2025年生化組輪崗考試試題（附答案）一、單項選擇題（每題2分，共20分）1.關于蛋白質二級結構的描述，正確的是：A.α-螺旋中每個肽鍵的N-H與第四個肽鍵的C=O形成氫鍵B.β-折疊僅存在于平行式結構中C.無規(guī)卷曲是完全無序的空間結構D.脯氨酸是α-螺旋的穩(wěn)定氨基酸答案：A2.下列哪種酶催化的反應是糖酵解的限速步驟？A.己糖激酶B.磷酸果糖激酶-1C.丙酮酸激酶D.葡萄糖-6-磷酸異構酶答案：B3.關于酶的競爭性抑制作用，錯誤的是：A.抑制劑與底物結構相似B.抑制程度取決于抑制劑與底物的相對濃度C.表觀Km增大，Vmax不變D.抑制劑與酶的活性中心外部位結合答案：D4.真核生物DNA復制中，負責合成引物的酶是：A.DNA聚合酶αB.DNA聚合酶δC.DNA聚合酶εD.拓撲異構酶答案：A5.三羧酸循環(huán)中，直接生成GTP的反應是：A.異檸檬酸→α-酮戊二酸B.α-酮戊二酸→琥珀酰CoAC.琥珀酰CoA→琥珀酸D.琥珀酸→延胡索酸答案：C6.下列哪項不是tRNA的結構特征？A.3’端含有CCA-OH序列B.含有較多的稀有堿基C.二級結構呈三葉草形D.5’端有帽子結構答案：D7.脂肪酸β-氧化的正確順序是：A.脫氫→加水→再脫氫→硫解B.加水→脫氫→再脫氫→硫解C.脫氫→再脫氫→加水→硫解D.硫解→脫氫→加水→再脫氫答案：A8.逆轉錄過程中，催化cDNA合成的酶是：A.逆轉錄酶（RNA依賴的DNA聚合酶）B.DNA連接酶C.RNA聚合酶ⅡD.拓撲異構酶答案：A9.關于PCR反應的描述，錯誤的是：A.需耐高溫的DNA聚合酶（如Taq酶）B.引物長度通常為15-30個核苷酸C.退火溫度一般高于引物Tm值5-10℃D.循環(huán)次數通常為25-35次答案：C10.下列哪種氨基酸屬于酸性氨基酸？A.精氨酸B.天冬氨酸C.色氨酸D.甲硫氨酸答案：B二、填空題（每空1分，共20分）1.蛋白質的一級結構是指________的排列順序，維持其穩(wěn)定的主要化學鍵是________。答案：氨基酸；肽鍵2.酶的特異性可分為絕對特異性、________和________。答案：相對特異性；立體異構特異性3.糖異生的關鍵酶包括丙酮酸羧化酶、________、果糖-1,6-二磷酸酶和________。答案：磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶；葡萄糖-6-磷酸酶4.核酸的基本組成單位是________，其中DNA的戊糖是________，RNA的戊糖是________。答案：核苷酸；脫氧核糖；核糖5.脂肪酸合成的原料主要是________，其限速酶是________。答案：乙酰CoA；乙酰CoA羧化酶6.真核生物mRNA的加工修飾包括5’端加________、3’端加________和________。答案：帽子結構（m7GpppN）；多聚A尾（polyA）；剪接7.蛋白質生物合成中，密碼子的閱讀方向是________，多肽鏈的延伸方向是________。答案：5’→3’；N端→C端8.常用的蛋白質定量方法包括________（如Lowry法）、________（如Bradford法）和紫外吸收法（280nm）。答案：雙縮脲法；考馬斯亮藍法三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述DNA雙螺旋結構的主要特點。答案：①DNA由兩條反向平行的脫氧核苷酸鏈圍繞同一中心軸形成右手螺旋；②磷酸-脫氧核糖骨架位于外側，堿基對（A=T、G≡C）通過氫鍵連接并垂直于螺旋軸，位于內側；③螺旋直徑約2nm，每圈10個堿基對，螺距3.4nm；④堿基堆積力和氫鍵共同維持結構穩(wěn)定；⑤存在大溝和小溝，是蛋白質識別DNA序列的主要部位。2.比較競爭性抑制與非競爭性抑制的異同。