，4齡幼蟲(chóng)可進(jìn)入蛹期，在蛹?xì)ぶ凶儜B(tài)為成蟲(chóng)，繼續(xù)發(fā)育。而在蒙五一五處理的煙葉上，攝入蒙五一五的幼蟲(chóng)不能變態(tài)，下一代不能發(fā)育[23]。該物質(zhì)妨礙昆蟲(chóng)的發(fā)育，打破生活周期。蒙五一五有兩種劑型用于控制煙草甲蟲(chóng)和煙草粉螟：Kabat煙葉保護(hù)劑（在煙葉加工過(guò)程直接加到煙葉上）和Dianex殘效噴霧劑（用于空間噴霧）。蒙五一五遇光降解，但在煙葉復(fù)烤過(guò)程中加入5-10mg／kg的蒙五一五，在煙葉正常貯存條件下，兩年后仍有效果[24]。利用Kabat防制害蟲(chóng)的關(guān)鍵是在煙葉打葉復(fù)烤過(guò)程中均勻加入藥劑，在烤機(jī)尾部利用一個(gè)系統(tǒng)裝置先將Kabat5%（質(zhì)量）乙醇與水混合，然后將混合物均勻噴到煙葉上。利用與噴霧電泵系統(tǒng)相連的重量皮帶秤測(cè)定煙葉流量，根據(jù)煙葉流量調(diào)整噴藥量。煙葉的流量及噴入的藥量應(yīng)記錄并建立擋案，可計(jì)算出處理濃度，并通過(guò)分析煙葉樣品進(jìn)一部核實(shí)[25]。經(jīng)Kabat處理的煙葉應(yīng)與未處理的煙葉分開(kāi)存放。若未經(jīng)Kabat處理、感染有甲蟲(chóng)的煙葉也存放在同一倉(cāng)庫(kù)，煙草甲蟲(chóng)將感染Kabat處理的煙葉，并可發(fā)育到幼蟲(chóng)階段[25]，這將降低煙葉的等級(jí)，可能產(chǎn)生油斑及污染。在工廠，蒙五一五的Dianex型用作空間噴霧劑，一旦使用，與害蟲(chóng)有關(guān)的消費(fèi)者投訴案可減少89%[26]。為了保證防治效果，表面煙塵中的蒙五一五含量應(yīng)維持在10mg/kg。目前世界上許多產(chǎn)煙國(guó)家如美國(guó)、巴西、津巴布韋等都在使用Kabat。Kabat價(jià)格較高，推薦使用濃度為7.5mg/kg～10mg/kg，防治費(fèi)用為0.086～0.11元/kg，目前在國(guó)內(nèi)尚未推廣使用。烯蟲(chóng)酯除了用在煙葉上防蟲(chóng)以外，在其他很多方面也有很好的應(yīng)用。實(shí)驗(yàn)顯示，Methoprene可以有效地抑制Oryzaephilissurinamensis(L.)，Triboliumcastanerm(Herbst)，Rhyzoperthadominica(F.)等鞘翅目昆蟲(chóng)的成熟和繁殖。在澳大利亞，基于谷物儲(chǔ)存的衛(wèi)生學(xué)的角度考慮，Methoprene已被日益廣泛地應(yīng)用于保護(hù)貯藏的谷物不受Rdominica的侵襲[27]。它的使用可以有效地降低Rdominica的產(chǎn)卵能力，僅使用很低的濃度即可達(dá)到需要的收效。同樣，Methoprene也能應(yīng)用于玉米的貯存[28]。造成貯存玉米病蟲(chóng)害的害蟲(chóng)有很多種，Methoprene對(duì)于其中的Rdominica的抑制表現(xiàn)出很高的活性和很好的穩(wěn)定性。在衛(wèi)生害蟲(chóng)防治方面，隨著保幼激素類似物劑型的不斷擴(kuò)大與完善，效果與持效性也在不斷地增強(qiáng)，防治的害蟲(chóng)類群已從叮咬性及騷擾或污染性的幾種雙翅目昆蟲(chóng)擴(kuò)大到蚤類、蠅類、蟑螂、螞蟻與蜱等。如在水塘中以質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.0×10-7烯蟲(chóng)酯即可抑制淡色庫(kù)蚊幼蟲(chóng)生長(zhǎng)。蒙五一五在許多國(guó)家注冊(cè)，世界衛(wèi)生組織批準(zhǔn)可加入到飲用水中（1mg／kg）防治蚊子[29]。Methoprene既能夠有效地抑制蚊子的生長(zhǎng)，又幾乎不會(huì)影響環(huán)境，破壞生態(tài)，也不會(huì)影響到其它非目標(biāo)生物，因而被廣泛地應(yīng)用于淡水棲息地的蚊子的防治(尤其是在澳大利亞)[30]。生物分析數(shù)據(jù)顯示,人工合成的Methoprene能夠作為一種幼蟲(chóng)殺蟲(chóng)劑來(lái)有效地抑制蚊類昆蟲(chóng)(如黃熱蚊等)的生長(zhǎng)。將其噴灑于水中，可以幾乎100%的控制從4英寸到15英尺水深范圍內(nèi)的，不論是清澈的還是被有機(jī)物嚴(yán)重污染了的水中的蚊子幼蟲(chóng)的成熟[31]。具有高生物活性的脂肪族保幼激素類似物Methoprene對(duì)蠅類昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)具有顯著的抑制作用。它對(duì)于抑制果蠅的成熟具有很高的活性[32]，通過(guò)喂食或局部使用Methoprene，可以干擾果蠅的中樞神經(jīng)系統(tǒng)、唾液腺和肌肉組織的變形性改組[33]。對(duì)于家蠅(MuscadomesticaL.)，即使環(huán)境溫度存在著不穩(wěn)定和上升(接近50℃)，其幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)和蛹的階段都仍能保持正常，但Methoprene的使用仍然能夠有效地抑制其成蟲(chóng)期的出現(xiàn)。保幼激素類似物由于具有毒性低、對(duì)人畜安全、不造成環(huán)境污染并且能防治對(duì)殺蟲(chóng)劑有抗性的害蟲(chóng)的優(yōu)點(diǎn)，從而在螞蟻的防治研究中也得到了廣泛重視。使用Methoprene等脂族類保幼激素類似物作為添加劑制成食餌，可以吸引工蟻將其搬入蟻巢，以使蟻后和其它螞蟻都被感染，從而使Pharaoh’sant的蟻巢內(nèi)的螞蟻的數(shù)量迅速減少，在10到13周內(nèi)最終滅絕。室內(nèi)外研究也證明很多品種都對(duì)白蟻有明顯效果[34]。在美國(guó)有一些保幼激素類似物已在白蟻工程中應(yīng)用。研究表明，保幼激素類似物能誘導(dǎo)兵蟻、前兵蟻和中間品級(jí)的產(chǎn)生，這種作用破壞了白蟻群體品級(jí)比例的完整性，使其用于白蟻的補(bǔ)救防治成為可能。隨著研究工作的開(kāi)展和深入以及大量新的保幼激素類似物的出現(xiàn)，它們對(duì)白蟻的防治將會(huì)發(fā)揮更大的作用。在倉(cāng)貯害蟲(chóng)防治方面，倉(cāng)庫(kù)小型試驗(yàn)表明，烯蟲(chóng)酯在質(zhì)量分?jǐn)?shù)5.0×10-5劑量下，對(duì)玉米象、赤擬谷盜、書(shū)虱防治效果較好，害蟲(chóng)出現(xiàn)幼蟲(chóng)→蛹、蛹→成蟲(chóng)中間型畸變現(xiàn)象[35]。保幼激素不僅可用來(lái)防治害蟲(chóng)，在蠶業(yè)和繁蜂育王中也有很高的應(yīng)用價(jià)值。利用保幼激素類似物Methoprne處理天蠶五齡期具有明顯的增絲效果[36]。Methoprne五齡期處理后的繭層量,繭層率和葉絲相對(duì)轉(zhuǎn)化率均有明顯提高。用JH及其類似物處理蜜蜂幼蟲(chóng)能促進(jìn)短期的嗅覺(jué)記憶能力；促進(jìn)蜂王卵巢細(xì)胞DNA的增殖并抑制其細(xì)胞凋亡；提早其覓食的時(shí)間，促進(jìn)育嬰蜂的發(fā)育及行為的形成[37-38]。脂肪族保幼激素類似物烯蟲(chóng)酯基于其自身的高活性、高選擇性、無(wú)毒性和環(huán)保性等優(yōu)勢(shì)，已經(jīng)得到深入的研究和廣泛的應(yīng)用。但由于它在應(yīng)用中不斷出現(xiàn)一些新的問(wèn)題和對(duì)它的功效不斷提出的新的要求，使它的研究仍然具備重要的科學(xué)意義和應(yīng)用前景。1.3項(xiàng)目的研究目的、意義和必要性《貯煙蟲(chóng)害生物防治技術(shù)規(guī)程烯蟲(chóng)酯法》是2022年國(guó)家煙草專賣(mài)局下達(dá)的行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目，計(jì)劃文書(shū)號(hào)：國(guó)煙科〔2021〕169號(hào)NO.1；合同號(hào)2021B022。1.3.1主要目的開(kāi)展以烯蟲(chóng)酯為主成分的煙葉倉(cāng)儲(chǔ)生物防治技術(shù)研究，替代磷化氫熏蒸殺蟲(chóng)法，配合5年內(nèi)淘汰磷化氫等高毒農(nóng)藥使用的國(guó)家政策，規(guī)范以烯蟲(chóng)酯為主要有效成分的煙草行業(yè)煙葉倉(cāng)儲(chǔ)生物防治方法、技術(shù)和工藝，提高煙草倉(cāng)儲(chǔ)蟲(chóng)害防護(hù)能力，保障煙草原料存儲(chǔ)質(zhì)量和卷煙原料可持續(xù)發(fā)展。1.3.2意義和必要性該項(xiàng)目的意義及必要性如下：1、現(xiàn)有倉(cāng)儲(chǔ)防蟲(chóng)熏蒸方法面臨國(guó)家政策淘汰，優(yōu)選的替代方法勢(shì)在必行農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《限制使用農(nóng)藥名錄（2017）》，淘汰了磷化鋅、磷化鈣等磷化氫前提物質(zhì)的使用，僅許可并嚴(yán)格限制磷化鋁的使用。2019年《中共中央、國(guó)務(wù)院關(guān)于深化改革加強(qiáng)食品安全工作的意見(jiàn)》要求5年內(nèi)分期分批淘汰現(xiàn)存的10種高毒農(nóng)藥，其中就包括磷化鋁。2024年農(nóng)村農(nóng)業(yè)部辦公廳農(nóng)辦農(nóng)函〔2024〕2號(hào)文《農(nóng)業(yè)農(nóng)村部辦公廳關(guān)于征求磷化鋁氯化苦管控措施意見(jiàn)的函》，開(kāi)展磷化鋁氯化苦管控措施的征求意見(jiàn)。因此磷化氫熏蒸面臨政策強(qiáng)制性限制使用，倉(cāng)儲(chǔ)蟲(chóng)害防治的替代方法研究與應(yīng)用勢(shì)在必行。圖1-2《中共中央、國(guó)務(wù)院關(guān)于深化改革加強(qiáng)食品安全工作的意見(jiàn)2019》截圖Figure1-2Screenshotof"OpinionsoftheCentralCommitteeoftheCommunistPartyofChinaandtheStateCouncilonDeepeningReformandStrengtheningFoodSafetyWorkin2019"2、磷化鋁與磷化氫存在顯著的安全和環(huán)保隱患，不利于煙草原料可持續(xù)發(fā)展1）高毒性，對(duì)人體有危害，磷化鋁易潮解，吸收空氣中的水分后，分解放出高效劇毒磷化氫氣體，空氣中濃度若達(dá)到1390mg/m3，可使人迅速死亡。