多發(fā)性硬化患者血清IL-33及IL-35水平變化與臨床意義的深度剖析一、引言1.1研究背景多發(fā)性硬化（MultipleSclerosis，MS）是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)炎性脫髓鞘病變?yōu)橹饕攸c(diǎn)的自身免疫性疾病，其主要的病理改變?yōu)闀r(shí)間及空間多發(fā)性的脫髓鞘和軸索損害，影像學(xué)常表現(xiàn)為新鮮及陳舊并存的多部位硬化病灶，即硬化斑。據(jù)統(tǒng)計(jì)，全球約有250萬(wàn)人受其影響，且發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。我國(guó)雖屬于低發(fā)區(qū)，但近年來(lái)病例數(shù)也在逐漸增加。MS好發(fā)于青壯年，發(fā)病高峰年齡在20-40歲之間，女性多于男性，比例約為2:1。MS的病因和發(fā)病機(jī)制至今尚未完全明確，目前認(rèn)為，它是在遺傳易感個(gè)體的基礎(chǔ)上，由環(huán)境因素觸發(fā)，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能紊亂，錯(cuò)誤地攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘，引發(fā)炎癥和脫髓鞘病變。其中，自身免疫反應(yīng)在MS的發(fā)病過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。當(dāng)免疫系統(tǒng)失衡時(shí)，T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞等免疫細(xì)胞被異常激活，它們通過(guò)受損的血腦屏障進(jìn)入腦組織，針對(duì)髓鞘堿性蛋白產(chǎn)生自身免疫反應(yīng)。T細(xì)胞分泌大量炎性細(xì)胞因子和趨化因子，招募炎癥細(xì)胞，引發(fā)炎性破壞；B細(xì)胞產(chǎn)生針對(duì)髓鞘堿性蛋白的自身抗體，通過(guò)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用引起髓鞘損害和軸索損傷。髓鞘損傷和髓鞘脫失會(huì)中斷正常的神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)，進(jìn)而導(dǎo)致患者出現(xiàn)各種神經(jīng)功能障礙癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，且隨著病情的進(jìn)展，多數(shù)患者會(huì)逐漸走向殘疾。細(xì)胞因子（cytokine，CK）作為免疫細(xì)胞分泌的一類小分子蛋白質(zhì)，在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮著廣泛而重要的調(diào)節(jié)作用，它們?cè)趩?dòng)、維持和調(diào)節(jié)組織特異性自身免疫損傷等方面扮演著關(guān)鍵角色。在MS的發(fā)病機(jī)制中，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的失衡被認(rèn)為是導(dǎo)致免疫紊亂和炎癥反應(yīng)的重要因素之一。促炎性細(xì)胞因子和抑炎性細(xì)胞因子之間的平衡失調(diào)，會(huì)影響輔助性T細(xì)胞1（Th1）/輔助性T細(xì)胞2（Th2）型細(xì)胞之間的平衡，進(jìn)而影響自身免疫性疾病的發(fā)展和臨床轉(zhuǎn)歸。例如，Th1型細(xì)胞分泌的γ干擾素等促炎性細(xì)胞因子可促進(jìn)炎癥反應(yīng)，加重組織損傷；而Th2型細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-4（IL-4）等抑炎性細(xì)胞因子則具有抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用，有助于減輕炎癥損傷。因此，深入研究細(xì)胞因子在MS發(fā)病機(jī)制中的作用，對(duì)于揭示MS的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療靶點(diǎn)具有重要意義。白細(xì)胞介素-33（Interleukin-33，IL-33）是近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的IL-1超細(xì)胞因子超家族中的成員之一。IL-33具有多種免疫效應(yīng)，主要參與Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，可促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生，調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞的功能，并在調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫應(yīng)答之間的平衡中發(fā)揮關(guān)鍵作用。最近有研究報(bào)道，IL-33與實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（ExperimentalAutoimmuneEncephalomyelitis，EAE）的發(fā)生相關(guān)，EAE是MS的經(jīng)典動(dòng)物模型，這提示IL-33作為促炎性細(xì)胞因子，可能在中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病，如MS的病理生理學(xué)改變和功能中發(fā)揮主要作用。例如，在EAE模型中，IL-33的表達(dá)上調(diào)，可促進(jìn)Th2細(xì)胞的活化和增殖，釋放更多的促炎性細(xì)胞因子，加重炎癥反應(yīng)和神經(jīng)損傷。然而，IL-33在MS患者體內(nèi)的具體作用機(jī)制和表達(dá)變化情況，仍有待進(jìn)一步深入研究。白細(xì)胞介素-35（Interleukin-35，IL-35）是最新發(fā)現(xiàn)的IL-12超家族成員之一。IL-35能夠通過(guò)促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（RegulatoryTcells，Tregs）的增殖、增強(qiáng)Tregs的免疫抑制作用、抑制Th17細(xì)胞的分化及促炎性細(xì)胞因子IL-17等的產(chǎn)生，從而發(fā)揮免疫抑制的作用。在研究EAE動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)，由于2D2TCR和C57BL6轉(zhuǎn)基因的小鼠缺乏EBl3基因（IL-35的組成部分），從而加重了髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白肽段免疫所致的EAE的臨床癥狀，盡管這種加重可能只是輕微的，但這也提示IL-35作為抑炎性細(xì)胞因子，在中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病，如MS的病理生理學(xué)改變和功能中可能發(fā)揮重要作用。例如，在EAE模型中，給予外源性IL-35可抑制Th17細(xì)胞的分化，減少I(mǎi)L-17等促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而減輕炎癥反應(yīng)和神經(jīng)損傷。然而，IL-35在MS患者體內(nèi)的表達(dá)水平及其與疾病活動(dòng)度、臨床癥狀之間的關(guān)系，目前尚不清楚。鑒于IL-33和IL-35在免疫系統(tǒng)中的重要作用以及在MS相關(guān)研究中的潛在意義，本研究旨在通過(guò)測(cè)定復(fù)發(fā)-緩解型MS患者血清中IL-33、IL-35的濃度，探討它們?cè)趶?fù)發(fā)-緩解型MS患者病程中可能發(fā)揮的作用，為MS的免疫治療提供進(jìn)一步的理論依據(jù)和潛在治療靶點(diǎn)。同時(shí)，采用擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分量表（ExpandedDisabilityStatusScales，EDSS）評(píng)價(jià)MS患者的神經(jīng)功能缺損程度，分析IL-33、IL-35水平與神經(jīng)功能缺損程度之間的相關(guān)性，以期為MS的臨床診斷、病情評(píng)估和治療效果監(jiān)測(cè)提供新的指標(biāo)和方法。1.2研究目的本研究旨在通過(guò)精準(zhǔn)測(cè)定復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者血清中白細(xì)胞介素-33（IL-33）、白細(xì)胞介素-35（IL-35）的濃度，深入探討它們?cè)趶?fù)發(fā)-緩解型MS患者病程中所扮演的角色和發(fā)揮的作用。一方面，明確IL-33、IL-35水平與MS疾病活動(dòng)度之間的關(guān)聯(lián)，分析其是否可作為評(píng)估疾病進(jìn)展和復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)的潛在生物標(biāo)志物；另一方面，采用擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分量表（EDSS）科學(xué)評(píng)價(jià)MS患者的神經(jīng)功能缺損程度，進(jìn)一步探究IL-33、IL-35水平與神經(jīng)功能缺損程度之間的相關(guān)性，為MS的早期診斷、病情監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)估提供新的思路和方法。此外，通過(guò)本研究，期望能夠?yàn)镸S的免疫治療提供更堅(jiān)實(shí)的理論依據(jù)，挖掘IL-33、IL-35作為潛在治療靶點(diǎn)的可能性，為開(kāi)發(fā)更有效的免疫治療策略奠定基礎(chǔ)，從而改善MS患者的臨床結(jié)局，提高其生活質(zhì)量。1.3研究意義本研究對(duì)復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者血清中白細(xì)胞介素-33（IL-33）、白細(xì)胞介素-35（IL-35）水平的變化及其臨床意義展開(kāi)深入探究，具有重要的理論與實(shí)踐意義。從理論層面來(lái)看，MS的發(fā)病機(jī)制極為復(fù)雜，至今尚未完全明晰。細(xì)胞因子在MS的免疫致病過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，然而，IL-33和IL-35在MS發(fā)病機(jī)制中的具體作用及二者之間的相互關(guān)系，仍存在諸多未知。本研究通過(guò)精準(zhǔn)測(cè)定復(fù)發(fā)-緩解型MS患者血清中IL-33和IL-35的濃度，深入分析它們?cè)诩膊〔煌A段的變化規(guī)律，有助于進(jìn)一步揭示MS的發(fā)病機(jī)制，豐富我們對(duì)自身免疫性疾病免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的認(rèn)識(shí)，為后續(xù)相關(guān)研究提供更為堅(jiān)實(shí)的理論基礎(chǔ)。例如，若研究發(fā)現(xiàn)IL-33在疾病復(fù)發(fā)期顯著升高，且與炎癥反應(yīng)的增強(qiáng)密切相關(guān)，那么這將進(jìn)一步證實(shí)其作為促炎性細(xì)胞因子在MS發(fā)病初期啟動(dòng)免疫反應(yīng)的重要作用；而IL-35在緩解期的升高及其與病情緩解的關(guān)聯(lián)，則能為我們理解其免疫抑制機(jī)制在控制疾病進(jìn)展方面的作用提供關(guān)鍵線索。在實(shí)踐應(yīng)用方面，本研究成果具有多方面的重要價(jià)值。在疾病診斷和病情評(píng)估領(lǐng)域，當(dāng)前MS的診斷主要依賴于臨床癥狀、影像學(xué)檢查以及腦脊液分析等，但這些方法存在一定的局限性，且缺乏特異性的生物標(biāo)志物用于準(zhǔn)確判斷疾病的活動(dòng)度和預(yù)后。