【摘要】目的：研制一種結(jié)合避蚊胺（DEET）與植物揮發(fā)油的雙效驅(qū)蚊凝膠劑，以協(xié)同增效機(jī)制提升驅(qū)蚊效率并降低DEET用量，同時確保產(chǎn)品的安全性與長效性。方法：通過分光光度法建立OD值與菌落數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，其中大腸桿菌的回歸方程為（y=15.6x-0.6173，r=0.9888），金黃色葡萄球菌的回歸方程為（y=6.3075x＋0.828，r=0.963）；通過微量肉湯稀釋法測定香葉天竺葵（PelargoniumgraveolensL'Hér.&Aiton）揮發(fā)油與薄荷（MenthacanadensisL.）揮發(fā)油（復(fù)配1：1）體系的抑菌效力（MIC/MBC）；采用單因素試驗優(yōu)化凝膠基質(zhì)配比（卡波姆濃度、吐溫80濃度及保濕劑比例）；通過人體藥效實驗測定驅(qū)蚊時效，并利用雞胚尿囊膜實驗評估皮膚刺激性。結(jié)果：揮發(fā)油對大腸桿菌與金黃色葡萄球菌的MIC均為0.313%，MBC為1.25%；凝膠最佳配方為卡波姆940（0.6%）、吐溫80（1%）、保濕劑（PEG400：丙二醇：丁二醇=2:1:1，40%），其平均有效保護(hù)時間達(dá)3.32小時；雞胚尿囊膜實驗顯示終點(diǎn)評分（ES=0），表明無皮膚刺激性。結(jié)論：成功開發(fā)出兼具高效驅(qū)蚊與安全性的雙效凝膠劑，驗證了DEET與植物揮發(fā)油的協(xié)同應(yīng)用潛力，為環(huán)境友好型驅(qū)蚊產(chǎn)品的設(shè)計提供了理論依據(jù)與實踐參考。【關(guān)鍵詞】DEET；揮發(fā)油；驅(qū)蚊凝膠；抑菌效力；皮膚刺激性DevelopmentofaDual-EffectMosquitoRepellentGelBasedonDEETandVolatileOils[Abstract]Objective:Todevelopadual-effectmosquitorepellentgelcombiningDEETandplant-derivedvolatileoils,leveragingasynergisticmechanismtoenhancerepellentefficacywhilereducingDEETconcentration,ensuringproductsafetyandlong-lastingperformance.Methods:

AstandardcurverelatingODvaluestocolony-formingunitswasestablishedusingspectrophotometry,withregressionequationsforEscherichiacoli(y=15.6x-0.6173,r=0.9888)andStaphylococcusaureus(y=6.3075x+0.828,r=0.963).Theantimicrobialefficacy(MIC/MBC)ofblendedvolatileoilsfrom

Pelargoniumgraveolens

L'Hér.&Aitonand

Menthacanadensis

L.wasdeterminedusingthemicrobrothdilutionmethod.Single-factorexperimentsoptimizedthegelmatrixformulation(Carbomer940concentration,Tween80concentration,andhumectantratio).Humanefficacytrialsassessedrepellentduration,whileskinirritationwasevaluatedviathehen'seggchorioallantoicmembrane(HET-CAM)test.Results:TheMICandMBCofthevolatileoilsagainst

E.coli

and

S.aureus

were0.313%and1.25%,respectively.TheoptimalgelformulationcomprisedCarbomer940(0.6%),Tween80(1%),andhumectants(PEG400:propylene