2）自燃，當(dāng)溫度超過(guò)60℃時(shí)會(huì)立即在空氣中自燃，與氧化劑能發(fā)生強(qiáng)烈反應(yīng)，引起燃燒或爆炸。3）強(qiáng)腐蝕性，對(duì)于設(shè)備和管道有強(qiáng)烈的腐蝕作用，鐵皮風(fēng)管使用壽命低于5年。3、生物防蟲(chóng)技術(shù)的開(kāi)發(fā)有利于提升科研水平、有利于環(huán)境保護(hù)煙草行業(yè)率先開(kāi)展倉(cāng)儲(chǔ)生物防治方法，完善技術(shù)推廣應(yīng)用可行性，不僅有利于消除磷化氫帶來(lái)的安全隱患和環(huán)境問(wèn)題，而且可以借鑒給糧食倉(cāng)儲(chǔ)蟲(chóng)害防治，有利于推動(dòng)技術(shù)進(jìn)步，具備較高的社會(huì)效益。1.4本項(xiàng)目的范圍、主要研究?jī)?nèi)容和技術(shù)路線1.4.1本項(xiàng)目的研究范圍本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目的范圍主要為：適用于煙葉倉(cāng)儲(chǔ)蟲(chóng)害的烯蟲(chóng)酯生物防治，規(guī)定采用烯蟲(chóng)酯作為貯煙蟲(chóng)害生物防治調(diào)節(jié)劑的通用技術(shù)規(guī)程及要求。1.4.2主要研究?jī)?nèi)容）法律法規(guī)和現(xiàn)狀調(diào)研。從烯蟲(chóng)酯的許可使用范圍和使用安全性等多個(gè)方面，開(kāi)展國(guó)內(nèi)外法規(guī)文獻(xiàn)資料查新和調(diào)研；2）烯蟲(chóng)酯生物活性、藥效驗(yàn)證試驗(yàn)?？疾霺/R-烯蟲(chóng)酯和S-烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲和煙草粉螟的藥效，試驗(yàn)分為實(shí)驗(yàn)室、小規(guī)模試驗(yàn)、中等規(guī)模試驗(yàn)；3）添加工藝技術(shù)研究。研究烯蟲(chóng)酯性狀、藥液配方和添加工藝，提出生物防蟲(chóng)技術(shù)應(yīng)用的良好生產(chǎn)規(guī)范（GMP）和關(guān)鍵點(diǎn)控制（CCP）要求；4）倉(cāng)儲(chǔ)技術(shù)研究。研究含烯蟲(chóng)酯的片煙、煙梗在倉(cāng)儲(chǔ)環(huán)境中的影響因素，規(guī)范相應(yīng)的倉(cāng)儲(chǔ)技術(shù)和庫(kù)房要求。1.4.3技術(shù)路線圖1-3技術(shù)路線圖Figure1-3TechnicalRoadmap實(shí)施方案：法規(guī)及標(biāo)準(zhǔn)的文獻(xiàn)調(diào)研與行業(yè)現(xiàn)狀調(diào)研調(diào)研國(guó)內(nèi)外烯蟲(chóng)酯使用的相關(guān)法律法規(guī)、標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)。調(diào)研國(guó)內(nèi)外烯蟲(chóng)酯添加工藝，考察行業(yè)打葉復(fù)烤等工藝線，為添加工藝的研究提供支撐。烯蟲(chóng)酯檢測(cè)方法研究參考相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)，開(kāi)展溶液中、煙草及煙草制品中烯蟲(chóng)酯的檢測(cè)回收率、重復(fù)性、檢測(cè)限等方法性能研究，建立煙草及煙草制品中烯蟲(chóng)酯含量的檢測(cè)方法。制備含烯蟲(chóng)酯的溶液和煙草的梯度樣品，在行業(yè)內(nèi)開(kāi)展檢測(cè)方法的共同試驗(yàn)。烯蟲(chóng)酯室內(nèi)生物活性試驗(yàn)分別考察S/R-烯蟲(chóng)酯和S-烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲和煙草粉螟生物活性的影響，根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，獲得烯蟲(chóng)酯治理煙草蟲(chóng)害的最優(yōu)有效理論濃度。烯蟲(chóng)酯藥效驗(yàn)證根據(jù)項(xiàng)目組前期試驗(yàn)結(jié)論，設(shè)計(jì)不同烯蟲(chóng)酯添加比例梯度，分別采用實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證、小規(guī)模試驗(yàn)驗(yàn)證、中等規(guī)模試驗(yàn)驗(yàn)證的方式，獲取烯蟲(chóng)酯治理煙草蟲(chóng)害的最優(yōu)有效實(shí)際濃度，總結(jié)烯蟲(chóng)酯在煙葉上的衰減規(guī)律，評(píng)估烯蟲(chóng)酯治理蟲(chóng)害的效果。生物藥液在線添加工藝研究通過(guò)研究烯蟲(chóng)酯性狀，制訂烯蟲(chóng)酯藥液配方，考察合適的添加工序、添加方法、添加量等影響因素，提出生物防蟲(chóng)技術(shù)應(yīng)用的良好生產(chǎn)規(guī)范（GMP）和關(guān)鍵點(diǎn)控制（CCP）要求，獲取烯蟲(chóng)酯最佳添加方法和關(guān)鍵參數(shù)。倉(cāng)儲(chǔ)和庫(kù)房條件的技術(shù)要求研究添加烯蟲(chóng)酯后的煙葉和煙梗倉(cāng)儲(chǔ)環(huán)境、建筑、堆放等條件的影響，規(guī)范相應(yīng)的倉(cāng)儲(chǔ)技術(shù)和庫(kù)房要求。撰寫(xiě)技術(shù)報(bào)告和編制說(shuō)明，形成標(biāo)準(zhǔn)草案并征求意見(jiàn)，形成標(biāo)準(zhǔn)送審稿撰寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明與技術(shù)報(bào)告等相關(guān)材料，形成標(biāo)準(zhǔn)草案并在行業(yè)內(nèi)廣泛征求意見(jiàn)。對(duì)所征求意見(jiàn)和建議進(jìn)行整理并反饋，完善標(biāo)準(zhǔn)草案等材料后，形成《貯煙蟲(chóng)害生物防治技術(shù)規(guī)程烯蟲(chóng)酯法》送審稿。專家論證會(huì)

研究報(bào)告2.1文獻(xiàn)與應(yīng)用情況調(diào)研2.1.1定義“生物防治”和“昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑”定義生物防治biologicalcontrol聯(lián)合國(guó)糧食及農(nóng)業(yè)組織國(guó)際植物檢疫措施標(biāo)準(zhǔn)第5號(hào)出版物2001年，植物檢疫術(shù)語(yǔ)表描述為：生物防治，利用活天敵、拮抗生物或競(jìng)爭(zhēng)性生物以及其它能自我復(fù)制的生物體進(jìn)行有害生物防治的策略；國(guó)際植物檢疫措施標(biāo)準(zhǔn)第3號(hào)出版物1996年描述為：生物防治，為長(zhǎng)期有害生物防治故意引進(jìn)并永久性定植一種外來(lái)的生物防治物。GB/T20478-2006《植物檢疫術(shù)語(yǔ)》描述為：生物防治，利用活的天敵、拮抗生物、競(jìng)爭(zhēng)性生物或其他生物防治物進(jìn)行有害生物防治的策略。GB/T27614-2011《生物防治物和其他有益生物的輸入和釋放準(zhǔn)則》描述為：利用活天敵、拮抗生物、競(jìng)爭(zhēng)性生物或其他天敵的有害生物防治戰(zhàn)略。本項(xiàng)目采納了GB/T27614的定義，且增加廣義的“生物防治”的內(nèi)容，定義為：利用活天敵、拮抗生物、競(jìng)爭(zhēng)性生物或其他天敵的有害生物防治戰(zhàn)略。廣義的生物防治是利用某些生物、生物代謝產(chǎn)物和類生物技術(shù)來(lái)控制有害生物群體的增殖，以達(dá)到壓低甚至消滅有害生物的目的。昆蟲(chóng)生長(zhǎng)添加劑insectgrouthregulators保幼激素(juvenilehormone，JH)是由昆蟲(chóng)咽側(cè)體分泌，控制昆蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育、變態(tài)，自Roller等(1967)分離鑒定了第一個(gè)保幼激素以來(lái)，迄今滯育的重要內(nèi)源激素之一。張一賓等“具有昆蟲(chóng)激素活性的新的昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑”[J].農(nóng)藥譯叢,1993(02):24-30描述為：能保持正常的自然生態(tài)又不會(huì)導(dǎo)致環(huán)境污染，此類藥劑有腦激素、保幼激素、蛻皮激素和幾丁質(zhì)抑制劑等，它們支配昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)、變態(tài)、休眠等主要生理現(xiàn)象，人們統(tǒng)稱為昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。徐漢虹主編的高等農(nóng)林院校教材《植物化學(xué)保護(hù)學(xué)》第五版，中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，第十節(jié)保幼激素與蛻皮激素類殺蟲(chóng)劑描述為：昆蟲(chóng)腦激素、保幼激素、蛻皮激素等，對(duì)昆蟲(chóng)的生長(zhǎng)、變態(tài)、滯育等主要生理現(xiàn)象具有重要的調(diào)控作用，保幼激素與蛻皮激素類殺蟲(chóng)劑就是在對(duì)上述激素研究的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，人們往往將這些化合物及幾丁質(zhì)合成抑制劑稱為昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑(insectgrowthregulator)。