ICS11.120.01

CCSC00

14

山西省地方標(biāo)準(zhǔn)

DB14/T3467—2025

制藥企業(yè)質(zhì)量控制藥品微生物檢驗(yàn)無(wú)菌操

作技術(shù)要求

2025-07-10發(fā)布2025-10-10實(shí)施

山西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB14/T3467—2025

目次

前言..................................................................................II

1范圍................................................................................1

2規(guī)范性引用文件......................................................................1

3術(shù)語(yǔ)和定義..........................................................................1

4基本要求............................................................................1

5實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備............................................................................2

6實(shí)驗(yàn)過(guò)程............................................................................2

7實(shí)驗(yàn)記錄............................................................................3

參考文獻(xiàn)...............................................................................4

I

DB14/T3467—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由山西省藥品監(jiān)督管理局提出、組織實(shí)施和監(jiān)督實(shí)施。

山西省市場(chǎng)監(jiān)督管理局對(duì)本文件的組織實(shí)施情況進(jìn)行監(jiān)督檢查。

本文件由山西省藥品質(zhì)量管理標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（SXS/TC32）歸口。

本文件起草單位：山西省檢驗(yàn)檢測(cè)中心（山西省標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量技術(shù)研究院）、山西錦爍生物醫(yī)藥科技有

限公司。

本文件主要起草人：曲萍、劉瑋、邢瑤瑤、武瑞杰、李琛、張璇、張倩、田小鵬、崔小芳、甘雨鑫、

鄧自新、王春芳、羅晉萍、楊國(guó)偉。

II

DB14/T3467—2025

制藥企業(yè)質(zhì)量控制藥品微生物檢驗(yàn)無(wú)菌操作技術(shù)要求

1范圍

本文件規(guī)定了藥品微生物檢驗(yàn)無(wú)菌操作在環(huán)境、儀器設(shè)備、人員、實(shí)驗(yàn)操作等方面的技術(shù)要求。

本文件適用于制藥企業(yè)藥品微生物檢驗(yàn)。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過(guò)文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

中華人民共和國(guó)藥典

藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范

3術(shù)語(yǔ)和定義

下列術(shù)語(yǔ)和定義適用于本文件。

微生物檢驗(yàn)

通過(guò)微生物的分離培養(yǎng)、生理生化反應(yīng)、顯微鏡檢查等方法對(duì)樣品中的微生物進(jìn)行檢驗(yàn)。檢驗(yàn)方法

主要分為兩種：定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)。定性試驗(yàn)是測(cè)定樣品中是否存在活的微生物；定量試驗(yàn)是測(cè)定樣

品中存在活的微生物數(shù)量。

無(wú)菌操作

在操作過(guò)程中人為地排除一切不需要的微生物，是微生物學(xué)的基本技術(shù)。

4基本要求

微生物檢驗(yàn)應(yīng)在符合《中華人民共和國(guó)藥典》要求的環(huán)境中進(jìn)行。微生物實(shí)驗(yàn)室的布局應(yīng)充分考

慮實(shí)驗(yàn)設(shè)備安裝、良好微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)范和實(shí)驗(yàn)室安全的要求。

微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)包括潔凈區(qū)和生物安全控制區(qū)，生物安全控制區(qū)應(yīng)配備滿足要求的生物安全柜。

潔凈區(qū)按照《中華人民共和國(guó)藥典》要求進(jìn)行日常監(jiān)測(cè)和定期監(jiān)測(cè)。潔凈區(qū)的空氣過(guò)濾系統(tǒng)應(yīng)定期維護(hù)

和更換，紫外線燈應(yīng)根據(jù)紫外線強(qiáng)度檢測(cè)結(jié)果或其使用壽命參數(shù)及時(shí)更換燈管，做好相關(guān)記錄。

微生物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程，包括潔凈區(qū)管理，儀器設(shè)備管理、培養(yǎng)基管理、菌種

管理、消毒滅菌程序、實(shí)驗(yàn)操作等，潔凈區(qū)出入程序、潔凈區(qū)自?xún)魰r(shí)間、消毒滅菌程序、培養(yǎng)基貯藏條

件等關(guān)鍵環(huán)節(jié)均應(yīng)進(jìn)行驗(yàn)證。

微生物實(shí)驗(yàn)室配置的儀器設(shè)備應(yīng)能滿足微生物檢驗(yàn)工作的需要。關(guān)鍵儀器設(shè)備應(yīng)定期進(jìn)行檢定校

