病理科臨床操作規(guī)范及流程標準病理科作為疾病診斷的“金標準”輸出端，其操作的規(guī)范性與流程的標準化直接影響診斷準確性、醫(yī)療安全及患者預后。本文結(jié)合臨床實踐與行業(yè)標準，梳理病理科核心操作的規(guī)范要點與流程標準，為病理技術(shù)人員及診斷醫(yī)師提供實用參考。一、標本接收與預處理（一）標本核對與簽收收到臨床送檢標本時，需雙人核對（至少一名技術(shù)人員與登記人員）以下信息：患者基本信息：姓名、性別、年齡、病歷號與申請單/標本標簽完全一致；標本信息：標本類型（組織、細胞學、冰凍等）、部位、數(shù)量、固定液類型（如含甲醛、無固定液的新鮮標本）；申請單完整性：臨床病史、送檢目的、特殊要求（如冰凍、免疫組化）需清晰可辨。若發(fā)現(xiàn)標本溢漏、標簽模糊、信息不符或固定液不足（如組織體積＞固定液體積1/5），需立即聯(lián)系臨床補送或修正，同步記錄問題詳情（時間、人員、處理措施）并留存影像佐證。（二）標本預處理1.新鮮標本處理：冰凍標本：30分鐘內(nèi)送至冰凍切片室，置于-20℃~-30℃環(huán)境暫存，避免反復凍融；分子病理標本：取新鮮組織（≤0.5cm3）放入RNA/DNA保護液，標注“分子檢測”后轉(zhuǎn)至-80℃冰箱；細胞學標本（如胸腹水）：離心（1500rpm，5分鐘）后留取沉渣，加入等量95%乙醇固定。2.固定標本處理：常規(guī)組織：用中性緩沖甲醛（10%濃度，即3.7%甲醛溶液）固定，固定液體積≥組織體積5倍，固定時間6~24小時（特殊組織如乳腺、淋巴結(jié)可適當延長至48小時，但需避免超過72小時影響抗原活性）；特殊標本（如骨組織）：需先經(jīng)10%甲酸脫鈣（脫鈣液體積≥標本體積10倍），脫鈣后流水沖洗24小時，再行固定。二、組織脫水與包埋（一）梯度脫水脫水流程需嚴格遵循“低濃度→高濃度”梯度，避免組織收縮或膨脹：75%乙醇（1小時）→85%乙醇（1小時）→95%乙醇Ⅰ（1小時）→95%乙醇Ⅱ（1小時）→無水乙醇Ⅰ（30分鐘）→無水乙醇Ⅱ（30分鐘）；脫水時間需根據(jù)組織大小調(diào)整（如小活檢組織可縮短至每步30分鐘，大標本延長至1.5~2小時）。（二）透明與浸蠟透明：二甲苯Ⅰ（15分鐘）→二甲苯Ⅱ（15分鐘），透明時間過長會導致組織變脆，過短則石蠟滲透不足；浸蠟：62℃~65℃石蠟Ⅰ（1小時）→石蠟Ⅱ（2小時），確保組織完全浸透（切面呈均勻蠟黃色）。（三）包埋與切片1.包埋：包埋盒需標注患者姓名、病歷號、標本部位；組織擺放方向：活檢標本“立埋”（最大切面朝上），大標本“平鋪”（重要結(jié)構(gòu)如黏膜面、腫瘤邊緣朝上）；石蠟溫度控制在62℃~65℃，避免過熱導致組織收縮或過冷導致包埋不牢。2.切片：切片厚度：常規(guī)HE切片為3~5μm，冰凍切片為5~8μm，免疫組化切片建議4μm（減少抗原損失）；展片：將切片漂浮于40℃~45℃水浴鍋（水面需清潔無雜質(zhì)），待組織自然展平后，用防脫載玻片撈?。ㄝd玻片需提前經(jīng)APES防脫處理）；烤片：60℃烤箱烤片1~2小時（或56℃過夜），確保切片與玻片充分結(jié)合。三、染色與封片（一）HE染色流程1.脫蠟與水化：二甲苯Ⅰ（10分鐘）→二甲苯Ⅱ（10分鐘）→無水乙醇Ⅰ（5分鐘）→無水乙醇Ⅱ（5分鐘）→95%乙醇（3分鐘）→85%乙醇（3分鐘）→75%乙醇（3分鐘）→蒸餾水（5分鐘）；2.蘇木精染色：蘇木精液浸染5~10分鐘（根據(jù)組織類型調(diào)整，如淋巴組織可縮短至3分鐘），流水沖洗返藍10分鐘；3.伊紅染色：伊紅液浸染1~3分鐘，蒸餾水沖洗；4.脫水與透明：95%乙醇Ⅰ（1分鐘）→95%乙醇Ⅱ（1分鐘）→無水乙醇Ⅰ（1分鐘）→無水乙醇Ⅱ（1分鐘）→二甲苯Ⅰ（1分鐘）→二甲苯Ⅱ（1分鐘）；5.封片：滴加中性樹膠（量以覆蓋組織且無氣泡為宜），加蓋蓋玻片，自然晾干或60℃烤片30分鐘。（二）特殊染色與免疫組化1.