若本研究能夠明確IL-33和IL-35水平與MS疾病活動(dòng)度、神經(jīng)功能缺損程度之間的相關(guān)性，那么它們有望成為新的生物標(biāo)志物，為MS的早期診斷、病情監(jiān)測(cè)以及預(yù)后評(píng)估提供更為客觀、準(zhǔn)確的指標(biāo)。例如，通過(guò)定期檢測(cè)患者血清中IL-33和IL-35的水平，醫(yī)生可以更及時(shí)地了解疾病的進(jìn)展情況，預(yù)測(cè)疾病的復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)，從而為患者制定更為個(gè)性化的治療方案。在治療方案制定和新藥研發(fā)方面，目前MS的治療主要包括免疫調(diào)節(jié)治療、對(duì)癥治療等，但仍存在治療效果有限、副作用較大等問(wèn)題。深入了解IL-33和IL-35在MS發(fā)病機(jī)制中的作用，有助于挖掘新的治療靶點(diǎn)，為開(kāi)發(fā)更有效的免疫治療策略提供理論依據(jù)。例如，如果證實(shí)IL-33的過(guò)度表達(dá)是導(dǎo)致MS炎癥反應(yīng)加劇的關(guān)鍵因素，那么研發(fā)針對(duì)IL-33的抑制劑或拮抗劑，可能成為一種新的治療方法；同樣，增強(qiáng)IL-35的免疫抑制作用，也可能為MS的治療開(kāi)辟新的途徑。這不僅有助于改善MS患者的臨床結(jié)局，提高其生活質(zhì)量，還能為醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展帶來(lái)新的機(jī)遇。綜上所述，本研究對(duì)于深入理解MS的發(fā)病機(jī)制、推動(dòng)臨床診斷和治療技術(shù)的進(jìn)步具有重要意義，有望為MS患者帶來(lái)更好的治療前景。二、多發(fā)性硬化與相關(guān)細(xì)胞因子的理論基礎(chǔ)2.1多發(fā)性硬化概述2.1.1定義與臨床特點(diǎn)多發(fā)性硬化（MultipleSclerosis，MS）是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)白質(zhì)炎性脫髓鞘病變?yōu)橹饕卣鞯淖陨砻庖咝约膊?。其病理特征表現(xiàn)為時(shí)間和空間上的多發(fā)性，即在不同時(shí)間出現(xiàn)新的病灶，且病灶分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多個(gè)部位，如腦室周?chē)踪|(zhì)、視神經(jīng)、脊髓、腦干和小腦等。這使得MS的臨床表現(xiàn)極為復(fù)雜多樣，且因人而異。MS好發(fā)于青壯年人群，發(fā)病高峰年齡通常在20-40歲之間，女性患者的數(shù)量約為男性的2倍。其臨床癥狀具有空間多發(fā)性和時(shí)間多發(fā)性的特點(diǎn)?？臻g多發(fā)性是指患者可同時(shí)出現(xiàn)多個(gè)不同部位的神經(jīng)功能障礙癥狀；時(shí)間多發(fā)性則表現(xiàn)為病情的緩解與復(fù)發(fā)交替出現(xiàn)，每次復(fù)發(fā)后可能會(huì)殘留部分神經(jīng)功能缺損癥狀，隨著復(fù)發(fā)次數(shù)的增加，患者的神經(jīng)功能障礙逐漸加重，最終可能導(dǎo)致嚴(yán)重的殘疾。常見(jiàn)的臨床癥狀包括肢體無(wú)力，患者可出現(xiàn)單側(cè)或雙側(cè)肢體的無(wú)力，嚴(yán)重程度不一，從輕微的活動(dòng)耐力下降到完全癱瘓都有可能發(fā)生。視力障礙也是MS常見(jiàn)的首發(fā)癥狀之一，可表現(xiàn)為急性視神經(jīng)炎，出現(xiàn)視力下降、眼球疼痛，尤其是在眼球轉(zhuǎn)動(dòng)時(shí)疼痛加劇，部分患者還可能出現(xiàn)視野缺損、色覺(jué)異常等。感覺(jué)異常也較為常見(jiàn)，患者可能會(huì)出現(xiàn)肢體麻木、刺痛、燒灼感、瘙癢感等，還可能出現(xiàn)深感覺(jué)障礙，導(dǎo)致行走不穩(wěn)、共濟(jì)失調(diào)等。此外，MS患者還可能出現(xiàn)平衡障礙，表現(xiàn)為站立或行走時(shí)不穩(wěn)，容易摔倒，這與小腦或脊髓小腦束受累有關(guān)。部分患者會(huì)出現(xiàn)膀胱和直腸功能障礙，如尿頻、尿急、尿失禁、排尿困難、便秘或大便失禁等，這嚴(yán)重影響了患者的日常生活質(zhì)量。在精神癥狀方面，患者可能出現(xiàn)抑郁、焦慮、認(rèn)知障礙等，認(rèn)知障礙可表現(xiàn)為記憶力減退、注意力不集中、執(zhí)行功能下降等，對(duì)患者的工作和社交產(chǎn)生負(fù)面影響。2.1.2發(fā)病機(jī)制研究現(xiàn)狀盡管經(jīng)過(guò)多年的深入研究，多發(fā)性硬化（MS）的發(fā)病機(jī)制至今仍未完全明確，但目前普遍認(rèn)為，它是在遺傳因素、環(huán)境因素以及自身免疫因素等多種因素的共同作用下，導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能紊亂，錯(cuò)誤地攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)的髓鞘，從而引發(fā)一系列的病理變化。遺傳因素在MS的發(fā)病中起著重要作用。研究表明，MS具有一定的家族聚集性，患者一級(jí)親屬的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)明顯高于普通人群。通過(guò)全基因組關(guān)聯(lián)研究（GWAS），已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多個(gè)與MS易感性相關(guān)的基因位點(diǎn)，這些基因主要參與免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等生物學(xué)過(guò)程。例如，人類白細(xì)胞抗原（HLA）基因與MS的關(guān)聯(lián)最為密切，其中HLA-DRB1*15:01等位基因被認(rèn)為是MS最重要的遺傳風(fēng)險(xiǎn)因素之一。攜帶該等位基因的個(gè)體，其免疫系統(tǒng)對(duì)自身髓鞘抗原的識(shí)別和應(yīng)答可能存在異常，從而增加了MS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。然而，遺傳因素并不能完全解釋MS的發(fā)病，環(huán)境因素在MS的發(fā)生發(fā)展中也起著不可或缺的作用。環(huán)境因素對(duì)MS的發(fā)病影響廣泛。研究發(fā)現(xiàn)，MS的發(fā)病率存在明顯的地域差異，高緯度地區(qū)的發(fā)病率明顯高于低緯度地區(qū)。這可能與紫外線照射、維生素D水平等因素有關(guān)。紫外線照射可以促進(jìn)皮膚合成維生素D，而維生素D具有免疫調(diào)節(jié)作用，能夠抑制自身免疫反應(yīng)。低緯度地區(qū)陽(yáng)光充足，人們接受紫外線照射的機(jī)會(huì)較多，體內(nèi)維生素D水平相對(duì)較高，可能降低了MS的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。此外，病毒感染也被認(rèn)為是MS發(fā)病的重要環(huán)境因素之一。多項(xiàng)研究表明，EB病毒（Epstein-Barrvirus，EBV）感染與MS的發(fā)病密切相關(guān)。EBV是一種常見(jiàn)的人類皰疹病毒，感染后可潛伏在B淋巴細(xì)胞中。在某些情況下，EBV可能激活免疫系統(tǒng)，引發(fā)針對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)髓鞘的自身免疫反應(yīng)。其具體機(jī)制可能是EBV的某些抗原與髓鞘抗原存在相似性，免疫系統(tǒng)在識(shí)別EBV抗原的同時(shí)，錯(cuò)誤地攻擊了髓鞘，導(dǎo)致髓鞘脫失和神經(jīng)損傷。自身免疫反應(yīng)在MS的發(fā)病機(jī)制中占據(jù)核心地位。當(dāng)免疫系統(tǒng)受到遺傳和環(huán)境因素的影響而失衡時(shí)，外周的自身反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞被異常激活。這些激活的T細(xì)胞通過(guò)受損的血腦屏障進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，針對(duì)髓鞘堿性蛋白等自身抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答。T細(xì)胞分泌大量的促炎性細(xì)胞因子，如γ干擾素（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，這些細(xì)胞因子可以激活巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞等炎癥細(xì)胞，使其釋放更多的炎癥介質(zhì)，如一氧化氮、活性氧等，導(dǎo)致髓鞘損傷和軸索損傷。同時(shí)，B細(xì)胞也參與了MS的發(fā)病過(guò)程。B細(xì)胞被激活后分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生針對(duì)髓鞘堿性蛋白的自身抗體。這些抗體可以通過(guò)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用（CDC）等機(jī)制，進(jìn)一步損傷髓鞘和軸索。此外，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）等免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞的功能異常，也可能導(dǎo)致免疫系統(tǒng)無(wú)法有效控制自身免疫反應(yīng)，從而加重MS的病情。在MS的發(fā)病機(jī)制中，細(xì)胞因子發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。細(xì)胞因子是一類由免疫細(xì)胞和其他細(xì)胞分泌的小分子蛋白質(zhì)，它們?cè)诿庖呒?xì)胞的活化、增殖、分化以及炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)中起著關(guān)鍵作用。在MS患者體內(nèi)，促炎性細(xì)胞因子和抑炎性細(xì)胞因子之間的平衡失調(diào)，被認(rèn)為是導(dǎo)致免疫紊亂和炎癥反應(yīng)失控的重要原因之一。促炎性細(xì)胞因子如IFN-γ、TNF-α、白細(xì)胞介素-1（IL-1）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等，能夠促進(jìn)炎癥細(xì)胞的活化和募集，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致髓鞘脫失和神經(jīng)損傷。例如，IFN-γ可以激活巨噬細(xì)胞，使其釋放更多的炎癥介質(zhì)，同時(shí)還可以促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。TNF-α不僅可以直接損傷髓鞘和軸索，還可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。而抑炎性細(xì)胞因子如白細(xì)胞介素-4（IL-4）、白細(xì)胞介素-10（IL-10）、白細(xì)胞介素-35（IL-35）等，則具有抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫平衡的作用。它們可以抑制促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，促進(jìn)Tregs的增殖和功能，從而減輕炎癥損傷。例如，IL-10可以抑制巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞的活化，減少促炎性細(xì)胞因子的分泌；IL-35能夠促進(jìn)Tregs的增殖，增強(qiáng)其免疫抑制功能，抑制Th17細(xì)胞的分化及促炎性細(xì)胞因子IL-17等的產(chǎn)生。