答案：相同點：均通過與酶結合降低酶活性；均可用米氏方程分析動力學變化。不同點：①抑制劑結合部位：競爭性抑制劑與底物競爭酶的活性中心；非競爭性抑制劑結合酶的非活性中心部位（酶-底物復合物或游離酶）。②動力學參數：競爭性抑制時Km增大、Vmax不變；非競爭性抑制時Km不變、Vmax降低。③抑制程度：競爭性抑制可通過增加底物濃度減弱；非競爭性抑制不受底物濃度影響。3.簡述三羧酸循環(huán)的生理意義。答案：①是糖、脂肪、氨基酸徹底氧化的共同途徑（最終生成CO?和H?O）；②是三大營養(yǎng)物質代謝聯系的樞紐（如糖代謝中間產物可轉化為脂肪或非必需氨基酸，脂肪分解產生的甘油可進入糖代謝）；③為其他物質合成提供前體（如α-酮戊二酸→谷氨酸，琥珀酰CoA→血紅素）；④產生大量還原當量（NADH和FADH?），通過氧化磷酸化生成ATP，是機體能量的主要來源。4.說明PCR技術的基本原理及主要步驟。答案：原理：模擬體內DNA復制過程，利用高溫變性、低溫退火、適溫延伸的循環(huán)操作，在體外特異性擴增目標DNA片段。主要步驟：①變性（94-95℃）：雙鏈DNA解鏈為單鏈；②退火（50-60℃）：引物與單鏈DNA模板的互補序列特異性結合；③延伸（72℃）：TaqDNA聚合酶以dNTP為原料，從引物3’端延伸合成新的DNA鏈。重復25-35次循環(huán)后，目標DNA片段呈指數級擴增。5.分析蛋白質變性與復性的條件及生物學意義。答案：變性條件：物理因素（高溫、紫外線、劇烈震蕩）或化學因素（強酸/堿、尿素、重金屬離子）破壞維持空間結構的次級鍵（氫鍵、疏水鍵等），但不破壞一級結構。復性條件：去除變性因素后，若蛋白質一級結構完整且空間結構簡單（如牛胰核糖核酸酶），可重新折疊恢復天然構象和功能。生物學意義：變性可用于消毒滅菌（如高溫煮沸）或蛋白質分離（如沉淀雜質蛋白）；復性是研究蛋白質折疊機制的重要手段，也為重組蛋白的功能恢復（如基因工程生產胰島素）提供理論依據。四、案例分析題（20分）某實驗室進行重組人胰島素原（分子量約9kDa）的原核表達實驗，步驟如下：①構建pET-28a-胰島素原重組質粒（含His標簽）；②轉化BL21(DE3)感受態(tài)細胞，涂布含卡那霉素的LB平板；③挑取單菌落接種至5mLLB液體培養(yǎng)基（含卡那霉素），37℃、200rpm培養(yǎng)至OD600≈0.6；④加入IPTG（終濃度0.5mM）誘導表達4小時；⑤收集菌液，超聲破碎后離心（12,000rpm，4℃，20分鐘），分別取上清和沉淀進行SDS檢測。實驗結果：SDS顯示沉淀中出現明顯目標條帶（約9kDa），而上清中未檢測到目標蛋白。問題：（1）分析目標蛋白主要存在于沉淀中的可能原因。（10分）（2）提出3種優(yōu)化實驗的具體措施，以提高上清中可溶性目標蛋白的表達量。（10分）答案：（1）可能原因：①重組蛋白表達量過高，超過宿主菌折疊能力，導致未正確折疊的蛋白形成包涵體（不溶性顆粒），存在于沉淀中；②胰島素原含有二硫鍵（天然構象需正確配對），原核表達系統(tǒng)（如大腸桿菌）缺乏真核細胞的內質網折疊環(huán)境（如分子伴侶、二硫鍵異構酶），導致錯誤折疊或聚集；③誘導溫度過高（37℃）加速蛋白合成，但不利于正確折疊；④IPTG濃度過高（0.5mM）或誘導時間過長（4小時），進一步加劇包涵體形成；⑤重組蛋白N端的His標簽可能影響其可溶性（如標簽暴露疏水區(qū)域，促進聚集）。（2）優(yōu)化措施：①降低誘導溫度（如20-25℃），減緩蛋白合成速率，為折疊提供更多時間；②減少IPTG濃度（如0.1mM）或縮短誘導時間（如2-3小時），降低表達強度；③共表達分子伴侶（如pG-KJE8質粒編碼DnaK/DnaJ/GrpE和GroEL/GroES）或二硫鍵異構酶（如pET32a含Trx標簽），輔助蛋白正確折疊；④在破碎緩沖液中添加低濃度變性劑