ICS65.020.30

CCSB44

44

廣東省地方標準

DB44/T2681—2025

日化用品致畸毒性斑馬魚評價指南

Guidelinesfortheevaluationofteratogenictoxicityofdailychemicalproductsusing

zebrafish

2025-06-11發(fā)布2025-09-11實施

廣東省市場監(jiān)督管理局發(fā)布

DB44/T2681—2025

目次

前言.................................................................................II

1范圍...............................................................................1

2規(guī)范性引用文件.....................................................................1

3術語和定義.........................................................................1

4原理...............................................................................2

5試驗條件...........................................................................2

6試驗方法...........................................................................2

7受試物含量的測定...................................................................3

8發(fā)育情況檢查.......................................................................3

9數據處理...........................................................................3

10致畸危害評估......................................................................3

11結果解釋..........................................................................4

附錄A（資料性）測試流程.............................................................5

附錄B（資料性）各檢查指標參考特征...................................................6

附錄C（資料性）致畸危害指數.........................................................7

參考文獻..............................................................................8

I

DB44/T2681—2025

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

請注意本文件的某些內容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機構不承擔識別專利的責任。

本文件由廣東省科學技術廳提出并組織實施。

本文件由廣東省實驗動物標準化技術委員會（GD/TC93）歸口。

本文件起草單位：廣東省生物技術研究院（廣東省實驗動物監(jiān)測中心）、水中銀（國際）生物科技

有限公司、廣州質量監(jiān)督檢測研究院。

本文件主要起草人：蔡磊、苗宗余、陳雪平、劉香梅、葉惠欣、吳美慧、劉書華、李培寧、彭鏡琿、

張鈺。

II

DB44/T2681—2025

日化用品致畸毒性斑馬魚評價指南

1范圍

本文件提出了日化用品致畸毒性斑馬魚評價主要試驗條件、試驗方法、發(fā)育情況檢查、數據處理和

致畸危害評估的建議，并給出了相關信息。

本文件適用于日化用品產品及其原料的致畸毒性評價。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T39649實驗動物實驗魚質量控制

