微生物檢驗操作程序規(guī)范一、概述

微生物檢驗是評估樣品中微生物含量和種類的重要手段，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、環(huán)境、生物制品等領(lǐng)域。為確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性，必須嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序。本規(guī)范詳細(xì)規(guī)定了微生物檢驗的基本流程、操作步驟、質(zhì)量控制要點(diǎn)及注意事項，旨在指導(dǎo)檢驗人員規(guī)范操作，提高檢驗質(zhì)量。

二、檢驗前的準(zhǔn)備

（一）樣品采集與處理

1.樣品采集應(yīng)遵循無菌操作原則，避免污染。

2.根據(jù)樣品類型（如液體、固體、表面等）選擇合適的取樣工具和方法。

3.樣品處理包括均質(zhì)化、稀釋等步驟，確保微生物均勻分布。

（二）檢驗環(huán)境要求

1.檢驗應(yīng)在潔凈室或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，環(huán)境溫度控制在20–30℃。

2.相對濕度維持在40%–60%，避免過高濕度導(dǎo)致微生物滋生。

3.空氣潔凈度應(yīng)符合無菌操作標(biāo)準(zhǔn)，定期進(jìn)行環(huán)境微生物監(jiān)測。

（三）儀器與試劑準(zhǔn)備

1.主要儀器包括培養(yǎng)箱、顯微鏡、滅菌鍋、均質(zhì)器等，需定期校準(zhǔn)。

2.試劑包括培養(yǎng)基（如營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂）、生理鹽水、消毒劑等，需驗證合格。

3.個人防護(hù)用品（手套、口罩、實驗服）需符合無菌操作要求。

三、檢驗操作步驟

（一）平板計數(shù)法（MPN法）

1.**樣品稀釋**：將樣品按系列稀釋（如10倍梯度稀釋），制備3個濃度梯度樣品。

2.**傾注平板**：每個梯度取1mL樣品，加入90mL無菌培養(yǎng)基中，混勻后傾注平皿。

3.**培養(yǎng)**：倒置平皿，放入36±1℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48–72小時。

4.**計數(shù)**：選擇菌落數(shù)在30–300的平板，采用三角計數(shù)法統(tǒng)計菌落數(shù)。

5.**結(jié)果計算**：根據(jù)公式計算每克/毫升樣品中的菌落數(shù)（CFU）。

（二）菌落形態(tài)觀察

1.將純化菌株接種于固體培養(yǎng)基，36±1℃培養(yǎng)24–48小時。

2.觀察菌落大小、形狀、顏色、透明度等特征，記錄典型形態(tài)。

3.通過顯微鏡觀察菌體形態(tài)（如革蘭染色、鞭毛染色等）。

（三）無菌檢驗

1.取樣量≤1mL時，直接接種于100mL培養(yǎng)基中；≥1mL時，接種于相應(yīng)體積培養(yǎng)基。

2.培養(yǎng)7天，期間每日觀察是否有菌落生長。

3.如無生長，判定樣品無菌；如有生長，需進(jìn)一步鑒定。

四、質(zhì)量控制要點(diǎn)

（一）陽性對照

每次檢驗需設(shè)置陽性對照，確保培養(yǎng)基和操作有效性。

（二）重復(fù)性檢驗

對可疑結(jié)果或重要樣品，應(yīng)進(jìn)行至少2次平行檢驗。

（三）培養(yǎng)基質(zhì)量監(jiān)控

每月進(jìn)行培養(yǎng)基復(fù)蘇試驗，確保無菌性和支持生長能力。

（四）操作人員培訓(xùn)

