ICS65.120CCSB463502chromatography-tandemDB3502/T157—2024前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語(yǔ)和定義 14方法原理 15干擾與消除 26試劑和材料 27儀器和設(shè)備 28樣品 29分析步驟 310結(jié)果計(jì)算與表示 511精密度和正確度 612質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 813廢物處理 814注意事項(xiàng) 9附錄A（資料性）方法檢出限和測(cè)定下限 附錄B（資料性）目標(biāo)化合物及內(nèi)標(biāo)物的測(cè)定參考參數(shù) DB3502/T157—2024本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請(qǐng)注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別這些專利的責(zé)任。本文件由廈門市生態(tài)環(huán)境局提出并歸口。本文件起草單位：廈門大學(xué)、廈門市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)院、福建省廈門環(huán)境監(jiān)測(cè)中心站、廈門市標(biāo)準(zhǔn)化研究院。本文件主要起草人：陳猛、王倩、高靜、梁榕源、李振良、馬曉霞。DB3502/T157—20241水質(zhì)硝基呋喃類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、硝基咪唑類和抗病毒類藥物的測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法本文件描述了水中硝基呋喃類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、硝基咪唑類和抗病毒類藥物的液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定方法。本文件適用于地表水、地下水、海水和生活污水中硝基呋喃類（呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林、呋喃妥因）、大環(huán)內(nèi)酯類（紅霉素、泰樂(lè)菌素、白霉素、延胡索酸泰妙菌素、林可霉素、替米考星）、氯霉素類（氯霉素、甲砜霉素、氟甲砜霉素）、硝基咪唑類（甲硝唑、二甲硝咪唑、洛硝達(dá)唑）和抗病毒類（金剛烷胺）藥物殘留量的測(cè)定。當(dāng)?shù)乇硭?、地下水和海水取樣量?L，定容體積為1.0mL，進(jìn)樣體積為10μL時(shí)，硝基呋喃類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、硝基咪唑類和抗病毒類藥物的方法檢出限為0.6ng/L～2ng/L，測(cè)定下限為2.4ng/L～8ng/L；當(dāng)生活污水取樣量為200mL，定容體積為0.5mL，進(jìn)樣體積為10μL時(shí)，硝基呋喃類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、硝基咪唑類和抗病毒類藥物的方法檢出限為2ng/L～4ng/L，測(cè)定下限為8ng/L~16ng/L，詳見(jiàn)附錄A。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB17378.3海洋監(jiān)測(cè)規(guī)范第3部分：樣品采集、貯存與運(yùn)輸HJ91.1污水監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ91.2地表水環(huán)境質(zhì)量監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ164地下水環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范HJ442.3近岸海域環(huán)境監(jiān)測(cè)技術(shù)規(guī)范第三部分近岸海域水質(zhì)監(jiān)測(cè)HJ493水質(zhì)樣品的保存和管理技術(shù)規(guī)定3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒(méi)有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4方法原理水中的硝基呋喃類、大環(huán)內(nèi)酯類、氯霉素類、硝基咪唑類和抗病毒類藥物經(jīng)固相萃取柱富集，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分離檢測(cè)，通過(guò)保留時(shí)間、特征離子及其豐度比進(jìn)行定性，內(nèi)標(biāo)法定量。2DB3502/T157—20245干擾與消除金屬離子與部分目標(biāo)化合物能形成絡(luò)合物，降低固相萃取效率，向水樣中加入乙二胺四乙酸二鈉抑制絡(luò)合物的形成，消除干擾。6試劑和材料除非另有規(guī)定，僅使用色譜純?cè)噭?.1水：GB/T6682，一級(jí)。6.2乙二胺四乙酸二鈉（Na2EDTA）：優(yōu)級(jí)純。6.30.1%甲酸甲醇溶液：取1mL甲酸，加甲醇稀釋至1000mL，混勻。6.40.1%甲酸乙腈溶液：取1mL甲酸，加乙腈稀釋至1000mL，混勻。6.5甲醇-水（2+8）溶液：甲醇和水（6.1）按照2：8的體積比混合，混勻。6.60.1%甲酸甲醇-水（2+8）溶液：取1mL甲酸，加甲醇-水（2+8）溶液（6.5）稀釋至1000mL，混勻。6.7標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（100μg/mL直接購(gòu)買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，參照制造商的產(chǎn)品說(shuō)明保存。