glycol:butylene

glycol=2:1:1,40%),achievinganaverageeffectiveprotectiontimeof3.32hours.TheHET-CAMtestyieldedafinalirritationscore(ES=0),indicatingnoskinirritation.Conclusion:Adual-effectgelwithhighrepellencyandsafetywassuccessfullydeveloped,demonstratingthesynergisticpotentialofDEETandplant-derivedvolatileoils.Thisstudyprovidestheoreticalandpracticalinsightsfordesigningeco-friendlymosquitorepellentproducts.[Keywords]DEET;volatileoils;mosquitorepellentgel;antibacterialefficacy;skinirritation隨著全球氣候變暖和城市化進(jìn)程的加速，蚊媒疾病的傳播風(fēng)險顯著增加，開發(fā)高效、安全的驅(qū)蚊產(chǎn)品已成為公共衛(wèi)生領(lǐng)域的重要課題。傳統(tǒng)的驅(qū)蚊劑以化學(xué)合成成分為主，其中避蚊胺（DEET）因其廣譜高效的驅(qū)蚊效果而被廣泛應(yīng)用。然而，DEET的長期使用可能引發(fā)皮膚刺激、環(huán)境殘留以及對非靶標(biāo)生物的潛在毒性問題，這限制了其在可持續(xù)公共衛(wèi)生策略中的應(yīng)用。與此同時，植物源揮發(fā)油因其天然、低毒的特性逐漸受到關(guān)注，但其驅(qū)蚊時效短、穩(wěn)定性差等缺陷限制了其實際應(yīng)用。因此，如何通過劑型優(yōu)化與組分協(xié)同作用實現(xiàn)驅(qū)蚊效率與安全性的平衡，成為本領(lǐng)域研究的核心目標(biāo)。近年來，凝膠劑因其良好的皮膚附著性、緩釋性能及使用舒適度，成為新型驅(qū)蚊制劑的優(yōu)選載體。凝膠劑能夠有效控制活性成分的釋放速率，延長驅(qū)蚊時效，同時減少化學(xué)驅(qū)蚊劑的使用量，從而降低其潛在毒性風(fēng)險。然而，單一驅(qū)蚊成分的凝膠劑難以滿足長效與溫和的雙重要求。基于此，本研究提出將DEET與植物揮發(fā)油復(fù)配，構(gòu)建雙效驅(qū)蚊體系：一方面利用DEET的高效驅(qū)避特性，另一方面通過揮發(fā)油的天然抗菌活性降低DEET用量，同時發(fā)揮協(xié)同增效作用。本研究選取香葉天竺葵（Pelargoniumgraveolens

L'Hér.&Aiton）和薄荷（Menthacanadensis

L.）兩種植物揮發(fā)油作為研究對象。香葉天竺葵油富含香茅醇，具有顯著的抗菌和驅(qū)蚊活性；薄荷油則以薄荷醇為主要成分，具有清涼感和一定的驅(qū)避效果。兩者在化學(xué)成分和作用機(jī)制上具有互補(bǔ)性，通過復(fù)配可能產(chǎn)生協(xié)同增效作用。研究通過微量肉湯稀釋法評估揮發(fā)油的抑菌效力，采用單因素試驗篩選凝膠基質(zhì)的最佳配比，并結(jié)合人體藥效實驗與雞胚尿囊膜實驗綜合評價產(chǎn)品的驅(qū)蚊時效及皮膚安全性。本研究不僅為開發(fā)環(huán)境友好型驅(qū)蚊產(chǎn)品提供理論依據(jù)，也為天然活性成分與合成成分的協(xié)同應(yīng)用開辟新思路，具有重要的科學(xué)價值與社會意義。通過優(yōu)化配方與劑型設(shè)計，本研究有望為公共衛(wèi)生領(lǐng)域提供一種高效、安全、長效的驅(qū)蚊解決方案，同時推動天然資源在現(xiàn)代驅(qū)蚊產(chǎn)品中的應(yīng)用。2.1主要儀器實驗所用主要儀器如下（見表2-1）。表2-1儀器名稱型號生產(chǎn)廠家電動攪拌器電熱恒溫培養(yǎng)箱上海一恒科學(xué)儀器雙人單面凈化工作臺蘇州凈化設(shè)備超低溫冰箱海爾集團(tuán)冷凍冷藏箱美的集團(tuán)紫外-可見分光光度計津島德國股份萬分之一天平上海精科天美儀器搖擺式高速萬能粉碎機(jī)雙光束紫外可見分光光度計上海佑科儀器儀表壓力蒸汽滅菌鍋電熱套鄭州長城科工有限公司體式顯微鏡重慶奧特光學(xué)儀器全自動高端孵化機(jī)多功能粉碎機(jī)漩渦混合儀常州恩培儀器制造pH計上海三信儀表廠超聲波清洗器昆山市超聲儀器