定期進(jìn)行操作技能培訓(xùn)和考核，確保符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

五、注意事項

1.所有操作需在無菌條件下進(jìn)行，避免二次污染。

2.培養(yǎng)基和試劑需在有效期內(nèi)使用，避免變質(zhì)。

3.培養(yǎng)箱溫度需定期校準(zhǔn)，確保培養(yǎng)條件穩(wěn)定。

4.實驗廢棄物需按生物安全規(guī)定處理。

六、結(jié)果記錄與報告

（一）記錄

詳細(xì)記錄樣品信息、操作步驟、菌落數(shù)、形態(tài)特征等數(shù)據(jù)。

（二）報告

檢驗報告應(yīng)包含樣品名稱、檢驗方法、結(jié)果、結(jié)論及檢驗人信息。

本規(guī)范為微生物檢驗的基本操作指南，具體檢驗項目可結(jié)合實際需求進(jìn)行調(diào)整。

一、概述

微生物檢驗是評估樣品中微生物含量和種類的重要手段，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、環(huán)境、生物制品等領(lǐng)域。為確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性，必須嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序。本規(guī)范詳細(xì)規(guī)定了微生物檢驗的基本流程、操作步驟、質(zhì)量控制要點(diǎn)及注意事項，旨在指導(dǎo)檢驗人員規(guī)范操作，提高檢驗質(zhì)量。

二、檢驗前的準(zhǔn)備

（一）樣品采集與處理

1.**樣品采集**

-采集工具需徹底清潔并滅菌（如使用75%乙醇浸泡30分鐘，滅菌鍋121℃滅菌15分鐘）。

-根據(jù)樣品類型選擇合適的取樣方法：

（1）液體樣品：使用無菌吸管或注射器直接吸取。

（2）固體樣品：采用無菌剪刀或鑿子取代表性樣品（約5–10g）。

（3）表面樣品：使用無菌棉簽擦拭指定區(qū)域（≥100cm2）。

-樣品采集后應(yīng)立即密封，標(biāo)記樣品信息（名稱、采集時間、編號等）。

2.**樣品處理**

-**液體樣品**：

（1）混勻樣品，取適量（如1mL）加入9mL無菌生理鹽水中稀釋。

（2）按需進(jìn)行系列稀釋（如10?1至10?3梯度）。

-**固體樣品**：

（1）將樣品剪碎或磨細(xì)，取適量（如10g）加入90mL無菌生理鹽水中。

（2）使用均質(zhì)器高速攪拌1–3分鐘（10000–12000rpm），或充分振搖。

-**表面樣品**：

（1）將無菌棉簽在生理鹽水中擠壓數(shù)次，去除多余液體。

（2）在樣品表面均勻涂抹3次，每個區(qū)域≥1cm2。

（二）檢驗環(huán)境要求

1.**環(huán)境條件**：

（1）檢驗區(qū)域應(yīng)為潔凈實驗室，溫度20–30℃，相對濕度40%–60%。

（2）空氣潔凈度應(yīng)達(dá)到ISO5級或以上，定期檢測空氣菌落數(shù)（如每立方米≤3CFU）。

2.**設(shè)備要求**：

（1）生物安全柜：使用前需進(jìn)行風(fēng)量、風(fēng)速、過濾效率檢測。

（2）培養(yǎng)箱：配備溫度傳感器，校準(zhǔn)誤差≤±0.5℃。

（3）高壓滅菌鍋：滅菌程序驗證（如使用嗜熱脂肪芽孢菌片監(jiān)測滅菌效果）。

3.**表面消毒**：

（1）操作臺面使用70%乙醇擦拭消毒，作用時間≥30秒。

（2）實驗器械（如接種環(huán)、移液器）使用后立即滅菌（如滅菌鍋121℃滅菌15分鐘）。

（三）儀器與試劑準(zhǔn)備

1.**主要儀器**：

（1）移液器：校準(zhǔn)精度≤±2%，定期進(jìn)行泄漏測試。

（2）顯微鏡：配備油鏡，校準(zhǔn)目鏡測微尺。

（3）菌落計數(shù)器：確?？潭惹逦瑹o磨損。

2.**培養(yǎng)基與試劑**：

（1）常用培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（NA）、麥康凱瓊脂（MAC）、血瓊脂（BA）等，需驗證pH值（6.4–7.2）和凝固溫度（45–46℃）。