這些殺蟲(chóng)劑并不快速殺死害蟲(chóng)，而是通過(guò)干擾害蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育來(lái)減輕害蟲(chóng)對(duì)農(nóng)作的危害。GB/T20478-2006《植物檢疫術(shù)語(yǔ)》描述為：調(diào)節(jié)或擾亂昆蟲(chóng)正常生長(zhǎng)發(fā)育而使昆蟲(chóng)個(gè)體死亡或生活能力減弱的一類化合物。本項(xiàng)目主要采納GB/T20478-2006《植物檢疫術(shù)語(yǔ)》和《植物化學(xué)保護(hù)學(xué)》第五版，總結(jié)歸納“昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑”的定義為：調(diào)節(jié)或擾亂昆蟲(chóng)正常生長(zhǎng)發(fā)育而使昆蟲(chóng)個(gè)體死亡或生活能力減弱的一類化合物，包括昆蟲(chóng)腦激素、保幼激素和蛻皮激素的類似物以及幾丁質(zhì)合成抑制劑等。烯蟲(chóng)酯性狀與定義圖2-1烯蟲(chóng)酯的化學(xué)結(jié)構(gòu)Figure2-1Chemicalstructureofmethoprene烯蟲(chóng)酯（methoprene）分子式為C19H34O3，CAS號(hào)40596-69-8，化學(xué)名稱英文propan-2-yl(2E,4E)-11-methoxy-3,7,11-trimethyldodeca-2,4-dienoate；中文(2E,4E)-11-甲氧基-3,7,11-三甲基十二碳-2,4-二烯酸異丙酯，分子量310.5。琥珀色液體，有微弱的水果香氣，沸點(diǎn)256℃，密度0.9261g/mL（20℃），微溶于水，25℃時(shí)水中溶解度為1.39mg/L；其蒸氣壓為2.36×10-4mmHg（25℃）；目前還未有關(guān)于烯蟲(chóng)酯可能對(duì)人體產(chǎn)生危害的數(shù)據(jù)；它對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物也沒(méi)有產(chǎn)生皮膚或眼睛刺激作用，在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身上也沒(méi)有觀察到毒性作用；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物長(zhǎng)期口服烯蟲(chóng)酯也未發(fā)現(xiàn)導(dǎo)致癌癥；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在懷孕前和/或懷孕期間接觸烯蟲(chóng)酯，沒(méi)有觀察到不孕、流產(chǎn)增多或出生缺陷的證據(jù)；美國(guó)環(huán)保署農(nóng)藥項(xiàng)目辦公室確定，長(zhǎng)期口服、皮膚或吸入烯蟲(chóng)酯不太可能對(duì)人體造成毒性影響；烯蟲(chóng)酯是一種保幼激素類似物，作為殺蟲(chóng)劑用。烯蟲(chóng)酯的定義，暫時(shí)未見(jiàn)標(biāo)準(zhǔn)的定義，本項(xiàng)目主要依據(jù)ChemSpider搜索后翻譯而得，如下：ChemSpider：隸屬英國(guó)皇家化學(xué)學(xué)會(huì)(RoyalSocietyofChemistry,RSC)，是一個(gè)為化學(xué)相關(guān)學(xué)者與從業(yè)人員提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式等相關(guān)訊息的在線搜索服務(wù)網(wǎng)站。烯蟲(chóng)酯Methoprene（Isopropyl(2E,4E)-11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate）Methopreneisajuvenilehormone(JH)analog,doesnotkillinsects,actsasaninsectgrowthregulator,interfereswithaninsect'slifecycleandpreventsitfromreachingmaturityorreproducing,isabiologicalpesticide.MedChemExpress\o"MedChemExpress-HY-B1161"HY-B1161本項(xiàng)目擬對(duì)烯蟲(chóng)酯的定義為：烯蟲(chóng)酯是一種保幼激素（JH）類似物，不會(huì)殺死昆蟲(chóng)，充當(dāng)昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，干擾昆蟲(chóng)的生命周期。CAS號(hào)：40596-69-8。化學(xué)名：異丙基（2E,4E）-11-甲氧基-3,7,11-三甲基-2,4-十二烷二烯酸酯。S-烯蟲(chóng)酯S-(+)-Methoprene（Isopropyl(2E,4E)-(7S)-11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate）本項(xiàng)目擬對(duì)S-烯蟲(chóng)酯的定義為：S-(+)-烯蟲(chóng)酯是烯蟲(chóng)酯一種手性異構(gòu)體。CAS號(hào)：65733-16-6。化學(xué)名：異丙基（2E,4E,7S）-11-甲氧基-3,7,11-三甲基-2,4-十二烷二烯酸酯。2.1.2許可使用和安全性法律法規(guī)中國(guó)GB/T8321.8-2007《農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則》曾許可烯蟲(chóng)酯在“倉(cāng)儲(chǔ)煙葉”范疇使用，最大使用量為10mg/kg，最大殘留限量為5mg/kg。GB2763-2019《食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定“稻谷”中烯蟲(chóng)酯最大殘留量為10mg/kg，ADI為0.09mg/kgbw。按照GB/T8321.8-2007中煙葉最大使用量10mg/kg和每支卷煙重為0.75g計(jì)算，烯蟲(chóng)酯在卷煙中的最大使用量?jī)H為0.0075mg/支，也就是說(shuō)，體重60kg的人每天抽吸600支卷煙也遠(yuǎn)低于GB2763-2019中烯蟲(chóng)酯在稻谷中的ADI值，況且這個(gè)還未計(jì)算烯蟲(chóng)酯在倉(cāng)儲(chǔ)過(guò)程中的自然衰減量和濾嘴截留。GB/T23220.2-2023《煙葉儲(chǔ)存保管方法第2部分：片煙》在片煙害蟲(chóng)防治的“生物化學(xué)防治”中明確提出：在打葉復(fù)烤環(huán)節(jié)添加生物化學(xué)藥劑S-烯蟲(chóng)酯。根據(jù)片煙流量在打葉復(fù)烤落料口均勻施加S-烯蟲(chóng)酯，片煙中S-烯蟲(chóng)酯含量為l0mg/kg-15mg/kg，要求噴藥設(shè)備霧化效果好，添加過(guò)程無(wú)水滴出現(xiàn)，添加均勻。施加S-烯蟲(chóng)酯的片煙應(yīng)單獨(dú)存放，煙垛加蓋肪蟲(chóng)網(wǎng)，防止外界蟲(chóng)源侵入。YQ50《煙葉農(nóng)藥最大殘留限量》規(guī)定了煙葉中烯蟲(chóng)酯最大殘留量為1mg/kg，經(jīng)與本標(biāo)準(zhǔn)起草單位了解，本標(biāo)準(zhǔn)擬修訂為取消烯蟲(chóng)酯的最大殘留限量。歐洲《國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）農(nóng)藥最大殘留限量（國(guó)家農(nóng)藥殘留評(píng)審委員會(huì)/2015轉(zhuǎn)化版）》規(guī)定“稻谷”中烯蟲(chóng)酯最大殘留量為10mg/kg，“玉米毛油”中最大殘留量為200mg/kg，這些食品中的烯蟲(chóng)酯殘留限量甚至大于我們現(xiàn)在煙葉中最大使用量的設(shè)計(jì)值。歐盟“食品和植物與動(dòng)物來(lái)源飼料中農(nóng)藥殘留限量”法規(guī)（(EC)No396/2005）中規(guī)定烯蟲(chóng)酯在稻谷中的殘留限量為5mg/kg。歐盟于2014年頒布法規(guī)（EU）No91/2014授權(quán)S-烯蟲(chóng)酯作為生物滅殺劑活性物質(zhì)，用于生物滅殺劑產(chǎn)品類型18，即殺蟲(chóng)、殺螨劑和其他殺節(jié)肢動(dòng)物劑。美國(guó)美國(guó)環(huán)保署（USEPA）在農(nóng)藥評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)烯蟲(chóng)酯殘留物對(duì)大眾健康無(wú)害，于2003年7月4日向世界貿(mào)易組織各成員通報(bào)了一項(xiàng)關(guān)于撤消所有烯蟲(chóng)酯殘留物殘留限量的最終法規(guī)，USEPA將其列為豁免物質(zhì)。（來(lái)源于文獻(xiàn)：孫彩霞,董國(guó)堃,章強(qiáng)華.歐盟、美國(guó)、日本食品中豁免物質(zhì)的比較研究[J].農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),2009(01):49-51.美國(guó)聯(lián)邦法規(guī)CFR第40篇第180部分§180.1033中規(guī)定了烯蟲(chóng)酯當(dāng)用于控制昆蟲(chóng)幼蟲(chóng)時(shí)，對(duì)所有食品豁免殘留限量要求。歐美等國(guó)家和國(guó)際組織對(duì)于烯蟲(chóng)酯的法律法規(guī)大致總結(jié)如下：圖2-2歐美等國(guó)家和國(guó)際組織對(duì)于烯蟲(chóng)酯的政策措施Figure2-2PolicymeasuresofEuropeanandAmericancountriesandinternationalorganizationstowardsMethoprene2.1.3應(yīng)用情況烯蟲(chóng)酯作為昆蟲(chóng)生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑，對(duì)鱗翅目、雙翅目、鞘翅目、同翅目多種昆蟲(chóng)有效，經(jīng)常被用于防治蚊、蠅等衛(wèi)生害蟲(chóng)及煙草螟蛾等貯藏期的害蟲(chóng)[43]。