2.2主要材料和試劑實驗所用主要材料和試劑如下（見表2-2）。表2-2主要原料與試劑原料名稱規(guī)格生產(chǎn)廠家薄荷香葉天竺葵避蚊胺上海麥克林生化科技股份有限公司丙二醇聚乙二醇4001,3丁二醇乙二胺四乙酸二鈉天津市百世化工有限公司三乙醇胺山東優(yōu)索化工科技有限公司聚乙烯吡咯烷酮K30天津市眾聯(lián)試劑有限公司吐溫80成都市科龍化工試劑廠卡波姆940廣東廣試試劑科技有限公司DEET上海麥克林生化科技股份有限公司對羥基苯甲酸乙酯西亞試劑去離子水實驗室自制瓊脂粉LB肉湯廣東環(huán)凱微生物科技有限公司CAMHB肉湯海博生物技術(shù)有限公司氯化鈉二甲基亞砜鏈霉素北京索萊寶科技有限公司注：薄荷來源于中山市仙逸堂有限公司，經(jīng)廣東藥科大學(xué)田素英副教授鑒定為唇形科薄荷屬薄荷（Menthacanadensis

L.）。香葉天竺葵來源于中山市仙逸堂有限公司，經(jīng)廣東藥科大學(xué)田素英副教授鑒定為牻牛兒苗科天竺葵屬植物香葉天竺葵（Pelargoniumgraveolens

L'Hér.&Aiton）。

3.1建立OD值與菌落數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線OD值反映總菌體（包括死菌和代謝產(chǎn)物），而平板計數(shù)僅統(tǒng)計活菌。抑菌實驗需明確活菌數(shù)量變化以評估抗菌效果。此外，不同菌種的最適檢測波長及OD值與菌數(shù)的換算系數(shù)存在差異。通過標(biāo)準(zhǔn)曲線可將OD值轉(zhuǎn)換為活菌數(shù)（CFU），避免高估或低估抑菌率。將－80℃保存的大腸桿菌（Escherichiacoli）和金黃色葡萄球菌（Staphylococcusaureus，S.aureus）菌種接種于LB平板，37℃培養(yǎng)18小時。將復(fù)蘇后的菌種用無菌接種環(huán)挑取單個菌落接種于LB平板挑取純化后的單個菌落，接種于LB平板，37℃培養(yǎng)18小時。純化后的幾個單克隆菌種用無菌生理鹽水將菌懸液稀釋至適當(dāng)濃度。將菌懸液用無菌生理鹽水進(jìn)行適當(dāng)稀釋，選取OD600nm值在0.1-0.8之間的菌懸液稀釋液作為原菌液樣品6個。每個稀釋度需重復(fù)測定3次，取平均值。根據(jù)測定的OD值，將菌液進(jìn)行10倍梯度稀釋，取100μL菌液加入到900μL無菌生理鹽水中，混勻，得到10^1稀釋度；再取100μL10^1稀釋液加入到900μL無菌生理鹽水中，混勻，得到10^2稀釋度，以此類推。樣品稀釋度分別為10^6、10^6、10^7、10^7、10^7、10^7。從每個稀釋度中分別取50μL菌液，加入到無菌培養(yǎng)皿中，涂布均勻。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18小時。將每個梯度的菌液分別涂布于平板上。將涂布后的LB平板置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)20小時，觀察菌落數(shù)，選擇菌落數(shù)在30-300之間的平板進(jìn)行計數(shù)。統(tǒng)計每個培養(yǎng)平板上的菌落數(shù)，根據(jù)稀釋倍數(shù)和涂布體積，計算出每mL原始菌液中的菌落數(shù)（CFU/mL）。記錄每個OD值對應(yīng)的CFU/mL值，以O(shè)D600為橫坐標(biāo)，菌落總數(shù)（CFU/mL）為縱坐標(biāo)，繪制OD值對菌落總數(shù)曲線回歸方程（R2>0.95）。3.2微量肉湯稀釋法抑菌效力測定該實驗使用2倍連續(xù)稀釋法，使香葉天竺葵油與薄荷油（1:1復(fù)配）體系形成濃度梯度。孵育后通過肉眼觀察孔內(nèi)濁度變化，無可見生長的最低藥物濃度即為MIC，反映藥物抑菌效力；MBC為取MIC對應(yīng)清孔菌液涂布瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h后無可見菌落的最低濃度，反映藥物殺菌效力。將香葉天竺葵油與薄荷油按1:1混合，用1%DMSO與0.5%吐溫80溶解，以CAMHB培養(yǎng)基進(jìn)行2倍稀釋，其濃度為10%、5%、2.5%、1.25%、0.625%、0.313%、0.156%、0.078%（v/v）。于96孔板中每孔加入100μL菌懸液與100μL揮發(fā)油稀釋液，37℃培養(yǎng)24h。藥物終濃度為5%、2.5%、1.25%、0.625%、0.313%、0.156%、0.078%，0.039%（v/v）。以不含揮發(fā)油的培養(yǎng)基為陰性對照，以50μg/mL的鏈霉素為陽性對照，含1%DMSO與0.5%吐溫80的培養(yǎng)基為溶劑對照（圖3-1）。測定MIC與MBC，MIC為肉眼觀察無渾濁的最低濃度；MBC為取MIC對應(yīng)清孔菌液涂布瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24h后無可見菌落的最低濃度。圖3-1微量肉湯稀釋法抑菌實驗