（2）無菌生理鹽水：使用蒸餾水或去離子水配制，滅菌后冷卻至室溫。

（3）消毒劑：如季銨鹽類消毒液（濃度500–1000mg/L），使用前測定有效成分。

3.**個人防護(hù)**：

（1）穿戴一次性手套，操作全程避免觸摸非無菌區(qū)域。

（2）佩戴防霧護(hù)目鏡，實驗服應(yīng)覆蓋所有皮膚。

三、檢驗操作步驟

（一）平板計數(shù)法（MPN法）

1.**樣品稀釋**：

（1）稱取10g固體樣品或1mL液體樣品，加入90mL無菌生理鹽水中。

（2）用移液器吸取1mL稀釋液，加入9mL新生理鹽水中，重復(fù)3次（10?1至10?3）。

（3）記錄稀釋倍數(shù)，確保后續(xù)接種量≤1mL。

2.**傾注平板**：

（1）每個稀釋梯度取1mL樣品，加入90mL已滅菌的培養(yǎng)基（如NA）中。

（2）立即將培養(yǎng)基分裝至無菌平皿（每皿15–20mL），混勻后靜置凝固（室溫≥30分鐘）。

（3）倒置平皿，標(biāo)注稀釋倍數(shù)和接種量。

3.**培養(yǎng)與計數(shù)**：

（1）將平皿放入36±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48–72小時。

（2）選擇菌落數(shù)在30–300的平板，采用三角計數(shù)法統(tǒng)計活菌數(shù)。

（3）計算公式：CFU/g（mL）=（平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)）/接種量。

（二）菌落形態(tài)觀察

1.**純化培養(yǎng)**：

（1）挑取單菌落，劃線接種于NA平板，36±1℃培養(yǎng)24–48小時。

（2）觀察菌落形態(tài)（大小、顏色、邊緣、透明度），記錄典型特征。

2.**革蘭染色**：

（1）制備細(xì)菌涂片，自然干燥后火焰固定。

（2）依次滴加結(jié)晶紫1分鐘、碘液1分鐘、95%乙醇30秒、復(fù)紅30秒。

（3）水洗晾干后油鏡觀察，區(qū)分革蘭陽性（紫色）和陰性（紅色）。

3.**顯微鏡檢查**：

（1）制備懸液（1:10稀釋），加入美蘭染液1分鐘染色。

（2）鏡下觀察菌體大小、形狀（球菌/桿菌）、鞭毛/芽孢等特征。

（三）無菌檢驗

1.**接種量確定**：

（1）≤1mL樣品：接種全部體積于100mL培養(yǎng)基。

（2）1mL–50mL樣品：接種全部體積于500mL培養(yǎng)基。

（3）>50mL樣品：接種1mL于100mL培養(yǎng)基，另取50mL直接培養(yǎng)。

2.**培養(yǎng)與觀察**：

（1）接種后培養(yǎng)基需滅菌（如121℃15分鐘），冷卻后置于36±1℃培養(yǎng)。

（2）每日檢查是否有菌落生長，連續(xù)觀察7天。

（3）如無生長，判定樣品無菌；如有生長，需進(jìn)一步鑒定。

四、質(zhì)量控制要點(diǎn)

（一）陽性對照設(shè)置

1.每批次檢驗需加入已知菌懸液（如大腸桿菌，1×10?CFU/mL）作為陽性對照。

2.陽性對照必須生長，否則檢驗無效，需排查培養(yǎng)基或操作問題。

（二）重復(fù)性檢驗

1.對可疑結(jié)果（如菌落數(shù)臨界值）或關(guān)鍵樣品，進(jìn)行至少2次平行檢驗。

2.兩次結(jié)果差異應(yīng)≤20%，否則需重新檢驗。

（三）培養(yǎng)基質(zhì)量監(jiān)控

1.每月進(jìn)行培養(yǎng)基復(fù)蘇試驗：取少量培養(yǎng)基劃線，觀察典型菌落生長。

2.檢查培養(yǎng)基pH值（使用pH試紙或儀檢測），確保在6.4–7.2范圍內(nèi)。

（四）操作人員培訓(xùn)

