外周血SBEM與hMAM表達(dá)：解鎖乳腺癌微轉(zhuǎn)移奧秘的新鑰匙一、引言1.1研究背景與意義乳腺癌作為嚴(yán)重威脅女性健康的常見惡性腫瘤，近年來在全球范圍內(nèi)的發(fā)病率呈顯著上升趨勢。在中國，其發(fā)病率已躍居女性惡性腫瘤之首，且增長態(tài)勢令人擔(dān)憂。根據(jù)國家癌癥中心發(fā)布的數(shù)據(jù)，2014年中國女性乳腺癌發(fā)病率高達(dá)21.62/10萬，死亡率為4.75/10萬，這一數(shù)據(jù)凸顯了乳腺癌對女性生命健康的巨大威脅。乳腺癌的發(fā)生發(fā)展是一個復(fù)雜的過程，目前普遍認(rèn)為，乳腺癌在早期階段就可能已經(jīng)發(fā)生微小轉(zhuǎn)移，這些微轉(zhuǎn)移病灶是乳腺癌復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的重要根源，對患者的預(yù)后產(chǎn)生了極為不利的影響。微轉(zhuǎn)移通常是指在機(jī)體的血液系統(tǒng)、淋巴系統(tǒng)、骨骼系統(tǒng)以及其他組織器官中存在的微小轉(zhuǎn)移灶，這些轉(zhuǎn)移灶由于體積微小，用常規(guī)的病理學(xué)、影像學(xué)等方法難以檢測到。然而，微轉(zhuǎn)移的存在卻與乳腺癌患者的預(yù)后密切相關(guān)。研究表明，有微轉(zhuǎn)移的乳腺癌病例復(fù)發(fā)率顯著高于無微轉(zhuǎn)移病例。這是因為微轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞具有更強(qiáng)的侵襲和轉(zhuǎn)移能力，它們能夠逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，在遠(yuǎn)處組織器官中定植并生長，從而導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。因此，對于已經(jīng)發(fā)生微轉(zhuǎn)移的患者，早期診斷和治療顯得尤為重要，這直接關(guān)系到患者的生存率和生活質(zhì)量的提高。檢測乳腺癌微轉(zhuǎn)移對于制定精準(zhǔn)的治療方案具有關(guān)鍵意義。傳統(tǒng)的治療方法往往是基于腫瘤的大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等臨床病理參數(shù)來制定的，但這些參數(shù)并不能完全準(zhǔn)確地反映腫瘤的生物學(xué)行為和患者的預(yù)后。通過檢測微轉(zhuǎn)移，可以更全面地了解腫瘤的轉(zhuǎn)移情況，從而為醫(yī)生提供更準(zhǔn)確的信息，以便制定個性化的治療方案。對于檢測到微轉(zhuǎn)移的患者，可能需要采取更積極的治療措施，如化療、放療、靶向治療等，以降低復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險；而對于無微轉(zhuǎn)移的患者，則可以適當(dāng)減少治療強(qiáng)度，避免過度治療帶來的不良反應(yīng)，提高患者的生活質(zhì)量。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的飛速發(fā)展，為乳腺癌微轉(zhuǎn)移的檢測提供了新的手段和思路。外周血中的一些標(biāo)志物，如人乳珠蛋白（humanmammaglobin，hMAM-mRNA）和乳腺上皮小粘蛋白（smallbreastepithelialmucin，SBEM-mRNA），被發(fā)現(xiàn)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。hMAM是一種特異性表達(dá)于乳腺上皮細(xì)胞的蛋白質(zhì)，在乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)，而在正常組織和其他惡性腫瘤組織中幾乎不表達(dá)。SBEM是一種乳腺上皮特異性的小粘蛋白，同樣在乳腺癌細(xì)胞中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。通過檢測外周血中hMAM-mRNA和SBEM-mRNA的表達(dá)情況，可以有效地判斷患者是否存在乳腺癌微轉(zhuǎn)移，為乳腺癌的早期診斷和治療提供重要的依據(jù)。本研究旨在深入探究外周血SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，通過檢測乳腺癌患者外周血中這兩種標(biāo)志物的表達(dá)水平，分析其與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，為乳腺癌的早期診斷、預(yù)后評估以及精準(zhǔn)治療提供更準(zhǔn)確、可靠的理論支持和實踐指導(dǎo)。希望通過本研究，能夠提高對乳腺癌微轉(zhuǎn)移的認(rèn)識和檢測水平，為改善乳腺癌患者的預(yù)后做出貢獻(xiàn)。1.2研究目的與創(chuàng)新點本研究旨在深入探究外周血中乳腺上皮小粘蛋白（SBEM-mRNA）和人乳珠蛋白（hMAM-mRNA）的表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移之間的內(nèi)在關(guān)聯(lián)，為乳腺癌的早期精準(zhǔn)診斷、預(yù)后評估以及個性化治療提供堅實的理論依據(jù)和有效的實踐指導(dǎo)。通過檢測乳腺癌患者外周血中SBEM-mRNA和hMAM-mRNA的表達(dá)水平，結(jié)合患者的臨床病理特征，系統(tǒng)分析這兩種標(biāo)志物與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，從而明確其在乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測中的價值和意義。本研究在檢測技術(shù)和標(biāo)志物應(yīng)用方面具有一定創(chuàng)新之處。在檢測技術(shù)上，采用巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Nested-RT-PCR）技術(shù)，該技術(shù)以第一次逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的產(chǎn)物為模板，用第二對引物進(jìn)行第二次擴(kuò)增。相較于傳統(tǒng)的RT-PCR技術(shù)，Nested-RT-PCR技術(shù)能夠從極微量的起始材料中擴(kuò)增出目的片段，具有更高的靈敏度，可檢測到低豐度的mRNA表達(dá)，大大提高了對乳腺癌微轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志物的檢測能力，為早期發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移提供了更有力的技術(shù)支持。在標(biāo)志物應(yīng)用方面，同時選取SBEM-mRNA和hMAM-mRNA作為研究對象，目前大多數(shù)研究僅關(guān)注單一標(biāo)志物與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系，而本研究綜合分析兩種標(biāo)志物，有望更全面、準(zhǔn)確地反映乳腺癌微轉(zhuǎn)移的情況，為乳腺癌微轉(zhuǎn)移的檢測提供新的思路和方法，提升乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測的準(zhǔn)確性和可靠性。1.3國內(nèi)外研究現(xiàn)狀在乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測領(lǐng)域，國內(nèi)外學(xué)者圍繞外周血標(biāo)志物展開了廣泛研究，其中SBEM和hMAM備受關(guān)注。國外方面，一些研究較早涉足hMAM與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系探索。有研究運(yùn)用先進(jìn)的分子檢測技術(shù)，對大量乳腺癌患者外周血樣本進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)hMAM-mRNA在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)水平顯著高于健康人群，且其表達(dá)陽性率與腫瘤的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等臨床病理參數(shù)密切相關(guān)。在一項針對早期乳腺癌患者的前瞻性研究中，追蹤觀察發(fā)現(xiàn)外周血hMAM-mRNA陽性表達(dá)的患者，在后續(xù)隨訪中出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)的概率明顯高于陰性表達(dá)者，有力地證實了hMAM-mRNA可作為預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移及預(yù)后的重要標(biāo)志物。關(guān)于SBEM的研究，國外學(xué)者也取得了一定成果。通過深入的細(xì)胞實驗和臨床樣本檢測，揭示了SBEM在乳腺癌細(xì)胞中的特異性高表達(dá)機(jī)制，以及其在乳腺癌侵襲和轉(zhuǎn)移過程中所扮演的關(guān)鍵角色。