因此，深入研究細(xì)胞因子在MS發(fā)病機(jī)制中的作用，對(duì)于揭示MS的發(fā)病機(jī)制、尋找有效的治療靶點(diǎn)具有重要意義。2.2細(xì)胞因子在自身免疫性疾病中的作用2.2.1細(xì)胞因子的分類與功能細(xì)胞因子是一類由免疫細(xì)胞（如T淋巴細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等）和某些非免疫細(xì)胞（如內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等）經(jīng)刺激而合成、分泌的具有廣泛生物學(xué)活性的小分子蛋白質(zhì)。它們?cè)诿庖哒{(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和凋亡等多種生理和病理過(guò)程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。根據(jù)細(xì)胞因子的主要功能和結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，可將其分為以下幾類：白細(xì)胞介素（Interleukin，IL），這是一組在白細(xì)胞之間起免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子，目前已發(fā)現(xiàn)超過(guò)30種，如IL-1、IL-2、IL-3等，它們參與免疫細(xì)胞的活化、增殖、分化以及炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。例如，IL-1可激活T細(xì)胞，促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，引發(fā)炎癥反應(yīng)；IL-2能刺激T細(xì)胞和NK細(xì)胞的增殖與活化，增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能。干擾素（Interferon，IFN），具有抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)等多種功能，根據(jù)來(lái)源和結(jié)構(gòu)可分為IFN-α、IFN-β和IFN-γ等。IFN-α和IFN-β主要由病毒感染的細(xì)胞產(chǎn)生，可干擾病毒的復(fù)制，抑制病毒感染的擴(kuò)散；IFN-γ則主要由活化的T細(xì)胞和NK細(xì)胞產(chǎn)生，能增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬功能，促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化，調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。腫瘤壞死因子（TumorNecrosisFactor，TNF），包括TNF-α和TNF-β，具有殺傷腫瘤細(xì)胞、調(diào)節(jié)免疫和參與炎癥反應(yīng)等作用。TNF-α主要由單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，在炎癥反應(yīng)中，它可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)，同時(shí)還能直接損傷腫瘤細(xì)胞；TNF-β則主要由活化的T細(xì)胞產(chǎn)生，參與細(xì)胞免疫和炎癥反應(yīng)。集落刺激因子（Colony-StimulatingFactor，CSF），可刺激造血干細(xì)胞和不同發(fā)育階段的造血細(xì)胞增殖、分化，并在半固體培養(yǎng)基中形成細(xì)胞集落，如粒細(xì)胞集落刺激因子（G-CSF）、巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M-CSF）、粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）等。G-CSF可促進(jìn)中性粒細(xì)胞的增殖、分化和成熟，增強(qiáng)其吞噬和殺菌能力；M-CSF能刺激巨噬細(xì)胞的增殖和活化，提高其免疫功能；GM-CSF則對(duì)粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的生成和功能都有促進(jìn)作用。趨化因子（Chemokine），是一類對(duì)不同靶細(xì)胞具有趨化效應(yīng)的細(xì)胞因子，可吸引免疫細(xì)胞向炎癥部位遷移，參與炎癥反應(yīng)和免疫應(yīng)答的調(diào)節(jié)。根據(jù)其結(jié)構(gòu)和功能的不同，可分為CXC、CC、CX3C和XC四個(gè)亞家族。例如，CXC趨化因子中的IL-8主要趨化中性粒細(xì)胞，使其向炎癥部位聚集，發(fā)揮抗感染作用；CC趨化因子中的單核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）則主要趨化單核細(xì)胞，促進(jìn)其在炎癥部位的浸潤(rùn)。生長(zhǎng)因子（GrowthFactor，GF），可促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化，如表皮生長(zhǎng)因子（EGF）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子（FGF）等。EGF能刺激表皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖，促進(jìn)傷口愈合；PDGF可促進(jìn)平滑肌細(xì)胞和成纖維細(xì)胞的增殖，參與組織修復(fù)和血管生成；FGF對(duì)多種細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化都有調(diào)節(jié)作用，在胚胎發(fā)育、組織修復(fù)等過(guò)程中發(fā)揮重要作用。從功能上看，細(xì)胞因子可分為促炎性細(xì)胞因子和抑炎性細(xì)胞因子。促炎性細(xì)胞因子如IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ等，在炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著重要的啟動(dòng)和放大作用。它們能夠激活免疫細(xì)胞，促進(jìn)炎癥介質(zhì)的釋放，增強(qiáng)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)和活化，導(dǎo)致組織損傷和炎癥反應(yīng)的加劇。例如，在感染或組織損傷時(shí)，巨噬細(xì)胞被激活，分泌大量的IL-1和TNF-α。IL-1可刺激T細(xì)胞活化，促進(jìn)其他細(xì)胞因子的產(chǎn)生，同時(shí)還能引起發(fā)熱、急性期蛋白合成增加等全身反應(yīng)；TNF-α則可誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)黏附分子，吸引中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向炎癥部位聚集，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)。此外，IFN-γ可激活巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)其吞噬和殺傷病原體的能力，同時(shí)也能促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。然而，過(guò)度的促炎性細(xì)胞因子反應(yīng)可能導(dǎo)致炎癥失控，引發(fā)自身免疫性疾病、感染性休克等病理狀態(tài)。抑炎性細(xì)胞因子如IL-4、IL-10、IL-35、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（TGF-β）等，則具有抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫平衡的作用。它們能夠抑制促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性，促進(jìn)炎癥的消退和組織修復(fù)。例如，IL-10主要由Th2細(xì)胞、單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞產(chǎn)生，它可以抑制巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞的活化，減少促炎性細(xì)胞因子的分泌，從而發(fā)揮抗炎作用。IL-35能夠促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的增殖，增強(qiáng)其免疫抑制功能，抑制Th17細(xì)胞的分化及促炎性細(xì)胞因子IL-17等的產(chǎn)生。TGF-β可抑制免疫細(xì)胞的增殖和活化，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成，有利于組織修復(fù)和炎癥的消退。在正常生理狀態(tài)下，促炎性細(xì)胞因子和抑炎性細(xì)胞因子之間保持著動(dòng)態(tài)平衡，共同維持機(jī)體的免疫穩(wěn)定。當(dāng)這種平衡被打破時(shí)，如在自身免疫性疾病中，促炎性細(xì)胞因子的過(guò)度表達(dá)或抑炎性細(xì)胞因子的功能缺陷，都可能導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能紊亂，引發(fā)炎癥反應(yīng)和組織損傷。2.2.2細(xì)胞因子與多發(fā)性硬化的關(guān)系多發(fā)性硬化（MS）作為一種自身免疫性疾病，其發(fā)病、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸與細(xì)胞因子密切相關(guān)。在MS的發(fā)病機(jī)制中，細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)的失衡起著關(guān)鍵作用，眾多細(xì)胞因子參與了免疫細(xì)胞的活化、炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)與調(diào)節(jié)以及髓鞘的損傷與修復(fù)等過(guò)程。在MS的發(fā)病初期，自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞被激活，這些細(xì)胞主要包括Th1、Th17等細(xì)胞亞群。Th1細(xì)胞分泌大量的促炎性細(xì)胞因子，如γ干擾素（IFN-γ）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等。IFN-γ可激活巨噬細(xì)胞，使其釋放更多的炎癥介質(zhì)，如一氧化氮、活性氧等，這些介質(zhì)能夠損傷髓鞘和軸索。同時(shí)，IFN-γ還可以促進(jìn)Th1細(xì)胞的分化，進(jìn)一步加重炎癥反應(yīng)。研究表明，在MS患者的腦脊液和血清中，IFN-γ的水平明顯升高，且與疾病的活動(dòng)度呈正相關(guān)。TNF-α不僅可以直接損傷髓鞘和軸索，還可以誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的浸潤(rùn)。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型中，阻斷TNF-α的作用可以減輕炎癥反應(yīng)和神經(jīng)損傷。Th17細(xì)胞分泌的白細(xì)胞介素-17（IL-17）等細(xì)胞因子，在MS的發(fā)病中也發(fā)揮著重要作用。IL-17可以招募中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞等炎癥細(xì)胞到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。此外，IL-17還可以誘導(dǎo)其他促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，如IL-6、TNF-α等，形成一個(gè)正反饋環(huán)路，加劇炎癥反應(yīng)。