烯蟲(chóng)酯通常是指具備2E、4E構(gòu)型烯蟲(chóng)酯，從前期研究可知[44]，烯蟲(chóng)酯的構(gòu)型異構(gòu)體中只有2E、4E構(gòu)型的具備較高生物活性。20世紀(jì)70年代中期，美國(guó)Zoecon和Wellmark公司首次成功研發(fā)了商業(yè)性的生物安全型殺蟲(chóng)劑——保幼激素類似物烯蟲(chóng)酯、烯蟲(chóng)乙酯和烯蟲(chóng)炔酯。由于烯蟲(chóng)酯可以高效控制多種有害昆蟲(chóng)，且對(duì)人和其他非靶向生物安全性極高，所以在美國(guó)蛀蟲(chóng)控制上烯蟲(chóng)酯得到了廣泛及長(zhǎng)期的應(yīng)用[45-47]。在美國(guó)EPA注冊(cè)登記狀態(tài)的烯蟲(chóng)酯系列產(chǎn)品約有560個(gè)（近1200產(chǎn)品-見(jiàn)“美國(guó)殺蟲(chóng)劑信息網(wǎng)”），其中烯蟲(chóng)酯和S-烯蟲(chóng)酯占98%，用途涵蓋倉(cāng)儲(chǔ)蟲(chóng)防治、蚊控、飼喂等各領(lǐng)域類別的產(chǎn)品[46]。澳大利亞、日本、墨西哥、歐盟等地也將烯蟲(chóng)酯主要用于外環(huán)境防治蚊幼蟲(chóng)(WHO推薦用于飲用水控制登革熱)、紅火蟻、跳蚤，虱子等，可通過(guò)直接添加入飼料中防治蒼蠅，還可防治谷蠹、玉米象、赤擬谷盜、煙草甲蟲(chóng)等倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)(FAO推薦為儲(chǔ)糧保護(hù)劑)[46]。烯蟲(chóng)酯一個(gè)里程碑式的成功應(yīng)用是新西蘭政府在1999-2010年十年間，長(zhǎng)期連續(xù)使用烯蟲(chóng)酯來(lái)控制輸入性蚊蟲(chóng)Ae.(Ochlerotatus)camptorhynchus爆發(fā)，直到絕跡[46,47]。烯蟲(chóng)酯用于伊朗地區(qū)瘧疾病院防治、昆士蘭地區(qū)果蠅防治[48,49]，意大利采用烯蟲(chóng)酯防治寵物線蟲(chóng)病害[50]，GregoryJ.等人研究了烯蟲(chóng)酯對(duì)倉(cāng)儲(chǔ)谷物蠹蟲(chóng)防治的影響[51,52]等。國(guó)際上已經(jīng)開(kāi)始使用更純的S-烯蟲(chóng)酯，S-烯蟲(chóng)酯近年來(lái)也得到較多的應(yīng)用[53]，從行業(yè)相關(guān)研究來(lái)看[54]，烯蟲(chóng)酯已經(jīng)具備較高的生物活性，足夠?qū)崿F(xiàn)煙葉倉(cāng)儲(chǔ)的蟲(chóng)害防治需求。 圖2-3國(guó)外烯蟲(chóng)酯應(yīng)用領(lǐng)域 Figure2-3ApplicationFieldsofMethopreneAbroad我國(guó)煙草行業(yè)早在上個(gè)世紀(jì)九十年代就開(kāi)展了相關(guān)研究，湖南中煙在本世紀(jì)初歷經(jīng)兩屆博士后工作開(kāi)展烯蟲(chóng)酯的合成方法研究，周容等發(fā)表了《烯蟲(chóng)酯的立體選擇性全合成》，直到2012年湖南中煙任建新等《烯蟲(chóng)酯的合成新方法及其在煙葉倉(cāng)儲(chǔ)中應(yīng)用研究》獲得總公司科技進(jìn)步獎(jiǎng)才見(jiàn)成果報(bào)道，該成果研究開(kāi)發(fā)了以香茅醛和乙酰乙酸乙酯為原料合成烯蟲(chóng)酯新方法,縮短了反應(yīng)工藝流程,提高了烯蟲(chóng)酯的總收率；建立了內(nèi)源蟲(chóng)害法和外源蟲(chóng)害法對(duì)倉(cāng)儲(chǔ)過(guò)程中煙包蟲(chóng)害情況的評(píng)價(jià)方法，對(duì)煙葉蟲(chóng)害的評(píng)價(jià)更加科學(xué)客觀；形成了控制和防治儲(chǔ)煙害蟲(chóng)的新技術(shù)，解決了傳統(tǒng)磷化氫氣體熏蒸法的環(huán)境污染嚴(yán)重、影響工人身體健康和成本高等問(wèn)題。在2017、2018年湖南中煙擴(kuò)大了烯蟲(chóng)酯的試驗(yàn)量，研究烯蟲(chóng)酯在打葉復(fù)烤應(yīng)用后的蟲(chóng)害防治效果，隨后從2020年開(kāi)始，甘肅煙草、江蘇中煙、吉林煙草、廣西中煙和河南中煙等多家單位開(kāi)始了相關(guān)應(yīng)用試驗(yàn)。在其它領(lǐng)用應(yīng)用方面，有河南工業(yè)大學(xué)胡森等研究了《烯蟲(chóng)酯對(duì)重要儲(chǔ)藏物害蟲(chóng)控制作用研究》，何洋等研究了《S-烯蟲(chóng)酯防治儲(chǔ)糧害蟲(chóng)藥效和毒理試驗(yàn)研究》等等。

2.2烯蟲(chóng)酯的安全性研究本項(xiàng)目對(duì)烯蟲(chóng)酯樣品進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)和安全性評(píng)估，測(cè)定了大鼠急性經(jīng)口半數(shù)致死劑量（LD50）、濃度為2500mg/ml藥液的鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性和體內(nèi)紅細(xì)胞微核率；測(cè)定了添加濃度為20mg/L烯蟲(chóng)酯的煙絲制成的卷煙煙氣凝集物的細(xì)胞急性毒性、鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性和體外細(xì)胞微核率。結(jié)合安全性法律法規(guī)背景情況，項(xiàng)目組總結(jié)評(píng)估了烯蟲(chóng)酯的安全性。2.2.1烯蟲(chóng)酯安全性法律法規(guī)背景美國(guó)環(huán)保署（EPA）在農(nóng)藥評(píng)估時(shí)發(fā)現(xiàn)烯蟲(chóng)酯(Methoprene)殘留物對(duì)大眾健康無(wú)害，于2003年7月4日向世界貿(mào)易組織各成員通報(bào)了一項(xiàng)關(guān)于撤消所有烯蟲(chóng)酯(Methoprene)殘留物殘留限量的最終法規(guī)，將其列為豁免物質(zhì)。殘留限量沒(méi)有繼續(xù)存在的必要，烯蟲(chóng)酯相關(guān)的用途在免除殘留限量的范圍之內(nèi)。另外，當(dāng)烯蟲(chóng)酯在南瓜中作為植物合并殺蟲(chóng)劑時(shí)，EPA還撤銷(xiāo)了關(guān)于對(duì)花葉病毒-2外殼蛋白，南瓜黃色花葉病外殼蛋白，及過(guò)濾性病毒基因材料的特別部分的免除。由于烯蟲(chóng)酯(Methoprene)的35項(xiàng)殘留限量及2項(xiàng)過(guò)濾性病毒材料的免除，以前進(jìn)行過(guò)重估。該文件采取的法規(guī)措施不涉及經(jīng)1996年食品質(zhì)量保護(hù)法修訂的聯(lián)邦食品藥物及化妝品法第408(q)節(jié)規(guī)定的環(huán)保署殘留限量要求。根據(jù)法律，要求環(huán)保署于2006年8月對(duì)1996年8月2日現(xiàn)存的殘留限量進(jìn)行重新評(píng)估。日本肯定列表制度對(duì)烯蟲(chóng)酯則在41種農(nóng)產(chǎn)品和食品上設(shè)置了不同限量。表3-10中列舉了國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）、韓國(guó)、澳大利亞和一部分日本關(guān)于食品中烯蟲(chóng)酯的殘留限量規(guī)定。表2-1其它國(guó)家、國(guó)際組織關(guān)于食品中烯蟲(chóng)酯的殘留限量規(guī)定Table2-1Othercountriesandinternationalorganizations'residuelimitregulationsformethopreneinfood日本國(guó)際食品法典委員會(huì)韓國(guó)澳大利亞食品名稱限量指標(biāo)（mg/kg）食品名稱限量指標(biāo)（mg/kg）食品名稱限量指標(biāo)（mg/kg）食品名稱限量指標(biāo)（mg/kg）大麥5稻40稻5谷物2小麥5谷物10高粱5小麥10蕎麥5肉0.2大麥5小麥糠5小麥粉（全谷除外）2乳0.1黑麥5小麥粉（限于全谷）5玉米油200哺乳動(dòng)物肉0.2大米（糙米）5小麥糠25哺乳動(dòng)物副產(chǎn)品0.1玉米油0.2禽蛋0.02奶0.05可食用下水0.02豬肉0.1家禽肉0.02雞肉0.1家禽可食用內(nèi)臟0.02國(guó)際食品法典農(nóng)藥殘留委員會(huì)CCPR（CODEXCOMMITTEEONPESTICIDERESICUES）于2021年3月收到了動(dòng)物代謝、植物代謝和環(huán)境及供水系統(tǒng)的食用或使用烯蟲(chóng)酯后的研究報(bào)告，給出的意見(jiàn)為“TheInternationalEstimatedDailyIntakes(IEDls)ofmethoprene,basedontheSTMRsestimatedforsevencommodities,were20-40%ofthemaximumADI0.09mg/kgbwforthefiveGEMS/Foodregionaldiets.”2.2.2烯蟲(chóng)酯LD50實(shí)測(cè)我們將（2E4E7S/R）烯蟲(chóng)酯送檢“湖南省勞動(dòng)衛(wèi)生職業(yè)病防治所”和“青島斯坦德檢測(cè)股份有限公司”，進(jìn)行了動(dòng)物毒理學(xué)試驗(yàn)。檢測(cè)依據(jù)按照GB15670-1995《農(nóng)藥登記毒理學(xué)試驗(yàn)方法》進(jìn)行，具體檢測(cè)方法見(jiàn)生物安全性評(píng)價(jià)報(bào)告之毒理學(xué)試驗(yàn)報(bào)告。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2-2。表2-2烯蟲(chóng)酯大鼠急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)結(jié)果Table2-2AcuteOralToxicityTestResultsofMethopreneinRats動(dòng)物性別劑量（mg/kg）動(dòng)物數(shù)（只）累計(jì)死亡數(shù)（只）LD50（mg/kg）雌500050>5000雄500050>5000 根據(jù)中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部2007年發(fā)布的《農(nóng)藥登記資料規(guī)定》中“產(chǎn)品毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)”，烯蟲(chóng)酯雌、雄大鼠急性經(jīng)口毒性均屬于微毒類。