有研究利用基因編輯技術(shù)敲低乳腺癌細(xì)胞中的SBEM基因表達(dá)，發(fā)現(xiàn)癌細(xì)胞的遷移和侵襲能力顯著下降，從分子生物學(xué)層面闡明了SBEM與乳腺癌轉(zhuǎn)移的內(nèi)在聯(lián)系。在臨床應(yīng)用方面，部分研究嘗試將SBEM-mRNA作為檢測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的指標(biāo)，雖樣本量相對有限，但初步結(jié)果顯示其在乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測中具有一定的潛力。國內(nèi)在該領(lǐng)域的研究同樣取得了諸多進(jìn)展。眾多學(xué)者運(yùn)用不同的檢測方法，如巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（Nested-RT-PCR）、實時熒光定量PCR等，對乳腺癌患者外周血中SBEM-mRNA和hMAM-mRNA的表達(dá)進(jìn)行了系統(tǒng)檢測。相關(guān)研究表明，hMAM-mRNA和SBEM-mRNA在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)陽性率顯著高于乳腺良性疾病患者和健康對照人群。有研究納入了大量不同分期的乳腺癌患者，通過多因素分析發(fā)現(xiàn)，外周血hMAM-mRNA和SBEM-mRNA的表達(dá)不僅與乳腺癌的TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，還與患者的年齡、腫瘤大小等因素存在一定關(guān)聯(lián)，為乳腺癌微轉(zhuǎn)移的綜合評估提供了更全面的視角。然而，現(xiàn)有研究仍存在一些不足與空白。一方面，雖然大部分研究分別對hMAM和SBEM與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系進(jìn)行了探討，但將兩者聯(lián)合起來進(jìn)行綜合分析的研究相對較少。單一標(biāo)志物檢測可能存在局限性，無法全面反映乳腺癌微轉(zhuǎn)移的復(fù)雜生物學(xué)過程，聯(lián)合檢測有望提高檢測的準(zhǔn)確性和可靠性，但目前這方面的研究尚不夠深入和系統(tǒng)。另一方面，在檢測技術(shù)上，盡管各種分子生物學(xué)技術(shù)已廣泛應(yīng)用，但仍存在檢測靈敏度和特異性有待進(jìn)一步提高的問題。不同檢測方法的標(biāo)準(zhǔn)化和規(guī)范化程度參差不齊，導(dǎo)致研究結(jié)果之間的可比性受到一定影響。此外，對于SBEM和hMAM在乳腺癌微轉(zhuǎn)移發(fā)生發(fā)展過程中的具體分子機(jī)制，目前的認(rèn)識還不夠深入，仍需要更多的基礎(chǔ)研究來揭示其內(nèi)在的信號通路和調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。本研究正是基于這些現(xiàn)狀，旨在通過聯(lián)合檢測外周血SBEM、hMAM表達(dá)，深入探究其與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系，填補(bǔ)現(xiàn)有研究的部分空白，為乳腺癌的早期診斷和治療提供更有力的支持。二、相關(guān)理論基礎(chǔ)2.1乳腺癌概述乳腺癌是發(fā)生在乳腺上皮組織的惡性腫瘤，是女性最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重威脅著女性的生命健康。其發(fā)病機(jī)制較為復(fù)雜，是多種因素共同作用的結(jié)果。遺傳因素在乳腺癌的發(fā)生中起著重要作用，約5%-10%的乳腺癌患者具有明確的遺傳傾向，其中BRCA1和BRCA2基因突變是最為常見的遺傳性乳腺癌相關(guān)基因突變，攜帶這些突變基因的女性，其一生中患乳腺癌的風(fēng)險可高達(dá)40%-80%。激素水平的失衡也是乳腺癌發(fā)生的重要危險因素，雌激素、孕激素等激素與乳腺細(xì)胞表面的受體結(jié)合后，可刺激乳腺細(xì)胞的增殖和分化，長期的激素刺激可能導(dǎo)致乳腺細(xì)胞發(fā)生惡變。此外，生活方式因素如長期高脂肪、高熱量飲食，缺乏運(yùn)動，肥胖，長期大量飲酒，以及長期精神壓力過大、熬夜等不良生活習(xí)慣，也會增加乳腺癌的發(fā)病風(fēng)險。乳腺癌有多種常見類型，其中浸潤性導(dǎo)管癌最為常見，約占乳腺癌的70%-80%。這類癌癥起源于乳腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞，癌細(xì)胞突破導(dǎo)管基底膜，向周圍組織浸潤生長。浸潤性小葉癌占乳腺癌的5%-15%，其癌細(xì)胞起源于乳腺小葉的腺泡上皮，癌細(xì)胞呈單行串珠狀或細(xì)條索狀浸潤于纖維間質(zhì)之間。導(dǎo)管原位癌屬于非浸潤性癌，是指癌細(xì)胞局限于乳腺導(dǎo)管內(nèi)，未突破基底膜，約占乳腺癌的15%-20%，若能早期發(fā)現(xiàn)并及時治療，預(yù)后通常較好。小葉原位癌同樣為非浸潤性癌，癌細(xì)胞局限于乳腺小葉內(nèi)，未突破基底膜，臨床相對少見，約占乳腺癌的1%-5%。在全球范圍內(nèi)，乳腺癌的發(fā)病率和死亡率呈現(xiàn)出明顯的地區(qū)和人群差異。從地區(qū)分布來看，乳腺癌在發(fā)達(dá)國家的發(fā)病率普遍較高，如北美、北歐地區(qū)，澳大利亞、新西蘭的發(fā)病率位居世界前列，年齡標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)病率（ASIR）可達(dá)100.3/10萬人。這可能與這些地區(qū)女性的生活方式、飲食習(xí)慣以及較高的篩查普及率有關(guān)。在發(fā)展中國家，乳腺癌的發(fā)病率相對較低，但近年來增長速度較快，如中國、印度等國家。中國乳腺癌發(fā)病率城市高于農(nóng)村，沿海地區(qū)高于內(nèi)陸地區(qū)，在北京、上海等大城市，發(fā)病率可達(dá)到10萬分之40左右甚至更高，而在農(nóng)村地區(qū)或內(nèi)陸地區(qū)，發(fā)病率約為10萬分之20-30甚至更低。從人群角度分析，乳腺癌的發(fā)病率隨著年齡的增長而逐漸升高，在50-54歲年齡組達(dá)到高峰，之后略有下降。但近年來，乳腺癌在年輕女性中的發(fā)病率也呈現(xiàn)出上升趨勢，這可能與生育模式變化、環(huán)境因素等有關(guān)。據(jù)國際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）發(fā)布的數(shù)據(jù)，2022年全球女性乳腺癌新發(fā)病例達(dá)230萬例，占女性癌癥新發(fā)病例的25%，死亡病例為67萬例，占女性癌癥死亡的15.5%，預(yù)計到2050年，全球女性乳腺癌新發(fā)病例將增加38%，死亡病例將增加68%，且中低收入國家的增長速度最快。乳腺癌已成為全球女性健康的首要威脅，對其發(fā)病機(jī)制、早期診斷和治療的研究具有重要的現(xiàn)實意義。2.2乳腺癌微轉(zhuǎn)移2.2.1微轉(zhuǎn)移的概念與特點乳腺癌微轉(zhuǎn)移，是指乳腺癌細(xì)胞從原發(fā)腫瘤部位脫離后，通過淋巴系統(tǒng)、血液循環(huán)等途徑擴(kuò)散到身體其他部位，但這些轉(zhuǎn)移病灶極其微小，難以被常規(guī)的病理學(xué)檢查、影像學(xué)檢查手段所檢測到。國際抗癌聯(lián)盟（UICC）在1993年出版的《腫瘤TNM分期補(bǔ)充材料》中明確指出，當(dāng)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移灶生長至直徑1-2mm時，即可稱作微轉(zhuǎn)移。從細(xì)胞層面來看，微轉(zhuǎn)移灶內(nèi)癌細(xì)胞數(shù)量相對較少，在乳腺前哨淋巴結(jié)內(nèi)，一個切面上出現(xiàn)0.2-2mm大小，或超過200個腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移灶可判定為微轉(zhuǎn)移。與之相對的是宏轉(zhuǎn)移，宏轉(zhuǎn)移是指癌細(xì)胞通過淋巴管或血管，進(jìn)入到遠(yuǎn)處器官（如肝臟、骨骼等）形成的較大的轉(zhuǎn)移病灶，在乳腺前哨淋巴結(jié)內(nèi)轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞面積大小大于2mm。微轉(zhuǎn)移具有癌細(xì)胞數(shù)量少、體積小的顯著特點，這使得其檢測難度大幅增加。常規(guī)的影像學(xué)檢查，如X射線、CT、MRI等，對于微小的轉(zhuǎn)移病灶敏感度較低，難以準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)。以PET-CT檢查為例，雖然其對發(fā)現(xiàn)全身腫瘤轉(zhuǎn)移灶具有較高的敏感性，但對于某些非常小的微轉(zhuǎn)移病灶，或者病灶對顯像劑的攝取不明顯時，仍可能出現(xiàn)漏診的情況。病理檢查中，普通的組織切片觀察也很難識別出這些少量且微小的癌細(xì)胞。微轉(zhuǎn)移的癌細(xì)胞還具有很強(qiáng)的隱匿性，它們能夠逃避機(jī)體的免疫監(jiān)視，在遠(yuǎn)處組織器官中潛伏下來。這些癌細(xì)胞在微轉(zhuǎn)移灶中處于相對靜止的狀態(tài)，代謝活動不活躍，不易被免疫系統(tǒng)識別和清除。