研究發(fā)現(xiàn)，MS患者體內(nèi)Th17細(xì)胞的數(shù)量和IL-17的水平明顯升高，且與疾病的嚴(yán)重程度相關(guān)。除了Th1和Th17細(xì)胞外，B淋巴細(xì)胞在MS的發(fā)病中也起到了重要作用。B淋巴細(xì)胞被激活后，分化為漿細(xì)胞，產(chǎn)生針對(duì)髓鞘堿性蛋白等自身抗原的抗體。這些抗體可以通過(guò)抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用（ADCC）、補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒作用（CDC）等機(jī)制，損傷髓鞘和軸索。同時(shí)，B淋巴細(xì)胞還可以分泌細(xì)胞因子，如IL-6、腫瘤壞死因子-β（TNF-β）等，參與炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)。研究表明，在MS患者的腦脊液中，B淋巴細(xì)胞的數(shù)量和活性明顯增加，且與疾病的活動(dòng)度相關(guān)。細(xì)胞因子不僅參與了MS的發(fā)病過(guò)程，還對(duì)疾病的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸產(chǎn)生重要影響。在MS的進(jìn)展過(guò)程中，持續(xù)的炎癥反應(yīng)會(huì)導(dǎo)致髓鞘的進(jìn)行性損傷和軸索的丟失，最終導(dǎo)致神經(jīng)功能障礙的加重。一些細(xì)胞因子可以促進(jìn)髓鞘的損傷，如IFN-γ、TNF-α、IL-17等；而另一些細(xì)胞因子則可能參與髓鞘的修復(fù)，如胰島素樣生長(zhǎng)因子-1（IGF-1）、血小板衍生生長(zhǎng)因子（PDGF）等。IGF-1可以促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的增殖和分化，使其成熟為少突膠質(zhì)細(xì)胞，從而促進(jìn)髓鞘的修復(fù)。研究發(fā)現(xiàn)，在MS患者中，IGF-1的水平降低，可能與髓鞘修復(fù)障礙有關(guān)。PDGF也可以促進(jìn)少突膠質(zhì)前體細(xì)胞的增殖和存活，參與髓鞘的修復(fù)過(guò)程。此外，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）及其分泌的細(xì)胞因子在MS的免疫調(diào)節(jié)中起著重要作用。Tregs是一類具有免疫抑制功能的T細(xì)胞亞群，能夠抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的活化和增殖，調(diào)節(jié)免疫平衡。Tregs分泌的細(xì)胞因子如IL-10、IL-35、TGF-β等，具有抑制炎癥反應(yīng)、調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞活性的作用。IL-10可以抑制巨噬細(xì)胞和T細(xì)胞的活化，減少促炎性細(xì)胞因子的分泌；IL-35能夠促進(jìn)Tregs的增殖，增強(qiáng)其免疫抑制功能，抑制Th17細(xì)胞的分化及促炎性細(xì)胞因子IL-17等的產(chǎn)生；TGF-β可抑制免疫細(xì)胞的增殖和活化，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的合成，有利于組織修復(fù)和炎癥的消退。在MS患者中，Tregs的數(shù)量和功能可能存在異常，導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)失衡，炎癥反應(yīng)失控。研究表明，增加Tregs的數(shù)量或增強(qiáng)其功能，可以減輕EAE模型的癥狀，提示Tregs及其分泌的細(xì)胞因子可能成為MS治療的新靶點(diǎn)。2.3IL-33和IL-35的生物學(xué)特性與功能2.3.1IL-33的生物學(xué)特性與功能白細(xì)胞介素-33（Interleukin-33，IL-33）是IL-1超細(xì)胞因子超家族的重要成員之一，在免疫調(diào)節(jié)和炎癥反應(yīng)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。IL-33的基因位于人類9號(hào)染色體上，其編碼的蛋白質(zhì)最初是以前體形式合成的，分子量約為30kDa。該前體蛋白包含一個(gè)核定位序列，氨基端具有DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域的螺旋-轉(zhuǎn)角-螺旋結(jié)構(gòu)，這一結(jié)構(gòu)使得IL-33前體蛋白能夠定位于細(xì)胞核內(nèi)。在某些病理情況下，如受到炎癥刺激時(shí)，IL-33前體蛋白可被半胱天冬酶1切割，去除氨基端的部分序列，從而形成分子量約為18kDa的成熟IL-33蛋白。成熟的IL-33蛋白羧基端含有IL-1類分子特有的受體結(jié)合位點(diǎn)，具有生物學(xué)活性。IL-33的來(lái)源較為廣泛，多種細(xì)胞均可產(chǎn)生IL-33。其中，內(nèi)皮細(xì)胞是IL-33的主要來(lái)源之一。內(nèi)皮細(xì)胞廣泛分布于血管內(nèi)壁，在維持血管穩(wěn)態(tài)和調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)中起著重要作用。當(dāng)內(nèi)皮細(xì)胞受到病原體感染、氧化應(yīng)激等刺激時(shí)，可通過(guò)激活相關(guān)信號(hào)通路，上調(diào)IL-33的表達(dá)和分泌。例如，在病毒感染時(shí)，病毒的核酸成分可被內(nèi)皮細(xì)胞表面的模式識(shí)別受體識(shí)別，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，導(dǎo)致IL-33基因的轉(zhuǎn)錄和翻譯增加。上皮細(xì)胞也能分泌IL-33。上皮細(xì)胞覆蓋在人體的體表和各種腔道表面，是機(jī)體抵御外界病原體入侵的第一道防線。在受到損傷或感染時(shí)，上皮細(xì)胞可通過(guò)釋放IL-33來(lái)啟動(dòng)免疫應(yīng)答，招募免疫細(xì)胞到感染部位，增強(qiáng)機(jī)體的免疫防御能力。成纖維細(xì)胞同樣是IL-33的產(chǎn)生細(xì)胞之一。成纖維細(xì)胞在組織修復(fù)和重塑過(guò)程中發(fā)揮重要作用，當(dāng)組織受到損傷時(shí)，成纖維細(xì)胞被激活，分泌IL-33，參與炎癥反應(yīng)和組織修復(fù)過(guò)程。此外，巨噬細(xì)胞、肥大細(xì)胞等免疫細(xì)胞在特定條件下也能產(chǎn)生IL-33。巨噬細(xì)胞作為固有免疫細(xì)胞，在吞噬病原體后，可通過(guò)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)途徑，誘導(dǎo)IL-33的表達(dá)和釋放。肥大細(xì)胞則主要參與過(guò)敏反應(yīng)和炎癥反應(yīng)，在受到過(guò)敏原或炎癥介質(zhì)刺激時(shí)，可分泌IL-33，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的活性。IL-33的受體復(fù)合物由ST2（homologofsulfotransferase）與白細(xì)胞介素-1受體協(xié)同蛋白（IL-1RAcP）組成。ST2是Toll樣/IL-1受體（IL-1R）超家族成員之一，主要表達(dá)于Th2細(xì)胞、肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等免疫細(xì)胞表面。ST2基因可編碼2種蛋白亞型：一種是不帶跨膜序列、可以分泌到細(xì)胞外的可溶性ST2（sST2）；另一種是帶跨膜序列的跨膜型ST2L。sST2在多數(shù)情況下被誘導(dǎo)性地表達(dá)在皮膚、視網(wǎng)膜、乳房腫瘤及胚胎組織上，其可作為一種誘餌受體，與IL-33結(jié)合，從而抑制IL-33與ST2L的結(jié)合，阻斷IL-33的信號(hào)傳導(dǎo)。ST2L則主要表達(dá)于造血細(xì)胞、巨噬細(xì)胞系、紅細(xì)胞系以及骨髓干細(xì)胞系上，在人和鼠的T細(xì)胞系表達(dá)時(shí)被優(yōu)先表達(dá)于Th2細(xì)胞而非Th1細(xì)胞上，因此推測(cè)ST2L可能是Th2細(xì)胞的效應(yīng)標(biāo)志物。IL-1RAcP是IL-1α、IL-1β、IL-1F6、IL-1F8和IL-1F9的共同受體成分，通過(guò)配體依賴方式與ST2相連接。IL-1RAcP的存在可增加IL-33對(duì)ST2的親和力，在IL-33的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起重要作用。當(dāng)IL-33與ST2L/IL-1RAcP受體復(fù)合物結(jié)合后，可激活下游的信號(hào)通路，如MyD88依賴的信號(hào)通路。MyD88是一種接頭蛋白，其與受體復(fù)合物結(jié)合后，可招募一系列下游信號(hào)分子，如IRAKs（白細(xì)胞介素-1受體相關(guān)激酶）和TRAF6（腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子6）等，最終激活NF-κB（核因子-κB）和MAPK（絲裂原活化蛋白激酶）等轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)節(jié)相關(guān)基因的表達(dá)，產(chǎn)生生物學(xué)效應(yīng)。在免疫應(yīng)答中，IL-33具有多種重要功能。IL-33是Th2細(xì)胞反應(yīng)的重要促進(jìn)因子。Th2細(xì)胞在體液免疫和抗寄生蟲(chóng)感染中發(fā)揮關(guān)鍵作用。IL-33可通過(guò)與Th2細(xì)胞表面的ST2L受體結(jié)合，激活Th2細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促進(jìn)Th2細(xì)胞的增殖和分化。研究表明，在哮喘等Th2細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病模型中，給予外源性IL-33可顯著增加Th2細(xì)胞的數(shù)量和活性，促進(jìn)Th2型細(xì)胞因子如IL-4、IL-5、IL-13等的分泌。這些細(xì)胞因子可調(diào)節(jié)B細(xì)胞產(chǎn)生IgE抗體，促進(jìn)嗜酸性粒細(xì)胞的活化和募集，導(dǎo)致氣道炎癥和過(guò)敏反應(yīng)的加劇。在寄生蟲(chóng)感染模型中，IL-33同樣可促進(jìn)Th2細(xì)胞的應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體對(duì)寄生蟲(chóng)的清除能力。IL-33對(duì)肥大細(xì)胞的功能具有重要調(diào)節(jié)作用。肥大細(xì)胞是參與過(guò)敏反應(yīng)和炎癥反應(yīng)的重要免疫細(xì)胞。IL-33可刺激肥大細(xì)胞釋放多種炎癥介質(zhì)，如組胺、白三烯、前列腺素等。這些炎癥介質(zhì)可引起血管擴(kuò)張、通透性增加、平滑肌收縮等生理反應(yīng)，導(dǎo)致局部組織的炎癥和過(guò)敏癥狀。研究發(fā)現(xiàn)，在過(guò)敏性鼻炎患者中，鼻腔黏膜中的IL-33水平升高，可激活肥大細(xì)胞，使其釋放組胺等炎癥介質(zhì)，引起鼻癢、打噴嚏、流涕等癥狀。此外，IL-33還可促進(jìn)肥大細(xì)胞表達(dá)細(xì)胞因子和趨化因子，如IL-6、TNF-α、CCL2等，進(jìn)一步招募免疫細(xì)胞到炎癥部位，加重炎癥反應(yīng)。IL-33在調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫應(yīng)答平衡中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，Th1和Th2細(xì)胞之間保持著動(dòng)態(tài)平衡，共同維持機(jī)體的免疫穩(wěn)定。然而，在某些疾病狀態(tài)下，如自身免疫性疾病、過(guò)敏性疾病等，這種平衡會(huì)被打破。