1.新員工需通過理論和實操考核（如無菌操作評分≥85分）。

2.每半年進(jìn)行1次技能復(fù)訓(xùn)，重點(diǎn)強(qiáng)化手部消毒和移液準(zhǔn)確性。

五、注意事項

1.**無菌操作**：

（1）所有接種、稀釋步驟需在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，避免說話或動作幅度過大。

（2）移液時避免氣泡混入，防止污染。

2.**培養(yǎng)基管理**：

（1）培養(yǎng)基需現(xiàn)配現(xiàn)用（如蛋白胨水需臨用前加入吐溫80），冷藏保存（4℃）。

（2）過期培養(yǎng)基需記錄銷毀日期，避免誤用。

3.**溫度控制**：

（1）培養(yǎng)箱溫度需每小時記錄1次，異常及時調(diào)整。

（2）樣品處理時避免暴露室溫過久（≤30分鐘）。

4.**廢棄物處理**：

（1）廢棄培養(yǎng)基需高壓滅菌（121℃30分鐘）后丟棄。

（2）銳器（如針頭）放入專用銳器盒。

六、結(jié)果記錄與報告

（一）原始記錄

1.記錄所有操作參數(shù)：樣品編號、稀釋液體積、菌落數(shù)、培養(yǎng)時間等。

2.繪制菌落形態(tài)圖，標(biāo)注革蘭染色結(jié)果。

（二）報告生成

1.報告格式：

（1）標(biāo)題：檢驗項目、樣品名稱、檢驗日期。

（2）方法：采用的標(biāo)準(zhǔn)或自定義方法。

（3）結(jié)果：菌落數(shù)（CFU/g/mL）、形態(tài)特征。

（4）結(jié)論：是否符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)（如食品≤100CFU/g）。

2.報告審核：檢驗人、復(fù)核人需簽字確認(rèn)，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確無誤。

本規(guī)范為微生物檢驗的基本操作指南，具體檢驗項目可結(jié)合實際需求進(jìn)行調(diào)整。

一、概述

微生物檢驗是評估樣品中微生物含量和種類的重要手段，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、環(huán)境、生物制品等領(lǐng)域。為確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性，必須嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序。本規(guī)范詳細(xì)規(guī)定了微生物檢驗的基本流程、操作步驟、質(zhì)量控制要點(diǎn)及注意事項，旨在指導(dǎo)檢驗人員規(guī)范操作，提高檢驗質(zhì)量。

二、檢驗前的準(zhǔn)備

（一）樣品采集與處理

1.樣品采集應(yīng)遵循無菌操作原則，避免污染。

2.根據(jù)樣品類型（如液體、固體、表面等）選擇合適的取樣工具和方法。

3.樣品處理包括均質(zhì)化、稀釋等步驟，確保微生物均勻分布。

（二）檢驗環(huán)境要求

1.檢驗應(yīng)在潔凈室或生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，環(huán)境溫度控制在20–30℃。

2.相對濕度維持在40%–60%，避免過高濕度導(dǎo)致微生物滋生。

3.空氣潔凈度應(yīng)符合無菌操作標(biāo)準(zhǔn)，定期進(jìn)行環(huán)境微生物監(jiān)測。

（三）儀器與試劑準(zhǔn)備

1.主要儀器包括培養(yǎng)箱、顯微鏡、滅菌鍋、均質(zhì)器等，需定期校準(zhǔn)。

2.試劑包括培養(yǎng)基（如營養(yǎng)瓊脂、麥康凱瓊脂）、生理鹽水、消毒劑等，需驗證合格。

3.個人防護(hù)用品（手套、口罩、實驗服）需符合無菌操作要求。

三、檢驗操作步驟

（一）平板計數(shù)法（MPN法）

1.**樣品稀釋**：將樣品按系列稀釋（如10倍梯度稀釋），制備3個濃度梯度樣品。

2.**傾注平板**：每個梯度取1mL樣品，加入90mL無菌培養(yǎng)基中，混勻后傾注平皿。

3.**培養(yǎng)**：倒置平皿，放入36±1℃培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)48–72小時。

4.**計數(shù)**：選擇菌落數(shù)在30–300的平板，采用三角計數(shù)法統(tǒng)計菌落數(shù)。

5.**結(jié)果計算**：根據(jù)公式計算每克/毫升樣品中的菌落數(shù)（CFU）。

（二）菌落形態(tài)觀察

1.將純化菌株接種于固體培養(yǎng)基，36±1℃培養(yǎng)24–48小時。

2.觀察菌落大小、形狀、顏色、透明度等特征，記錄典型形態(tài)。

3.通過顯微鏡觀察菌體形態(tài)（如革蘭染色、鞭毛染色等）。

（三）無菌檢驗

1.取樣量≤1mL時，直接接種于100mL培養(yǎng)基中；≥1mL時，接種于相應(yīng)體積培養(yǎng)基。

2.培養(yǎng)7天，期間每日觀察是否有菌落生長。

3.如無生長，判定樣品無菌；如有生長，需進(jìn)一步鑒定。

四、質(zhì)量控制要點(diǎn)