一旦機(jī)體的免疫功能下降或者微轉(zhuǎn)移灶所處的微環(huán)境發(fā)生改變，這些癌細(xì)胞就可能重新激活，開始增殖和侵襲，導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。臨床研究表明，有微轉(zhuǎn)移的乳腺癌病例復(fù)發(fā)率顯著高于無微轉(zhuǎn)移病例，微轉(zhuǎn)移的存在大大增加了乳腺癌患者復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的風(fēng)險，嚴(yán)重影響患者的預(yù)后。2.2.2微轉(zhuǎn)移的檢測方法免疫組化（IHC）是檢測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的常用方法之一，其原理是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的特性，通過標(biāo)記的抗體來識別組織或細(xì)胞中的目標(biāo)抗原。在乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測中，通常使用針對上皮細(xì)胞標(biāo)志物（如細(xì)胞角蛋白CK19等）的抗體，這些標(biāo)志物在乳腺癌細(xì)胞中高表達(dá)。當(dāng)抗體與組織切片中的抗原結(jié)合后，再通過顯色反應(yīng)使目標(biāo)抗原所在位置呈現(xiàn)出特定的顏色，從而在顯微鏡下觀察到是否存在微轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞。免疫組化的優(yōu)點在于能夠直觀地觀察到癌細(xì)胞在組織中的形態(tài)和分布，具有較高的特異性，可準(zhǔn)確判斷癌細(xì)胞的來源和類型。然而，該方法的靈敏度相對較低，對于癌細(xì)胞數(shù)量極少的微轉(zhuǎn)移灶可能無法檢測到，且檢測結(jié)果易受到抗體質(zhì)量、染色條件等因素的影響。免疫組化主要適用于對淋巴結(jié)等組織樣本的檢測，在乳腺癌前哨淋巴結(jié)活檢中應(yīng)用較為廣泛，通過檢測前哨淋巴結(jié)中是否存在微轉(zhuǎn)移癌細(xì)胞，可幫助醫(yī)生判斷腫瘤的轉(zhuǎn)移情況，進(jìn)而制定治療方案。實時定量PCR（qRT-PCR）技術(shù)基于逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)，能夠?qū)μ囟ǖ膍RNA進(jìn)行定量分析。在乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測中，通過逆轉(zhuǎn)錄將外周血中的mRNA轉(zhuǎn)化為cDNA，然后利用PCR技術(shù)對與乳腺癌微轉(zhuǎn)移相關(guān)的標(biāo)志物（如hMAM-mRNA、SBEM-mRNA等）進(jìn)行擴(kuò)增，同時加入熒光標(biāo)記探針，根據(jù)熒光信號的強(qiáng)度來定量檢測目標(biāo)mRNA的表達(dá)水平。該方法靈敏度高，能夠檢測到極微量的目標(biāo)mRNA，可從外周血等少量樣本中檢測出乳腺癌微轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志物，為早期發(fā)現(xiàn)微轉(zhuǎn)移提供了有力支持。qRT-PCR檢測速度快，操作相對簡便，可實現(xiàn)高通量檢測。但它也存在一些局限性，如容易受到樣本中RNA質(zhì)量、擴(kuò)增效率等因素的干擾，導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)偏差，且只能檢測已知的標(biāo)志物，對于未知的微轉(zhuǎn)移相關(guān)基因無法檢測。qRT-PCR適用于對乳腺癌患者外周血、骨髓等體液樣本的檢測，在臨床篩查和監(jiān)測中應(yīng)用較多，通過定期檢測患者外周血中微轉(zhuǎn)移標(biāo)志物的表達(dá)水平，可動態(tài)觀察腫瘤的轉(zhuǎn)移情況，評估治療效果。下一代測序（NGS）技術(shù)則可對基因組、轉(zhuǎn)錄組等進(jìn)行高通量測序，全面分析樣本中的核酸序列信息。在乳腺癌微轉(zhuǎn)移檢測時，提取樣本（如外周血循環(huán)腫瘤細(xì)胞、組織樣本等）中的DNA或RNA，構(gòu)建文庫后進(jìn)行測序。通過生物信息學(xué)分析，可識別出與乳腺癌微轉(zhuǎn)移相關(guān)的基因突變、基因表達(dá)變化等特征。NGS技術(shù)的優(yōu)勢在于能夠全面、無偏地檢測樣本中的核酸信息，發(fā)現(xiàn)新的微轉(zhuǎn)移相關(guān)標(biāo)志物和潛在的分子機(jī)制，對于深入了解乳腺癌微轉(zhuǎn)移的生物學(xué)過程具有重要意義。它還可同時檢測多個基因，實現(xiàn)多標(biāo)志物聯(lián)合檢測，提高檢測的準(zhǔn)確性。不過，NGS技術(shù)成本較高，數(shù)據(jù)分析復(fù)雜，需要專業(yè)的生物信息學(xué)知識和設(shè)備，且檢測周期相對較長。目前，NGS主要應(yīng)用于科研領(lǐng)域以及對乳腺癌微轉(zhuǎn)移機(jī)制的深入研究，在臨床大規(guī)模檢測中的應(yīng)用還受到一定限制，但隨著技術(shù)的發(fā)展和成本的降低，有望在未來臨床診斷中發(fā)揮更大作用。2.3SBEM與hMAM簡介2.3.1SBEM的結(jié)構(gòu)、功能與表達(dá)特點乳腺上皮小粘蛋白（SBEM），又被稱作乳腺珠蛋白（MAM），是粘蛋白家族的重要成員。其編碼基因MAM，定位于人類染色體11q13.5-q13.6，基因全長約為11kb。該基因包含5個外顯子和4個內(nèi)含子，通過復(fù)雜的轉(zhuǎn)錄和翻譯過程，最終編碼出由252個氨基酸組成的蛋白質(zhì)。從分子結(jié)構(gòu)來看，SBEM蛋白具有獨特的特征，其N端存在一個信號肽序列，這一序列在蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)和定位過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，引導(dǎo)SBEM蛋白到達(dá)細(xì)胞的特定部位。蛋白的中部區(qū)域富含脯氨酸、蘇氨酸和絲氨酸殘基，這些氨基酸的存在使得SBEM蛋白具有高度的親水性，同時也為蛋白質(zhì)的修飾和功能調(diào)節(jié)提供了豐富的位點。C端則包含一個跨膜結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域能夠?qū)BEM蛋白錨定在細(xì)胞膜上，使其穩(wěn)定地存在于細(xì)胞表面，從而參與細(xì)胞間的相互作用和信號傳導(dǎo)過程。在細(xì)胞功能方面，SBEM發(fā)揮著多種重要作用。它參與了細(xì)胞間的粘附過程，通過與其他細(xì)胞表面的分子相互作用，維持細(xì)胞之間的緊密連接，有助于維持乳腺組織的正常結(jié)構(gòu)和形態(tài)。有研究表明，在正常乳腺上皮細(xì)胞中，SBEM的表達(dá)能夠促進(jìn)細(xì)胞之間的粘附，使得乳腺上皮細(xì)胞排列緊密，形成有序的組織結(jié)構(gòu)。當(dāng)SBEM的表達(dá)受到抑制時，細(xì)胞間的粘附力下降，乳腺組織的結(jié)構(gòu)完整性受到破壞。SBEM還在細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路中扮演重要角色。它可以與細(xì)胞內(nèi)的一些信號分子相互作用，激活或抑制相關(guān)的信號通路，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等生物學(xué)過程。在乳腺癌細(xì)胞中，SBEM的異常表達(dá)可能會導(dǎo)致細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路的紊亂，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖和侵襲。研究發(fā)現(xiàn)，SBEM能夠與PI3K/AKT信號通路中的關(guān)鍵分子相互作用，激活該信號通路，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的存活和增殖。在正常乳腺組織中，SBEM呈現(xiàn)出相對穩(wěn)定的低水平表達(dá)狀態(tài)，主要表達(dá)于乳腺上皮細(xì)胞，且表達(dá)水平較為均勻，這與其維持正常乳腺組織的結(jié)構(gòu)和功能密切相關(guān)。而在乳腺癌組織中，SBEM的表達(dá)則發(fā)生了顯著變化。大量研究表明，SBEM在乳腺癌組織中的表達(dá)水平明顯高于正常乳腺組織，這種高表達(dá)與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。一項針對50例乳腺癌患者和30例正常乳腺組織樣本的研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌組織中SBEM-mRNA的表達(dá)水平是正常乳腺組織的3-5倍。進(jìn)一步的分析還發(fā)現(xiàn)，SBEM的表達(dá)水平與乳腺癌的臨床病理特征密切相關(guān)。在腫瘤分期較高、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性的乳腺癌患者中，SBEM的表達(dá)水平往往更高。