特殊染色（如PAS、Masson）：需嚴格遵循試劑盒說明書，注意試劑有效期、孵育溫度（通常37℃）及時間（如PAS染色糖原前處理需10分鐘）；2.免疫組化：抗原修復：根據(jù)抗體類型選擇熱修復（檸檬酸緩沖液，pH6.0或9.0）或酶修復（胰酶/胃蛋白酶），修復時間15~20分鐘；封閉：3%過氧化氫阻斷內(nèi)源性過氧化物酶（10分鐘），5%BSA封閉非特異性結(jié)合（30分鐘，室溫）；一抗孵育：4℃過夜或37℃1小時（濃度按說明書稀釋，如1:100~1:200）；二抗孵育：37℃30分鐘，DAB顯色（5~10分鐘，鏡下控制顯色程度），蘇木精復染細胞核。四、病理診斷與報告簽發(fā)（一）大體與鏡下觀察1.大體觀察：記錄標本大小、形狀、顏色、質(zhì)地、病灶位置（如距切緣距離），拍照留存（重要標本需多角度拍攝）；2.鏡下觀察：先低倍鏡（4×、10×）掃視組織全貌，再高倍鏡（20×、40×）觀察細胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)及特殊病變（如核分裂、壞死），疑難病例需多人閱片（至少兩名主治醫(yī)師）。（二）診斷與報告審核1.診斷分級：Ⅰ級：明確診斷（如“胃腺癌”）；Ⅱ級：意向性診斷（如“考慮腺癌，建議免疫組化協(xié)診”）；Ⅲ級：描述性診斷（如“鏡下見異型細胞，無法確診，建議重取標本”）。2.報告簽發(fā)：常規(guī)報告：4個工作日內(nèi)完成（冰凍報告需30分鐘內(nèi)出具）；審核流程：住院醫(yī)師初診→主治醫(yī)師復核→副主任醫(yī)師以上終審（疑難病例需科內(nèi)會診或外送專家）；報告內(nèi)容：患者信息、標本類型、大體描述、鏡下診斷、免疫組化/分子結(jié)果（如有）、建議（如隨訪、補充檢查）。五、質(zhì)量控制與安全管理（一）室內(nèi)質(zhì)控切片質(zhì)量：每月隨機抽取10%切片，評估無褶皺、脫片、染色均勻度（合格率≥95%）；診斷一致性：每季度選取20例疑難病例，由3名醫(yī)師盲審，診斷符合率≥90%；設(shè)備校準：切片機、染色機每周清潔維護，冰凍切片機每月校準溫度（誤差≤±1℃）。（二）生物安全與防護標本處理：全程佩戴乳膠手套、口罩，操作銳器（如刀片、針頭）時禁止徒手傳遞，使用后立即放入銳器盒；醫(yī)療廢物：甲醛固定液、二甲苯等廢液分類收集（化學性廢物），病理蠟塊、切片按“感染性廢物”處理；應急處理：若發(fā)生銳器傷，立即擠出傷口血液，流動水沖洗15分鐘，碘伏消毒，24小時內(nèi)上報并完善乙肝、HIV等檢測。六、特殊技術(shù)操作規(guī)范（一）冰凍切片標本接收后15分鐘內(nèi)啟動冰凍機（溫度預冷至-25℃~-30℃）；切片后立即固定（95%乙醇，1分鐘）、HE染色（時間減半），30分鐘內(nèi)出具初步診斷（注明“冰凍快速診斷，最終以石蠟報告為準”）；冰凍剩余組織需常規(guī)石蠟包埋，與冰凍切片診斷比對。（二）分子病理核酸提取：使用無酶槍頭、離心管，操作區(qū)定期紫外線消毒（30分鐘/次）；PCR擴增：試劑配制在“試劑準備區(qū)”，加樣在“樣本處理區(qū)”，擴增在“擴增區(qū)”，三區(qū)物理隔離；結(jié)果判讀：設(shè)置陰性、陽性對照，Ct值＞35時需重復實驗或判為陰性。七、應急處理與差錯防范（一）標本相關(guān)差錯標本丟失/混淆：立即啟動“標本追溯流程”，核查接收、處理、包埋記錄，調(diào)取監(jiān)控（如有），2小時內(nèi)聯(lián)系臨床補送標本；固定液錯誤：若誤將無水乙醇當固定液，需重新取材（如標本可再取）或與臨床溝通說明對診斷的影響。（二）診斷與報告差錯診斷錯誤：發(fā)現(xiàn)后立即通知臨床暫停相關(guān)治療，重新閱片（必要時外送會診），24小時內(nèi)出具修正報告并書面致歉；報告漏發(fā)/錯發(fā)：建立“報告簽發(fā)臺賬”，每日下班前核對報告數(shù)量與申請單，漏發(fā)報告4小時內(nèi)補出，錯發(fā)報告立即召回并重新簽發(fā)。（三）設(shè)備故