4.1凝膠樣品的配制與評估標(biāo)準(zhǔn)凝膠型驅(qū)蚊劑配制：向燒杯中加入卡波姆940，溶脹過夜，然后加入EDTA-2Na、去離子水和TEA，機(jī)械攪拌至均勻（約200r/min），攪拌時間10min，制成凝膠半成品。再將防腐劑、PVPK30、PEG40、丙二醇和丁二醇混合均勻后，加入驅(qū)避劑和揮發(fā)油混合均勻，攪拌速度為200r/min，攪拌5min。最后將含有驅(qū)避劑、香葉天竺葵油與薄荷油（1:1復(fù)配）體系和吐溫80的混合溶液緩慢加入凝膠半成品中，繼續(xù)攪拌20min，形成樣品。膚感評估：志愿者清潔雙手。依次評估樣品，每項指標(biāo)獨(dú)立評分，間隔清水沖洗或休息，避免感官疲勞。耐熱與耐寒測試：將凝膠樣品裝入試管（Φ20mm×120mm），高度約80mm，密封。耐熱：將樣品置于（40±1）℃恒溫箱24h，恢復(fù)室溫后對比外觀變化；耐寒：將樣品置于-5℃~-10℃冰箱24h，恢復(fù)室溫后對比外觀變化。長期留樣試驗：模擬實際儲存環(huán)境，溫度25℃±2℃，濕度60%±5%RH，時間點(diǎn)設(shè)置為0，3，6月。分別配制卡波姆940濃度為0.4%、0.6%、0.8%、1.0%、1.2%、1.4%（w/w）的凝膠基質(zhì)，固定吐溫80為1.0%（w/w）、保濕劑（PEG400：丙二醇：丁二醇=2:1:1）為40%（w/w），加入DEET（2%）和香葉天竺葵油與薄荷油（1:1復(fù)配）體系，總濃度0.313%。采用磁力攪拌器（500rpm，25℃）均質(zhì)化30min，調(diào)節(jié)pH至6.5-7.0（三乙醇胺調(diào)節(jié)），用去離子水加至100g。固定卡波姆0.8%、保濕劑（PEG400：丙二醇：丁二醇=2:1:1）40%，設(shè)置吐溫80濃度為0.5%、0.75%、1%、1.25%、1.5%（w/w）。

