第一章材料與方法1.1實(shí)驗(yàn)用品1.1.1實(shí)驗(yàn)材料紫茉莉1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑MS培養(yǎng)基母液、6-BA、NAA、KT、升汞、酒精、蒸餾水、氯化鈉、蔗糖、瓊脂粉、鹽酸和氫氧化鈉等。1.1.3實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備：超凈工作臺(tái)、高壓蒸汽滅菌鍋、微量可調(diào)移液槍、pH計(jì)、電子天平、鑷子、三角瓶、燒杯、玻璃棒、量筒和培養(yǎng)皿等。1.2實(shí)驗(yàn)方法1.2.1培養(yǎng)基配制1.2.1.1MS培養(yǎng)基的配制稱(chēng)取大量元素50mL用移液槍吸入燒杯中，微量元素5mL用移液槍吸入燒杯中，有機(jī)物母液5mL用移液槍吸入燒杯中，鐵鹽母液5mL用移液槍吸入燒杯中（其中除大量元素為10倍液其余均為100倍液），稱(chēng)取蔗糖15g于100mL燒杯內(nèi)，用去離子水溶解后再倒入500mL容量瓶，定容至500mL，然后倒入500mL燒杯中，調(diào)pH置5.8，稱(chēng)取瓊脂4g倒入調(diào)好pH的培養(yǎng)基中，然后將燒杯放在煮沸的水中進(jìn)行消煮，煮時(shí)常用玻璃棒攪動(dòng)。1.2.1.2不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的配制以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，配制不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基ML17：MS+1.5mg·L-1KT+1mg·L-1NAA+0.05mg·L-1TDZ，調(diào)pH在5.9-6.0之間，分裝進(jìn)100mL的三角瓶?jī)?nèi)，每瓶50mL，封口后，高壓滅菌。1.2.1.3不定芽生根培養(yǎng)基的配制以1/2MS為基本培養(yǎng)基，配制生根培養(yǎng)基MLR：1/2MS+0.5mg·L-1NAA，調(diào)pH值5.9-6.0之間。分裝入100mL的三角瓶?jī)?nèi)，每瓶50mL，然后加入不同質(zhì)量NaCl，使其濃度分別為0、25、50、75、100、125、150、175、200、225、250、300mmol·L-1，封口并標(biāo)記，高壓滅菌。1.2.2外植體的消毒將紫茉莉的枝條剪成帶一個(gè)個(gè)帶芽的莖段，自來(lái)水沖洗30min，蒸餾水沖洗2次，轉(zhuǎn)移至超凈工作臺(tái)，用70%酒精消毒30sec，升汞消毒15min，最后用無(wú)菌水沖洗5~6次。1.2.3紫茉莉不定芽的誘導(dǎo)在超凈工作臺(tái)上點(diǎn)上酒精燈，用酒精棉對(duì)雙手、鑷子及手術(shù)刀進(jìn)行消毒，取莖段上的芽，接種于紫茉莉不定芽誘導(dǎo)和增殖培養(yǎng)基ML17中，每瓶接入4~5個(gè)不定芽，放入組培室對(duì)其進(jìn)行不定芽的誘導(dǎo)。1.2.4紫茉莉不定芽的生根培養(yǎng)在超凈工作臺(tái)上點(diǎn)上酒精燈，用酒精棉對(duì)雙手、鑷子及手術(shù)刀進(jìn)行消毒，在超凈工作臺(tái)中切下不定芽，接到生根培養(yǎng)基MLR中開(kāi)始生根誘導(dǎo)，每瓶接入4~5個(gè)不定芽。1.2.5不定芽生長(zhǎng)情況的觀察在紫茉莉不定芽生根培養(yǎng)30d后，對(duì)每組培養(yǎng)基內(nèi)不定芽的生長(zhǎng)情況進(jìn)行觀察。從葉的形態(tài)和顏色，苗的大小，苗的形狀，根的生長(zhǎng)狀況，生根數(shù)及生出的根的形態(tài)等方面對(duì)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行分析總結(jié)，統(tǒng)計(jì)不定芽的生根率和根增殖系數(shù)，最后分析數(shù)據(jù)得出結(jié)論。

