新型冠狀病毒核酸檢測標(biāo)準(zhǔn)流程核酸檢測作為新型冠狀病毒感染診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，其標(biāo)準(zhǔn)化操作流程直接關(guān)系到檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、生物安全防護(hù)的有效性，以及疫情防控決策的科學(xué)性。以下從檢測全流程角度，對新冠病毒核酸檢測的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范進(jìn)行詳細(xì)解析，為醫(yī)療機構(gòu)、第三方檢測機構(gòu)及基層防疫單位提供實操指引。一、檢測前準(zhǔn)備：資質(zhì)、物資與環(huán)境的三重保障（一）人員資質(zhì)與培訓(xùn)檢測相關(guān)人員需具備醫(yī)學(xué)檢驗或相關(guān)專業(yè)資質(zhì)，且完成生物安全培訓(xùn)（含二級生物安全實驗室操作規(guī)范）、核酸檢測專項培訓(xùn)（含采樣、提取、擴(kuò)增全流程），考核合格后方可上崗。采樣人員還需掌握急救技能，應(yīng)對采樣過程中可能出現(xiàn)的暈厥、嘔吐等突發(fā)情況。（二）物資準(zhǔn)備清單1.采樣物資：病毒采樣管（含保存液，需與拭子匹配）、一次性使用無菌采樣拭子（鼻咽/口咽型）、密封袋、條碼標(biāo)簽（含唯一識別碼）。2.防護(hù)裝備：N95及以上級別口罩、醫(yī)用防護(hù)服（連體式，符合GB____標(biāo)準(zhǔn)）、一次性醫(yī)用手套（雙層）、防護(hù)面屏/護(hù)目鏡、鞋套。3.檢測試劑與設(shè)備：核酸提取試劑（磁珠法/柱提法）、擴(kuò)增試劑（含內(nèi)標(biāo)，需驗證分析性能）、PCR擴(kuò)增儀（定期校準(zhǔn)，溫度精度±0.5℃）、核酸提取儀（運行穩(wěn)定，通量匹配需求）。4.輔助物資：75%醫(yī)用酒精（采樣前后手消毒、設(shè)備表面消毒）、含氯消毒劑（環(huán)境終末消毒）、醫(yī)療廢物包裝袋（雙層，耐穿刺）。（三）環(huán)境與分區(qū)管理1.采樣點設(shè)置：劃分清潔區(qū)（工作人員更衣、物資準(zhǔn)備）、緩沖區(qū)（防護(hù)裝備穿脫）、污染區(qū)（采樣操作），三區(qū)物理隔離，單向流動（清潔區(qū)→緩沖區(qū)→污染區(qū)）。采樣臺需配備手消毒裝置、醫(yī)療廢物桶，地面及臺面每2小時消毒1次。2.實驗室布局：遵循“三區(qū)兩通道”（試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)，人員/樣本通道分離），各區(qū)壓力梯度為：試劑準(zhǔn)備區(qū)（正壓）＞樣本制備區(qū)（微負(fù)壓）＞擴(kuò)增區(qū)（負(fù)壓），防止氣溶膠交叉污染。二、采樣流程：規(guī)范操作保障樣本質(zhì)量（一）鼻咽拭子采樣（成人優(yōu)先推薦）1.患者體位：頭部后仰45°，暴露鼻咽腔（兒童可由助手固定頭部，避免晃動）。2.采樣操作：采樣者手持拭子（避免觸碰手部），沿鼻腔下鼻道（與面部垂直方向）緩緩插入，深度約為鼻尖至耳垂距離的1/2~2/3，旋轉(zhuǎn)拭子3圈（約10秒），輕柔退出，立即將拭子頭浸入采樣管保存液中，折斷拭桿（低于液面），旋緊管蓋。3.注意事項：若遇阻力或患者劇烈不適，立即停止操作；采樣后囑患者避免擤鼻，防止樣本泄漏。（二）口咽拭子采樣（兒童、鼻咽部禁忌者適用）1.患者配合：頭部微仰，張口發(fā)“啊”音，充分暴露咽后壁、扁桃體。2.采樣操作：拭子越過舌根，在咽后壁、雙側(cè)扁桃體隱窩處各擦拭至少3次（總時長≥15秒），動作輕柔避免嘔吐反射，后續(xù)處理同鼻咽拭子。3.特殊情況：對嘔吐敏感者，可提前含服利多卡因膠漿（需評估過敏史）；采樣后及時清理嘔吐物，使用含氯消毒劑覆蓋消毒30分鐘。（三）樣本標(biāo)識與封裝采樣管外貼唯一條碼，標(biāo)注受檢者姓名、采樣時間、采樣類型；將采樣管放入密封袋（第一層），再放入生物安全運輸箱（內(nèi)置冰排，溫度2~8℃），隨附《樣本轉(zhuǎn)運單》（含受檢者信息、采樣時間、檢測目的）。三、樣本轉(zhuǎn)運與實驗室接收：全程冷鏈與合規(guī)核查（一）轉(zhuǎn)運要求1.包裝合規(guī)：采用UN2814生物安全運輸箱（符合WHO《實驗室生物安全手冊》要求），內(nèi)層密封袋需防滲漏，外層箱體外貼“感染性物質(zhì)”標(biāo)識。2.運輸時限：常溫下（25℃以下），樣本需在6小時內(nèi)送達(dá)實驗室；若超過6小時，需2~8℃冷鏈運輸，且總轉(zhuǎn)運時間不超過24小時（特殊情況可-70℃凍存，但需避免反復(fù)凍融）。