固定卡波姆0.8%、吐溫801%，設(shè)置保濕劑（PEG400：丙二醇：丁二醇=2:1:1）濃度為25%、30%、35%、40%、45%（w/w）。

本實驗評估驅(qū)蚊劑防護(hù)時效，通蚊蟲叮咬行為判定藥物失效節(jié)點(diǎn)。每次正式測試前需進(jìn)行空白對照測試，當(dāng)未施藥部位在2min內(nèi)吸引≥2只蚊蟲停留時，判定蚊群攻擊力達(dá)標(biāo)。自施藥起每小時進(jìn)行叮咬測試，持續(xù)至失效為止，施藥區(qū)域出現(xiàn)首例成功叮咬即判定防護(hù)失效。記錄每位受試者各次測試的有效防護(hù)時間（精確至分鐘），最終取算術(shù)平均值作為產(chǎn)品防護(hù)時效。5.1受試者的選擇選取4名及以上健康志愿者，納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡18～35歲；（2）無化妝品或藥物過敏史；（3）無任何皮膚或系統(tǒng)性疾病患史；（4）無體質(zhì)高度敏感者；（5）最近三個月受試部位未參加其他臨床試驗者；（6）自愿參加，并簽閱知情同意書，能嚴(yán)格遵守研究方案的要求。5.2驅(qū)蚊時間測定采用人體手臂暴露法。將0.1mL樣品均勻涂布于15cm2方形皮膚區(qū)域，自然環(huán)境下保持靜止暴露狀態(tài)，記錄首次被叮咬時間，每人試驗重復(fù)10次（間隔≥72小時）。

6.1雞胚處理選用受精雞胚（孵化第9天），開窗暴露尿囊膜（CAM），隨機(jī)分為三組：陰性對照組（生理鹽水）、陽性對照組（0.1mol/LNaOH）、實驗組（0.3g凝膠）。6.2刺激性觀察使用薄膜上樣品（凝膠3g），孵育五分鐘，用生理鹽水沖洗樣品。本研究采用03分評分法。表6-1刺激性評分表出血凝血血管融解無000輕度111中度222重度3336.3數(shù)據(jù)分析樣本獨(dú)立評分三次，計算刺激指數(shù)(ES)=3只雞胚得分總和的平均值，判定標(biāo)準(zhǔn)：ES≤15為無/輕刺激性；15<ES≤50為輕度刺激；ES>50具顯著刺激性

7.1OD值與菌落數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線表7-1大腸桿菌的OD值與菌落數(shù)對照OD值0.1020.1760.2820.4500.5270.767平板計數(shù)結(jié)果／（×１０8ＣＦＵ·ｍＬ－１）0.871.361.952.743.345.01表7-2金黃色葡萄球菌的OD值與菌落數(shù)對照OD值0.0920.1850.3130.4200.5760.729平板計數(shù)結(jié)果／（×１０8ＣＦＵ·ｍＬ－１）1.122.213.163.44.085.6

圖7-3中，大腸桿菌的OD值與菌落數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=15.6x-0.6173（r=0.9888）。圖7-4中，金黃色葡萄球菌的OD值與菌落數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線為y=6.3075x＋0.828（r=0.963）。圖7-3大腸桿菌的OD值與菌落數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線圖7-4金黃色葡萄球菌的OD值與菌落數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線

7.2微量肉湯稀釋法抑菌實驗大腸桿菌的MIC為0.313%（如圖7-5），MBC為1.25%（如表7-7）。金黃色葡萄球菌的MIC為0.313%（如圖7-6），MBC為1.25%（如表7-8）。圖7-5大腸桿菌的最小抑菌濃度（MIC）圖7-6金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度（MIC）

表7-7大腸桿菌的最小殺菌濃度（MBC）梯度試樣5%2.5%1.25%0.625%0.313%有無菌落無無無有有表7-8金黃色葡萄球菌的最小殺菌濃度（MBC）梯度試樣5%2.5%1.25%0.625%0.313%有無菌落無無無有有7.3驅(qū)蚊凝膠基質(zhì)的篩選與優(yōu)化為了對基質(zhì)進(jìn)行優(yōu)化和評估，以下是篩查標(biāo)準(zhǔn)：指標(biāo)優(yōu)（3~2分）良（2~1分）差（1~0分）外觀均勻度外觀均勻，有光澤外觀較為均勻，光澤較暗淡外觀不均勻，無光澤粘膩度清爽，成膜感輕，無明顯粘感成膜感微重，黏膩感輕微成膜感重，粘膩感重粘稠度粘稠度適中粘稠度差，流動性強(qiáng)粘稠度極強(qiáng)，微結(jié)塊潤滑度非常潤滑潤滑良好涂抹干澀穩(wěn)定性外觀無變化微微分層乳化，析出