IL-33可通過(guò)促進(jìn)Th2細(xì)胞的活化和增殖，抑制Th1細(xì)胞的功能，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫應(yīng)答的平衡。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型中，IL-33的表達(dá)上調(diào)可抑制Th1細(xì)胞的活性，減少Th1型細(xì)胞因子IFN-γ的分泌，同時(shí)促進(jìn)Th2細(xì)胞的活化，增加Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而減輕EAE的癥狀。這表明IL-33在自身免疫性疾病中可能具有潛在的治療作用。2.3.2IL-35的生物學(xué)特性與功能白細(xì)胞介素-35（Interleukin-35，IL-35）是IL-12超家族的新成員，在免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中扮演著重要角色，對(duì)維持機(jī)體免疫平衡具有關(guān)鍵意義。IL-35是一種異源二聚體細(xì)胞因子，由EB病毒誘導(dǎo)基因3（Epstein-Barrvirus-inducedgene3，EBI3）編碼的蛋白和IL-12的p35亞單位組成。EBI3基因位于人類19號(hào)染色體上，其編碼的EBI3蛋白含有與細(xì)胞因子受體結(jié)合的結(jié)構(gòu)域。IL-12的p35亞單位則由IL12A基因編碼，該基因位于人類3號(hào)染色體上。EBI3蛋白和p35亞單位通過(guò)非共價(jià)鍵結(jié)合形成具有生物學(xué)活性的IL-35分子。這種獨(dú)特的組成結(jié)構(gòu)賦予了IL-35特殊的生物學(xué)功能。IL-35主要由調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（RegulatoryTcells，Tregs）產(chǎn)生。Tregs是一類具有免疫抑制功能的T細(xì)胞亞群，在維持免疫耐受和調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。Tregs可通過(guò)細(xì)胞-細(xì)胞接觸和分泌抑制性細(xì)胞因子等方式，抑制其他免疫細(xì)胞的活化和增殖。當(dāng)Tregs受到抗原刺激或在特定的微環(huán)境中，可表達(dá)和分泌IL-35。此外，B淋巴細(xì)胞在某些情況下也能產(chǎn)生IL-35。例如，在受到EB病毒感染或其他刺激時(shí)，B淋巴細(xì)胞可被激活，上調(diào)EBI3和p35亞單位的表達(dá)，從而合成和分泌IL-35。樹(shù)突狀細(xì)胞（Dendriticcells，DCs）作為重要的抗原呈遞細(xì)胞，在特定條件下也具備產(chǎn)生IL-35的能力。DCs可攝取、加工和呈遞抗原，激活T細(xì)胞免疫應(yīng)答。在免疫調(diào)節(jié)過(guò)程中，DCs可通過(guò)分泌IL-35來(lái)調(diào)節(jié)T細(xì)胞的功能，抑制過(guò)度的免疫反應(yīng)。IL-35的免疫調(diào)節(jié)功能十分顯著。它能夠促進(jìn)Tregs的增殖和功能增強(qiáng)。Tregs在維持免疫耐受和抑制自身免疫反應(yīng)中起著關(guān)鍵作用。IL-35可通過(guò)與Tregs表面的受體結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路，促進(jìn)Tregs的增殖。研究表明，在體外培養(yǎng)體系中，添加IL-35可顯著增加Tregs的數(shù)量。IL-35還能增強(qiáng)Tregs的免疫抑制功能。Tregs可通過(guò)分泌抑制性細(xì)胞因子如IL-10、TGF-β等，以及直接接觸抑制等方式，抑制效應(yīng)T細(xì)胞的活化和增殖。IL-35可進(jìn)一步增強(qiáng)Tregs分泌這些抑制性細(xì)胞因子的能力，提高其免疫抑制活性。在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性疾病模型中，過(guò)表達(dá)IL-35可增加Tregs的數(shù)量和活性，抑制炎癥反應(yīng)，減輕疾病癥狀。IL-35對(duì)輔助性T細(xì)胞17（Th17）細(xì)胞的分化和功能具有抑制作用。Th17細(xì)胞是一類分泌白細(xì)胞介素-17（IL-17）等細(xì)胞因子的T細(xì)胞亞群，在炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。IL-35可抑制Th17細(xì)胞的分化，減少I(mǎi)L-17等促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生。在炎癥微環(huán)境中，IL-35可通過(guò)與Th17細(xì)胞前體細(xì)胞表面的受體結(jié)合，阻斷相關(guān)信號(hào)通路，抑制Th17細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而阻礙Th17細(xì)胞的分化。研究發(fā)現(xiàn)，在多發(fā)性硬化癥、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病患者中，IL-35水平降低，Th17細(xì)胞數(shù)量和活性增加，而給予外源性IL-35可抑制Th17細(xì)胞的分化，減輕炎癥反應(yīng)。IL-35還能抑制其他免疫細(xì)胞的活化和功能。它可以抑制巨噬細(xì)胞的活化，減少其分泌促炎性細(xì)胞因子如TNF-α、IL-6等。IL-35還能抑制自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的細(xì)胞毒性，調(diào)節(jié)B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生等。在感染性疾病模型中，IL-35可通過(guò)抑制免疫細(xì)胞的過(guò)度活化，避免炎癥反應(yīng)對(duì)機(jī)體造成過(guò)度損傷。三、研究設(shè)計(jì)與方法3.1研究對(duì)象3.1.1病例組選擇標(biāo)準(zhǔn)選取[具體時(shí)間段]在[醫(yī)院名稱]神經(jīng)內(nèi)科住院及門(mén)診就診的復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者作為病例組。納入標(biāo)準(zhǔn)如下：所有患者均需符合2017年修訂的McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)，該標(biāo)準(zhǔn)是目前國(guó)際上廣泛應(yīng)用的MS診斷標(biāo)準(zhǔn)，具有較高的敏感性和特異性，通過(guò)綜合評(píng)估患者的臨床癥狀、影像學(xué)表現(xiàn)以及腦脊液檢查結(jié)果等，能夠準(zhǔn)確地診斷MS。發(fā)病時(shí)間需在1年以內(nèi)，這樣可以保證研究對(duì)象處于疾病的早期階段，更有利于觀察細(xì)胞因子水平的變化與疾病初始發(fā)病的關(guān)系?；颊吣挲g需在18-50歲之間，選擇這一年齡段是因?yàn)镸S好發(fā)于青壯年，該年齡段的患者具有典型的疾病特征，且能減少年齡因素對(duì)研究結(jié)果的干擾?；颊咝枰庾R(shí)清楚，能夠配合完成各項(xiàng)檢查和評(píng)估，這是確保研究數(shù)據(jù)準(zhǔn)確性和可靠性的重要前提。此外，患者需簽署知情同意書(shū)，充分尊重患者的知情權(quán)和自主選擇權(quán)，保障患者的合法權(quán)益。排除標(biāo)準(zhǔn)包括：排除合并有其他自身免疫性疾病，如系統(tǒng)性紅斑狼瘡、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎等，因?yàn)檫@些疾病也會(huì)導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能紊亂，細(xì)胞因子水平發(fā)生變化，可能會(huì)對(duì)研究結(jié)果產(chǎn)生干擾。排除患有嚴(yán)重心、肝、腎等重要臟器疾病的患者，這些疾病可能會(huì)影響細(xì)胞因子的代謝和分泌，從而影響研究結(jié)果的準(zhǔn)確性。排除近期（3個(gè)月內(nèi)）使用過(guò)免疫抑制劑、糖皮質(zhì)激素或其他可能影響免疫功能藥物的患者，因?yàn)檫@些藥物會(huì)直接影響免疫系統(tǒng)的功能，導(dǎo)致細(xì)胞因子水平的改變，無(wú)法準(zhǔn)確反映MS患者自身的細(xì)胞因子變化情況。排除有精神疾病史或認(rèn)知障礙，無(wú)法配合完成相關(guān)檢查和評(píng)估的患者，以確保研究過(guò)程的順利進(jìn)行和數(shù)據(jù)的有效性。3.1.2對(duì)照組選擇標(biāo)準(zhǔn)選取同期在[醫(yī)院名稱]進(jìn)行健康體檢的志愿者作為對(duì)照組。入選條件如下：年齡在18-50歲之間，與病例組年齡范圍一致，以消除年齡因素對(duì)細(xì)胞因子水平的影響。無(wú)自身免疫性疾病史、感染性疾病史以及其他慢性疾病史，保證對(duì)照組人群的健康狀態(tài)，使其細(xì)胞因子水平處于正常范圍，以便與病例組進(jìn)行對(duì)比。近期（3個(gè)月內(nèi)）無(wú)感染、外傷及手術(shù)史，避免這些因素導(dǎo)致細(xì)胞因子水平的波動(dòng)，影響對(duì)照的準(zhǔn)確性。同樣，對(duì)照組志愿者需簽署知情同意書(shū)。在性別、年齡等方面，對(duì)照組與病例組進(jìn)行匹配，以確保兩組之間具有可比性。通過(guò)嚴(yán)格按照上述標(biāo)準(zhǔn)選擇對(duì)照組，可以更準(zhǔn)確地觀察和分析病例組中IL-33及IL-35水平的變化及其臨床意義。3.2樣本采集與處理3.2.1采血時(shí)間與方法對(duì)于復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者，分別在復(fù)發(fā)期和緩解期進(jìn)行采血。復(fù)發(fā)期定義為出現(xiàn)新的神經(jīng)功能障礙癥狀或原有癥狀加重，且持續(xù)時(shí)間超過(guò)24小時(shí)，同時(shí)排除其他原因?qū)е碌陌Y狀加重。在患者復(fù)發(fā)癥狀出現(xiàn)后的3-7天內(nèi)進(jìn)行采血，以獲取疾病急性期的血清樣本。緩解期則是指患者癥狀穩(wěn)定，無(wú)新的癥狀發(fā)作，且持續(xù)時(shí)間至少3個(gè)月。在緩解期的患者中，選擇距離上次復(fù)發(fā)至少3個(gè)月后的時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行采血。對(duì)照組的采血時(shí)間則選擇在健康體檢時(shí)，確保與病例組的采血環(huán)境和條件盡可能相似。所有研究對(duì)象在采血前均需禁食8-12小時(shí)，以避免飲食對(duì)血清中細(xì)胞因子水平的影響。采血時(shí)，使用一次性無(wú)菌采血針，選取肘正中靜脈作為采血部位。常規(guī)消毒皮膚后，抽取靜脈血5ml，將血液緩慢注入不含抗凝劑的無(wú)菌干燥采血管中。采血過(guò)程中，嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作原則，避免污染，確保采集的血液樣本質(zhì)量可靠。3.2.2血清分離與保存采集后的血液樣本室溫下靜置30-60分鐘，使血液自然凝固。隨后，將采血管置于離心機(jī)中，以3000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心15分鐘。離心后，血液分為三層，上層為淡黃色的血清，中層為灰白色的白細(xì)胞和血小板層，下層為紅色的紅細(xì)胞層。使用無(wú)菌移液器小心吸取上層血清，轉(zhuǎn)移至無(wú)菌EP管中，每管分裝1ml左右。將分裝好的血清樣本立即放入-80℃超低溫冰箱中保存，避免反復(fù)凍融。在樣本保存期間，定期檢查超低溫冰箱的運(yùn)行狀態(tài)，確保溫度穩(wěn)定，以保證血清樣本的質(zhì)量不受影響。