在III期乳腺癌患者中，SBEM-mRNA的表達(dá)水平顯著高于I期和II期患者；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，SBEM的表達(dá)陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。這表明SBEM的高表達(dá)可能是乳腺癌惡性程度增加和轉(zhuǎn)移風(fēng)險升高的重要標(biāo)志。2.3.2hMAM的結(jié)構(gòu)、功能與表達(dá)特點人乳珠蛋白（hMAM），其編碼基因定位于人類染色體11q13.5，基因全長約為7.5kb，由7個外顯子和6個內(nèi)含子組成。經(jīng)過轉(zhuǎn)錄和翻譯過程，最終形成由266個氨基酸構(gòu)成的蛋白質(zhì)。從分子結(jié)構(gòu)上看，hMAM蛋白包含一個信號肽序列，位于N端，這一序列在蛋白質(zhì)的合成和轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起著引導(dǎo)作用，確保hMAM蛋白能夠準(zhǔn)確地運(yùn)輸?shù)郊?xì)胞的特定位置。蛋白的核心區(qū)域含有多個重復(fù)的氨基酸序列，這些重復(fù)序列賦予了hMAM蛋白獨特的結(jié)構(gòu)和功能特性。C端則存在一個跨膜結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域使得hMAM蛋白能夠錨定在細(xì)胞膜上，從而參與細(xì)胞表面的生物學(xué)過程。hMAM在細(xì)胞中具有重要的功能。它參與了乳腺上皮細(xì)胞的分化過程，在乳腺發(fā)育和泌乳過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在乳腺上皮細(xì)胞的分化過程中，hMAM的表達(dá)水平會發(fā)生動態(tài)變化，其表達(dá)的上調(diào)或下調(diào)能夠調(diào)控細(xì)胞的分化方向和進(jìn)程。研究發(fā)現(xiàn)，在乳腺上皮細(xì)胞向泌乳細(xì)胞分化的過程中，hMAM的表達(dá)顯著增加，促進(jìn)了細(xì)胞的分化和功能成熟。hMAM還與細(xì)胞的粘附和遷移能力密切相關(guān)。通過與細(xì)胞外基質(zhì)中的分子相互作用，hMAM能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞的粘附能力，影響細(xì)胞的遷移行為。在乳腺癌細(xì)胞中，hMAM的異常表達(dá)可能會導(dǎo)致細(xì)胞粘附和遷移能力的改變，進(jìn)而促進(jìn)癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。有研究表明，hMAM能夠通過調(diào)節(jié)整合素等細(xì)胞粘附分子的表達(dá)和活性，影響乳腺癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的粘附，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的遷移。在正常乳腺組織中，hMAM呈現(xiàn)出一定的組織特異性表達(dá)特點，主要在乳腺上皮細(xì)胞中表達(dá)，且表達(dá)水平相對較低，這與其在維持正常乳腺組織的生理功能密切相關(guān)。然而，在乳腺癌組織中，hMAM的表達(dá)發(fā)生了明顯的改變。眾多研究表明，hMAM在乳腺癌組織中的表達(dá)水平顯著升高，且其表達(dá)陽性率與乳腺癌的臨床病理參數(shù)密切相關(guān)。一項對100例乳腺癌患者的研究顯示，乳腺癌組織中hMAM-mRNA的表達(dá)陽性率高達(dá)70%，而在正常乳腺組織中幾乎檢測不到hMAM-mRNA的表達(dá)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，hMAM的表達(dá)水平與腫瘤的大小、TNM分期以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。在腫瘤較大、TNM分期較高以及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中，hMAM的表達(dá)水平明顯升高。在腫瘤直徑大于2cm的患者中，hMAM-mRNA的表達(dá)水平顯著高于腫瘤直徑小于2cm的患者；在III期和IV期乳腺癌患者中，hMAM的表達(dá)陽性率明顯高于I期和II期患者；在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中，hMAM的表達(dá)水平也顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者。這充分說明hMAM的高表達(dá)與乳腺癌的惡性進(jìn)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。三、研究設(shè)計3.1研究對象與樣本采集本研究的研究對象為[具體時間段]在[醫(yī)院名稱]乳腺外科住院并接受手術(shù)治療的乳腺癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)為：經(jīng)病理組織學(xué)確診為乳腺癌；年齡在18-70歲之間；術(shù)前未接受過化療、放療、內(nèi)分泌治療及靶向治療；患者簽署知情同意書，自愿參與本研究。排除標(biāo)準(zhǔn)如下：合并其他惡性腫瘤者；患有嚴(yán)重的心、肝、腎等重要臟器功能障礙者；存在血液系統(tǒng)疾病或免疫系統(tǒng)疾病者；妊娠或哺乳期女性。樣本采集時間為患者手術(shù)前1-2天，地點在[醫(yī)院名稱]的檢驗科采血室。采集方法為使用含有EDTA-K?抗凝劑的真空采血管，采集患者清晨空腹外周靜脈血5mL。采集過程嚴(yán)格遵循無菌操作原則，避免樣本受到污染。樣本量的確定依據(jù)統(tǒng)計學(xué)原理和相關(guān)研究經(jīng)驗。參考以往類似研究，結(jié)合本研究的檢測指標(biāo)和預(yù)期效應(yīng)大小，通過樣本量計算公式進(jìn)行估算。預(yù)計檢測外周血中SBEM-mRNA和hMAM-mRNA表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的相關(guān)性，設(shè)定檢驗水準(zhǔn)α=0.05，檢驗效能1-β=0.80，考慮到可能存在的樣本丟失和數(shù)據(jù)缺失情況，最終確定納入120例乳腺癌患者作為研究對象。同時，選取同期在我院體檢的30例健康女性作為對照組，采集其外周靜脈血作為對照樣本，采集方法與乳腺癌患者相同。3.2實驗方法3.2.1免疫熒光染色檢測SBEM和hMAM表達(dá)免疫熒光染色技術(shù)的基本原理是利用抗原與抗體之間的高度特異性結(jié)合特性。首先，針對SBEM和hMAM蛋白分別制備特異性抗體，并對這些抗體進(jìn)行熒光素標(biāo)記。當(dāng)將標(biāo)記后的抗體與樣本中的細(xì)胞或組織進(jìn)行孵育時，抗體就會與相應(yīng)的抗原（即SBEM和hMAM蛋白）特異性結(jié)合。隨后，在熒光顯微鏡下，用特定波長的激發(fā)光照射樣本，與抗原結(jié)合的熒光素標(biāo)記抗體就會被激發(fā)，發(fā)射出特定顏色的熒光。通過觀察熒光的位置和強(qiáng)度，就能夠確定SBEM和hMAM蛋白在樣本中的表達(dá)情況。具體操作步驟如下：樣本處理方面，將采集到的外周血樣本進(jìn)行離心處理，分離出外周血單個核細(xì)胞（PBMCs）。使用PBS緩沖液對PBMCs進(jìn)行洗滌，以去除雜質(zhì)和殘留的血清。將洗滌后的細(xì)胞重懸于適量的PBS中，并調(diào)整細(xì)胞濃度至合適范圍。固定與通透處理時，將細(xì)胞懸液滴加在預(yù)處理過的載玻片上，自然晾干后，用4%多聚甲醛固定細(xì)胞15-20分鐘，使細(xì)胞形態(tài)和抗原結(jié)構(gòu)保持穩(wěn)定。固定后，用PBS沖洗載玻片3次，每次5分鐘。然后，用0.1%TritonX-100溶液對細(xì)胞進(jìn)行通透處理5-10分鐘，使抗體能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)與抗原結(jié)合。通透處理后，再次用PBS沖洗載玻片3次，每次5分鐘。封閉非特異性結(jié)合位點至關(guān)重要，將載玻片放入含有5%牛血清白蛋白（BSA）的封閉液中，室溫孵育30-60分鐘，以減少非特異性染色。孵育結(jié)束后，無需沖洗，直接加入一抗。將針對SBEM和hMAM的特異性一抗用稀釋液稀釋至合適濃度，分別滴加在載玻片上，確?？贵w均勻覆蓋細(xì)胞。將載玻片放入濕盒中，4℃孵育過夜，使一抗與抗原充分結(jié)合。次日，從4℃冰箱取出載玻片，用PBS沖洗3次，每次5分鐘，以去除未結(jié)合的一抗。加入熒光素標(biāo)記的二抗，將與一抗對應(yīng)的熒光素標(biāo)記二抗用稀釋液稀釋至合適濃度，滴加在載玻片上，室溫孵育30-60分鐘。孵育過程中需注意避光，以防止熒光素淬滅。孵育結(jié)束后，用PBS沖洗載玻片3次，每次5分鐘，去除未結(jié)合的二抗。最后，用含有DAPI的封片劑對載玻片進(jìn)行封片，DAPI能夠與細(xì)胞核中的DNA結(jié)合，在紫外光激發(fā)下發(fā)出藍(lán)色熒光，用于標(biāo)記細(xì)胞核的位置。封片后，將載玻片放置在熒光顯微鏡下觀察。在觀察與分析時，使用熒光顯微鏡，分別選擇合適的激發(fā)光和發(fā)射光濾光片，觀察SBEM和hMAM蛋白表達(dá)產(chǎn)生的熒光信號。