6.8標(biāo)準(zhǔn)使用液（500μg/L）：分別準(zhǔn)確移取適量17種目標(biāo)物的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（6.7），用甲醇逐級(jí)稀釋，于-18℃以下冷凍、避光保存，有效期3個(gè)月。6.9內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液（100μg/mL內(nèi)標(biāo)物為呋喃唑酮-D4、呋喃它酮-D5、呋喃西林-13C,15N2、紅霉素-D3、林可霉素-D3、氯霉素-D5、甲硝唑-D4、二甲硝咪唑-D3和金剛烷胺-D15。直接購(gòu)買有證標(biāo)準(zhǔn)溶液，參照制造商的產(chǎn)品說(shuō)明保存。6.10內(nèi)標(biāo)使用液（500μg/L）：分別移取適量9種內(nèi)標(biāo)物的儲(chǔ)備液（6.9），用甲醇逐級(jí)稀釋，于-18℃以下冷凍、避光保存，有效期3個(gè)月。6.11固相萃取柱：填料為二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB），規(guī)格為1g/20mL，或其他等效萃取柱。6.12濾膜：0.45μm玻璃纖維或其他材質(zhì)等效濾膜。6.13針式微孔濾膜：0.22μm聚四氟乙烯濾膜（PTFE）。7儀器和設(shè)備7.1液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀：配有電噴霧離子化源（ESI）。7.2固相萃取裝置：自動(dòng)或手動(dòng)（帶真空泵），流速可調(diào)節(jié)。7.3濃縮裝置：氮吹濃縮儀或其他性能相當(dāng)?shù)脑O(shè)備。7.4分析天平：感量0.01g。8樣品8.1樣品采集和保存按照GB17378.3、HJ91.1、HJ91.2、HJ164、HJ442.3和HJ493的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行樣品的采集。樣品采集時(shí)應(yīng)注滿棕色磨口具塞玻璃瓶或具有聚四氟乙烯襯墊瓶蓋的棕色螺口玻璃瓶，不留空隙。樣品采集后應(yīng)于4℃冷藏、避光運(yùn)輸，及時(shí)分析。若不能及時(shí)分析，應(yīng)置于4℃冷藏、避光保存，3天內(nèi)完成分析。DB3502/T157—202438.2試樣的制備8.2.1水樣預(yù)處理8.2.1.1地表水、地下水和海水水樣經(jīng)0.45μm濾膜（6.12）過(guò)濾后，量取1000mL水樣，加入40.0μL內(nèi)標(biāo)使用液（6.10），混勻。再向水樣中加入0.5g的Na2EDTA（6.2），振蕩至完全溶解。8.2.1.2生活污水水樣經(jīng)0.45μm濾膜（6.12）過(guò)濾后，量取200mL水樣，加入40.0μL內(nèi)標(biāo)使用液（6.10），混勻。再向水樣中加入0.5g的Na2EDTA（6.2），振蕩至完全溶解。8.2.2固相萃取將固相萃取柱（6.11）固定在固相萃取裝置（7.2）上，分別用10mL甲醇和10mL水（6.1）活化，在活化過(guò)程中應(yīng)保證柱頭浸潤(rùn)。8.2.2.1地表水、地下水和海水將水樣以6mL/min流速通過(guò)活化后的固相萃取柱，再用10mL水（6.1）淋洗萃取柱，負(fù)壓抽干。依次用6mL甲醇、6mL0.1%甲酸甲醇溶液（6.3）洗脫富集后的小柱，收集洗脫液。將上述洗脫液濃縮（7.3）至近干，用0.1%甲酸甲醇-水（2+8）溶液（6.6）定容至1.0mL，經(jīng)0.22μm針式微孔濾膜（6.13）過(guò)濾于樣品瓶中，待測(cè)。8.2.2.2生活污水將水樣以6mL/min流速通過(guò)活化后的固相萃取柱，再用10mL水（6.1）淋洗萃取柱，負(fù)壓抽干。依次用6mL甲醇、6mL0.1%甲酸甲醇溶液（6.3）洗脫富集后的小柱，收集洗脫液。將上述洗脫液濃縮（7.3）至近干，用0.1%甲酸甲醇-水（2+8）溶液（6.6）定容至0.5mL，經(jīng)0.22μm針式微孔濾膜（6.13）過(guò)濾于樣品瓶中，待測(cè)。8.3空白試樣的制備以水（6.1）代替水樣，按照與試樣的制備（8.2）相同的步驟，制備空白試樣。9分析步驟9.1儀器參考條件9.1.1液相色譜參考條件液相色譜參考條件如下：a)色譜柱：C18柱，柱長(zhǎng)150mm，內(nèi)徑3mm，粒徑2.6μm，或等效反相高效液相色譜柱；b)流動(dòng)相：A相-水（6.1），B相-0.1%甲酸乙腈溶液（6.4），梯度洗脫程序見(jiàn)表1；c)進(jìn)樣體積：10μL；d)流速：0.25mL/min。DB3502/T157—20244表1梯度洗脫程序559.1.2質(zhì)譜參考條件質(zhì)譜參考條件如下：a)離子源類型：電噴霧離子源；b)掃描方式：正離子和負(fù)離子同時(shí)掃描；c)離子源溫度：350℃;d)毛細(xì)管電壓：正離子3500V，負(fù)離子-3000V；e)檢測(cè)方式：多離子反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；f)具體條件參見(jiàn)附錄B。對(duì)于不同質(zhì)譜儀器，參數(shù)可能存在差異，測(cè)定前應(yīng)將質(zhì)譜參數(shù)優(yōu)化到最佳。9.1.3儀器調(diào)諧按照儀器使用說(shuō)明書在規(guī)定時(shí)間和頻次內(nèi)對(duì)液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行質(zhì)量數(shù)和分辨率的校正，以確保儀器處于最佳測(cè)試狀態(tài)。在儀器使用過(guò)程中，如發(fā)現(xiàn)質(zhì)量數(shù)出現(xiàn)明顯偏差或靈敏度大幅度下降時(shí)，應(yīng)立即對(duì)儀器重新進(jìn)行質(zhì)量數(shù)和分辨率的校正。