（一）陽性對照

每次檢驗需設(shè)置陽性對照，確保培養(yǎng)基和操作有效性。

（二）重復(fù)性檢驗

對可疑結(jié)果或重要樣品，應(yīng)進(jìn)行至少2次平行檢驗。

（三）培養(yǎng)基質(zhì)量監(jiān)控

每月進(jìn)行培養(yǎng)基復(fù)蘇試驗，確保無菌性和支持生長能力。

（四）操作人員培訓(xùn)

定期進(jìn)行操作技能培訓(xùn)和考核，確保符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

五、注意事項

1.所有操作需在無菌條件下進(jìn)行，避免二次污染。

2.培養(yǎng)基和試劑需在有效期內(nèi)使用，避免變質(zhì)。

3.培養(yǎng)箱溫度需定期校準(zhǔn)，確保培養(yǎng)條件穩(wěn)定。

4.實驗廢棄物需按生物安全規(guī)定處理。

六、結(jié)果記錄與報告

（一）記錄

詳細(xì)記錄樣品信息、操作步驟、菌落數(shù)、形態(tài)特征等數(shù)據(jù)。

（二）報告

檢驗報告應(yīng)包含樣品名稱、檢驗方法、結(jié)果、結(jié)論及檢驗人信息。

本規(guī)范為微生物檢驗的基本操作指南，具體檢驗項目可結(jié)合實際需求進(jìn)行調(diào)整。

一、概述

微生物檢驗是評估樣品中微生物含量和種類的重要手段，廣泛應(yīng)用于食品、藥品、環(huán)境、生物制品等領(lǐng)域。為確保檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性和可重復(fù)性，必須嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化的操作程序。本規(guī)范詳細(xì)規(guī)定了微生物檢驗的基本流程、操作步驟、質(zhì)量控制要點(diǎn)及注意事項，旨在指導(dǎo)檢驗人員規(guī)范操作，提高檢驗質(zhì)量。