第二章結(jié)果與分析2.1鹽脅迫對(duì)紫茉莉不定芽生根的影響在超凈工作臺(tái)中，切取長(zhǎng)3~4cm不定芽，接種到不同NaCl濃度梯度MLR培養(yǎng)基中進(jìn)行生根誘導(dǎo)。在組培室培養(yǎng)4周后，通過(guò)對(duì)不定芽生根情況及根的生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)（表2.1），在0、25、50、75、100、125、150mmol·L-1鹽濃度的培養(yǎng)基中，不定芽均可生根，但生根數(shù)呈下降趨勢(shì)。隨著鹽脅迫程度進(jìn)一步的加深，不定芽不再生根，并且伴隨有芽基部褐化，葉片失水皺縮，個(gè)別葉子出現(xiàn)干枯，腐爛的現(xiàn)象。表2.1NaCl脅迫對(duì)紫茉莉不定芽的生長(zhǎng)狀況影響NaCl濃度（mmol/L）生根率（%）每顆根數(shù)生長(zhǎng)狀態(tài)0100%7生長(zhǎng)旺盛，根多且發(fā)達(dá)2595%6生長(zhǎng)幾乎無(wú)抑制，根系較發(fā)達(dá)5086%5生長(zhǎng)有抑制，葉正常，根部有輕微抑制7578%4抑制效果增強(qiáng)，葉正常，根較細(xì)10070%3生長(zhǎng)受到明顯抑制，葉片發(fā)綠，個(gè)別有黃葉現(xiàn)象，根明顯減少12545%3生長(zhǎng)受到明顯抑制，葉片發(fā)綠，個(gè)別有黃葉，根稀少而短15028%1生長(zhǎng)抑制加重，根幾乎沒(méi)有，葉片基本為綠，黃葉增多17511%0生長(zhǎng)抑制明顯，葉有輕微卷曲，無(wú)根20000芽基部褐化，葉有輕微卷曲，無(wú)根22500芽基部褐化，葉有輕微卷曲并有枯萎變色的現(xiàn)象，無(wú)根25000芽基部褐化，葉有卷曲并有枯萎變色的現(xiàn)象，無(wú)根30000芽基部褐化，葉基本枯，無(wú)根2.2鹽脅迫對(duì)紫茉莉不定芽生根率的影響如表2.2所示，對(duì)照組組生根率高達(dá)100%，處理組的生根率隨著鹽濃度的增大而不斷減小。在25、50、75、100、125、150mmol·L-1濃度的NaCl脅迫下，紫茉莉不定芽可誘導(dǎo)產(chǎn)生根，但相對(duì)于對(duì)照組有一定的差異。在鹽濃度為25、50、75、100mmol·L-1時(shí)，不定芽的生根率依然很高，平均達(dá)到了82%。但當(dāng)鹽濃度再增加到125、150mmol·L-1時(shí)，不定芽的生根率變化明顯，平均只有37%。在鹽濃度>175mmol·L-1時(shí)，紫茉莉不定芽已經(jīng)無(wú)法生根。表2.2鹽脅迫下紫茉莉的生根率NaCl濃度（mmol/L）1組生根率（%）2組生根率（%）3組生根率（%）0100%100%98%2594%94%96%5090%84%86%7580%76%78%10070%64%76%12550%46%40%15030%34%20%17510%8%14%2000002250002500003000002.3鹽脅迫對(duì)紫茉莉每顆不定芽生根數(shù)的影響從表2.1可以看出，對(duì)照組每顆不定芽的生根數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于處理組，甚至是處理組的兩到三倍。