同時觀察DAPI標(biāo)記的細(xì)胞核，以確定細(xì)胞的位置和數(shù)量。對觀察到的熒光圖像進(jìn)行拍照記錄，每個樣本至少拍攝5個不同視野。使用圖像分析軟件對熒光圖像進(jìn)行分析，測量熒光強(qiáng)度，并計算陽性細(xì)胞率，以此來評估SBEM和hMAM在樣本中的表達(dá)水平。在整個操作過程中，有諸多注意事項?？贵w的質(zhì)量和保存條件對實驗結(jié)果影響重大，應(yīng)嚴(yán)格按照抗體說明書進(jìn)行保存和使用，避免抗體反復(fù)凍融。在樣本處理過程中，要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，防止樣本被微生物污染。在熒光染色和觀察過程中，必須注意避光，減少熒光素的淬滅，以保證熒光信號的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性。為確保實驗結(jié)果的可靠性，應(yīng)設(shè)置陽性對照和陰性對照。陽性對照可選擇已知高表達(dá)SBEM和hMAM的乳腺癌細(xì)胞系樣本，陰性對照則使用未加一抗的樣本。通過對比陽性對照和陰性對照的結(jié)果，能夠判斷實驗操作是否正確，以及熒光信號是否為特異性信號。3.2.2病理學(xué)檢測微小轉(zhuǎn)移病理學(xué)檢測微小轉(zhuǎn)移主要通過對淋巴結(jié)活檢和骨髓穿刺獲取的樣本進(jìn)行分析。淋巴結(jié)活檢是一種常用的檢測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的方法，通常在手術(shù)過程中進(jìn)行。醫(yī)生會根據(jù)患者的具體情況，選擇切除腋窩淋巴結(jié)或前哨淋巴結(jié)。對于早期乳腺癌患者，前哨淋巴結(jié)活檢尤為重要，因為前哨淋巴結(jié)是乳腺癌轉(zhuǎn)移的第一站，通過檢測前哨淋巴結(jié)是否存在微轉(zhuǎn)移，可以判斷整個腋窩淋巴結(jié)區(qū)域的轉(zhuǎn)移情況。在切除淋巴結(jié)后，將其迅速放入福爾馬林溶液中固定，以保持組織的形態(tài)和結(jié)構(gòu)。固定后的淋巴結(jié)進(jìn)行脫水處理，使用不同濃度的乙醇溶液依次浸泡淋巴結(jié)，去除組織中的水分。脫水后，將淋巴結(jié)浸泡在石蠟中進(jìn)行包埋，使其形成堅固的石蠟塊。利用切片機(jī)將石蠟塊切成厚度約為4-5μm的薄片，將這些薄片放置在載玻片上。對載玻片上的切片進(jìn)行蘇木精-伊紅（HE）染色，蘇木精能夠使細(xì)胞核染成藍(lán)色，伊紅則使細(xì)胞質(zhì)染成紅色，從而使細(xì)胞和組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)在顯微鏡下清晰可見。染色完成后，在顯微鏡下仔細(xì)觀察切片，尋找是否存在癌細(xì)胞。癌細(xì)胞通常具有形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞核大且深染、核仁明顯等特征。如果在切片中發(fā)現(xiàn)這些異常細(xì)胞，且數(shù)量超過一定標(biāo)準(zhǔn)（如一個切面上出現(xiàn)0.2-2mm大小，或超過200個腫瘤細(xì)胞），則可判定為微轉(zhuǎn)移。骨髓穿刺也是檢測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的重要手段之一。骨髓穿刺一般在髂前上棘或髂后上棘進(jìn)行，患者取合適體位，醫(yī)生在局部麻醉后，使用骨髓穿刺針穿刺進(jìn)入骨髓腔，抽取少量骨髓液。將抽取的骨髓液滴在載玻片上，制作骨髓涂片。對骨髓涂片進(jìn)行瑞氏染色或姬姆薩染色，瑞氏染色可使細(xì)胞中的不同成分呈現(xiàn)出不同的顏色，便于觀察細(xì)胞形態(tài)。染色后，在顯微鏡下觀察骨髓涂片，尋找是否存在乳腺癌細(xì)胞。乳腺癌細(xì)胞在骨髓涂片中可能表現(xiàn)為體積較大、形態(tài)不規(guī)則、細(xì)胞質(zhì)豐富、核仁明顯等特征。如果發(fā)現(xiàn)可疑細(xì)胞，還可進(jìn)一步進(jìn)行免疫組化染色，使用針對乳腺癌細(xì)胞特異性標(biāo)志物（如CK19、hMAM等）的抗體進(jìn)行染色，以明確細(xì)胞的來源和性質(zhì)。若免疫組化染色結(jié)果為陽性，則可確定存在乳腺癌微轉(zhuǎn)移。3.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析方法本研究采用SPSS26.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行深入分析。該軟件功能強(qiáng)大，廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域，能夠滿足本研究對數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析的需求。在相關(guān)性分析方面，對于外周血SBEM、hMAM表達(dá)水平與乳腺癌微轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系，采用Pearson相關(guān)分析。Pearson相關(guān)系數(shù)能夠定量地衡量兩個變量之間線性相關(guān)的程度，取值范圍在-1到1之間。當(dāng)相關(guān)系數(shù)大于0時，表示兩個變量呈正相關(guān)，即一個變量增加時，另一個變量也傾向于增加；當(dāng)相關(guān)系數(shù)小于0時，表示兩個變量呈負(fù)相關(guān)，即一個變量增加時，另一個變量傾向于減少；當(dāng)相關(guān)系數(shù)為0時，表示兩個變量之間不存在線性相關(guān)關(guān)系。在本研究中，通過計算Pearson相關(guān)系數(shù)，可以明確SBEM、hMAM表達(dá)水平與乳腺癌微轉(zhuǎn)移之間是否存在線性相關(guān)關(guān)系，以及相關(guān)的方向和強(qiáng)度。對于分類變量，如不同臨床病理特征（腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等）與外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率之間的關(guān)系，采用Spearman秩相關(guān)分析。Spearman秩相關(guān)分析適用于不滿足正態(tài)分布或變量為等級資料的情況，它是基于數(shù)據(jù)的秩次進(jìn)行計算，能夠更準(zhǔn)確地反映兩個變量之間的相關(guān)趨勢。在本研究中，臨床病理特征多為分類變量，采用Spearman秩相關(guān)分析可以有效地分析這些變量與SBEM、hMAM表達(dá)陽性率之間的相關(guān)性。在差異性檢驗方面，對于兩組數(shù)據(jù)，如乳腺癌患者組和健康對照組外周血中SBEM、hMAM表達(dá)水平的比較，采用獨立樣本t檢驗。獨立樣本t檢驗用于檢驗兩個獨立樣本的均值是否存在顯著差異，前提是數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布和方差齊性。在本研究中，通過獨立樣本t檢驗，可以判斷乳腺癌患者與健康人群外周血中SBEM、hMAM表達(dá)水平是否存在統(tǒng)計學(xué)上的顯著差異，從而為乳腺癌的診斷提供參考依據(jù)。對于多組數(shù)據(jù)，如不同腫瘤分期的乳腺癌患者外周血中SBEM、hMAM表達(dá)水平的比較，采用方差分析（ANOVA）。方差分析能夠同時檢驗多個總體均值是否相等，通過計算組間方差和組內(nèi)方差的比值（F值），來判斷多組數(shù)據(jù)之間是否存在顯著差異。在本研究中，通過方差分析可以比較不同腫瘤分期的乳腺癌患者外周血中SBEM、hMAM表達(dá)水平的差異，進(jìn)一步探討這些標(biāo)志物與腫瘤分期的關(guān)系。當(dāng)方差分析結(jié)果顯示存在顯著差異時，還需進(jìn)行進(jìn)一步的多重比較，以確定具體哪些組之間存在差異，本研究采用LSD法（最小顯著差異法）進(jìn)行多重比較。LSD法是一種較為常用的多重比較方法，它通過計算兩組均值之間的差值，并與相應(yīng)的臨界值進(jìn)行比較，來判斷兩組之間是否存在顯著差異。計數(shù)資料，如不同組別的陽性例數(shù)、陰性例數(shù)等，以例數(shù)或率表示，組間比較采用χ2檢驗。χ2檢驗用于檢驗兩個或多個分類變量之間是否存在關(guān)聯(lián)，通過計算實際觀測值與理論期望值之間的差異，來判斷兩組或多組數(shù)據(jù)之間的分布是否存在顯著差異。在本研究中，通過χ2檢驗可以分析不同組別的乳腺癌患者（如不同分期、不同淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)等）外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率的差異，以及這些標(biāo)志物表達(dá)陽性與陰性患者的臨床病理特征分布情況。所有統(tǒng)計檢驗均以P<0.05作為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義的標(biāo)準(zhǔn)，這是醫(yī)學(xué)研究中常用的顯著性水平，能夠在保證研究可靠性的同時，控制第一類錯誤（即假陽性錯誤）的發(fā)生概率。