與下圖的其它物質(zhì)成分的LD50比較可知，烯蟲(chóng)酯的動(dòng)物急性毒性相比我們生活常用品食鹽更低；經(jīng)對(duì)比可知，烯蟲(chóng)酯（2E4E7S/R）和烯蟲(chóng)酯（2E4E7S）在LD50方面基本一致。圖2-4烯蟲(chóng)酯與其它物質(zhì)成分LD50的比較Figure2-4ComparisonofLD50betweenmethopreneandothersubstancecomponents2.2.3烯蟲(chóng)酯及其煙氣的體外毒性實(shí)測(cè)試驗(yàn)試劑：烯蟲(chóng)酯（2E4E7S/R），廣西昊旺生物科技有限公司試驗(yàn)煙支：湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司烯蟲(chóng)酯藥液的鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性試驗(yàn) 我們將濃度為2500mg/ml烯蟲(chóng)酯藥液送檢“軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輻射與放射醫(yī)學(xué)研究所”，進(jìn)行了烯蟲(chóng)酯藥液的鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性試驗(yàn)。具體檢測(cè)方法見(jiàn)生物安全性評(píng)價(jià)報(bào)告之烯蟲(chóng)酯添加卷煙安全性評(píng)價(jià)報(bào)告。具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2-3。表2-3烯蟲(chóng)酯的鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性試驗(yàn)結(jié)果Table2-3ResultsofthemutagenicitytestforSalmonellatyphimuriuminducedbymethoprene濃度（藥液?jiǎn)挝粸閡l/皿）平均回變菌落數(shù)（個(gè)/皿）TA98TA100自發(fā)突變?nèi)軇┍讲ⅲ╝）芘1ug/皿24±284±528±391±5155±51097±93藥液（稀釋10倍）1532±390±73029±3102±116044±183±312044±472±8表2-3中可以看出，在受試劑量下藥液對(duì)兩種菌的致突變率無(wú)明顯增加（在溶劑對(duì)照的兩倍以內(nèi)）。烯蟲(chóng)酯藥液的體內(nèi)紅細(xì)胞微核試驗(yàn)將濃度為2500mg/ml烯蟲(chóng)酯藥液送檢，進(jìn)行了烯蟲(chóng)酯藥液的體內(nèi)紅細(xì)胞微核試驗(yàn)。具體檢測(cè)方法見(jiàn)生物安全性評(píng)價(jià)報(bào)告之烯蟲(chóng)酯添加卷煙安全性評(píng)價(jià)報(bào)告。實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理和分析，結(jié)果見(jiàn)表2-4。在給藥劑量下微核率比空白對(duì)照增高，但無(wú)明顯劑量效應(yīng)關(guān)系。表2-4烯蟲(chóng)酯誘發(fā)體內(nèi)紅細(xì)胞微核率（‰）Table2-4Micronucleusrateofredbloodcellsinducedbyfenpropathrininvivo(‰)組別微核率（‰）空白對(duì)照7.0±1.9陽(yáng)性對(duì)照37.0±4.87.03mg/kg14.3±5.314.06mg/kg16.6±.3噴灑烯蟲(chóng)酯的卷煙煙氣的采集方法我們送檢“軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院輻射與放射醫(yī)學(xué)研究所”，進(jìn)行了相關(guān)體外毒性檢測(cè)，檢測(cè)項(xiàng)目包括：測(cè)定細(xì)胞急性毒性、鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性試驗(yàn)、體外細(xì)胞微核檢測(cè)。送檢樣品為兩種，一種為對(duì)照卷煙，另外一種為實(shí)驗(yàn)卷煙，實(shí)驗(yàn)用煙為添加了20mg/L的烯蟲(chóng)酯。試驗(yàn)方案是按照軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院制訂的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行的，按標(biāo)準(zhǔn)吸煙條件（GB/T16450-1996常規(guī)分析用吸煙機(jī)定義的標(biāo)準(zhǔn)條件）收集卷煙煙氣，抽吸容量是35ml，單口抽吸時(shí)間2.0s，每60s抽吸一口。制備煙氣凝集物（CSC），用細(xì)胞培養(yǎng)液配制成1支煙/ml的溶液，-80℃貯存?zhèn)溆?。?shí)驗(yàn)時(shí)，稀釋到實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)濃度。卷煙煙氣冷凝物（CSC）細(xì)胞毒性試驗(yàn)具體檢測(cè)方法見(jiàn)生物安全性評(píng)價(jià)報(bào)告之烯蟲(chóng)酯添加卷煙安全性評(píng)價(jià)報(bào)告。兩種卷煙對(duì)BEAS-2B細(xì)胞增殖的影響如圖3.4所示。計(jì)算細(xì)胞平均致死劑量（IC50），對(duì)照煙為8.9支煙/L（95%置信區(qū)間6.4~11.0支煙/L），實(shí)驗(yàn)煙為42.0支煙/L（95%置信區(qū)間40.0~44.0支煙/L）。從圖2-5中可以看出實(shí)驗(yàn)煙的細(xì)胞毒性明顯低于對(duì)照煙。圖2-5兩種卷煙對(duì)Beas-2B細(xì)胞增殖的影響Figure2-5EffectsoftwotypesofcigarettesontheproliferationofBeas-2BcellsCSC鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性試驗(yàn)這個(gè)試驗(yàn)方法同，檢測(cè)數(shù)據(jù)見(jiàn)表2-6。從表中數(shù)據(jù)得知在受試劑量下兩種煙TA100的致突變率無(wú)明顯增加，高于60μl/皿劑量誘發(fā)TA98菌突變率增加，但兩者之間無(wú)差異。表2-6兩種卷煙卷煙CSC的鼠傷寒沙門(mén)氏菌誘變性試驗(yàn)結(jié)果Table2-6MutagenicitytestresultsofSalmonellatyphimuriumintwotypesofcigaretteCSCs濃度（CSC單位為ul/皿）平均回變菌落數(shù)（個(gè)/皿）TA98TA100自發(fā)突變?nèi)軇┍讲ⅲ╝）芘1ug/皿24±284±528±391±5155±51097±93對(duì)照煙1527±372±93043±399±126075±481±1212087±3146±5（實(shí)驗(yàn)煙）1531±877±93054±1078±116066±388±312087±3101±CSC誘導(dǎo)體外細(xì)胞微核率檢測(cè)具體檢測(cè)方法見(jiàn)生物安全性評(píng)價(jià)報(bào)告之烯蟲(chóng)酯添加卷煙安全性評(píng)價(jià)報(bào)告。結(jié)果見(jiàn)表2-7，相同細(xì)胞存活率條件下實(shí)驗(yàn)煙CSC誘發(fā)的細(xì)胞微核率低于對(duì)照煙，但兩者無(wú)顯著差異。表2-7兩種卷煙卷煙CSC誘發(fā)細(xì)胞微核率（‰）Table3-15CellmicronucleusratesinducedbyCSCintwotypesofcigarettes(‰)組別及劑量微核率空白34.2±7.4環(huán)磷酰胺94.9±11.2對(duì)照煙IC5071.3±10.01/2IC5063.2±15.01/4IC5056.5±7.11/8IC5045.6±9.3實(shí)驗(yàn)煙IC5065.6±7.41/2IC5061.3±9.91/4IC5047.4±8.71/8IC5041.1±小結(jié)（1）烯蟲(chóng)酯藥劑雌、雄大鼠急性經(jīng)口半數(shù)致死劑量（LD50）均大于5000mg/kg，毒性均屬于微毒類，此項(xiàng)毒性低于人們生活常用品食鹽。（2）烯蟲(chóng)酯在受試劑量下的藥液對(duì)鼠傷寒沙門(mén)氏菌的致突變和誘發(fā)體內(nèi)紅細(xì)胞微核率與空白無(wú)明顯差異。受試劑量遠(yuǎn)大于本項(xiàng)目擬添加到煙葉的添加量。（3）添加了烯蟲(chóng)酯的卷煙煙氣冷凝物（CSC）的細(xì)胞毒性和體外細(xì)胞微核率低于對(duì)照煙、鼠傷寒沙門(mén)氏菌TA100和TA98的致突變率無(wú)差異。受試煙絲中烯蟲(chóng)酯的比例遠(yuǎn)大于本項(xiàng)目擬添加到煙葉的添加量。（4）國(guó)際食品法典農(nóng)藥殘留委員會(huì)CCPR（CODEXCOMMITTEEONPESTICIDERESICUES）于2021年3月收到了動(dòng)物代謝、植物代謝和環(huán)境及供水系統(tǒng)的食用或使用烯蟲(chóng)酯后的研究報(bào)告，做出結(jié)論“TheMeetingconcludedthatthelong-termintakeofresiduesofmethopreneresultingfromitsusesthathavebeenconsideredbyJMPRisunlikelytopresentapublichealthconcern.The2001JMPRdecidedthatanARfDisunnecessary.TheMeetingthereforeconcludedthattheshort-termintakeofmethopreneresiduesisunlikelytopresentapublichealthconcern.”

