2025年臨床分子生物學(xué)檢驗?zāi)M題集及解析一、臨床基因擴增技術(shù)1.【單項選擇】實時熒光定量PCR中，若標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為3.32，擴增效率最接近A.90%B.95%C.100%D.105%答案：C解析：斜率=3.32時，效率E=10^(1/斜率)1=1.00，即100%。2.【單項選擇】ARMSPCR檢測EGFRL858R突變，野生型探針5′端標(biāo)記FAM，突變型探針標(biāo)記VIC。若某樣本FAMCt=28.1、VICCt=24.6，則判讀結(jié)果為A.野生型B.突變純合C.突變雜合D.無法判斷答案：C解析：ΔCt=VICFAM=3.5，系統(tǒng)閾值ΔCt≤3判定為突變雜合。3.【單項選擇】數(shù)字PCR微滴經(jīng)終點熒光讀取后，出現(xiàn)“rain”現(xiàn)象，最可能的原因是A.退火溫度過高B.探針濃度過量C.微滴生成時油水比偏低D.引物二聚體答案：C解析：油水比不足導(dǎo)致微滴大小不均，熒光分布彌散呈rain。4.【單項選擇】HRM分析檢測KRAS密碼子12突變，熔解曲線在84.7℃出現(xiàn)額外熔解峰，提示A.G12DB.G12VC.G12CD.G12S答案：B解析：G12V（GTT）使PCR產(chǎn)物Tm升高0.8℃，與84.7℃匹配。5.【單項選擇】RTqPCR檢測BCRABL1轉(zhuǎn)錄本，內(nèi)參基因選擇ABL1而非GAPDH的主要原因是A.ABL1表達更穩(wěn)定B.避免偽基因干擾C.擴增片段長度一致D.兩者均可答案：B解析：GAPDH存在大量偽基因，易與融合基因交叉擴增。6.【多項選擇】下列哪些措施可降低qPCR引物二聚體形成A.降低引物濃度B.采用熱啟動TaqC.增加Mg2?濃度D.使用LNA修飾引物答案：ABD解析：Mg2?升高會促進非特異配對。7.【多項選擇】關(guān)于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增（LAMP），正確的是A.需4條引物B.擴增產(chǎn)物為莖環(huán)結(jié)構(gòu)C.可肉眼觀察濁度D.對抑制物耐受性高于qPCR答案：BCD解析：LAMP需6條引物（F3/B3、FIP/BIP、LF/LB）。8.【案例分析】患者男，58歲，肺腺癌術(shù)后，qPCR檢測EGFR19號外顯子缺失，Ct=31.5，內(nèi)參Ct=22.0。實驗室突變豐度cutoff=1%，已知突變型與野生型擴增效率一致，求突變豐度并給出臨床建議。答案：突變豐度=2^(ΔΔCt)=2^9.5≈0.14%，低于cutoff，建議結(jié)合NGS復(fù)測或動態(tài)監(jiān)測。9.【填空】在CFTRΔF508突變檢測中，3堿基缺失導(dǎo)致PCR產(chǎn)物長度由______bp變?yōu)開_____bp。答案：98；9510.【簡答】簡述qPCR中“ΔRn”概念及其在閾值設(shè)定中的作用。答案：ΔRn=Rn(樣本)Rn(基線)，用于去除背景熒光；閾值設(shè)定于ΔRn指數(shù)擴增期的幾何階段，確保Ct值與起始模板對數(shù)呈線性。二、核酸提取與質(zhì)量控制11.【單項選擇】血漿游離DNA提取，磁珠法最后一步洗脫體積為50μl，若Qubit測得濃度0.8ng/μl，則總回收量約為A.20ngB.30ngC.40ngD.50ng答案：C解析：0.8×50=40ng，考慮10%測量誤差，最接近40ng。12.【單項選擇】提取RNA后，Agilent2100RIN=5.8，提示A.RNA完整性好B.輕度降解C.重度降解D.有基因組DNA污染答案：B解析：RIN≥7為完整，46為輕度降解。13.【單項選擇】哪種試劑可有效去除gDNA污染以獲得高純度RNAA.