準(zhǔn)；高壓蒸汽滅菌器按國(guó)家有關(guān)規(guī)定管理并定期檢驗(yàn)，陽(yáng)性高壓蒸汽滅菌器應(yīng)獨(dú)立配備；儀器設(shè)備脫離

實(shí)驗(yàn)室或檢修后，恢復(fù)使用前應(yīng)重新確認(rèn)其性能符合要求。

1

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關(guān)鍵儀器設(shè)備的使用和日常監(jiān)控應(yīng)有記錄，包含但不限于以下內(nèi)容：

——應(yīng)對(duì)培養(yǎng)箱、冰箱、超低溫冰箱、高壓蒸汽滅菌器的關(guān)鍵參數(shù)(如溫度、壓力）進(jìn)行連續(xù)觀測(cè)；

——應(yīng)定期對(duì)超凈工作臺(tái)、生物安全柜進(jìn)行監(jiān)測(cè)；

——無(wú)菌檢查用隔離系統(tǒng)（以下統(tǒng)稱(chēng)隔離系統(tǒng)）在操作周期內(nèi)應(yīng)對(duì)設(shè)備運(yùn)行狀態(tài)和內(nèi)部環(huán)境指標(biāo)

進(jìn)行監(jiān)測(cè)，確認(rèn)其無(wú)菌維持能力；

——每次無(wú)菌檢查開(kāi)始前及結(jié)束后，宜對(duì)隔離系統(tǒng)的艙體和手套/袖套的完整性進(jìn)行檢測(cè)，檢測(cè)頻

率也可根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定。

應(yīng)定期對(duì)儀器設(shè)備進(jìn)行維護(hù)和性能驗(yàn)證，并記錄。容易污染微生物的儀器設(shè)備應(yīng)定期清潔和消毒；

超凈工作臺(tái)單次使用最高時(shí)長(zhǎng)應(yīng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證；滅菌設(shè)備應(yīng)定期使用生物指示劑檢查滅菌效果，指示劑放在

不易達(dá)到滅菌的部位。

從事微生物檢驗(yàn)工作的人員（以下統(tǒng)稱(chēng)檢驗(yàn)人員）應(yīng)具備微生物學(xué)或相近專(zhuān)業(yè)知識(shí)的教育背景。

檢驗(yàn)人員應(yīng)經(jīng)過(guò)相關(guān)培訓(xùn)，培訓(xùn)內(nèi)容包括實(shí)驗(yàn)技術(shù)、儀器操作、質(zhì)量管理、生物安全和衛(wèi)生等。

非簡(jiǎn)單壓力容器操作人員應(yīng)持有特種設(shè)備作業(yè)人員證書(shū)。

應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)人員進(jìn)行健康管理，并建立健康檔案。檢驗(yàn)人員上崗前應(yīng)進(jìn)行健康檢查且以后每年至少

進(jìn)行一次健康檢查。

微生物實(shí)驗(yàn)室僅限經(jīng)批準(zhǔn)的人員進(jìn)入。任何進(jìn)入潔凈區(qū)的人員均應(yīng)按照規(guī)定更衣，無(wú)菌衣的選材、

式樣及穿戴方式應(yīng)符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求。進(jìn)入潔凈區(qū)時(shí)不應(yīng)化妝和佩帶飾物。

5實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

開(kāi)啟潔凈區(qū)空氣凈化系統(tǒng)、超凈工作臺(tái)風(fēng)機(jī)和紫外線燈，進(jìn)行自?xún)?，使環(huán)境達(dá)到相應(yīng)潔凈度。

采用經(jīng)驗(yàn)證的滅菌程序?qū)?shí)驗(yàn)物品正確實(shí)施滅菌，且有明顯滅菌標(biāo)識(shí)。

如需無(wú)菌取樣，應(yīng)采用無(wú)菌操作技術(shù)在具有無(wú)菌條件的特定區(qū)域中進(jìn)行。取樣的任何消毒過(guò)程不

應(yīng)影響樣品中微生物的檢出。

如使用隔離系統(tǒng)，將樣品和實(shí)驗(yàn)物品等預(yù)清潔后放入艙體內(nèi)，開(kāi)啟滅菌程序。

6實(shí)驗(yàn)過(guò)程

人和物應(yīng)按照經(jīng)過(guò)驗(yàn)證的程序進(jìn)入潔凈區(qū)，控制進(jìn)入人數(shù)并盡量減少人員走動(dòng)。