二、檢驗前的準(zhǔn)備

（一）樣品采集與處理

1.**樣品采集**

-采集工具需徹底清潔并滅菌（如使用75%乙醇浸泡30分鐘，滅菌鍋121℃滅菌15分鐘）。

-根據(jù)樣品類型選擇合適的取樣方法：

（1）液體樣品：使用無菌吸管或注射器直接吸取。

（2）固體樣品：采用無菌剪刀或鑿子取代表性樣品（約5–10g）。

（3）表面樣品：使用無菌棉簽擦拭指定區(qū)域（≥100cm2）。

-樣品采集后應(yīng)立即密封，標(biāo)記樣品信息（名稱、采集時間、編號等）。

2.**樣品處理**

-**液體樣品**：

（1）混勻樣品，取適量（如1mL）加入9mL無菌生理鹽水中稀釋。

（2）按需進(jìn)行系列稀釋（如10?1至10?3梯度）。

-**固體樣品**：

（1）將樣品剪碎或磨細(xì)，取適量（如10g）加入90mL無菌生理鹽水中。

（2）使用均質(zhì)器高速攪拌1–3分鐘（10000–12000rpm），或充分振搖。

-**表面樣品**：

（1）將無菌棉簽在生理鹽水中擠壓數(shù)次，去除多余液體。

（2）在樣品表面均勻涂抹3次，每個區(qū)域≥1cm2。

（二）檢驗環(huán)境要求

1.**環(huán)境條件**：

（1）檢驗區(qū)域應(yīng)為潔凈實驗室，溫度20–30℃，相對濕度40%–60%。

（2）空氣潔凈度應(yīng)達(dá)到ISO5級或以上，定期檢測空氣菌落數(shù)（如每立方米≤3CFU）。

2.**設(shè)備要求**：

（1）生物安全柜：使用前需進(jìn)行風(fēng)量、風(fēng)速、過濾效率檢測。

（2）培養(yǎng)箱：配備溫度傳感器，校準(zhǔn)誤差≤±0.5℃。

（3）高壓滅菌鍋：滅菌程序驗證（如使用嗜熱脂肪芽孢菌片監(jiān)測滅菌效果）。

3.**表面消毒**：

（1）操作臺面使用70%乙醇擦拭消毒，作用時間≥30秒。

（2）實驗器械（如接種環(huán)、移液器）使用后立即滅菌（如滅菌鍋121℃滅菌15分鐘）。

（三）儀器與試劑準(zhǔn)備

1.**主要儀器**：

（1）移液器：校準(zhǔn)精度≤±2%，定期進(jìn)行泄漏測試。

（2）顯微鏡：配備油鏡，校準(zhǔn)目鏡測微尺。

（3）菌落計數(shù)器：確保刻度清晰，無磨損。

2.**培養(yǎng)基與試劑**：

（1）常用培養(yǎng)基：營養(yǎng)瓊脂（NA）、麥康凱瓊脂（MAC）、血瓊脂（BA）等，需驗證pH值（6.4–7.2）和凝固溫度（45–46℃）。

（2）無菌生理鹽水：使用蒸餾水或去離子水配制，滅菌后冷卻至室溫。

（3）消毒劑：如季銨鹽類消毒液（濃度500–1000mg/L），使用前測定有效成分。

3.**個人防護(hù)**：

（1）穿戴一次性手套，操作全程避免觸摸非無菌區(qū)域。

（2）佩戴防霧護(hù)目鏡，實驗服應(yīng)覆蓋所有皮膚。

三、檢驗操作步驟

（一）平板計數(shù)法（MPN法）

1.**樣品稀釋**：

（1）稱取10g固體樣品或1mL液體樣品，加入90mL無菌生理鹽水中。

（2）用移液器吸取1mL稀釋液，加入9mL新生理鹽水中，重復(fù)3次（10?1至10?3）。

（3）記錄稀釋倍數(shù)，確保后續(xù)接種量≤1mL。

2.**傾注平板**：

（1）每個稀釋梯度取1mL樣品，加入90mL已滅菌的培養(yǎng)基（如NA）中。

（2）立即將培養(yǎng)基分裝至無菌平皿（每皿15–20mL），混勻后靜置凝固（室溫≥30分鐘）。

（3）倒置平皿，標(biāo)注稀釋倍數(shù)和接種量。

3.**培養(yǎng)與計數(shù)**：

（1）將平皿放入36±1℃培養(yǎng)箱，培養(yǎng)48–72小時。

（2）選擇菌落數(shù)在30–300的平板，采用三角計數(shù)法統(tǒng)計活菌數(shù)。

（3）計算公式：CFU/g（mL）=（平均菌落數(shù)×稀釋倍數(shù)）/接種量。

（二）菌落形態(tài)觀察

1.**純化培養(yǎng)**：

（1）挑取單菌落，劃線接種于NA平板，36±1℃培養(yǎng)24–48小時。

（2）觀察菌落形態(tài)（大小、顏色、邊緣、透明度），記錄典型特征。

2.**革蘭染色**：

（1）制備細(xì)菌涂片，自然干燥后火焰固定。

（2）依次滴加結(jié)晶紫1分鐘、碘液1分鐘、95%乙醇30秒、復(fù)紅30秒。

（3）水洗晾干后油鏡觀察，區(qū)分革蘭陽性（紫色）和陰性（紅色）。

3.**顯微鏡檢查**：

（1）制備懸液（1:10稀釋），加入美蘭染液1分鐘染色。

（2）鏡下觀察菌體大小、形狀（球菌/桿菌）、鞭毛/芽孢等特征。

（三）無菌檢驗

1.**接種量確定**：

（1）≤1mL樣品：接種全部體積于100mL培養(yǎng)基。

（2）1mL–50mL樣品：接種全部體積于500mL培養(yǎng)基。

（3）>50mL樣品：接種1mL于100mL培養(yǎng)基，另取50mL直接培養(yǎng)。

2.**培養(yǎng)與觀察**：

（1）接種后培養(yǎng)基需滅菌（如121℃15分鐘），冷卻后置于36±1℃培養(yǎng)。

（2）每日檢查是否有菌落生長，連續(xù)觀察7天。

（3）如無生長，判定樣品無菌；如有生長，需進(jìn)一步鑒定。

四、質(zhì)量控制要點(diǎn)

（一）陽性