蛋白酶KB.DNaseIC.RNaseAD.CTAB答案：B14.【多項選擇】關(guān)于cfDNA片段特征，正確的是A.主峰約166bpB.腫瘤患者可見90bp小峰C.EDTA管保存>72h片段會縮短D.片段大小與核小體定位相關(guān)答案：ABD解析：EDTA管保存過久cfDNA總量減少但主峰不變。15.【案例分析】提取石蠟包埋組織DNA，Qubit濃度12ng/μl，260/280=1.05，260/230=0.65，PCR擴增失敗，最可能原因及改進措施？答案：260/230<1表明鹽或有機溶劑污染，抑制Taq活性；改進：增加80%乙醇洗滌次數(shù)，延長干燥時間，稀釋模板降低抑制物濃度。16.【填空】用于評估NGS文庫質(zhì)量的Bioanalyzer指標(biāo)中，主峰前方小峰稱為______峰，提示______。答案：接頭二聚體；文庫構(gòu)建過量接頭未純化干凈17.【簡答】解釋“溶血”對血漿核酸檢測結(jié)果的影響機制。答案：溶血釋放大量gDNA和血紅蛋白，gDNA稀釋目標(biāo)cfDNA導(dǎo)致假陰性；血紅蛋白含F(xiàn)e2?抑制Taq酶活性，降低擴增效率。三、高通量測序與生物信息學(xué)18.【單項選擇】IlluminaNovaSeq6000S4流動槽單端150bp模式，官方通量約A.1GbB.20GbC.200GbD.2000Gb答案：D19.【單項選擇】腫瘤組織NGS檢測，平均測序深度1000×?xí)r，突變豐度0.5%的理論檢出讀長數(shù)為A.1B.5C.10D.20答案：B解析：1000××0.5%=5條突變讀長。20.【單項選擇】BWAMEM比對時，標(biāo)記為“XA”的字段表示A.次優(yōu)比對位置B.讀長質(zhì)量C.插入長度D.配對信息答案：A21.【單項選擇】GATKBestPractice中BQSR步驟主要校正A.比對錯誤B.堿基質(zhì)量分?jǐn)?shù)C.插入缺失D.重復(fù)序列答案：B22.【單項選擇】腫瘤突變負(fù)荷（TMB）計算單位通常表示為A.突變/MbB.突變/GbC.突變/外顯子D.突變/樣本答案：A23.【多項選擇】下列哪些變異類型可被NGS靶向捕獲檢出A.SNPB.InDelC.CNVD.融合基因答案：ABCD24.【多項選擇】可能導(dǎo)致NGS假陰性的技術(shù)因素A.引物結(jié)合區(qū)SNPB.捕獲探針覆蓋不足C.測序深度過低D.UMI糾錯過度答案：ABC25.【案例分析】患者外周血NGS檢測BRAFV600E，突變豐度0.3%，但ddPCR復(fù)測陰性，分析可能原因并給出解決方案。答案：NGS可能因測序錯誤或PCR早期污染導(dǎo)致假陽性；解決方案：使用UMI重新分析數(shù)據(jù)，過濾低頻突變；ddPCR設(shè)計跨內(nèi)含子引物避免偽基因，提高靈敏度至0.01%。26.【填空】人類參考基因組GRCh38中，線粒體染色體編號為______。答案：chrM27.【簡答】簡述“分子標(biāo)簽（UMI）”在低頻突變檢測中的作用原理。答案：UMI為隨機短序列，連接于文庫接頭，同一模板來源的讀長具相同UMI；比對后按UMI分組，可去除PCR擴增及測序錯誤，真實突變需在同組多條讀長中一致出現(xiàn)，提高信噪比。四、遺傳病與藥物基因組學(xué)28.【單項選擇】CYP2C192突變導(dǎo)致酶活性A.增強B.無影響C.降低D.完全喪失答案：C29.【單項選擇】脊髓性肌萎縮癥（SMA）分子診斷首選檢測A.SMN1外顯子7缺失B.SMN2拷貝數(shù)C.SMN1點突變D.NEURAPIN基因答案：A30.【單項選擇】華法林藥物基因組學(xué)模型中，最重要的非遺傳因素是A.年齡B.體重C.性別D.飲食答案：A31.【單項選擇】地中海貧血基因檢測，GapPCR無法檢出A.–SEA缺失B.–α3.7缺失C.HbConstantSpringD.