ICS11.220

CCSB41DB2312

黑龍江省綏化市地方標(biāo)準(zhǔn)

DB2312/T087—2023

胚培養(yǎng)滅活疫苗用種雞蛋

檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程

2023-11-30發(fā)布2024-01-01實(shí)施

綏化市市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布

DB2312/T087—2023

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。

本文件由綏化市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局歸口。

本文件起草單位：黑龍江省百洲生物工程有限公司、明水縣農(nóng)業(yè)綜合行政執(zhí)法大隊(duì)。

本文件主要起草人：李山峰、張洪楠、張?jiān)?、王丹、王海楠、王東升。

I

DB2312/T087—2023

胚培養(yǎng)滅活疫苗用種雞蛋檢驗(yàn)技術(shù)操作規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了胚培養(yǎng)滅活疫苗的種雞蛋的蛋重、蛋形、孵化率、蛋殼表面細(xì)菌含量、蛋內(nèi)容物細(xì)菌

含量、卵黃抗體、病原7項(xiàng)檢驗(yàn)方法。

本文件適用于獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)對(duì)胚培養(yǎng)滅活疫苗用種雞蛋檢測(cè)及質(zhì)量考察。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T16550雞新城疫診斷技術(shù)

GB/T19167傳染性法氏囊病診斷技術(shù)

GB/T23197雞傳染性支氣管炎診斷技術(shù)

NY/T551雞產(chǎn)蛋下降綜合征診斷技術(shù)

NY/T772禽流感病毒RT-PCR檢測(cè)方法

SN/T4053雞傳染性貧血檢疫技術(shù)規(guī)范

《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020年版（三部）

3術(shù)語(yǔ)和定義

本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。

4主要技術(shù)內(nèi)容

4.1蛋重

使用電子天平稱重（精度為0.1g），應(yīng)控制在50g～70g之間，且整齊度不大于10g。

4.2蛋形

肉眼觀察應(yīng)為卵圓形，表面光澤無裂紋、沙皮、畸形。

4.3孵化率

將種蛋洗凈、消毒后入孵化器孵化，溫度控制在38℃～38.5℃之間，濕度控制在65%～70%之間，

每60min翻蛋一次，孵化5d～6d，用照蛋燈逐個(gè)照檢，胚胎及血管發(fā)育正常為合格，孵化率應(yīng)大于90%。

4.4蛋殼表面細(xì)菌含量檢測(cè)

每批抽檢10枚種雞蛋，分別用無菌棉拭子在蛋殼表面擦拭1cm2面積后馬上折斷棉拭子頭放入準(zhǔn)備

好的含10ml生理鹽水的無菌瓶?jī)?nèi)，將無菌瓶放在振蕩器上200r/min振蕩10min，在超凈工作臺(tái)內(nèi)分別

吸取0.1ml生理鹽水，涂布于TSA培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)48h，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，為消毒效果提供數(shù)據(jù)指

導(dǎo)。

4.5蛋內(nèi)容物細(xì)菌含量檢測(cè)

每批抽檢10枚種雞蛋，打開蛋殼倒出蛋清和蛋黃，按1：2加入無菌生理鹽水用無菌組織搗碎機(jī)勻

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DB2312/T087—2023

漿，在超凈工作臺(tái)內(nèi)分別吸取0.1ml生理鹽水，涂布于TSA培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)48h，統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，

為產(chǎn)品生產(chǎn)過程控制以及追溯提供數(shù)據(jù)支撐。

4.6卵黃抗體

每批抽檢10枚種雞蛋，卵黃直接稀釋測(cè)定法檢測(cè)：在樣品管中加入0.5ml0.9%生理鹽水，再吸取

0.5ml卵黃做1:1稀釋，混勻后即為待檢卵黃樣品，依照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020版三部附錄血

凝抑制試驗(yàn)方法測(cè)定，判定結(jié)果時(shí)以完全抑制4HA單位抗原的最高稀釋度作為判定終點(diǎn)，卵黃中雞新城

疫、禽流感（H9亞型）或傳染性支氣管炎（M41株)的抗體效價(jià)均應(yīng)小于1：4。

在卵黃直接稀釋測(cè)定法檢測(cè)出現(xiàn)跳孔或測(cè)不出抗體時(shí)，采用卵黃氯仿萃取法檢測(cè)，取上述1:1稀釋

過的卵黃稀釋液0.5ml，在通風(fēng)櫥中加入0.5ml氯仿，震蕩混勻，室溫靜置30min，3000r/min離心5min，

作為待檢卵黃樣品，進(jìn)行HI抗體檢測(cè)，判定結(jié)果時(shí)以完全抑制4HA單位抗原的最高稀釋度作為判定終

點(diǎn)，讀數(shù)加1，卵黃中雞新城疫、禽流感（H9亞型）或雞傳染性支氣管炎（M41株)的抗體效價(jià)均應(yīng)小于

1：4。

4.7外源病毒檢測(cè)

每批抽檢10枚種雞蛋，打開蛋殼倒出蛋清和蛋黃，用無菌組織搗碎機(jī)勻漿，重點(diǎn)檢測(cè)經(jīng)胚垂直傳

播的病原體。

按照NY/T772的規(guī)定檢測(cè)禽流感，應(yīng)為陰性；

按照GB/T16550的規(guī)定檢測(cè)雞新城疫，應(yīng)為陰性；

按照GB/T23197的規(guī)定檢測(cè)雞傳染性支氣管炎，應(yīng)為陰性；

按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020版三部附錄3302ELISA方法檢測(cè)禽白血病，應(yīng)為陰性；

按照《中華人民共和國(guó)獸藥典》2020版三部附錄3304間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA)方法檢測(cè)禽網(wǎng)狀內(nèi)

皮增生癥，應(yīng)為陰性；

按照GB/T19167的規(guī)定檢測(cè)雞傳染性法氏囊病，應(yīng)為陰性；

按照SN/T4053的規(guī)定檢測(cè)雞傳染性貧血，應(yīng)為陰性；

按照NY/T551的規(guī)定檢測(cè)產(chǎn)蛋下降綜合征，應(yīng)為陰性。

5檢驗(yàn)記錄

填寫檢驗(yàn)記錄，并建