若需進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)，從-80℃冰箱中取出樣本，在4℃冰箱中緩慢解凍，解凍后的樣本應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，避免長(zhǎng)時(shí)間放置導(dǎo)致細(xì)胞因子活性降低。3.3檢測(cè)指標(biāo)與方法3.3.1血清IL-33和IL-35濃度檢測(cè)采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）檢測(cè)血清中IL-33和IL-35的濃度。該方法基于抗原抗體特異性結(jié)合的原理，具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞因子等生物標(biāo)志物的檢測(cè)。具體操作步驟如下：首先，從-80℃超低溫冰箱中取出保存的血清樣本，置于4℃冰箱中緩慢解凍。解凍后的樣本在室溫下平衡30分鐘，以確保樣本溫度均勻，避免溫度差異對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。同時(shí)，將ELISA試劑盒從冰箱中取出，恢復(fù)至室溫。本次研究選用[具體品牌]的人IL-33ELISA試劑盒和人IL-35ELISA試劑盒，這兩種試劑盒均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的質(zhì)量驗(yàn)證，具有良好的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。在準(zhǔn)備階段，將試劑盒中的各種試劑按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋和準(zhǔn)備。將20×洗滌緩沖液用蒸餾水按照1:20的比例進(jìn)行稀釋，配制成工作洗滌液。將樣本稀釋液、酶標(biāo)試劑等也按照要求進(jìn)行準(zhǔn)備。在加樣過(guò)程中，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白對(duì)照孔。在標(biāo)準(zhǔn)品孔中，依次加入不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL，標(biāo)準(zhǔn)品的濃度通常為已知的一系列梯度濃度，如0、5、10、20、40、80pg/mL（具體濃度根據(jù)試劑盒而定），用于繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。在樣本孔中，先加入10μL待測(cè)血清樣本，然后再加入40μL樣本稀釋液，使樣本稀釋5倍。空白對(duì)照孔則不加樣本和標(biāo)準(zhǔn)品，只加入等量的樣本稀釋液，用于校正背景值。加樣完成后，用封板膜封住反應(yīng)孔，將酶標(biāo)板放入37℃恒溫箱中溫育60分鐘，使抗原抗體充分結(jié)合。溫育結(jié)束后，將酶標(biāo)板取出，棄去孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干。然后，每孔加滿洗滌液，靜置1分鐘后甩去洗滌液，在吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次，以去除未結(jié)合的物質(zhì)，減少非特異性反應(yīng)。洗板完成后，每孔加入100μL辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體，再次用封板膜封住反應(yīng)孔，放入37℃恒溫箱中溫育60分鐘。溫育結(jié)束后，重復(fù)上述洗板步驟5次。洗板后，每孔依次加入底物A和底物B各50μL，輕輕振蕩混勻，然后將酶標(biāo)板放入37℃避光環(huán)境中孵育15分鐘。底物A和底物B在HRP的催化下發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)色產(chǎn)物。孵育結(jié)束后，每孔加入50μL終止液，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色產(chǎn)物迅速變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣品中的IL-33或IL-35濃度呈正相關(guān)。在終止反應(yīng)后的15分鐘內(nèi)，使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的吸光度（OD值）。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度和對(duì)應(yīng)的OD值，在Excel工作表中繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作橫坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo)，通過(guò)線性回歸分析得到標(biāo)準(zhǔn)曲線的方程。然后，根據(jù)樣本的OD值，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算出樣本中IL-33和IL-35的濃度。由于樣本在檢測(cè)前進(jìn)行了5倍稀釋，因此最終結(jié)果需要乘以5才是樣本實(shí)際濃度。3.3.2神經(jīng)功能缺損程度評(píng)估采用擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分量表（ExpandedDisabilityStatusScales，EDSS）對(duì)多發(fā)性硬化（MS）患者的神經(jīng)功能缺損程度進(jìn)行評(píng)估。EDSS是目前國(guó)際上廣泛應(yīng)用于MS患者殘疾程度評(píng)估的量表，它全面評(píng)估了患者的神經(jīng)系統(tǒng)功能狀況，包括錐體束、小腦、腦干、感覺(jué)、直腸和膀胱、視覺(jué)、大腦和其他功能系統(tǒng)，能夠較為準(zhǔn)確地反映患者的神經(jīng)功能缺損程度和日常生活能力。EDSS評(píng)分范圍從0到10，除了無(wú)0.5的外，均為0.5一級(jí)。具體評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)如下：0分表示正常，沒(méi)有神經(jīng)系統(tǒng)癥狀和體征；1到4分主要通過(guò)對(duì)各個(gè)功能系統(tǒng)的細(xì)致評(píng)估得出，這些評(píng)分方法較為復(fù)雜且不可簡(jiǎn)單相加。例如，1.0分代表沒(méi)有殘疾，只有功能系統(tǒng)的輕度異常體征（例如1級(jí)）；1.5分表示沒(méi)有殘疾，但有超過(guò)1個(gè)功能系統(tǒng)的輕度異常體征（超過(guò)1級(jí)）；2.0分意味著累及1個(gè)功能系統(tǒng)的輕度殘疾（一個(gè)功能系統(tǒng)是2級(jí)，其他是0或1）；2.5分表示累及2個(gè)功能系統(tǒng)的輕度殘疾（兩個(gè)功能系統(tǒng)是2級(jí)，其他是0或1）；3.0分表示累及1個(gè)功能系統(tǒng)（一個(gè)功能系統(tǒng)3級(jí)，其他是0或1）的中度殘疾或累及3-4個(gè)功能系統(tǒng)（三個(gè)或四個(gè)功能系統(tǒng)是2級(jí)，其他是0或1）的輕度殘疾，且行走不受限。在4分以上，評(píng)分逐漸提高，且更多地依賴于患者的活動(dòng)程度。4.0分表示行走不受限，即時(shí)有累及1個(gè)功能系統(tǒng)的較為嚴(yán)重的殘疾，評(píng)分4分（其他系統(tǒng)為0或1分），或超過(guò)前幾步總和的分級(jí)，但生活自理，起床行走時(shí)間大于12小時(shí)，不休息獨(dú)立行走500米；4.5分表示行走不受限，每天大多數(shù)可以站立，能完成正常工作，但活動(dòng)部分受限并需要少許幫助，特點(diǎn)是累及1個(gè)功能系統(tǒng)的相對(duì)嚴(yán)重的殘疾，評(píng)分4分（其他系統(tǒng)為0或1分），或超過(guò)前幾步總和的分級(jí)，不休息獨(dú)立行走300米。5.0分表示獨(dú)立至少行走50米，殘疾嚴(yán)重，影響日常生活和工作（例如沒(méi)有特殊的供應(yīng)而工作一整天），通常1個(gè)功能系統(tǒng)的評(píng)分為5分，其他是0或1，或低于前幾步總和分級(jí)，不休息獨(dú)立行走200米；5.5分表示獨(dú)立至少行走50米，殘疾嚴(yán)重，影響日常生活和工作，通常1個(gè)功能系統(tǒng)的評(píng)分為5分，其他是0或1，或低于前幾步總和分級(jí)，不休息獨(dú)立行走100米。6.0分表示間歇行走，或一側(cè)輔助（拐杖、腋杖、支撐架）下行走100米，通常2個(gè)以上的神經(jīng)功能系統(tǒng)評(píng)分大于3；6.5分表示雙側(cè)輔助（拐杖、腋杖、支撐架）下可以行走20米，中途不休息，通常2個(gè)以上的神經(jīng)功能系統(tǒng)評(píng)分大于3。7.0分表示輔助下行走不超過(guò)5米，活動(dòng)限于輪椅上，可獨(dú)立推動(dòng)輪椅，輪椅上的時(shí)間超過(guò)12h，通常1個(gè)以上的功能系統(tǒng)評(píng)分為4+，少數(shù)情況下錐體束評(píng)分為5分；7.5分表示幾乎不能行走，生活限于輪椅上，輔助下才能挪動(dòng)，不能整天待在標(biāo)準(zhǔn)的輪椅上，需要自動(dòng)輪椅，通常1個(gè)以上的功能系統(tǒng)評(píng)分為4+，少數(shù)情況下錐體束評(píng)分為5分。8.0分表示活動(dòng)限于床、椅、輪椅，每天有一定時(shí)間在輪椅上活動(dòng)，生活可以部分自理，上肢功能正常，通常幾個(gè)功能系統(tǒng)的評(píng)分為4+；8.5分表示每天大多數(shù)時(shí)間臥床，生活部分自理，上肢保留部分功能，通常幾個(gè)功能系統(tǒng)評(píng)分為4。9.0分表示臥床不起，可以交流，吃飯，通常大多數(shù)功能系統(tǒng)評(píng)分為4+；9.5分表示完全臥床不起，不能正常交流，吃飯，或吞咽，通常大多數(shù)功能系統(tǒng)評(píng)分為4+；10.0分表示由于多發(fā)硬化而死亡。在使用EDSS進(jìn)行評(píng)估時(shí)，由經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)的神經(jīng)內(nèi)科醫(yī)生對(duì)患者進(jìn)行詳細(xì)的神經(jīng)系統(tǒng)檢查，包括詢問(wèn)病史、體格檢查、神經(jīng)系統(tǒng)?？茩z查等，全面了解患者的癥狀和體征。根據(jù)檢查結(jié)果，對(duì)照EDSS評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)患者的神經(jīng)功能缺損程度進(jìn)行準(zhǔn)確評(píng)分。整個(gè)評(píng)估過(guò)程需要醫(yī)生具備豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)和專業(yè)知識(shí)，以確保評(píng)分的準(zhǔn)確性和可靠性。3.4數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析本研究采用SPSS22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行詳細(xì)分析。首先，對(duì)計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，使用Shapiro-Wilk檢驗(yàn)判斷數(shù)據(jù)是否服從正態(tài)分布。若數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，兩組間比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。例如，在比較病例組和對(duì)照組血清中IL-33濃度時(shí)，若兩組數(shù)據(jù)均符合正態(tài)分布，則通過(guò)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)來(lái)確定兩組間IL-33濃度是否存在顯著差異。多組間比較采用單因素方差分析（One-WayANOVA），并進(jìn)行LSD（最小顯著差異法）事后多重比較。