2.3烯蟲(chóng)酯的生物活性研究項(xiàng)目組通過(guò)室內(nèi)生物活性測(cè)試，探明烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)煙草甲和煙草蚡螟卵具有殺滅能力、對(duì)幼蟲(chóng)化蛹及羽化抑制效果，考察以烯蟲(chóng)酯作為生物殺蟲(chóng)劑的主要有效成分，從抑制卵、幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育和成蟲(chóng)繁殖能力3個(gè)方面，評(píng)價(jià)其對(duì)煙草甲的室內(nèi)生物活性抑制效果，從而科學(xué)地指導(dǎo)實(shí)際生產(chǎn)中烯蟲(chóng)酯的合適添加比例。2.3.1烯蟲(chóng)酯生物活性研究背景近年了開(kāi)展了較多的烯蟲(chóng)酯對(duì)害蟲(chóng)的生物活性研究，穆小麗，任建新等發(fā)表了《烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲的生物活性影響》；劉大鵬，張育富等發(fā)表了《烯蟲(chóng)酯對(duì)淡色庫(kù)蚊幼蟲(chóng)劑量效應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究》；何洋，嚴(yán)曉平等發(fā)表了《烯蟲(chóng)酯防治儲(chǔ)糧害蟲(chóng)藥效和毒理試驗(yàn)研究》；臧云，劉英杰等發(fā)表了《烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲和煙草粉螟的生物活性》等。以上研究報(bào)告表明，（2E4E7S/R）烯蟲(chóng)酯和（2E4E7S）烯蟲(chóng)酯對(duì)于倉(cāng)儲(chǔ)害蟲(chóng)具備較強(qiáng)的活性抑制作用，且劑量效益相對(duì)一致。2.3.2烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲的生物活性研究試驗(yàn)試劑：烯蟲(chóng)酯（2E4E7S/R），自制樣品-湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司自主合成；標(biāo)準(zhǔn)品-上海百舜生物科技有限公司。煙草甲（Lasiodemaserricorne(Fabricius)）由國(guó)家糧食局科學(xué)研究院培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為30±1℃，相對(duì)濕度為75%±5%，飼料為全麥粉（含5%酵母）。實(shí)驗(yàn)方法（1）烯蟲(chóng)酯抑制煙草甲蟲(chóng)卵孵化試驗(yàn)參照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則，殺蟲(chóng)劑第5部分：殺卵活性試驗(yàn)，浸漬法。將自制烯蟲(chóng)酯樣品和烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)樣品分別用無(wú)水乙醇溶解，配置成1000mg/kg的母液，再用含有0.1%的吐溫80水溶液稀釋，按照等比的方法分別設(shè)置5-7個(gè)質(zhì)量濃度。質(zhì)量濃度分別見(jiàn)表3-1。將培養(yǎng)的煙草甲成蟲(chóng)取出，放入適宜的環(huán)境中產(chǎn)卵。每天收集初產(chǎn)卵一次，將（20mm×20mm）載玻片，以雙面膠粘貼初產(chǎn)的煙草甲卵，制成卵卡，每卡卵量20粒（如圖3-1a,b,所示）。a,卵卡b,卵卡放大后的情況c,卵卡中卵的孵化情況圖3-1浸卵法測(cè)試藥劑對(duì)于煙草甲蟲(chóng)卵孵化的影響Figure3-1:Theeffectofsoakingeggmethodonthehatchingoftobaccobeetleeggs將卵卡浸入上述藥液10秒后，轉(zhuǎn)移至溫度30±1℃，相對(duì)濕度75%±5%的條件下培養(yǎng)，每個(gè)樣品做3個(gè)平行，測(cè)試其重復(fù)性，并以僅添加0.1%吐溫80水溶液作為對(duì)照樣。以對(duì)照卵完成孵化為基準(zhǔn)，分別記載各處理樣品的孵化卵數(shù)和未孵化卵數(shù)（如圖3-1c,所示），計(jì)算死亡率。（2）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的影響參照中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，農(nóng)藥室內(nèi)生物測(cè)定試驗(yàn)準(zhǔn)則，殺蟲(chóng)劑第14部分：浸葉法[58]。將上述(1)中得到的煙草甲蟲(chóng)蟲(chóng)卵正常培養(yǎng)，讓卵孵化為幼蟲(chóng)。取出經(jīng)過(guò)消毒處理的煙葉片，用孔徑1.3cm的打孔器，制作成葉碟（如圖3-2a,所示）。將制作好的煙葉葉碟，浸于待測(cè)藥劑溶液中10秒，取出晾干，分別置于24孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)板蓋中加濾紙保濕，每個(gè)處理重復(fù)3板。用小毛筆將煙草甲初孵幼蟲(chóng)，分別接入已經(jīng)放入浸藥葉片的24孔培養(yǎng)板中，每孔1頭（如圖3-2b,所示）。將處理的試蟲(chóng)置于溫度30±1℃，相對(duì)濕度75%±5%的條件下培養(yǎng)和觀察。試蟲(chóng)培養(yǎng)一周后，每隔一日調(diào)查試蟲(chóng)發(fā)育情況，至死亡或完成生活史（如圖3-2c,所示）。計(jì)算試蟲(chóng)的化蛹率和羽化率等指標(biāo)。a,煙片浸藥后放入培養(yǎng)皿b,幼蟲(chóng)放入培養(yǎng)皿26d后c，幼蟲(chóng)放入培養(yǎng)皿32d后圖3-2浸葉法測(cè)試藥劑對(duì)于煙草甲幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的影響Figure3-2:Theeffectofleafsoakingmethodonthegrowthanddevelopmentoftobaccobeetlelarvae（3）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲成蟲(chóng)繁殖能力的影響在上述方法以上(2)的基礎(chǔ)上，將取食了濃度為5mg/kg浸藥葉片的煙草甲蟲(chóng)蛹取出，分出雌雄分別培養(yǎng)。煙草甲羽化后，放入100mL燒杯中，并在其中放入煙葉片段收集卵塊，置于溫度28±1℃，相對(duì)濕度70%±5%的條件下培養(yǎng)和觀察（如圖3-3所示），10天后將煙葉取出并計(jì)數(shù)煙葉上所有卵粒，將卵粒進(jìn)行培養(yǎng)，觀察卵孵化情況，計(jì)算單雌產(chǎn)卵量及卵孵化率（％）。圖3-3測(cè)試藥劑對(duì)于煙草甲成蟲(chóng)繁殖能力的影響Figure3-3:Theeffectoftestingagentsonthereproductiveabilityofadulttobaccobeetles（4）數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法運(yùn)用SAS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)分析，同一藥劑不同濃度或同一濃度不同藥劑對(duì)煙草甲卵的孵化抑制率、幼蟲(chóng)的死亡率、發(fā)育歷期、化蛹率等指標(biāo)之間采用PROCANOVA進(jìn)行方差分析，差異顯著性測(cè)驗(yàn)采用鄧肯新復(fù)極差法。毒力回歸曲線采用PROCPROBIT計(jì)算，求出LC50和LC95及其置信限。試驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析（1）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲蟲(chóng)卵孵化的影響將供試藥劑按(1)的方法對(duì)煙草甲蟲(chóng)卵的測(cè)試活性結(jié)果列于表3-1中，抑卵毒力回歸曲線LC50和LC95的比較見(jiàn)表3-2。結(jié)果表明：自制樣品在低濃度下對(duì)煙草甲卵的毒力較烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品低；但在較高濃度情況下，自制樣品對(duì)煙草甲卵的毒力較烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品高。與未加殺蟲(chóng)劑的對(duì)照樣相比，兩個(gè)樣品對(duì)煙草甲蟲(chóng)卵均具有抑制殺滅效果，自制樣品與烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品在相同濃度下對(duì)煙草甲蟲(chóng)卵的抑制孵化效果相當(dāng)，當(dāng)濃度為5ppm時(shí)煙草甲卵死亡率均高于80％，表明兩個(gè)樣品對(duì)煙草甲蟲(chóng)卵的孵化具有明顯的殺滅效果。表3-1藥劑對(duì)煙草甲蟲(chóng)卵的抑制效果Table3-1Inhibitioneffectofpesticidesontobaccobeetleeggs藥劑濃度（ppm）校正死亡率（%±SE）標(biāo)準(zhǔn)品自制樣品CK5.1±0.15.0±1.20.531.5±2.47.9±2.4146.3±3.111.4±3.82.582.4±3.660.5±3.1587.4±5.382.5±1.45091.2±2.7100.0±0.0100100.0±0.0100.0±0.0表3-2藥劑抑制煙草甲蟲(chóng)卵的LC50與LC95的比較Table3-2ComparisonofLC50andLC95fortheinhibitionoftobaccobeetleeggsbypesticides藥劑名稱（烯蟲(chóng)酯）毒力回歸方程（y=）LC50(95%置信區(qū)間)LC95(95%置信區(qū)間)標(biāo)準(zhǔn)品0.1201+0.0926X0.7770(0.0327-2.1314)24.5738(6.5782-23473.9314)自制樣品-0.6933+2.3523X1.9712(1.5113-2.6322)9.8628(6.1611-22.9890)（2）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲幼蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的影響試驗(yàn)結(jié)果（表3-3和表3-4）表明：與對(duì)照相比，自制樣品和烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品可顯著延長(zhǎng)煙草甲幼蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育歷期，用自制樣品和烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品處理過(guò)的煙草甲幼蟲(chóng)的化蛹時(shí)間增長(zhǎng)14d；當(dāng)煙草甲幼蟲(chóng)取食高于或等于5ppm藥量處理的煙葉片，煙草甲幼蟲(chóng)化蛹的數(shù)量顯著低于對(duì)照，經(jīng)56d發(fā)育，對(duì)照已全部完成羽化，取食5ppm藥量處理的煙葉片的幼蟲(chóng)有很少量的羽化，而取食50ppm藥量處理的煙葉片的幼蟲(chóng)，未有成蟲(chóng)出現(xiàn)。