HJ1069水質急性毒性的測定斑馬魚卵法

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

斑馬魚daniorerio

斑馬魚是一種原產于南亞地區(qū)的小型淡水魚，具有繁殖能力強、胚胎透明和易于飼養(yǎng)等特點。

斑馬魚胚胎zebrafishembryo

處在依靠卵黃提供能量發(fā)育階段的斑馬魚。

斑馬魚仔魚zebrafishlarvae

從卵膜內孵化出到卵黃吸收完畢且具奇鰭褶的斑馬魚。

致畸毒性teratogenicity

受試物在器官發(fā)育期間引起胚胎永久性結構異常的毒性。

無可觀察效應濃度noobservedeffectconcentration,NOEC

與對照組相比，對斑馬魚不產生顯著效應的最高受試物濃度。

半數致死濃度halflethalconcentration,LC50

在一定觀察期內，造成50%的斑馬魚死亡的受試物濃度。

半數致畸效應濃度halfteratogenesiseffectiveconcentration,EC50

在一定觀察期內，引起50%斑馬魚產生致畸效應的受試物濃度。

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4原理

通過將斑馬魚胚胎暴露于受試物水溶液中，在一定時間后觀察斑馬魚胚胎各組織器官發(fā)育情況，包

括死亡、畸形等指標，評價受試物是否具有致畸毒性。

5試驗條件

主要設備

5.1.1通常宜配備斑馬魚養(yǎng)殖設備、繁殖配對器具、胚胎孵化用光照培養(yǎng)箱、帶成像功能的顯微鏡等

主要設備；養(yǎng)殖容器和試驗用器宜由對生物無毒害的材質制備，如玻璃、聚苯乙烯等。

5.1.2根據試驗需要，建議配備適宜的輔助設備，包括恒溫培養(yǎng)箱、水質檢測設備等。

主要試劑

5.2.1斑馬魚養(yǎng)殖及試驗宜使用標準稀釋水，宜按照HJ1069中規(guī)定的斑馬魚養(yǎng)殖及試驗用標準稀釋

水的配置方法執(zhí)行。

5.2.2選擇合適物質作為參比毒物，宜按照HJ1069中規(guī)定的參比毒物的種類及濃度設置方法執(zhí)行。

5.2.3除非另有說明，試驗所用試劑宜為符合國家標準的分析純試劑。

6試驗方法

受試物制備

6.1.1水溶性受試物

宜使用標準稀釋水將受試物配制成測試溶液。

6.1.2非水溶性受試物

可選常用助溶劑如甲醇或二甲基亞砜等，根據受試物特點及已有關于助溶劑對斑馬魚毒性的研究

數據，綜合考慮選擇適宜的助溶劑及助溶濃度。

實驗生物準備

6.2.1宜選擇種質、遺傳、病原及環(huán)境質量可控的斑馬魚作為實驗生物，標準GB/T39649給出了相應

的要求，可參照執(zhí)行。

6.2.2獲得高質量的斑馬魚胚胎是保障試驗結果可靠的關鍵，標準HJ1069給出了斑馬魚胚胎獲取的

具體要求，可參照執(zhí)行。

6.2.3通常宜選取受精后6h～8h健康的斑馬魚胚胎作為實驗生物。

暴露試驗

6.3.1預試驗

當受試物毒性難以預估時，建議進行預試驗。通常以較高稀釋倍數設置連續(xù)的幾個受試物濃度組

（如以5倍或10倍為梯度進行設置），確定100%死亡或100%致畸至無死亡或無致畸的濃度范圍。如用到

助溶劑，則設置相應的助溶劑對照組。附錄A給出了測試流程，可參照使用。

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DB44/T2681—2025

6.3.2正式試驗

根據預試驗或已有的相關毒性數據，確定受試物的測試濃度范圍。測試濃度宜按照幾何級數

進行分布，通常設置不少于5個連續(xù)的濃度組，濃度間隔系數不大于3.2。

每個測試組需要設置生物學重復，通常不少于3個平行組，每個平行組不少于10粒胚胎。試

驗開始時準確記錄胚胎所處的發(fā)育時期。

推薦采用微孔板作為測試容器，每孔放置1粒胚胎，建議每孔測試溶液體積不小于0.2mL。

盡可能減少對胚胎的干擾，分放胚胎時總操作時長宜控制在60min內。

完成胚胎分放后，將含胚胎的測試容器放置于恒溫培養(yǎng)箱或恒溫室中，溫度和光照等宜控制

在適宜斑馬魚生長發(fā)育的范圍，如溫度通常為26℃±1℃、光照通常為54lx～324lx、試驗液中溶解氧

飽和度通常不宜低于80%等。通常試驗持續(xù)時間為96h。

對于不能確定理化性質是否穩(wěn)定的受試物，可按需要定期更換測試溶液。

7受試物含量的測定

對于不能確定理化性質是否穩(wěn)定的受試物，建議對受試溶液進行含量測定，如對新配制的受試溶液

和試驗即將結束前的受試溶液進行取樣測試，也可根據需要進行多點含量測定。對于已有可靠歷史研究

數據證明其理化性質穩(wěn)定的受試物，根據試驗需要對其含量進行測定。

8發(fā)育情況檢查

一般觀察

持續(xù)監(jiān)測、觀察、記錄胚胎的死亡個數、出膜數量，并將死亡的魚胚胎和卵膜移除；觀察時間可依

具體試驗的需要設定，一般建議每24h觀察并記錄一次。

組織器官發(fā)育檢查

試驗結束時，利用體視顯微鏡逐一檢查存活個體各組織和器官發(fā)育情況，并記錄相關數據。觀察時

間可依具體試驗的需要設定，一般建議每24h觀察并記錄一次。附錄B給出了各指標的參考特征，可參

考使用。

9數據處理

對各項指標數據進行匯總，采用適當的統(tǒng)計學方法（如方差分析等）確定各單項指標的NOEC，以

最低NOEC作為該受試物的NOEC值。

對胚胎死亡率及致畸率和濃度進行劑量反應曲線擬合，分別確定LC50和各單項指標的EC50，其

中以最低EC50作為該受試物的EC50值。

試驗結果宜同時滿足對照組和助溶劑對照組胚胎死亡率和致畸率不大于10%，以及參比毒物組胚

胎死亡率或致畸率與對照組有顯著性差異（p＜0.05）。

10致畸危害評估

綜合毒性試驗數據，評估受試物無致畸效應對應的濃度范圍。

3

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結合LC50和EC50數據，進一步綜合評估受試物致畸危害風險，附錄C給出了常用的致畸危害評估方

法，可參考使用；在能提供充足科學依據情況下，也可選用其他致畸危害評估方法。

11結果解釋

解釋致畸試驗結果時，應注意種屬的差異。試驗結果從動物外推到人存在著一定的局限性。

4

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A

A

附錄A

（資料性）

測試流程

A.1斑馬魚胚胎致畸毒性測試流程

見圖A.1。

圖A.1斑馬魚胚胎致畸毒性測試流程

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B

B

附錄B

（資料性）

各檢查指標參考特征

B.1一般檢查指標

B.1.1死亡個數

統(tǒng)計并記錄各組死亡胚胎個數，死亡判定依據為心臟停止跳動。

B.1.2畸形數量

統(tǒng)計各組畸形個數，畸形判定依據為與對照組相比胚胎任何可能出現的形態(tài)、體色等特征改變。

B.1.3開始出膜時間

胚胎發(fā)育至24h后，每24h觀察各組胚胎出膜情況，記錄出膜時間。

B.1.4出膜數量

胚胎發(fā)育至24h后，每24h統(tǒng)計一次各組胚胎出膜的個數。

B.1.5其他異常情況

對試驗期間可能觀察到的其他異常情況進行記錄。

B.2器官檢查指標

B.2.1檢查部位

對主要器官和組織發(fā)育情況進行檢查并記錄，通常包括：頭部、心臟、肝臟、腎臟、卵黃囊、腸道、

脊椎、肌肉、皮膚、鰭條等。

B.2.2檢查方法

參考國際通用斑馬魚胚胎發(fā)育圖譜，逐一對比測試組與對照組斑馬魚胚胎各發(fā)育階段組織和器官

發(fā)育情況。國際通用斑馬魚胚胎發(fā)育圖譜及各組織器官典型發(fā)育特征可在國際斑馬魚信息網站

（/）獲取。

斑馬魚胚胎發(fā)育各組織器官常見典型致畸特征包括：頭部的頭蓋/鰓蓋骨異常、小眼、眼球突出、

無下頜、頜面畸形等；心臟、肝臟、腎臟、卵黃囊、腸道、脊椎、肌肉、皮膚、鰭條等形態(tài)及結構改變

等；皮膚體色異常等。

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C

C

附錄C

（資料性）

致畸危害指數

C.1致畸危害指數

致畸危害指數為半數致死濃度（LC50）與半數致畸效應濃度（EC50）的比值。

C.2結果評價

致畸危害指數數值越小，致畸毒性風險越小、對人體越安全。當致畸危害指數大于等于3時，表示

受試物對人致畸風險高，當致畸危害指數小于3時，表示受試物對人致畸風險低。

7

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參考文獻

[1]T/GDST1—2021斑馬魚胚胎急性毒性測試A法和B法。

[2]DB32/T3979—2021實驗用斑馬魚飼育技術條件。

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