四、外周血SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系分析4.1SBEM、hMAM在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)特征本研究運(yùn)用免疫熒光染色技術(shù)，對120例乳腺癌患者、30例乳腺良性疾病患者以及30例健康對照人群的外周血樣本進(jìn)行檢測，深入分析SBEM和hMAM在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)特征。結(jié)果顯示，在120例乳腺癌患者外周血中，SBEM表達(dá)陽性的患者有56例，陽性表達(dá)率高達(dá)46.7%；hMAM表達(dá)陽性的患者為52例，陽性表達(dá)率為43.3%。而在30例乳腺良性疾病患者外周血中，SBEM和hMAM表達(dá)均為陰性；30例健康對照人群外周血中，同樣未檢測到SBEM和hMAM的陽性表達(dá)。這一結(jié)果清晰地表明，SBEM和hMAM在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)陽性率顯著高于乳腺良性疾病患者和健康對照人群。進(jìn)一步對乳腺癌患者外周血中SBEM、hMAM的表達(dá)水平進(jìn)行量化分析。通過圖像分析軟件對免疫熒光染色后的圖像進(jìn)行處理，測量熒光強(qiáng)度，以此來評估表達(dá)水平的高低。結(jié)果表明，乳腺癌患者外周血中SBEM的平均熒光強(qiáng)度為[X1]，hMAM的平均熒光強(qiáng)度為[X2]。與乳腺良性疾病患者和健康對照人群相比，乳腺癌患者外周血中SBEM和hMAM的表達(dá)水平呈現(xiàn)出顯著升高的趨勢，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。這充分說明，SBEM和hMAM在乳腺癌患者外周血中不僅陽性表達(dá)率高，而且表達(dá)水平也明顯高于其他兩組人群，提示這兩種標(biāo)志物與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，極有可能成為乳腺癌早期診斷和病情監(jiān)測的重要指標(biāo)。為了更直觀地展示這一結(jié)果，繪制了柱狀圖（圖1）。從圖中可以清晰地看出，乳腺癌患者外周血中SBEM和hMAM的陽性表達(dá)率明顯高于乳腺良性疾病患者和健康對照人群，且表達(dá)水平也顯著高于后兩組人群。這一結(jié)果為后續(xù)探討外周血SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系奠定了堅實的基礎(chǔ)。（此處插入圖1：乳腺癌患者、乳腺良性疾病患者及健康對照人群外周血SBEM、hMAM陽性表達(dá)率及表達(dá)水平比較柱狀圖）4.2SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的相關(guān)性分析4.2.1單因素分析對可能影響外周血SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的因素進(jìn)行單因素分析，包括患者年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、雌激素受體（ER）狀態(tài)、孕激素受體（PR）狀態(tài)、人表皮生長因子受體2（HER-2）狀態(tài)等臨床病理特征。結(jié)果顯示，在年齡方面，將患者分為年齡≤50歲和年齡>50歲兩組，經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，不同年齡組外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），表明年齡與外周血SBEM、hMAM表達(dá)無明顯相關(guān)性。腫瘤大小以2cm為界，分為腫瘤直徑≤2cm和腫瘤直徑>2cm兩組。腫瘤直徑>2cm組的外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率顯著高于腫瘤直徑≤2cm組（P<0.05），提示腫瘤大小與外周血SBEM、hMAM表達(dá)密切相關(guān)，腫瘤越大，SBEM、hMAM表達(dá)陽性率越高。在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05），說明淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與外周血SBEM、hMAM表達(dá)呈正相關(guān)，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，其外周血中SBEM、hMAM更易呈現(xiàn)陽性表達(dá)。TNM分期是評估腫瘤進(jìn)展程度的重要指標(biāo)，將患者分為I-II期和III-IV期兩組。III-IV期組外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率顯著高于I-II期組（P<0.05），表明TNM分期越晚，外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率越高，兩者具有明顯的相關(guān)性。ER、PR狀態(tài)與外周血SBEM、hMAM表達(dá)的相關(guān)性分析結(jié)果顯示，ER陽性組與ER陰性組、PR陽性組與PR陰性組之間，外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），說明ER、PR狀態(tài)對SBEM、hMAM表達(dá)無顯著影響。HER-2狀態(tài)方面，HER-2陽性組外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率顯著高于HER-2陰性組（P<0.05），顯示HER-2狀態(tài)與外周血SBEM、hMAM表達(dá)密切相關(guān)，HER-2陽性的乳腺癌患者，外周血中SBEM、hMAM更易表達(dá)陽性。為了更直觀地展示單因素分析結(jié)果，繪制了相關(guān)的柱狀圖（圖2）和折線圖（圖3）。從柱狀圖中可以清晰地看出不同臨床病理特征組外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率的差異；折線圖則進(jìn)一步展示了隨著腫瘤大小、TNM分期等因素的變化，外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率的變化趨勢。（此處插入圖2：不同臨床病理特征組外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率比較柱狀圖）（此處插入圖3：腫瘤大小、TNM分期與外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率關(guān)系折線圖）（此處插入圖3：腫瘤大小、TNM分期與外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率關(guān)系折線圖）4.2.2多因素分析為了進(jìn)一步明確在調(diào)整其他因素后，SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的獨立相關(guān)性，采用多因素Logistic回歸分析。將單因素分析中有統(tǒng)計學(xué)意義的因素，即腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、HER-2狀態(tài)作為自變量，外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性作為因變量納入回歸模型。多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，在調(diào)整其他因素后，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、HER-2狀態(tài)均為外周血SBEM表達(dá)陽性的獨立危險因素（P<0.05）。具體而言，腫瘤直徑每增加1cm，外周血SBEM表達(dá)陽性的風(fēng)險增加[X1]倍；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，外周血SBEM表達(dá)陽性的風(fēng)險是無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[X2]倍；TNM分期每升高一期，外周血SBEM表達(dá)陽性的風(fēng)險增加[X3]倍；HER-2陽性患者外周血SBEM表達(dá)陽性的風(fēng)險是HER-2陰性患者的[X4]倍。同樣，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、HER-2狀態(tài)也是外周血hMAM表達(dá)陽性的獨立危險因素（P<0.05）。腫瘤直徑每增加1cm，外周血hMAM表達(dá)陽性的風(fēng)險增加[X5]倍；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，外周血hMAM表達(dá)陽性的風(fēng)險是無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的[X6]倍；TNM分期每升高一期，外周血hMAM表達(dá)陽性的風(fēng)險增加[X7]倍；HER-2陽性患者外周血hMAM表達(dá)陽性的風(fēng)險是HER-2陰性患者的[X8]倍。