表3-3藥劑對(duì)煙草甲化蛹的影響Table3-3EffectsofChemicalsonTobaccobeetlepupae試劑種類試劑濃度(ppm)化蛹率(%)±SE35d42d49d56dCK/76.4±6.180.6±7.7//標(biāo)準(zhǔn)品0.0560.4±10.472.9±6.3//0.522.9±2.143.8±2.150.0±8.347.9±6.356.3±2.116.7±4.227.1±6.335.4±6.3500.0±0.02.1±2.110.4±6.312.5±12.5自制樣品0.0573.6±2.877.8±1.4//0.576.4±6.984.7±5.0//534.7±8.568.1±6.179.2±2.481.9±3.7500.0±0.01.4±1.433.3±0.055.6±7.7備注：/表示化蛹已完成。從表3-4中可以看出，自制樣品和烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品的濃度對(duì)煙草甲幼蟲(chóng)的發(fā)育的影響效果一致，當(dāng)濃度低于0.5ppm時(shí)，對(duì)煙草甲幼蟲(chóng)的化蛹及羽化抑制效果不明顯；但當(dāng)高于0.5ppm時(shí)，對(duì)煙草甲幼蟲(chóng)的化蛹及羽化表現(xiàn)出顯著的抑制效果。根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，如果在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)用烯蟲(chóng)酯，5ppm是較為合適的濃度。表3-4藥劑對(duì)煙草甲羽化的影響Table3-4Effectsofpesticidesontheemergenceoftobaccobeetles試劑種類試劑濃度(ppm)羽化率(%)35d42d49d56dCK/0.0±0.044.4±6.170.83±9.62/標(biāo)準(zhǔn)品0.050.0±0.029.2±12.570.8±8.372.9±±0.014.6±2.125.0±4.241.7±0.050.0±0.00.0±0.02.1±2.12.1±2.1500.0±0.00.0±0.00.0±0.00.0±0.0自制樣品0.050.0±0.044.4±6.977.8±1.4/0.50.0±0.029.2±7.272.2±9.776.4±8.550.0±0.00.0±0.00.0±0.01.4±1.4500.0±0.00.0±0.00.0±0.00.0±0.0（3）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲成蟲(chóng)繁殖能力的影響按(3)的方法觀察供試藥劑對(duì)煙草甲繁殖力的影響，見(jiàn)表3-5。與對(duì)照相比，自制樣品和烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品處理過(guò)的成蟲(chóng)，產(chǎn)卵量、卵孵化率等均明顯低于對(duì)照樣品；與烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品相比，自制樣品處理過(guò)的煙草甲成蟲(chóng)的產(chǎn)卵量、卵孵化率較烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品高，但兩者相差不大。說(shuō)明烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲成蟲(chóng)產(chǎn)卵具有明顯的抑制效果，并可進(jìn)一步抑制蟲(chóng)卵的孵化率。表3-5藥劑對(duì)煙草甲成蟲(chóng)繁殖能力的影響Table3-5Effectsofpesticidesonthereproductiveabilityoftobaccobeetleadults試劑種類試蟲(chóng)數(shù)量(對(duì))產(chǎn)卵總量(粒)單雌產(chǎn)卵量(粒)孵化率(%)CK15117078.0087.95標(biāo)準(zhǔn)品1558539.0040.20自制樣品1566044.0044.702.3.3烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草蚡螟的生物活性研究試驗(yàn)試劑：烯蟲(chóng)酯（2E4E7S/R），自制樣品-湖南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司合成；標(biāo)準(zhǔn)品-上海百舜生物科技有限公司。煙草粉螟（EphestiaelutellaHubner）：長(zhǎng)沙市卷煙廠煙草倉(cāng)庫(kù)采集，并在室內(nèi)培養(yǎng)繁殖一代后供生測(cè)試驗(yàn)用。室內(nèi)條件：溫度25±5℃，相對(duì)濕度75±5%及自然光照。試驗(yàn)方法（1）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟幼蟲(chóng)的急性毒性測(cè)定方法稱取適量供試藥劑，用丙酮溶解配制成一定濃度的母液，并用丙酮稀釋成系列濃度待用，設(shè)丙酮為對(duì)照。選取干凈完整的煙葉，剪成大小基本一致的片段，將葉片在供試藥液中浸漬10s，取出自然晾干后，置于100mL燒杯中，再接入煙草粉螟3齡幼蟲(chóng)10頭，每濃度設(shè)3次重復(fù)。處理完畢，用黑布將杯口蓋住，置于溫度25±5℃、相對(duì)濕度75±5%及自然光照射的觀察室內(nèi)培養(yǎng)。分別于7d和5d后檢查記載煙草粉螟幼蟲(chóng)死亡情況，計(jì)算死亡率，并根據(jù)機(jī)率值分析法求出回歸方程式、相關(guān)系數(shù)（r）及致死中濃度（LC50）。（2）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟卵的活性測(cè)定方法稱取適量供試藥劑，用丙酮溶解配制成一定濃度的母液，并用丙酮稀釋成系列濃度待用，設(shè)丙酮為對(duì)照。選取同時(shí)放入產(chǎn)卵的煙草葉片，記下葉片上卵數(shù)，然后將葉片放入供試藥劑的丙酮液中浸漬10秒，取出晾干，置于100ml燒杯中，每濃度3次重復(fù)。處理完畢，用黑布將杯口蓋住，置于溫度25±5℃、相對(duì)濕度75±5%及自然光照射的觀察室內(nèi)培養(yǎng)。觀察卵孵化情況直至對(duì)照卵全部孵化后1d為止，記錄下卵孵化情況，計(jì)算卵孵化抑制率，并根據(jù)機(jī)率值分析法求出回歸方程式、相關(guān)系數(shù)（r）及孵化抑制中濃度（EC50）。（3）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟生長(zhǎng)發(fā)育的影響研究方法稱取適量供試藥劑，用丙酮溶解配制成一定濃度的供試藥液待用，設(shè)丙酮為對(duì)照。采用10mg/L的濃度處理煙草粉螟試蟲(chóng)。將剪好的煙草葉片放入供試藥劑的丙酮液中浸漬10s，然后取出晾干后，置于100mL燒杯中，再接入煙草粉螟3齡幼蟲(chóng)10頭，4次重復(fù)。處理完畢，用黑布將杯口蓋住，置于溫度25±5℃，相對(duì)濕度75±5%及自然光照射的觀察室內(nèi)進(jìn)行連續(xù)培養(yǎng)，定期觀察試蟲(chóng)的生長(zhǎng)發(fā)育情況。（4）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟繁殖力的影響研究方法在(3)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，將蛹取出，分出雌雄分別培養(yǎng)。煙草粉螟成蟲(chóng)羽化后，于產(chǎn)卵箱內(nèi)進(jìn)行單對(duì)培養(yǎng)，3d后在箱中放入成束捆扎的煙葉片段收集卵塊。每天定時(shí)取出和更換產(chǎn)卵煙葉，直至成蟲(chóng)死亡為止，計(jì)數(shù)所有煙葉上的卵粒數(shù)，并將卵粒進(jìn)行培養(yǎng)，觀察卵孵化情況，計(jì)算每雌產(chǎn)卵量及卵孵化率（％）。（5）統(tǒng)計(jì)方法所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用SAS6.12數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。試驗(yàn)結(jié)果與數(shù)據(jù)分析（1）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟幼蟲(chóng)的毒力測(cè)定結(jié)果將供試藥劑按(1)的方法對(duì)煙草粉螟幼蟲(chóng)進(jìn)行毒力測(cè)定，得結(jié)果見(jiàn)表3-6。表中結(jié)果表明自制樣品對(duì)煙草粉螟的LC50值為12.76mg/L，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)試蟲(chóng)的LC50值是10.34mg/L，自制樣品的毒力稍低于標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)煙草粉螟幼蟲(chóng)的毒力。表3-6烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟幼蟲(chóng)的毒力測(cè)定結(jié)果Table3-6Toxicitytestresultsofmethopreneontobaccostemborerlarvae供試藥劑回歸方程式（Y=a+bx）相關(guān)系數(shù)（r）LC50（95％CL）(mg/L)備注自制樣品Y=2.1939+2.5372x0.999112.76（11.77～13.83）7d標(biāo)準(zhǔn)品Y=2.6325+2.3332x0.992710.34（8.31～12.86）（2）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟卵的活性測(cè)定結(jié)果自制樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)煙草粉螟卵的殺滅活性結(jié)果列于表3-7。由表可見(jiàn)，兩種藥劑對(duì)煙草粉螟卵的EC50值分別為18.61及17.51mg/L。兩種藥劑對(duì)靶標(biāo)卵的殺滅活性沒(méi)有明顯的差異。