如表7-9所示，當(dāng)卡波姆940濃度為0.6%（w/w）時，凝膠基質(zhì)表現(xiàn)出最優(yōu)的流變學(xué)特性。表7-9卡波姆濃度梯度篩選卡波姆940含量%（w/w）外觀均勻度粘膩度粘稠度潤滑度穩(wěn)定性總評分0.4外觀均勻，有光澤清爽，成膜感輕，無明顯粘感黏稠度較差非常潤滑外觀無變化120.6外觀均勻，有光澤清爽，成膜感輕，無明顯粘感比較黏稠非常潤滑外觀無變化130.8外觀均勻，有光澤成膜感微重，黏膩感輕微比較黏稠潤滑良好外觀無變化101.0外觀均勻，有光澤成膜感微重，黏膩感輕微比較黏稠潤滑一般外觀無變化8.51.2外觀均勻，有光澤成膜感重，粘膩感重非常黏稠潤滑一般外觀無變化8

吐溫80濃度為1%（w/w）時，凝膠的乳化效果最佳，能夠確保驅(qū)蚊成分均勻分布。表7-11吐溫80濃度梯度篩選吐溫80含量%（w/w）外觀均勻度粘膩度粘稠度潤滑度穩(wěn)定性總評分0.50外觀均勻，有光澤清爽，成膜感輕，無明顯粘感粘稠度適中非常潤滑外觀無變化110.75外觀均勻，有光澤清爽，成膜感輕，無明顯粘感粘稠度適中非常潤滑外觀無變化13.51.00外觀均勻，有光澤清爽，成膜感輕，無明顯粘感粘稠度適中非常潤滑外觀無變化121.25外觀均勻，有光澤成膜感微重，黏膩感輕微粘稠度適中非常潤滑外觀無變化121.50外觀均勻，有光澤成膜感微重，黏膩感輕微粘稠度適中潤滑良好外觀無變化11.5

保濕劑濃度為40%（w/w）時，凝膠的穩(wěn)定性、保濕效果最佳。表7-10保濕劑濃度梯度篩選保濕劑含量%（w/w）外觀均勻度粘膩度粘稠度潤滑度穩(wěn)定性總評分25外觀均勻，有光澤清爽，成膜感輕，無明顯粘感粘稠度適中潤滑良好乳化，析出穩(wěn)定性差，排除30外觀均勻，有光澤清爽，成膜感輕，無明顯粘感粘稠度適中潤滑良好乳化，析出穩(wěn)定性差，排除35外觀均勻，有光澤成膜感微重，黏膩感輕微粘稠度適中非常潤滑乳化，析出穩(wěn)定性差，排除40外觀均勻，有光澤成膜感微重，黏膩感輕微粘稠度適中非常潤滑外觀無變化1445外觀均勻，有光澤成膜感微重，黏膩感輕微粘稠度適中非常潤滑外觀無變化12

在保濕劑濃度梯度耐熱與耐寒測試中，25%、30%、35%的穩(wěn)定性過差，故排除（如圖7-11）。選取40%，45%，進(jìn)行下一步長期留樣試驗（如圖7-12，圖7-13）。保濕劑濃度為40%（w/w）時，凝膠的穩(wěn)定性效果最佳。故選擇40%。左1空白，左245%，左340%，左435%，左530%，左625%ba圖7-11保濕劑濃度梯度耐熱與耐寒測試baa左1空白，a左245%試樣，a左345%試樣，b左1空白，b左240%試樣，b左340%試樣圖7-12保濕劑濃度梯度長期留樣試驗（6個月）

7.4驅(qū)蚊藥效實驗四位志愿者的有效保護(hù)時間分別為2.68h、3.85h、3.29h和3.49h，總平均時長為3.32h（xˉ±SD=3.32±0.47）。表7-13驅(qū)蚊時間藥效實驗12345678910平均時長志愿者1驅(qū)蚊時長2.43.62.13.12.62.53.84.21.21.32.68志愿者2驅(qū)蚊時長2.65.11.35.34.62.43.62.94.763.85志愿者3驅(qū)蚊時長2.65.34.21.35.23.33.23.14.10.63.29志愿者4驅(qū)蚊時長4.35.21.34.81.92.65.33.61.34.63.49平均時長2.9754.82.2253.6253.5752.73.9753.452.8253.1253.3275

7.5皮膚刺激性評估（雞胚尿囊膜實驗）abc1cabc1c2e2e1d2d1e2e1d2d1a陽性，b陰性，c1加藥前，c2加藥后，d1加藥前，d2加藥后，e1加藥前，e2加藥后圖7-14驅(qū)蚊凝膠急性眼刺激試驗