9.2標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立分別取一定量的標(biāo)準(zhǔn)使用液（6.8）及內(nèi)標(biāo)使用液（6.10），制備至少5個(gè)濃度點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)系列，各點(diǎn)目標(biāo)物的質(zhì)量濃度分別為2.00μg/L、5.00μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L和200μg/L（參考濃度內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度均為20.0μg/L。按照儀器參考條件（9.1由低濃度到高濃度依次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行分析，得到不同濃度各目標(biāo)化合物的質(zhì)譜圖。以標(biāo)準(zhǔn)系列溶液中目標(biāo)化合物的濃度為橫坐標(biāo)，以目標(biāo)化合物定量離子的峰面積與內(nèi)標(biāo)物定量離子峰面積的比值和內(nèi)標(biāo)物濃度的乘積為縱坐標(biāo)，建立校準(zhǔn)曲線。9.3試樣測(cè)定按照與標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立（9.2）相同的條件進(jìn)行試樣（8.2）的測(cè)定。9.4空白試驗(yàn)按照與試樣測(cè)定（9.3）相同的條件進(jìn)行空白試樣（8.3）的測(cè)定。DB3502/T157—202410結(jié)果計(jì)算與表示10.1定性分析每種被測(cè)組分選擇1個(gè)母離子和2~3個(gè)子離子進(jìn)行監(jiān)測(cè)。在相同的實(shí)驗(yàn)條件下，樣品中待測(cè)組分的保留時(shí)間與標(biāo)準(zhǔn)樣品中目標(biāo)組分的保留時(shí)間比較，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的絕對(duì)值應(yīng)小于2.5%；且待測(cè)樣品譜圖中，各組分定性子離子的相對(duì)豐度（Ksam，見(jiàn)式1）與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液譜圖中對(duì)應(yīng)的定性子離子相對(duì)豐度（Kstd，見(jiàn)式2）進(jìn)行比較，偏差在表2規(guī)定的最大允許偏差范圍內(nèi)，則可判定為樣品中存在對(duì)應(yīng)的待測(cè)物。17種目標(biāo)化合物和9種內(nèi)標(biāo)物的總離子流圖見(jiàn)圖1。式中：Ksam——樣品中某組分定性子離子的相對(duì)豐度的數(shù)值，單位為百分比（%）；A2——樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定性子離子的峰面積；A1——樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定量子離子的峰面積。式中：Kstd——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分定性子離子的相對(duì)豐度，單位為百分比（%）；Astd2——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定性子離子的峰面積；Astd1——標(biāo)準(zhǔn)樣品中某組分二級(jí)質(zhì)譜定量子離子的峰面積。表2定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許偏差Kstd（%）Ksam最大允許偏差（%）Kstd>5020<Kstd≤50Kstd≤10DB3502/T157—202461514：甲砜霉素；15：呋喃妥因；16：呋喃唑酮-D4；17：呋喃唑酮；18：氟甲砜霉素；19：替米考星；20：紅圖1目標(biāo)化合物(ρ=50μg/L）和內(nèi)標(biāo)物(ρ=20μg/L）的總離子流圖10.2定量分析采用內(nèi)標(biāo)法定量，水樣中目標(biāo)物的質(zhì)量濃度ρi（ng/L按照公式（3）進(jìn)行計(jì)算。式中：ρi——水樣中目標(biāo)化合物i的質(zhì)量濃度，ng/L；Ai——水樣中目標(biāo)化合物i的峰面積；Ais——水樣中目標(biāo)化合物i所對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的峰面積；a——標(biāo)準(zhǔn)曲線的斜率；b——標(biāo)準(zhǔn)曲線的截距；ρis——水樣中目標(biāo)化合物i所對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量濃度，μg/L；Vi——定容體積，mL；V——水樣體積，mL。10.3結(jié)果表示測(cè)定結(jié)果小數(shù)點(diǎn)后位數(shù)與方法檢出限一致，最多保留3位有效數(shù)字。11精密度和正確度11.1精密度DB3502/T157—202411.1.13家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一空白加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：——實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.8%～20%、2.3%～16%和2.6%～11%；——實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.9%～18%、2.5%～15%和2.6%～12%；——重復(fù)性限分別為1.0ng/L～1.8ng/L、3.2ng/L～5.9ng/L和5.3ng/L～24ng/L；——再現(xiàn)性限分別為1.1ng/L～2.7ng/L、4.2ng/L～8.6ng/L和8.8ng/L～36ng/L。