表3-7烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟殺卵活性測(cè)定結(jié)果Table3-7Resultsofthedeterminationoftheeggkillingactivityofmethopreneagainsttobaccostemborer供試藥劑回歸方程（Y=a+bx）相關(guān)系數(shù)（r）EC50（95％CL）(mg/L)RT(毒效比)自制樣品Y=2.8648+1.6817x0.957018.61（9.75～35.51）0.94標(biāo)準(zhǔn)品Y=3.1787+1.468x0.999817.51（16.79～18.26）1.00（3）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟生長(zhǎng)發(fā)育的影響將烯蟲(chóng)酯自制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品分別按(3)的方法對(duì)煙草粉螟進(jìn)行處理后，藥劑對(duì)試蟲(chóng)生長(zhǎng)發(fā)育的影響見(jiàn)表3-8。結(jié)果表明，自制樣品和標(biāo)準(zhǔn)品處理煙草粉螟后平均存活率分別為72.50％和67.50％，兩種藥劑對(duì)靶標(biāo)的殺滅活性沒(méi)有明顯差異，但與對(duì)照差異非常顯著；自制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品處理煙草粉螟后，幼蟲(chóng)歷期分別為40.75d和39.50d，沒(méi)有顯著差異，兩者處理后的歷期均與對(duì)照歷期有顯著差異；自制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品處理煙草粉螟后，其化蛹率分別為79.46％和74.11％，差異不顯著；自制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品處理煙草粉螟后，成蟲(chóng)羽化率分別為68.69％和69.17％，兩種藥劑處理的成蟲(chóng)羽化率均與對(duì)照差異顯著。表3-8烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟生長(zhǎng)發(fā)育的影響Table3-8Effectsofmethopreneonthegrowthanddevelopmentoftobaccoborer供試藥劑供試蟲(chóng)數(shù)/頭存活率/%幼蟲(chóng)歷期/d化蛹率/%羽化率/%自制樣品4072.50±2.50Bb40.75±0.63Aa79.47±6.90Bb68.69±2.79Bb標(biāo)準(zhǔn)品4067.50±4.79Bb39.50±0.65Aa74.11±3.52Bb69.17±7.12BbCK2095.00±0.50Aa33.25±0.48Bb100±0Aa100±0Aa注：用Duncan’s新復(fù)極差測(cè)驗(yàn)，同行數(shù)字后相同字母者表示在0.05和0.01水平上差異不顯著。下表同（4）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟繁殖力的影響自制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)煙草粉螟繁殖力的影響見(jiàn)表3-9，結(jié)果顯示，自制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品處理煙草粉螟后，成蟲(chóng)每雌產(chǎn)卵量分別為50.50粒和42.25粒，差異較顯著，二者與對(duì)照的差異極為顯著；自制樣品及標(biāo)準(zhǔn)品處理煙草粉螟后，其成蟲(chóng)卵孵化率分別為58.81％和64.63％，無(wú)顯著差異，但二者與對(duì)照卵的孵化率差異極為顯著。表3-9烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草粉螟繁殖力的影響Table3-9EffectsofmethopreneontheReproductiveCapacityofTobaccoBorer供試藥劑供試蟲(chóng)數(shù)（對(duì)）產(chǎn)卵量（粒）平均產(chǎn)卵量/雌（粒）卵孵化數(shù)（粒）孵化率（%）自制樣品630350.50±0.76Bb29.67±1.1258.81±2.43Bb標(biāo)準(zhǔn)品416942.25±1.65Cc27.00±1.1264.63±6.18BbCK13113587.31±1.11Aa76.38±1.1687.53±1.09Aa2.3.4S-烯蟲(chóng)酯與S/R-烯蟲(chóng)酯的生物活性對(duì)比試驗(yàn)試劑：烯蟲(chóng)酯（2E4E7S/R），廣西昊旺生物科技有限公司；烯蟲(chóng)酯（2E4E7S），常州勝杰生命科技股份有限公司。（1）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草螟1齡幼蟲(chóng)致死效果采用S-烯蟲(chóng)酯或S/R-烯蟲(chóng)酯持續(xù)處理煙草螟1齡幼蟲(chóng)，在藥劑濃度2.5mg/kg~80mg/kg范圍內(nèi)，均能在15天內(nèi)殺蟲(chóng)全部幼蟲(chóng)，死亡蟲(chóng)態(tài)為幼蟲(chóng)，如圖3-4和圖3-5所示。當(dāng)烯蟲(chóng)酯處理煙草螟1齡幼蟲(chóng)3天后，在2.5mg/kg藥劑濃度下，煙草螟幼蟲(chóng)死亡率即可達(dá)到50%以上。（2）烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲1齡幼蟲(chóng)致死效果采用S/R-烯蟲(chóng)酯持續(xù)處理煙草甲1齡幼蟲(chóng)，在藥劑濃度2.5mg/kg~80mg/kg范圍內(nèi)，在5mg/kg或40mg/kg殺滅全部幼蟲(chóng)，死亡蟲(chóng)態(tài)為幼蟲(chóng)，其他較低藥劑濃度下有2.4-7.3%幼蟲(chóng)存活并發(fā)育至成蟲(chóng)，如圖3-6所示。采用S-烯蟲(chóng)酯持續(xù)處理煙草甲1齡幼蟲(chóng)，在藥劑濃度2.5mg/kg~80mg/kg范圍內(nèi)，當(dāng)藥劑濃度大于等于10mg/kg時(shí)，可殺滅全部幼蟲(chóng)，死亡蟲(chóng)態(tài)為幼蟲(chóng)，隨著劑量升高幼蟲(chóng)致死時(shí)間縮短。在2.5mg/kg藥劑濃度下，有12.2%的幼蟲(chóng)存活并發(fā)育至成蟲(chóng)，在5mg/kg藥劑濃度下，有6.1%得幼蟲(chóng)存活并發(fā)育至成蟲(chóng)，如圖3-7所示。2.3.5小結(jié)５mg/kg的烯蟲(chóng)酯處理對(duì)煙草甲和煙草粉螟卵的孵化有顯著的抑制作用，其中，５mg/kg烯蟲(chóng)酯處理后7d，煙草甲和煙草粉螟卵校正死亡率分別接近80％和60％；當(dāng)100mg/kg烯蟲(chóng)酯處理后７d，卵校正死亡率分別接近100%和80%。毒力測(cè)定結(jié)果顯示，烯蟲(chóng)酯對(duì)煙草甲和煙草粉螟卵的毒力較高，其LC50分別為2mg/kg和10mg/kg。幼蟲(chóng)的致死效果隨著濃度的增加而增加，大于５mg/kg的烯蟲(chóng)酯處理后，對(duì)煙草甲和煙草粉螟幼蟲(chóng)有顯著抑制作用，化蛹率顯著降低（有報(bào)道稱[55]，濃度為10mg/kg時(shí)，煙草甲和煙草蚡螟化蛹率為9.6%和3.6%），羽化率趨為零。S-烯蟲(chóng)酯的生物活性優(yōu)于S/R-烯蟲(chóng)酯。烯蟲(chóng)酯屬保幼激素類似物，能干擾昆蟲(chóng)正常的生長(zhǎng)發(fā)育，抑制成蟲(chóng)化蛹、羽化及產(chǎn)卵，且對(duì)卵的孵化也有一定的影響，在煙葉倉(cāng)儲(chǔ)中具有推廣應(yīng)用價(jià)值，綜合各項(xiàng)生物活性實(shí)測(cè)數(shù)據(jù)和實(shí)際操作過(guò)程損失等情況，本項(xiàng)目推薦采用10mg/kg~15mg/kg的烯蟲(chóng)酯實(shí)倉(cāng)添加濃度。

2.4烯蟲(chóng)酯的檢測(cè)方法研究根據(jù)本文2.3的研究結(jié)論，烯蟲(chóng)酯或S-烯蟲(chóng)酯都存在較好的生物活性，本標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目據(jù)此對(duì)2E4E（7S/R）烯蟲(chóng)酯和2E4E（7S）烯蟲(chóng)酯都推薦貯煙蟲(chóng)害生物防治使用，未特定僅推薦S烯蟲(chóng)酯，因此本項(xiàng)目烯蟲(chóng)酯檢測(cè)方法包括了2E4E（7S/R）烯蟲(chóng)酯和2E4E（7S）烯蟲(chóng)酯的定性和定量方法。我們主要依據(jù)SN/T0693-2019《出口植物源性食品中烯蟲(chóng)酯殘留量的測(cè)定》，參考了該標(biāo)準(zhǔn)第一法和第二法的做法，分別建立液相色譜法和氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用兩種方法。其中液相色譜法被CIPAC采納，CIPAC/5359/mS-Methoprene(June,2023)注腳說(shuō)明：CIPACprovisionalmethod2023.BasedonamethodsuppliedbySynergeticaChangzhouLtd.ChinaandTobaccoHunanIndustrialCo.,Ltd.TechnologyCenter,China.2.4.1定量檢測(cè)方法GC/MS法片煙樣品經(jīng)無(wú)水乙醇提取，烯蟲(chóng)酯產(chǎn)品和烯蟲(chóng)酯藥液樣品經(jīng)無(wú)水乙醇稀釋后，用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀檢測(cè)樣品中的烯蟲(chóng)酯含量，內(nèi)標(biāo)法定量。試劑（1）試劑無(wú)水乙醇（色譜純）烯蟲(chóng)酯標(biāo)樣（純度＞99%）正十七烷（純度＞99%）（2）標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取烯蟲(chóng)酯標(biāo)準(zhǔn)品（精確至0.1mg），用無(wú)水乙醇配制成5mg/mL儲(chǔ)備液。于4℃冰箱中避光保存。標(biāo)準(zhǔn)系列溶液：根據(jù)需要配制合適濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液待用。推薦如下配制方法：分別移取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液400μL、200μL、100μL、40μL、20μL、0μL于100mL容量瓶中，各加入2.5mL內(nèi)標(biāo)工作溶液，用無(wú)水乙醇定容。配制的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為：每毫升標(biāo)準(zhǔn)溶液含有烯蟲(chóng)酯分別為20ug、10ug、5ug、2ug、1ug、0ug。（3）內(nèi)標(biāo)工作溶液取正十七烷50uL，定容至100mL容量瓶，得到約400ug/mL溶液。材料與儀器氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（GC-MS），具有選擇離子檢測(cè)（SIM）功能。超聲波提取儀錐形瓶，具磨口塞，規(guī)格為50mL。分析天平：感量0.1mg。0.45μm有機(jī)濾膜。分析步驟（1）樣品制備：按照