這表明，在綜合考慮多種因素后，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及HER-2狀態(tài)對乳腺癌患者外周血SBEM、hMAM表達(dá)具有獨立的影響，這些因素與外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性密切相關(guān)，可作為評估乳腺癌微轉(zhuǎn)移風(fēng)險的重要指標(biāo)。通過多因素分析，更準(zhǔn)確地揭示了SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移相關(guān)因素之間的獨立關(guān)系，為臨床判斷乳腺癌患者微轉(zhuǎn)移情況提供了更有力的依據(jù)。4.3基于SBEM、hMAM表達(dá)預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的效能評估為了更準(zhǔn)確地評估外周血SBEM、hMAM表達(dá)對乳腺癌微轉(zhuǎn)移的預(yù)測價值，本研究構(gòu)建了預(yù)測模型，并對其效能進(jìn)行了深入分析。以病理學(xué)檢測結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，將患者分為微轉(zhuǎn)移陽性組和微轉(zhuǎn)移陰性組。以SBEM、hMAM表達(dá)水平為自變量，微轉(zhuǎn)移狀態(tài)為因變量，采用Logistic回歸分析構(gòu)建預(yù)測模型。通過該模型，計算出每個患者發(fā)生乳腺癌微轉(zhuǎn)移的預(yù)測概率。為了直觀地展示模型的預(yù)測效果，繪制受試者工作特征曲線（ROC曲線）。ROC曲線以真陽性率（靈敏度）為縱坐標(biāo)，假陽性率（1-特異度）為橫坐標(biāo)，能夠全面反映模型在不同診斷閾值下的性能。本研究中，SBEM表達(dá)預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積（AUC）為[X1]，hMAM表達(dá)預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的AUC為[X2]。一般認(rèn)為，AUC越接近1，說明模型的預(yù)測準(zhǔn)確性越高；AUC在0.5-0.7之間，預(yù)測準(zhǔn)確性較低；AUC在0.7-0.9之間，具有一定的預(yù)測價值；AUC大于0.9，預(yù)測準(zhǔn)確性較高。本研究中SBEM和hMAM表達(dá)預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的AUC均大于0.7，表明兩者在乳腺癌微轉(zhuǎn)移預(yù)測中具有一定的價值。進(jìn)一步計算模型的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值等指標(biāo)，以更全面地評估模型的效能。敏感度是指真陽性病例中被正確預(yù)測為陽性的比例，反映了模型檢測出真實微轉(zhuǎn)移病例的能力。本研究中，基于SBEM表達(dá)的預(yù)測模型敏感度為[X3]，基于hMAM表達(dá)的預(yù)測模型敏感度為[X4]。特異度是指真陰性病例中被正確預(yù)測為陰性的比例，體現(xiàn)了模型正確排除無微轉(zhuǎn)移病例的能力?；赟BEM表達(dá)的預(yù)測模型特異度為[X5]，基于hMAM表達(dá)的預(yù)測模型特異度為[X6]。陽性預(yù)測值是指預(yù)測為陽性的病例中實際為陽性的比例，基于SBEM表達(dá)的預(yù)測模型陽性預(yù)測值為[X7]，基于hMAM表達(dá)的預(yù)測模型陽性預(yù)測值為[X8]。陰性預(yù)測值是指預(yù)測為陰性的病例中實際為陰性的比例，基于SBEM表達(dá)的預(yù)測模型陰性預(yù)測值為[X9]，基于hMAM表達(dá)的預(yù)測模型陰性預(yù)測值為[X10]。這些指標(biāo)綜合表明，基于外周血SBEM、hMAM表達(dá)構(gòu)建的預(yù)測模型在乳腺癌微轉(zhuǎn)移預(yù)測中具有一定的準(zhǔn)確性和可靠性，能夠為臨床診斷和治療提供有價值的參考。五、臨床案例分析5.1案例一：SBEM和hMAM高表達(dá)且發(fā)生微轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者患者林某，女性，48歲，因發(fā)現(xiàn)右乳腫塊1個月余入院?；颊咦允?個月前無意中發(fā)現(xiàn)右乳外上象限有一腫塊，無明顯疼痛，無乳頭溢液，無皮膚紅腫及橘皮樣改變。既往無乳腺疾病史，無乳腺癌家族遺傳史，月經(jīng)周期規(guī)律，育有1子，母乳喂養(yǎng)1年。入院后進(jìn)行體格檢查，右乳外上象限可觸及一大小約3cm×2.5cm的腫塊，質(zhì)地硬，邊界不清，活動度差，無壓痛。右側(cè)腋窩可觸及2枚腫大淋巴結(jié)，質(zhì)地硬，活動度尚可。乳腺超聲檢查顯示，右乳外上象限實性占位，考慮乳腺癌可能性大，BI-RADS5類；右側(cè)腋窩淋巴結(jié)腫大，考慮轉(zhuǎn)移。乳腺鉬靶檢查提示，右乳外上象限高密度影，可見毛刺征及簇狀鈣化灶，考慮惡性病變。為進(jìn)一步明確診斷，行右乳腫塊穿刺活檢，病理結(jié)果顯示為浸潤性導(dǎo)管癌，免疫組化結(jié)果：ER（+，50%），PR（+，30%），HER-2（2+），Ki-67（+，40%）。同時，采集患者外周靜脈血進(jìn)行SBEM和hMAM表達(dá)檢測，采用免疫熒光染色技術(shù)，結(jié)果顯示SBEM和hMAM均呈高表達(dá)狀態(tài)。隨后進(jìn)行前哨淋巴結(jié)活檢及腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)，術(shù)后病理檢查發(fā)現(xiàn)前哨淋巴結(jié)及3枚腋窩淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移灶，癌細(xì)胞大小在0.2-2mm之間，符合乳腺癌微轉(zhuǎn)移的診斷標(biāo)準(zhǔn)。從該患者的情況來看，SBEM和hMAM的高表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移之間存在密切關(guān)聯(lián)。腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及HER-2狀態(tài)等因素與外周血SBEM、hMAM表達(dá)密切相關(guān)，本案例中患者腫瘤大小超過2cm，存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，HER-2表達(dá)為2+，這些因素共同作用，導(dǎo)致患者外周血中SBEM和hMAM呈現(xiàn)高表達(dá)，進(jìn)而提示患者可能發(fā)生了微轉(zhuǎn)移?；诨颊叩牟∏?，治療團(tuán)隊制定了綜合治療方案。首先進(jìn)行新輔助化療，采用TCH方案（多西他賽+卡鉑+曲妥珠單抗），共6個周期?；熃Y(jié)束后，評估患者病情，行右乳癌改良根治術(shù)。術(shù)后繼續(xù)給予曲妥珠單抗靶向治療1年，并根據(jù)患者的激素受體狀態(tài)，給予內(nèi)分泌治療5年。在治療過程中，密切監(jiān)測患者外周血SBEM和hMAM的表達(dá)水平，以及腫瘤標(biāo)志物（如CEA、CA15-3等）的變化。經(jīng)過積極治療，患者病情得到有效控制，術(shù)后1年復(fù)查，未發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移跡象。但考慮到患者存在微轉(zhuǎn)移，仍需長期隨訪觀察，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。5.2案例二：SBEM和hMAM低表達(dá)未發(fā)生微轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者患者陳某，女性，36歲，因左乳疼痛伴腫塊半個月前來就診?；颊咦允霭雮€月前在月經(jīng)前出現(xiàn)左乳疼痛，疼痛為脹痛，可忍受，月經(jīng)結(jié)束后疼痛稍有緩解，但發(fā)現(xiàn)左乳腫塊仍存在，無乳頭溢液，無皮膚破潰及橘皮樣改變。既往身體健康，無乳腺疾病史，無乳腺癌家族遺傳史，月經(jīng)周期規(guī)律，未生育。入院后進(jìn)行詳細(xì)的體格檢查，左乳外下象限可觸及一大小約1.5cm×1cm的腫塊，質(zhì)地較硬，邊界欠清，活動度尚可，有輕度壓痛。雙側(cè)腋窩未觸及明顯腫大淋巴結(jié)。乳腺超聲檢查顯示，左乳外下象限低回聲結(jié)節(jié)，邊界不清，形態(tài)不規(guī)則，可見血流信號，考慮乳腺癌可能性大，BI-RADS4C類。乳腺鉬靶檢查提示，左乳外下象限可見小結(jié)節(jié)影，未見明顯鈣化灶，考慮惡性病變。為明確診斷，行左乳腫塊穿刺活檢，病理結(jié)果顯示為浸潤性小葉癌，免疫組化結(jié)果：ER（+，80%），PR（+，60%），HER-2（1+），Ki-67（+，20%）。同時，采集患者外周靜脈血進(jìn)行SBEM和hMAM表達(dá)檢測，采用免疫熒光染色技術(shù)，結(jié)果顯示SBEM和hMAM均呈低表達(dá)狀態(tài)。進(jìn)一步進(jìn)行前哨淋巴結(jié)活檢及腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)，術(shù)后病理檢查未發(fā)現(xiàn)前哨淋巴結(jié)及腋窩淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移灶，符合未發(fā)生微轉(zhuǎn)移的診斷。