在鹽濃度為25mmol·L-1時(shí)與對(duì)照組幾乎無(wú)差別，隨著鹽脅迫的加深，每顆不定芽的生根數(shù)呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)。在鹽濃度為125mmol·L-1時(shí)，培養(yǎng)基中不定芽的生根數(shù)平均不到對(duì)照組的一半。當(dāng)鹽濃度為175mmol·L-1時(shí)，培養(yǎng)基中每顆苗只有少量的根產(chǎn)生，有些苗甚至無(wú)根產(chǎn)生。在濃度達(dá)到200mmol·L-1時(shí)，已不再生根。2.4鹽脅迫對(duì)紫茉莉不定芽生長(zhǎng)狀態(tài)的影響由圖2.3可以看出，在鹽脅迫下，處理組不定芽的生長(zhǎng)狀況較對(duì)照組有所差異，對(duì)照組苗的生長(zhǎng)正常，生出的根和葉多又旺盛（圖2.3A），在鹽濃度為25mmol·L-1時(shí)苗幾乎無(wú)抑制，對(duì)根系也沒(méi)有較大影響（圖2.3B）。在鹽濃度為50mmol·L-1時(shí)對(duì)苗有輕微的抑制（圖2.3C）。在鹽濃度為75mmol·L-1時(shí)抑制效果有增強(qiáng)但不明顯，根系有減少，葉綠且正常（圖2.3D）。從100mmol·L-1濃度NaCl脅迫開(kāi)始，不定芽的生長(zhǎng)就已經(jīng)被抑制，隨著鹽濃度的增大，不定芽生長(zhǎng)的抑制情況愈發(fā)明顯，有個(gè)別葉子有部分發(fā)黃現(xiàn)象，根系逐漸變短并減少（圖2.3E）。在鹽濃度為125mmol·L-1時(shí)苗有明顯抑制，根也明顯變少，葉部分發(fā)黃卷曲（圖2.3F）。在鹽濃度為150mmol·L-1時(shí)，葉片發(fā)黃，說(shuō)明此時(shí)的NaCl濃度對(duì)葉片中葉綠素產(chǎn)生了影響，并且根系稀疏較短，抑制效果明顯（圖2.3G）。在鹽濃度為175mmol·L-1時(shí)，苗生長(zhǎng)受到明顯抑制，并且?guī)缀鯖](méi)有根生長(zhǎng)且短?。▓D2.3H）。此濃度可作為紫茉莉耐鹽的臨界濃度，用于下一步紫茉莉耐鹽突變體的篩選。當(dāng)鹽濃度達(dá)到200mmol·L-1時(shí)，不定芽基部發(fā)生褐化，葉片基本正常（圖2.3I）。再隨著鹽濃度的上漲，當(dāng)達(dá)到225mmol·L-1和250mmol·L-1時(shí)，苗的生長(zhǎng)受到明顯抑制，且出現(xiàn)部分枯萎的現(xiàn)象，基部褐化，無(wú)根生長(zhǎng)（圖2.3J、圖2.3K）。當(dāng)鹽濃度達(dá)到300mmol·L-1時(shí)，培養(yǎng)基中的苗已經(jīng)大部分枯萎，基部褐化明顯，并且無(wú)根（圖2.3L）。由圖可知，低濃度的NaCl就開(kāi)始對(duì)紫茉莉有輕微抑制，但不明顯，隨著鹽濃度的增大，不定芽基部褐化愈發(fā)嚴(yán)重，部分葉片也開(kāi)始逐漸卷縮枯萎，不定芽的生長(zhǎng)被抑制的也越來(lái)越明顯，根系對(duì)鹽濃度的變化更為明顯。由此可見(jiàn)，鹽脅迫深深影響紫茉莉不定芽生長(zhǎng)發(fā)育，低濃度下紫茉莉還可以生長(zhǎng)但達(dá)到175mmol/L時(shí)紫茉莉幾乎無(wú)法正常生長(zhǎng)，高濃度的鹽脅迫甚至可以殺死幼苗。圖2.3NaCl脅迫對(duì)紫茉莉不定芽生根狀況的影響（A-L）NaCl濃度分別為：0、25、50、75、100、125、150、175、200、225、250、300mmol·L-1，MLR培養(yǎng)基。