11.1.23家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一地表水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：——實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.4%～16%、1.9%～19%和2.1%～12%；——實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.2%～12%、1.5%～13%和0.7%～9.7%；——重復(fù)性限分別為0.8ng/L～1.7ng/L、3.0ng/L～6.2ng/L和12ng/L～23ng/L；——再現(xiàn)性限分別為0.8ng/L～1.7ng/L、3.0ng/L～8.2ng/L和12ng/L～31ng/L。11.1.33家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一地下水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：——實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.7%～19%、2.5%～15%和1.3%～11%；——實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.0%～12%、1.0%～9.3%和0.5%～12%；——重復(fù)性限分別為1.2ng/L～2.2ng/L、3.0ng/L～6.9ng/L和12ng/L～21ng/L；——再現(xiàn)性限分別為1.2ng/L～2.3ng/L、3.8ng/L～7.4ng/L和13ng/L～34ng/L。11.1.43家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一海水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)——實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為4.1%～18%、3.2%～15%和1.9%～11%；——實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.1%～11%、2.6%～13%和1.6%～11%；——重復(fù)性限分別為1.1ng/L～1.9ng/L、2.6ng/L～7.3ng/L和9.1ng/L～22ng/L；——再現(xiàn)性限分別為1.2ng/L～2.2ng/L、3.9ng/L～8.6ng/L和10ng/L～29ng/L。11.1.53家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為20.0ng/L、40.0ng/L和160ng/L的統(tǒng)一生活污水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：——實(shí)驗(yàn)室內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為3.6%～20%、3.2%～17%和0.7%～14%；——實(shí)驗(yàn)室間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為1.0%～13%、1.1%～15%和0.6%～17%；——重復(fù)性限分別為3.0ng/L～8.9ng/L、5.1ng/L～14ng/L和13ng/L～39ng/L；——再現(xiàn)性限分別為3.0ng/L～9.6ng/L、6.6ng/L～17ng/L和20ng/L～71ng/L。11.2正確度11.2.13家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一空白加標(biāo)樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：——加標(biāo)回收率范圍分別為80.8%～118%、80.6%～114%和83.7%～119%；——加標(biāo)回收率最終值分別為（101±34.6）%104±32.5）%、（88.8±26.3）%112±6.9）%和（87.4±8.0）%113±13.1）%。11.2.23家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一地表水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：DB3502/T157—20248——加標(biāo)回收率范圍分別為81.5%～113%、78.5%～117%和89.5%～115%；——加標(biāo)回收率最終值分別為（88.2±11.6）%111±4.8）%、（86.3±20.1）%103±24.7）%和（97.2±16.6）%108±13.0）%。11.2.33家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一地下水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：——加標(biāo)回收率范圍分別為88.4%～116%、83.3%～119%和82.6%～115%；——加標(biāo)回收率最終值分別為（98.7±22.4）%109±22.8)）%、（93.3±20.7）%111±13.5）%和（88.2±9.9）%107±13.4）%。11.2.43家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為5.00ng/L、20.0ng/L和100ng/L的統(tǒng)一海水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)——加標(biāo)回收率范圍分別為88.4%～116%、81.5%～115%和81.5%～115%；——加標(biāo)回收率最終值分別為（95.1±20.6）%105±19.2）%、（91.6±19.5）%109±10.6）%和（91.6±19.5）%110±11.7）%。11.2.53家實(shí)驗(yàn)室對(duì)加標(biāo)濃度為20.0ng/L、40.0ng/L和160ng/L的統(tǒng)一生活污水樣品進(jìn)行了6次重復(fù)測(cè)定：——加標(biāo)回收率范圍分別為80.7%～119%、81.7%～112%和79.9%～119%；——加標(biāo)回收率最終值分別為