3.交接記錄：轉(zhuǎn)運人員與實驗室接收人員雙簽字確認(rèn)，記錄樣本數(shù)量、狀態(tài)（是否泄漏、保存液是否足量）、運輸時間。（二）實驗室接收核查1.外觀檢查：確認(rèn)運輸箱無破損、密封袋無泄漏、樣本管無裂紋，保存液無渾濁/沉淀。2.信息核對：逐一核對樣本條碼與轉(zhuǎn)運單信息，記錄異常樣本（如保存液不足、拭子外露），及時反饋采樣點重新采樣。3.樣本暫存：合格樣本立即轉(zhuǎn)入2~8℃冰箱暫存（≤24小時），或-20℃凍存（≤7天），-70℃長期保存（需避免反復(fù)凍融，影響核酸穩(wěn)定性）。四、核酸提取與擴(kuò)增：精準(zhǔn)操作把控檢測核心（一）實驗室分區(qū)操作1.試劑準(zhǔn)備區(qū)：在生物安全柜內(nèi)配制擴(kuò)增試劑（按說明書復(fù)溶、混勻，避免劇烈振蕩產(chǎn)生氣溶膠），分裝至PCR反應(yīng)管（每管體積與樣本體積匹配），做好防污染標(biāo)記。2.樣本制備區(qū)：在生物安全柜內(nèi)打開采樣管，使用移液器吸取保存液（避免觸碰拭子），加入核酸提取板（或提取管），按提取試劑說明書進(jìn)行裂解、純化（磁珠法需注意磁力架吸附時間，柱提法需注意離心轉(zhuǎn)速）。3.擴(kuò)增區(qū)：將提取的核酸（或提取產(chǎn)物）加入PCR反應(yīng)管，設(shè)置擴(kuò)增程序（以主流試劑為例：逆轉(zhuǎn)錄50℃15分鐘，預(yù)變性95℃3分鐘，循環(huán)擴(kuò)增95℃15秒+55℃30秒，共45個循環(huán)，最后40℃30秒），擴(kuò)增儀需提前預(yù)熱，運行過程中禁止開蓋。（二）關(guān)鍵質(zhì)控點內(nèi)標(biāo)監(jiān)控：每批樣本需設(shè)置陰性對照（無模板水）、陽性對照（已知陽性質(zhì)控品）、弱陽性對照（濃度接近檢測限，驗證靈敏度），若內(nèi)標(biāo)未擴(kuò)增（排除試劑/操作問題），或陽性對照未出峰，需重新實驗。防污染措施：各區(qū)工具（移液器、離心管、吸頭）專用，每次實驗后紫外線照射30分鐘（生物安全柜、擴(kuò)增儀），地面及臺面用含氯消毒劑擦拭。五、結(jié)果判讀與報告：科學(xué)解讀+合規(guī)上報（一）結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)1.陰性結(jié)果：靶基因（ORF1ab、N基因等）無擴(kuò)增曲線，或Ct值＞40（需結(jié)合內(nèi)標(biāo)是否正常，排除采樣/提取失敗）。2.陽性結(jié)果：至少1個靶基因Ct值≤35，或復(fù)檢后Ct值≤40（需滿足“雙靶標(biāo)陽性”或“單靶標(biāo)陽性+臨床癥狀/影像學(xué)支持”，避免假陽性）。3.無效結(jié)果：內(nèi)標(biāo)未擴(kuò)增（操作失誤或樣本抑制）、擴(kuò)增曲線異常（如基線漂移），需重新采樣檢測。（二）報告流程1.原始記錄：實驗人員記錄擴(kuò)增曲線、Ct值、質(zhì)控結(jié)果，雙人核對后簽字。2.報告簽發(fā)：檢驗醫(yī)師結(jié)合臨床信息（如流行病學(xué)史、癥狀）審核報告，陽性結(jié)果需立即電話通知受檢者及屬地疾控，同步上傳至“新冠病毒核酸檢測信息系統(tǒng)”。3.結(jié)果追溯：保存原始數(shù)據(jù)（擴(kuò)增曲線、樣本條碼）至少3個月，便于復(fù)核或溯源。六、質(zhì)量控制與安全管理：全流程風(fēng)險防控（一）室內(nèi)質(zhì)量控制日常質(zhì)控：每日實驗前運行設(shè)備質(zhì)控（PCR儀溫度校準(zhǔn)、核酸提取儀性能驗證）；每批檢測設(shè)置陰/陽/弱陽性對照，監(jiān)控試劑穩(wěn)定性。偏差處理：若質(zhì)控失敗，立即暫停檢測，排查試劑批次、操作流程、設(shè)備故障，待問題解決后重新實驗。（二）生物安全防護(hù)個人防護(hù)：采樣/檢測人員全程穿戴防護(hù)裝備，每2小時更換手套（污染時立即更換），脫卸裝備時嚴(yán)格遵循“七步洗手法”，避免污染眼、口、鼻。廢棄物處理：采樣拭子、廢棄試劑管等裝入雙層醫(yī)療廢物袋，高壓滅菌（121℃，30分鐘）后按醫(yī)療廢物處置；實驗室污水需經(jīng)消毒處理（余氯≥2mg/L，作用1小時）后排入市政管網(wǎng)。（三）應(yīng)急預(yù)案樣本溢灑：立即用吸水紙覆蓋，倒取1%含氯消毒劑浸潤30分鐘，按醫(yī)療廢物處理溢灑物，同時消毒污染區(qū)域。職業(yè)暴露：皮膚暴露用肥皂水沖洗+75%酒精消毒；黏膜暴露用生理鹽水沖洗，必要時報告醫(yī)療機構(gòu)進(jìn)行暴露后預(yù)防（如