雙手消毒后戴一次性無(wú)菌手套，在超凈工作臺(tái)中央無(wú)菌區(qū)域內(nèi)進(jìn)行操作。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)注意以下要

求：

——保持工作臺(tái)面整潔，必要物品可暫時(shí)放置，其他實(shí)驗(yàn)物品用完后及時(shí)移出，以利氣體流通；

——在酒精燈火焰旁的無(wú)菌區(qū)操作，動(dòng)作輕緩，幅度宜小，避免不必要的動(dòng)作；

——用適宜方法對(duì)直接接觸樣品的包裝表面進(jìn)行消毒后打開(kāi)包裝；

——加稀釋液時(shí)，不應(yīng)觸碰樣品瓶（袋）口；

——進(jìn)行10倍遞增稀釋時(shí)，刻度吸管移至下一級(jí)稀釋管的內(nèi)壁近液面處（勿接觸液面），緩慢放

出樣液，更換新的刻度吸管進(jìn)行吹打混勻（不應(yīng)過(guò)于劇烈），也可置混勻器上混勻；

——一支吸管只能吸取一種溶液，不應(yīng)交叉使用；

——加液時(shí)如吸管接觸瓶口、瓶外壁，應(yīng)立即棄用，更換另一支無(wú)菌吸管繼續(xù)實(shí)驗(yàn)；

——稀釋液和培養(yǎng)基溫度不應(yīng)超過(guò)45℃；固體培養(yǎng)基滅菌后只可再融化1次，融化后在45℃～

50℃保溫時(shí)間不應(yīng)超過(guò)8小時(shí)；

2

DB14/T3467—2025

——傾倒培養(yǎng)基時(shí)瓶口不應(yīng)接觸平皿，每皿（直徑90mm）注入的培養(yǎng)基量以15mL～20mL為宜；

——不應(yīng)在打開(kāi)容器的正上方操作；

——開(kāi)啟任何一次性無(wú)菌耗材都應(yīng)在超凈工作臺(tái)內(nèi)完成，避免與任何物品觸碰。

每次實(shí)驗(yàn)均應(yīng)設(shè)置陰性對(duì)照。陽(yáng)性菌操作應(yīng)在生物安全控制區(qū)完成，不應(yīng)與待檢樣品共用操作空

間；染菌的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有消毒劑的消毒桶內(nèi)消毒，待實(shí)驗(yàn)結(jié)束后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌

（121℃，30min）處理。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)同時(shí)進(jìn)行沉降菌在線監(jiān)測(cè)。無(wú)菌檢查結(jié)束后至實(shí)施消毒措施前，應(yīng)對(duì)檢驗(yàn)人員的雙

手5指手套、實(shí)驗(yàn)臺(tái)面等關(guān)鍵控制點(diǎn)進(jìn)行表面微生物測(cè)試。

實(shí)驗(yàn)結(jié)束，將實(shí)驗(yàn)物品帶出潔凈區(qū)，對(duì)工作臺(tái)面和地面進(jìn)行消毒，自?xún)艉箨P(guān)閉空氣凈化系統(tǒng)。

應(yīng)排除任何可能導(dǎo)致微生物污染的活動(dòng)。出現(xiàn)微生物生長(zhǎng)的培養(yǎng)物不應(yīng)在潔凈區(qū)內(nèi)打開(kāi)，對(duì)染菌

的樣品及培養(yǎng)物應(yīng)有效隔離。一些樣品若需要證明微生物的生長(zhǎng)或進(jìn)一步分析培養(yǎng)物特性，應(yīng)在生物安

全控制區(qū)域進(jìn)行。病原微生物的分離鑒定工作應(yīng)在相應(yīng)級(jí)別的生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。

7實(shí)驗(yàn)記錄

實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

——實(shí)驗(yàn)日期；

——樣品名稱(chēng)；

——依據(jù)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)或標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；

——實(shí)驗(yàn)參數(shù)（如環(huán)境條件、關(guān)鍵儀器設(shè)備信息、培養(yǎng)基名稱(chēng)和批號(hào)、菌種信息、培養(yǎng)溫度等）；

——實(shí)驗(yàn)過(guò)程；

——實(shí)驗(yàn)結(jié)果；

——實(shí)驗(yàn)人員和復(fù)核人員的簽名等。

實(shí)驗(yàn)記錄的修改應(yīng)能追溯至前一版本，保存原始及修改后的數(shù)據(jù)和文檔，包括修改日期、修改內(nèi)

容和修改人員。