2024年動(dòng)物疫病防治員三級(jí)復(fù)習(xí)題及答案一、病原學(xué)基礎(chǔ)與實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)1.【單選】下列哪種染色方法最適合在顯微鏡下快速鑒別布魯氏菌與馬耳他布魯氏菌？A.革蘭氏染色?B.抗酸染色?C.柯氏染色?D.姬姆薩染色答案：C?解析：柯氏染色可將布魯氏菌染成紅色，背景呈藍(lán)色，馬耳他布魯氏菌因菌體較小且著色淺，易與光滑型布魯氏菌區(qū)分。2.【單選】在口蹄疫病毒RTPCR檢測(cè)中，若5′UTR引物對(duì)擴(kuò)增失敗，而3D聚合酶基因引物對(duì)擴(kuò)增成功，最可能的解釋是：A.樣本RNA降解?B.引物二聚體干擾?C.病毒為新型O/MESA拓?fù)湫?D.抑制物殘留答案：C?解析：5′UTR區(qū)高度變異，新型拓?fù)湫涂沙霈F(xiàn)引物錯(cuò)配；3D區(qū)保守，仍能擴(kuò)增。3.【單選】對(duì)非洲豬瘟病毒（ASFV）實(shí)時(shí)熒光PCR，下列哪種內(nèi)參基因可有效監(jiān)控豬源DNA提取質(zhì)量？A.βactin?B.18SrRNA?C.RPL32?D.GAPDH答案：A?解析：βactin單拷貝且穩(wěn)定，可排除豬血細(xì)胞裂解不全造成的假陰性。4.【單選】采用雞胚尿囊腔接種分離新城疫病毒時(shí)，死亡雞胚的尿囊液能凝集1%雞紅細(xì)胞，但56℃30min處理后失去凝集活性，說(shuō)明：A.含NDV?B.含AIV?C.含腺病毒?D.含呼腸孤病毒答案：A?解析：NDV血凝素對(duì)熱敏感，AIV血凝素耐熱，可據(jù)此初篩。5.【單選】在奶牛結(jié)核菌素試驗(yàn)中，若注射后72h皮褶增厚差值為3.8mm，無(wú)熱痛，但I(xiàn)FNγ釋放試驗(yàn)陽(yáng)性，應(yīng)判定為：A.陰性?B.可疑?C.陽(yáng)性?D.需重做皮試答案：C?解析：OIE標(biāo)準(zhǔn)：皮試≥4mm為陽(yáng)性；<4mm但I(xiàn)FNγ陽(yáng)性仍判陽(yáng)性。6.【單選】對(duì)豬圓環(huán)病毒3型（PCV3）進(jìn)行原位雜交時(shí)，最佳固定液為：A.4%多聚甲醛?B.10%中性福爾馬林?C.Bouin液?D.95%乙醇答案：B?解析：中性福爾馬林對(duì)組織形態(tài)與RNA保存兼顧最佳，可減少非特異背景。7.【單選】用ELISA檢測(cè)小反芻獸疫（PPR）抗體，若樣本OD值為陰性對(duì)照均值2.1倍，但阻斷ELISA抑制率僅35%，應(yīng)：A.判陽(yáng)性?B.判陰性?C.重做阻斷ELISA?D.用中和試驗(yàn)確認(rèn)答案：D?解析：OD法易出現(xiàn)非特異，抑制率<40%視為陰性，需中和試驗(yàn)仲裁。8.【單選】對(duì)鴨瘟病毒（DPV）進(jìn)行噬斑純化時(shí)，維持液中加入1%低熔點(diǎn)瓊脂糖的主要目的是：A.提供營(yíng)養(yǎng)?B.限制病毒擴(kuò)散形成獨(dú)立噬斑?C.中和抗體?D.穩(wěn)定pH答案：B?解析：瓊脂糖凝固后形成微環(huán)境，使子代病毒局部感染，形成可見(jiàn)噬斑。9.【單選】在牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）分離中，用MDBK細(xì)胞出現(xiàn)明顯CPE，但免疫熒光檢測(cè)NS3蛋白陰性，最可能污染了：A.牛副流感病毒3型?B.牛腸道病毒?C.牛腺病毒?D.牛皰疹病毒1型答案：A?解析：BPIV3在MDBK上CPE類似BVDV，但NS3蛋白為黃病毒科特有。10.