第三章結(jié)論和建議3.1結(jié)論鹽脅迫是限制植物生長(zhǎng)發(fā)育的主要環(huán)境因素之一。目前關(guān)于紫茉莉的研究，多用于修復(fù)土壤和干旱有關(guān)的研究中，但有關(guān)紫茉莉在鹽脅迫方面的研究還是較少。鹽脅迫對(duì)植物影響具體有以下幾個(gè)方面，鹽脅迫對(duì)植物的影響首先體現(xiàn)在隨著鹽濃度的不斷升高，誘導(dǎo)愈傷組織率降低，植物成活率減少，植物體內(nèi)的水含量也減少[]。隨著不斷的對(duì)植物進(jìn)行鹽脅迫，植物愈傷組織的成活率會(huì)增加,鹽脅迫下植物的生理會(huì)發(fā)生重要的變化,用來(lái)抵抗或適應(yīng)逆境，首先就是膜透性的改變[]。鹽脅迫還會(huì)影響光合作用和呼吸作用的調(diào)控過(guò)程，鹽脅迫下的植物呼吸強(qiáng)度先增強(qiáng)后隨時(shí)間的延長(zhǎng)而降低[]。鹽脅迫下，植物細(xì)胞通常積累一些小分子有機(jī)物質(zhì)來(lái)維持較高的細(xì)胞質(zhì)滲透壓，用來(lái)保證植物能夠從土壤中吸取正常生長(zhǎng)所需的水分[]。鹽脅迫下植物的酶保護(hù)系統(tǒng)也會(huì)發(fā)生變化，因?yàn)辂}脅迫下會(huì)使植物產(chǎn)生大量活性氧自由基，這些自由基不及時(shí)清除的話(huà)就會(huì)導(dǎo)致植物受到損傷[]。鹽脅迫還會(huì)影響植物的離子分布的變化，植物吸收的鈉離子、氯離子-等必須在液泡中，否則會(huì)干擾植物細(xì)胞質(zhì)和葉綠體的生理生化代謝過(guò)程，植物受到鹽脅迫時(shí)，鹽濃度提高會(huì)使胞間鉀離子濃度下降，而鉀離子的減少會(huì)引發(fā)脯氨酸積累的中間信號(hào)，同時(shí)破壞了植物的離子平衡[]。鹽脅迫是限制植物正常生長(zhǎng)發(fā)育的主要環(huán)境因素之一，高濃度的鹽對(duì)植物的損害可以導(dǎo)致植物生長(zhǎng)緩慢、產(chǎn)量降低最終甚至可能植株死亡。本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，不同鹽濃度處理對(duì)紫茉莉外植體與不定芽的生長(zhǎng)特性有很大的影響。鹽脅迫下紫茉莉外植體的苗長(zhǎng)、株高、根的生長(zhǎng)、苗生長(zhǎng)情況，以及紫茉莉不定芽的生根數(shù)、每顆根數(shù)、生長(zhǎng)狀態(tài)都顯著低于對(duì)照，隨著鹽濃度的提高，抑制作用越強(qiáng)。這些表明鹽脅迫是影響植物生長(zhǎng)發(fā)育的重要環(huán)境限制因子之一，可能會(huì)使植物各器官的形態(tài)結(jié)構(gòu)及其結(jié)構(gòu)的相應(yīng)功能改變。當(dāng)鹽濃度為175mmol·L-1時(shí)，苗生長(zhǎng)受到明顯抑制，幾乎沒(méi)有根產(chǎn)生。因此175mmol·L-1可作為紫茉莉耐鹽的臨界濃度，用于下一步紫茉莉耐鹽突變體的篩選。3.2建議總體而言，鹽脅迫對(duì)紫茉莉不定芽的生長(zhǎng)的影響顯著，隨著處理濃度的增加，鹽脅迫對(duì)紫茉莉不定芽生長(zhǎng)的抑制不斷加重。只有合理利用土壤中的鹽環(huán)境，才能使紫茉莉生長(zhǎng)在鹽堿地中成為可能。

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