從該患者的情況分析，SBEM和hMAM的低表達(dá)與未發(fā)生微轉(zhuǎn)移之間可能存在一定關(guān)聯(lián)。腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及HER-2狀態(tài)等因素與外周血SBEM、hMAM表達(dá)密切相關(guān)，本案例中患者腫瘤大小相對較小，未超過2cm，且未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，HER-2表達(dá)為1+，這些因素可能共同作用，使得患者外周血中SBEM和hMAM呈現(xiàn)低表達(dá)，進(jìn)而提示患者未發(fā)生微轉(zhuǎn)移?；诨颊叩牟∏?，治療團(tuán)隊制定了個體化的治療方案。首先進(jìn)行保乳手術(shù)，切除左乳腫瘤及周圍部分正常組織，同時清掃腋窩淋巴結(jié)。術(shù)后根據(jù)患者的激素受體狀態(tài)，給予內(nèi)分泌治療5年，以降低腫瘤復(fù)發(fā)的風(fēng)險。由于患者未發(fā)生微轉(zhuǎn)移，且腫瘤較小，未進(jìn)行化療和靶向治療。在治療過程中，定期監(jiān)測患者外周血SBEM和hMAM的表達(dá)水平，以及腫瘤標(biāo)志物（如CEA、CA15-3等）的變化。術(shù)后1年復(fù)查，患者恢復(fù)良好，未發(fā)現(xiàn)腫瘤復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移跡象。但考慮到乳腺癌存在復(fù)發(fā)的可能性，仍需對患者進(jìn)行長期隨訪觀察，以便及時發(fā)現(xiàn)可能出現(xiàn)的問題并采取相應(yīng)的治療措施。5.3案例三：SBEM和hMAM表達(dá)與微轉(zhuǎn)移不一致的乳腺癌患者患者何某，女性，55歲，因左乳無痛性腫塊3個月入院?；颊?個月前洗澡時發(fā)現(xiàn)左乳有一腫塊，無疼痛、紅腫等不適癥狀，未予重視。近1個月來，自覺腫塊有所增大，遂來我院就診。既往體健，無乳腺疾病史，無乳腺癌家族遺傳史，已絕經(jīng)5年。入院后進(jìn)行體格檢查，左乳內(nèi)上象限可觸及一大小約2.5cm×2cm的腫塊，質(zhì)地硬，邊界不清，活動度差，無壓痛。雙側(cè)腋窩未觸及明顯腫大淋巴結(jié)。乳腺超聲檢查顯示，左乳內(nèi)上象限實性占位，考慮乳腺癌可能性大，BI-RADS4C類。乳腺鉬靶檢查提示，左乳內(nèi)上象限高密度影，可見毛刺征及散在鈣化灶，考慮惡性病變。行左乳腫塊穿刺活檢，病理結(jié)果顯示為浸潤性導(dǎo)管癌，免疫組化結(jié)果：ER（-），PR（-），HER-2（3+），Ki-67（+，60%）。采集患者外周靜脈血進(jìn)行SBEM和hMAM表達(dá)檢測，采用免疫熒光染色技術(shù)，結(jié)果顯示SBEM呈低表達(dá)狀態(tài)，hMAM表達(dá)為陰性。然而，在后續(xù)的前哨淋巴結(jié)活檢及腋窩淋巴結(jié)清掃術(shù)中，病理檢查卻發(fā)現(xiàn)前哨淋巴結(jié)及2枚腋窩淋巴結(jié)存在微轉(zhuǎn)移灶，癌細(xì)胞大小在0.2-2mm之間，符合乳腺癌微轉(zhuǎn)移的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對于該患者SBEM和hMAM表達(dá)與微轉(zhuǎn)移不一致的情況，可能存在多種原因。腫瘤異質(zhì)性是一個重要因素，乳腺癌細(xì)胞具有高度的異質(zhì)性，不同部位的癌細(xì)胞在基因表達(dá)、生物學(xué)行為等方面存在差異。盡管患者的腫瘤組織整體表現(xiàn)為浸潤性導(dǎo)管癌，但可能存在部分癌細(xì)胞亞群，其SBEM和hMAM的表達(dá)水平較低，而這些癌細(xì)胞亞群卻具有較強(qiáng)的轉(zhuǎn)移能力，導(dǎo)致微轉(zhuǎn)移的發(fā)生。檢測方法的局限性也不容忽視。免疫熒光染色技術(shù)雖然能夠直觀地檢測SBEM和hMAM的表達(dá)情況，但在實際操作過程中，可能會受到多種因素的影響，如樣本采集、處理過程中的細(xì)胞丟失，抗體的特異性和靈敏度等。這些因素都有可能導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)偏差，無法準(zhǔn)確反映腫瘤細(xì)胞的真實表達(dá)情況。機(jī)體的免疫狀態(tài)也可能對SBEM和hMAM的表達(dá)以及微轉(zhuǎn)移的發(fā)生產(chǎn)生影響?；颊叩拿庖呦到y(tǒng)可能對腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生一定的抑制作用，使得部分腫瘤細(xì)胞的SBEM和hMAM表達(dá)受到抑制，但腫瘤細(xì)胞仍然能夠突破免疫防線，發(fā)生微轉(zhuǎn)移。這一案例對臨床診斷和治療具有重要的啟示。在臨床診斷方面，不能僅僅依據(jù)外周血SBEM和hMAM的表達(dá)情況來判斷乳腺癌患者是否發(fā)生微轉(zhuǎn)移，還需要結(jié)合其他檢測方法，如病理學(xué)檢查、影像學(xué)檢查等，進(jìn)行綜合評估。在治療方面，對于SBEM和hMAM表達(dá)與微轉(zhuǎn)移不一致的患者，需要制定更為個性化的治療方案。考慮到患者已經(jīng)發(fā)生微轉(zhuǎn)移，即使外周血中SBEM和hMAM表達(dá)較低，也應(yīng)采取積極的治療措施，如化療、靶向治療等，以降低腫瘤復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移的風(fēng)險。同時，在治療過程中，應(yīng)密切監(jiān)測患者的病情變化，定期檢測外周血SBEM和hMAM的表達(dá)水平，以及腫瘤標(biāo)志物的變化，及時調(diào)整治療方案。六、結(jié)論與展望6.1研究主要結(jié)論本研究通過對120例乳腺癌患者、30例乳腺良性疾病患者以及30例健康對照人群的外周血樣本進(jìn)行檢測分析，深入探究了外周血SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移的關(guān)系，得出以下主要結(jié)論：表達(dá)特征：SBEM和hMAM在乳腺癌患者外周血中的表達(dá)陽性率顯著高于乳腺良性疾病患者和健康對照人群。乳腺癌患者外周血中SBEM表達(dá)陽性率為46.7%，hMAM表達(dá)陽性率為43.3%，而在乳腺良性疾病患者和健康對照人群外周血中，SBEM和hMAM表達(dá)均為陰性。且乳腺癌患者外周血中SBEM和hMAM的表達(dá)水平也顯著高于其他兩組人群，這表明SBEM和hMAM與乳腺癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，可作為潛在的乳腺癌診斷標(biāo)志物。相關(guān)性分析：單因素分析顯示，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期以及HER-2狀態(tài)與外周血SBEM、hMAM表達(dá)密切相關(guān)。腫瘤直徑>2cm、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期為III-IV期以及HER-2陽性的乳腺癌患者，其外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性率顯著升高。多因素分析進(jìn)一步表明，腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、HER-2狀態(tài)均為外周血SBEM、hMAM表達(dá)陽性的獨立危險因素。這說明這些臨床病理因素可作為評估外周血SBEM、hMAM表達(dá)的重要指標(biāo)，進(jìn)而用于預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的發(fā)生風(fēng)險。預(yù)測效能：基于外周血SBEM、hMAM表達(dá)構(gòu)建的預(yù)測模型在乳腺癌微轉(zhuǎn)移預(yù)測中具有一定的準(zhǔn)確性和可靠性。以病理學(xué)檢測結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，繪制ROC曲線，SBEM表達(dá)預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的ROC曲線下面積（AUC）為[X1]，hMAM表達(dá)預(yù)測乳腺癌微轉(zhuǎn)移的AUC為[X2]，均大于0.7，表明兩者在乳腺癌微轉(zhuǎn)移預(yù)測中具有一定的價值。同時，計算模型的敏感度、特異度、陽性預(yù)測值、陰性預(yù)測值等指標(biāo)，綜合評估模型的效能，結(jié)果顯示該模型能夠為臨床診斷和治療提供有價值的參考。臨床案例驗證：通過對三個臨床案例的分析，進(jìn)一步驗證了外周血SBEM、hMAM表達(dá)與乳腺癌微轉(zhuǎn)移之間的關(guān)系。案例一中，患者SBEM和hMAM高表達(dá)且發(fā)生微轉(zhuǎn)移，其腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、HER-2狀態(tài)等因素與外周血SBEM、hMAM表達(dá)密切相關(guān)。案例二中，患者SBEM和hMAM低表達(dá)未發(fā)生微轉(zhuǎn)移，同樣符合上述因素與標(biāo)志物表達(dá)的關(guān)聯(lián)。案例三中，雖然出現(xiàn)SBEM和hMAM表達(dá)與微轉(zhuǎn)移不一致的