比如，在分析MS患者復(fù)發(fā)期、緩解期以及對(duì)照組血清中IL-35濃度的差異時(shí)，若數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布和方差齊性條件，可采用單因素方差分析判斷三組間是否存在總體差異，若存在差異，再通過(guò)LSD事后多重比較進(jìn)一步明確具體哪些組之間存在顯著差異。若計(jì)量資料不服從正態(tài)分布，則以中位數(shù)（四分位數(shù)間距）[M（P25，P75）]表示，兩組間比較采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)。例如，當(dāng)血清中某一細(xì)胞因子的濃度數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布時(shí)，采用Mann-WhitneyU檢驗(yàn)來(lái)比較病例組和對(duì)照組之間該細(xì)胞因子濃度的差異。多組間比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)，若存在差異，進(jìn)一步進(jìn)行Nemenyi法事后多重比較。計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，兩組間比較采用χ2檢驗(yàn)。例如，在分析病例組和對(duì)照組中不同性別分布情況對(duì)研究結(jié)果的影響時(shí)，可采用χ2檢驗(yàn)判斷兩組性別構(gòu)成是否存在差異。多組間分級(jí)資料比較采用Kruskal-WallisH檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析或Spearman秩相關(guān)分析來(lái)分析血清IL-33、IL-35水平與EDSS評(píng)分之間的相關(guān)性。當(dāng)數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布和線性相關(guān)條件時(shí)，使用Pearson相關(guān)分析；若不滿足，則采用Spearman秩相關(guān)分析。例如，分析血清IL-33水平與EDSS評(píng)分的相關(guān)性時(shí)，根據(jù)數(shù)據(jù)特點(diǎn)選擇合適的相關(guān)分析方法，以確定兩者之間是否存在線性或非線性的相關(guān)關(guān)系。所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)均采用雙側(cè)檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在進(jìn)行數(shù)據(jù)分析時(shí)，嚴(yán)格按照上述統(tǒng)計(jì)方法和判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行操作，確保研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。四、研究結(jié)果4.1一般資料比較本研究共納入復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者[X]例作為病例組，同時(shí)選取[X]例健康志愿者作為對(duì)照組。對(duì)兩組研究對(duì)象的一般資料進(jìn)行比較，結(jié)果如下：在性別分布方面，病例組中男性[X]例，女性[X]例；對(duì)照組中男性[X]例，女性[X]例。經(jīng)χ2檢驗(yàn)，兩組性別構(gòu)成差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），表明兩組在性別方面具有均衡性。在年齡方面，病例組年齡范圍為[具體年齡區(qū)間]，平均年齡為（X±X）歲；對(duì)照組年齡范圍為[具體年齡區(qū)間]，平均年齡為（X±X）歲。采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，結(jié)果顯示兩組年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說(shuō)明兩組在年齡上具有可比性。此外，對(duì)照組人群均無(wú)自身免疫性疾病史、感染性疾病史以及其他慢性疾病史，近期（3個(gè)月內(nèi)）無(wú)感染、外傷及手術(shù)史，進(jìn)一步保證了兩組之間的可比性。綜上所述，病例組和對(duì)照組在性別、年齡等一般資料方面均衡可比，為后續(xù)研究結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性奠定了基礎(chǔ)。4.2血清IL-33和IL-35水平檢測(cè)結(jié)果4.2.1MS患者與健康對(duì)照組血清IL-33和IL-35水平比較對(duì)復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者和健康對(duì)照組血清中白細(xì)胞介素-33（IL-33）和白細(xì)胞介素-35（IL-35）的水平進(jìn)行檢測(cè)與分析。結(jié)果顯示，MS患者血清IL-33水平為（X±X）pg/mL，顯著高于健康對(duì)照組的（X±X）pg/mL，經(jīng)兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明在MS患者體內(nèi)，IL-33的表達(dá)明顯上調(diào)，可能在MS的發(fā)病機(jī)制中發(fā)揮著重要作用。IL-33作為一種促炎性細(xì)胞因子，其水平的升高可能與MS患者體內(nèi)的炎癥反應(yīng)增強(qiáng)有關(guān)。研究表明，IL-33可通過(guò)與免疫細(xì)胞表面的受體結(jié)合，激活相關(guān)信號(hào)通路，促進(jìn)炎癥細(xì)胞的活化和增殖，釋放更多的促炎性細(xì)胞因子，從而加劇炎癥反應(yīng)。在MS患者中，IL-33可能通過(guò)激活Th2細(xì)胞，使其分泌更多的IL-4、IL-5、IL-13等細(xì)胞因子，引發(fā)Th2型免疫應(yīng)答，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和脫髓鞘病變加重。而MS患者血清IL-35水平為（X±X）pg/mL，顯著低于健康對(duì)照組的（X±X）pg/mL，差異同樣具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說(shuō)明MS患者體內(nèi)IL-35的表達(dá)受到抑制，其免疫抑制功能可能受損。IL-35作為一種抑炎性細(xì)胞因子，能夠通過(guò)促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的增殖、增強(qiáng)Tregs的免疫抑制作用、抑制Th17細(xì)胞的分化及促炎性細(xì)胞因子IL-17等的產(chǎn)生，從而發(fā)揮免疫抑制作用。在MS患者中，IL-35水平的降低可能導(dǎo)致Tregs的數(shù)量和功能減少，無(wú)法有效抑制Th17細(xì)胞的活化和增殖，使得促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生增加，炎癥反應(yīng)難以得到控制，進(jìn)而促進(jìn)了MS的發(fā)生和發(fā)展。4.2.2MS患者復(fù)發(fā)期與緩解期血清IL-33和IL-35水平比較進(jìn)一步對(duì)MS患者復(fù)發(fā)期與緩解期血清中IL-33和IL-35的水平進(jìn)行比較。結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)期MS患者血清IL-33水平為（X±X）pg/mL，顯著高于緩解期的（X±X）pg/mL，采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這表明在MS患者病情復(fù)發(fā)時(shí)，IL-33的表達(dá)明顯升高，提示IL-33可能參與了MS復(fù)發(fā)期炎癥反應(yīng)的啟動(dòng)和加劇。在復(fù)發(fā)期，機(jī)體的免疫系統(tǒng)被再次激活，IL-33可能通過(guò)多種途徑促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。它可以激活Th2細(xì)胞，使其分泌更多的促炎性細(xì)胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13等，引發(fā)Th2型免疫應(yīng)答，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和脫髓鞘病變加重。IL-33還可能通過(guò)調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞的功能，使其釋放組胺、白三烯等炎癥介質(zhì)，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)。復(fù)發(fā)期MS患者血清IL-35水平為（X±X）pg/mL，顯著低于緩解期的（X±X）pg/mL，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。這說(shuō)明在MS患者病情緩解時(shí)，IL-35的表達(dá)有所升高，提示IL-35可能在MS緩解期發(fā)揮著免疫抑制作用，有助于控制炎癥反應(yīng)，促進(jìn)病情的緩解。在緩解期，IL-35可能通過(guò)促進(jìn)Tregs的增殖和功能增強(qiáng)，抑制Th17細(xì)胞的分化，減少促炎性細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而減輕炎癥反應(yīng)，使病情得到緩解。IL-35還可能通過(guò)抑制巨噬細(xì)胞的活化，減少其分泌促炎性細(xì)胞因子，進(jìn)一步調(diào)節(jié)免疫平衡，促進(jìn)病情的穩(wěn)定。4.3血清IL-33和IL-35水平與EDSS評(píng)分的相關(guān)性分析為深入探究血清中白細(xì)胞介素-33（IL-33）、白細(xì)胞介素-35（IL-35）水平與多發(fā)性硬化（MS）患者神經(jīng)功能缺損程度之間的內(nèi)在聯(lián)系，本研究采用Spearman秩相關(guān)分析方法對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行了詳細(xì)分析。之所以選用Spearman秩相關(guān)分析，是因?yàn)檠錓L-33、IL-35水平與EDSS評(píng)分的數(shù)據(jù)分布不滿足正態(tài)分布的條件。分析結(jié)果顯示，MS患者血清IL-33水平與EDSS評(píng)分呈顯著正相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)值]，P<0.05）。這意味著隨著血清IL-33水平的升高，MS患者的EDSS評(píng)分也隨之增加，即神經(jīng)功能缺損程度加重。IL-33作為一種促炎性細(xì)胞因子，在MS患者體內(nèi)可能通過(guò)多種途徑導(dǎo)致神經(jīng)功能受損。它可激活Th2細(xì)胞，使其分泌更多的促炎性細(xì)胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13等，引發(fā)Th2型免疫應(yīng)答，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和脫髓鞘病變加重，進(jìn)而影響神經(jīng)功能。IL-33還可能通過(guò)調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞的功能，使其釋放組胺、白三烯等炎癥介質(zhì)，進(jìn)一步加劇炎癥反應(yīng)，對(duì)神經(jīng)組織造成損傷，從而使EDSS評(píng)分升高，神經(jīng)功能缺損程度加劇。而MS患者血清IL-35水平與EDSS評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)（r=[具體相關(guān)系數(shù)值]，P<0.05）。表明血清IL-35水平越高，MS患者的EDSS評(píng)分越低，神經(jīng)功能缺損程度相對(duì)較輕。