–α4.2缺失答案：C解析：HbCS為點突變，非缺失型。32.【多項選擇】下列哪些基因變異與奧氮平代謝相關(guān)A.CYP1A2B.CYP2D6C.CYP3A4D.ABCB1答案：ABC33.【案例分析】新生兒足跟血Sanger測序發(fā)現(xiàn)GJB2c.235delC純合突變，聽力篩查未通過，家長拒絕進一步檢查，給出遺傳咨詢要點。答案：GJB2c.235delC為常隱致聾突變，純合導(dǎo)致重度語前聾；建議盡早佩戴助聽器或人工耳蝸，父母為攜帶者，再生育風(fēng)險25%，建議產(chǎn)前基因診斷。34.【填空】DMD基因外顯子______至______區(qū)域為缺失熱點，稱為“中央缺失熱點區(qū)”。答案：45；5235.【簡答】解釋“單倍型”在藥物基因組學(xué)中的臨床意義。答案：單倍型為同一染色體上緊密連鎖的等位基因組合，可共同影響藥物代謝酶活性；如CYP2D610由多個SNP組成，亞洲人群頻率高，導(dǎo)致酶活性下降，需降低曲馬多等藥物劑量，避免毒性。五、腫瘤分子病理與伴隨診斷36.【單項選擇】非小細(xì)胞肺癌ROS1融合檢測，F(xiàn)ISH斷裂探針判讀陽性標(biāo)準(zhǔn)為A.>5%細(xì)胞紅綠分離≥1信號直徑B.>10%C.>15%D.>50%答案：C37.【單項選擇】結(jié)直腸癌MSI檢測，BAT25片段長度變化≥______bp判定為不穩(wěn)定。A.1B.2C.3D.7答案：B38.【單項選擇】PDL122C3抗體檢測，CPS判讀需計數(shù)A.腫瘤細(xì)胞B.免疫細(xì)胞C.腫瘤細(xì)胞+免疫細(xì)胞D.淋巴細(xì)胞答案：C39.【單項選擇】IDH1R132H突變導(dǎo)致酶活性A.喪失并獲新功能B.增強C.無變化D.降低50%答案：A40.【多項選擇】下列哪些基因?qū)儆谕粗亟M修復(fù)通路A.BRCA1B.BRCA2C.PALB2D.ATM答案：ABCD41.【案例分析】患者女，45歲，卵巢癌術(shù)后，HRD評分42，BRCA1野生型，給出PARP抑制劑用藥依據(jù)及監(jiān)測策略。答案：HRD≥42為陽性，提示對奧拉帕利敏感；建議維持治療，每3月監(jiān)測CA125及影像學(xué)，注意骨髓抑制，若復(fù)發(fā)需重新活檢排除克隆演化。42.【填空】NTRK融合基因檢測，RNANGS優(yōu)于DNANGS的原因是______。答案：可檢測罕見內(nèi)含子斷點及閱讀框保留，避免大內(nèi)含子區(qū)域探針覆蓋不足43.【簡答】簡述“腫瘤異質(zhì)性”對分子檢測的影響。答案：空間異質(zhì)性導(dǎo)致穿刺樣本不能代表全貌，出現(xiàn)假陰；時間異質(zhì)性使治療前后突變譜變化，需動態(tài)監(jiān)測；克隆異質(zhì)性使低豐度耐藥克隆易被掩蓋，需高靈敏度方法。六、感染性疾病分子診斷44.【單項選擇】COVID19RTPCR檢測，ORF1ab基因Ct=38，N基因Ct=35，依據(jù)WHO指南判讀A.陽性B.陰性C.復(fù)檢D.報告不確定答案：C解析：雙靶標(biāo)不一致需復(fù)檢。45.【單項選擇】結(jié)核分枝桿菌rpoB基因突變導(dǎo)致利福平耐藥，最常見位點為A.S450LB.D435VC.H445YD.S431F答案：A46.【單項選擇】HPVE6/E7mRNA檢測優(yōu)于DNA檢測的原因是A.避免一過性感染B.靈敏度更高C.成本更低D.操作更簡單答案：A47.【單項選擇】HBVDNA定量，內(nèi)標(biāo)法可校正A.采樣誤差B.擴增抑制C.點突變D.引物二聚體答案：B48.【多項選擇】下列哪些病原體可使用16SrDNA通用引物檢測A.金黃色葡萄球菌B.銅綠假單胞菌C.白色念珠菌D.大腸埃希菌答案：ABD49.【案例分析】患者男，35歲，HIV1RNA1.2×10?cop