一、標(biāo)準(zhǔn)曲線建立的科學(xué)意義本研究成功構(gòu)建了OD600與CFU/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線，實現(xiàn)了大腸桿菌和金黃色葡萄球菌活菌數(shù)的精準(zhǔn)換算。相較于傳統(tǒng)OD值測量法易受死菌及代謝產(chǎn)物干擾導(dǎo)致結(jié)果偏高的問題，本方法顯著提升了抗菌實驗中活菌定量的準(zhǔn)確性。需特別指出的是，不同檢測方法對OD值與菌落數(shù)相關(guān)性存在顯著影響。光電比濁法雖具快速檢測優(yōu)勢，但其對菌落總數(shù)的表征精度有限。而平板計數(shù)法雖耗時較長，卻能提供更精確的活菌定量數(shù)據(jù)REF_Ref20946\r\h[1]。典型例證如當(dāng)OD600值為0.1時，金黃色葡萄球菌的菌落數(shù)為9.4×10?CFU/mL，而大腸桿菌則達(dá)到1.45×10?CFU/mL，充分揭示了不同菌種光吸收特性的種屬差異性。二、揮發(fā)油協(xié)同抑菌機(jī)制香葉天竺葵油與薄荷油（1:1復(fù)配）對金黃色葡萄球菌表現(xiàn)出顯著的協(xié)同抑菌效應(yīng)，相較于單一使用，聯(lián)合應(yīng)用使最低抑菌濃度（MIC）降低了約50%REF_Ref21047\r\h[2]。與Kafa等（2021）報道的香葉天竺葵油-迷迭香油組合相比REF_Ref195741129\r\h[3]，本研究復(fù)配體系對金黃色葡萄球菌的MIC降幅更為顯著，這歸因于兩種揮發(fā)油化學(xué)成分的功能互補(bǔ)：香葉天竺葵油中香茅醇通過靶向細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)揮抗菌作用，而薄荷油中的薄荷醇則通過破壞膜通透性產(chǎn)生協(xié)同增效REF_Ref195741129\r\h[3]。Sanei-Dehkordi等（2023）進(jìn)一步證實，香葉醇與薄荷醇可分別作用于細(xì)菌膜脂質(zhì)和呼吸鏈酶系統(tǒng)，二者的聯(lián)合作用顯著增強(qiáng)了抗菌效果REF_Ref21273\r\h[4]。但值得注意的是，本體系對大腸桿菌的抑菌效果低于Terlizzi等（2022）報道的天竺葵-N-乙酰半胱氨酸組合REF_Ref21312\r\h[5]，提示親水性成分可能通過增強(qiáng)滲透作用提升對革蘭氏陰性菌外膜屏障的穿透效率。值得注意的是，對大腸桿菌的MIC值（0.313%v/v）顯著高于金黃色葡萄球菌，可能與革蘭氏陰性菌外膜屏障有關(guān)REF_Ref195741170\r\h[6]。三、凝膠基質(zhì)的優(yōu)化與驅(qū)蚊性能通過系統(tǒng)優(yōu)化，確定卡波姆940濃度為0.6%（w/w）時凝膠具有最優(yōu)的黏彈性（表7-9）。結(jié)合吐溫80（1%）的乳化穩(wěn)定作用與保濕劑（40%）的增塑效應(yīng)，顯著改善了制劑的物理穩(wěn)定性與皮膚粘附性能。驅(qū)蚊功效評價顯示，復(fù)配揮發(fā)油凝膠的平均有效保護(hù)時間為3.32小時（表7-13），雖低于化學(xué)驅(qū)避劑DEET（N,N-二乙基間甲苯酰胺，4-8小時），但顯著優(yōu)于檸檬桉油等單一植物提取物（約2小時）REF_Ref195741382\r\h[7,REF_Ref195741389\r\h8]。這種時效差異可能與揮發(fā)油組分的蒸汽壓差異及基質(zhì)的緩釋動力學(xué)特性密切相關(guān)。四、驅(qū)蚊時長的差異與機(jī)理本研究獲得的平均有效驅(qū)蚊時長（3.32小時）較王越等（2013）報道的薄荷單方提取物（1.5小時）提升121%REF_R