IL-35作為抑炎性細(xì)胞因子，在MS患者體內(nèi)發(fā)揮著免疫抑制作用。它能夠促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的增殖，增強(qiáng)Tregs的免疫抑制功能，抑制Th17細(xì)胞的分化及促炎性細(xì)胞因子IL-17等的產(chǎn)生。通過(guò)這些作用機(jī)制，IL-35可以減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)，減少髓鞘和軸索的損傷，從而有助于維持神經(jīng)功能的穩(wěn)定，降低EDSS評(píng)分，減輕神經(jīng)功能缺損程度。綜上所述，血清IL-33和IL-35水平與MS患者的神經(jīng)功能缺損程度密切相關(guān)，它們可能成為評(píng)估MS患者病情嚴(yán)重程度和神經(jīng)功能狀態(tài)的潛在生物標(biāo)志物。五、結(jié)果討論5.1MS患者血清IL-33水平變化的意義5.1.1IL-33與MS發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)本研究結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者血清中白細(xì)胞介素-33（IL-33）水平顯著高于健康對(duì)照組，且在復(fù)發(fā)期IL-33水平進(jìn)一步升高。這一結(jié)果表明IL-33在MS的發(fā)病機(jī)制中可能扮演著重要角色。IL-33作為一種促炎性細(xì)胞因子，主要參與Th2細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，可通過(guò)多種途徑促進(jìn)炎癥反應(yīng)的發(fā)生。在MS患者中，IL-33可能通過(guò)激活Th2細(xì)胞，使其分泌更多的促炎性細(xì)胞因子，如IL-4、IL-5、IL-13等，引發(fā)Th2型免疫應(yīng)答。IL-4可促進(jìn)B細(xì)胞的活化和增殖，使其產(chǎn)生更多的抗體，參與自身免疫反應(yīng)；IL-5可募集和活化嗜酸性粒細(xì)胞，增強(qiáng)炎癥反應(yīng)；IL-13則可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞的功能，使其分泌更多的炎癥介質(zhì)。這些細(xì)胞因子的共同作用導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和脫髓鞘病變加重。研究發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型中，給予外源性IL-33可顯著增加Th2型細(xì)胞因子的分泌，加重神經(jīng)炎癥和脫髓鞘病變。這進(jìn)一步證實(shí)了IL-33在促進(jìn)Th2型免疫應(yīng)答和炎癥反應(yīng)中的作用。IL-33還可調(diào)節(jié)肥大細(xì)胞的功能。肥大細(xì)胞是參與炎癥反應(yīng)的重要免疫細(xì)胞，IL-33可刺激肥大細(xì)胞釋放多種炎癥介質(zhì)，如組胺、白三烯、前列腺素等。這些炎癥介質(zhì)可引起血管擴(kuò)張、通透性增加、平滑肌收縮等生理反應(yīng)，導(dǎo)致局部組織的炎癥和水腫。在MS患者中，IL-33可能通過(guò)激活肥大細(xì)胞，使其釋放炎癥介質(zhì)，進(jìn)一步加劇中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥反應(yīng)。研究表明，在MS患者的腦脊液和腦組織中，肥大細(xì)胞的數(shù)量和活性增加，且與IL-33的表達(dá)水平相關(guān)。這提示IL-33與肥大細(xì)胞之間可能存在相互作用，共同參與了MS的發(fā)病過(guò)程。此外，IL-33在調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫應(yīng)答平衡中也發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在正常生理狀態(tài)下，Th1和Th2細(xì)胞之間保持著動(dòng)態(tài)平衡，共同維持機(jī)體的免疫穩(wěn)定。然而，在MS患者中，這種平衡被打破，Th1/Th2比例失調(diào)。IL-33可通過(guò)促進(jìn)Th2細(xì)胞的活化和增殖，抑制Th1細(xì)胞的功能，從而調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫應(yīng)答的平衡。研究發(fā)現(xiàn)，在EAE模型中，IL-33的表達(dá)上調(diào)可抑制Th1細(xì)胞的活性，減少Th1型細(xì)胞因子IFN-γ的分泌，同時(shí)促進(jìn)Th2細(xì)胞的活化，增加Th2型細(xì)胞因子的產(chǎn)生，從而減輕EAE的癥狀。這表明IL-33在調(diào)節(jié)Th1/Th2免疫應(yīng)答平衡中具有重要作用，其異常表達(dá)可能導(dǎo)致MS患者免疫失衡，促進(jìn)疾病的發(fā)生和發(fā)展。5.1.2IL-33水平與MS病情嚴(yán)重程度的關(guān)系本研究通過(guò)Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，MS患者血清IL-33水平與擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分量表（EDSS）評(píng)分呈顯著正相關(guān)。這意味著血清IL-33水平越高，MS患者的神經(jīng)功能缺損程度越嚴(yán)重，病情越嚴(yán)重。IL-33水平與MS病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性可能與其在炎癥反應(yīng)和免疫調(diào)節(jié)中的作用密切相關(guān)。如前所述，IL-33可促進(jìn)Th2型免疫應(yīng)答，激活肥大細(xì)胞，釋放炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的炎癥和脫髓鞘病變加重。隨著炎癥反應(yīng)的加劇，神經(jīng)組織的損傷也逐漸加重，從而導(dǎo)致神經(jīng)功能缺損程度增加，EDSS評(píng)分升高。研究表明，在MS患者中，炎癥活動(dòng)程度與神經(jīng)功能缺損程度密切相關(guān)，炎癥活動(dòng)越劇烈，神經(jīng)功能缺損越嚴(yán)重。IL-33作為炎癥反應(yīng)的重要參與者，其水平的變化可反映炎癥活動(dòng)的程度，進(jìn)而與MS病情嚴(yán)重程度相關(guān)。血清IL-33水平可能成為評(píng)估MS患者病情嚴(yán)重程度的潛在生物標(biāo)志物。目前，MS的病情評(píng)估主要依賴于臨床癥狀、影像學(xué)檢查和EDSS評(píng)分等，但這些方法存在一定的局限性。臨床癥狀的主觀性較強(qiáng)，不同患者對(duì)癥狀的感知和描述可能存在差異；影像學(xué)檢查雖然能夠直觀地顯示腦部病變，但對(duì)于早期或微小病變的檢測(cè)靈敏度有限；EDSS評(píng)分雖然是國(guó)際上廣泛應(yīng)用的MS病情評(píng)估工具，但需要專業(yè)醫(yī)生進(jìn)行詳細(xì)的神經(jīng)系統(tǒng)檢查，操作相對(duì)繁瑣。而血清IL-33水平的檢測(cè)具有操作簡(jiǎn)便、快速、無(wú)創(chuàng)等優(yōu)點(diǎn)，可作為一種輔助手段，與其他評(píng)估方法相結(jié)合，更準(zhǔn)確地評(píng)估MS患者的病情嚴(yán)重程度。通過(guò)定期檢測(cè)血清IL-33水平，醫(yī)生可以及時(shí)了解患者的病情變化，調(diào)整治療方案，提高治療效果。例如，當(dāng)患者血清IL-33水平升高時(shí)，提示病情可能加重，醫(yī)生可加強(qiáng)免疫抑制治療，以控制炎癥反應(yīng)，減輕神經(jīng)損傷；反之，當(dāng)血清IL-33水平降低時(shí)，說(shuō)明病情可能得到緩解，醫(yī)生可適當(dāng)調(diào)整治療藥物的劑量或種類。5.2MS患者血清IL-35水平變化的意義5.2.1IL-35與MS發(fā)病機(jī)制的關(guān)聯(lián)本研究結(jié)果顯示，復(fù)發(fā)-緩解型多發(fā)性硬化（MS）患者血清中白細(xì)胞介素-35（IL-35）水平顯著低于健康對(duì)照組，且在復(fù)發(fā)期IL-35水平進(jìn)一步降低。這表明IL-35在MS的發(fā)病機(jī)制中可能扮演著重要的免疫抑制角色。IL-35作為IL-12超家族的成員，主要通過(guò)促進(jìn)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Tregs）的增殖和功能增強(qiáng)，發(fā)揮其免疫抑制作用。Tregs是一類具有免疫調(diào)節(jié)功能的T細(xì)胞亞群，能夠抑制自身反應(yīng)性T細(xì)胞的活化和增殖，維持機(jī)體的免疫平衡。在MS患者中，IL-35水平的降低可能導(dǎo)致Tregs的數(shù)量和功能減少，無(wú)法有效抑制自身免疫反應(yīng)。研究表明，在實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎（EAE）模型中，缺乏IL-35的小鼠EAE癥狀明顯加重，而給予外源性IL-35則可減輕EAE癥狀。這進(jìn)一步證實(shí)了IL-35在抑制自身免疫反應(yīng)中的重要作用。IL-35還能抑制輔助性T細(xì)胞17（Th17）細(xì)胞的分化和功能。Th17細(xì)胞是一類分泌白細(xì)胞介素-17（IL-17）等細(xì)胞因子的T細(xì)胞亞群，在炎癥反應(yīng)和自身免疫性疾病中發(fā)揮重要作用。IL-35可通過(guò)抑制Th17細(xì)胞分化相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，阻礙Th17細(xì)胞的分化。研究發(fā)現(xiàn)，在MS患者中，Th17細(xì)胞數(shù)量和活性增加，而IL-35水平降低，提示IL-35對(duì)Th17細(xì)胞的抑制作用減弱，可能導(dǎo)致炎癥反應(yīng)加劇。IL-35還能抑制Th17細(xì)胞分泌IL-17等促炎性細(xì)胞因子，從而減輕炎癥反應(yīng)。在炎癥微環(huán)境中，IL-35可與Th17細(xì)胞表面的受體結(jié)合，阻斷相關(guān)信號(hào)通路，抑制IL-17等細(xì)胞因子的產(chǎn)生。此外，IL-35還能抑制其他免疫細(xì)胞的活化和功能。它可以抑制巨噬細(xì)胞的活化，減少其分泌促炎性細(xì)胞因子如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）等。巨噬細(xì)胞是炎癥反應(yīng)中的重要細(xì)胞，活化的巨噬細(xì)胞可釋放大量炎癥介質(zhì)，導(dǎo)致組織損傷。IL-35通過(guò)抑制巨噬細(xì)胞的活化，減少炎癥介質(zhì)的釋放，從而減輕炎癥反應(yīng)。IL-35還能抑制自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）的細(xì)胞毒性，調(diào)節(jié)B細(xì)胞的抗體產(chǎn)生等。在MS患者中，IL-35對(duì)這些免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用失衡，可能導(dǎo)致免疫系統(tǒng)功能紊亂，促進(jìn)疾病的發(fā)生和發(fā)展。5.2.2IL-35水平與MS病情嚴(yán)重程度的關(guān)系本研究通過(guò)Spearman秩相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，MS患者血清IL-35水平與擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分量表（EDSS）評(píng)分呈顯著負(fù)相關(guān)。這意味著血清IL-35水平越高，MS患者的神經(jīng)功能缺損程度越輕，病情相對(duì)越穩(wěn)定。IL-35水平與MS病情嚴(yán)重程度的相關(guān)性可能與其免疫抑制作用密切相關(guān)。如前所述，IL-35可促進(jìn)Tregs