【單選】對(duì)羊痘病毒（SPPV）進(jìn)行透射電鏡負(fù)染，病毒顆粒表面可見(jiàn)：A.囊膜刺突呈“紐扣”樣?B.二十面體殼粒?C.螺旋對(duì)稱核衣殼?D.管狀脂蛋白突起答案：A?解析：羊痘病毒為痘病毒科，表面有隨機(jī)排列的管索樣結(jié)構(gòu)，形似紐扣。11.【多選】下列哪些方法可用于區(qū)分豬瘟病毒（CSFV）野毒與兔化弱毒疫苗株？A.E2糖蛋白單抗阻斷ELISA?B.5′UTR熒光探針熔解曲線?C.Erns基因高分辨率熔解?D.病毒分離后動(dòng)物回歸試驗(yàn)答案：A、B、C、D?解析：疫苗株E2表位缺失、5′UTR及Erns存在特征性堿基突變；動(dòng)物回歸可觀察熱型差異。12.【多選】關(guān)于禽白血病病毒（ALV）實(shí)時(shí)熒光定量PCR，下列描述正確的是：A.引物位于3′UTR可覆蓋所有亞群?B.可用SYBRGreen法?C.需建立標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒梯度?D.需使用FAM標(biāo)記的LNA探針提高特異性答案：A、B、C、D?解析：3′UTR保守；SYBR法成本低；標(biāo)準(zhǔn)曲線定量；LNA探針可減少引物二聚體干擾。13.【多選】在豬德?tīng)査跔畈《荆≒DCoV）RTPCR中，出現(xiàn)非特異條帶的原因包括：A.Mg2+濃度過(guò)高?B.退火溫度過(guò)低?C.引物3′端互補(bǔ)?D.模板量過(guò)高答案：A、B、C、D?解析：均會(huì)導(dǎo)致非特異擴(kuò)增，需優(yōu)化體系。14.【多選】對(duì)牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒（LSDV）進(jìn)行全基因組測(cè)序，下列哪些平臺(tái)可獲得完整末端反向重復(fù)序列？A.IlluminaNovaSeq?B.OxfordNanopore?C.PacBioSequelII?D.MGIDNBSEQ答案：B、C?解析：長(zhǎng)讀長(zhǎng)可覆蓋末端重復(fù)，短讀長(zhǎng)需拼接易缺失。15.【多選】在獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室生物安全中，關(guān)于ASFV操作，正確的是：A.生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室?B.離心使用密封杯?C.廢棄物需121℃30min高壓?D.工作人員需接種痘苗免疫答案：A、B、C?解析：ASFV為二類動(dòng)物病原，需BSL3；無(wú)疫苗，故不接種。16.【判斷】豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）歐洲型與北美型在Nsp2區(qū)均有高變區(qū)，但歐洲型缺失111+1個(gè)氨基酸。答案：正確?解析：歐洲型Lelystad株Nsp2缺失111+1，北美型VR2332無(wú)此缺失。17.【判斷】用雞胚致死量（ELD50）測(cè)定H5N1高致病性禽流感病毒時(shí)，若ReedMuench法計(jì)算值為10–7.5/0.1mL，則每毫升病毒含量為10–8.5ELD50。答案：錯(cuò)誤?解析：0.1mL含10–7.5，1mL含10–8.5ELD50，表述正確，但題干將“每毫升”寫為“每0.1毫升”導(dǎo)致邏輯顛倒，故判錯(cuò)誤。18.【判斷】牛乳中若檢出金黃色葡萄球菌enterotoxinA，可用Vero細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)確認(rèn)。答案：錯(cuò)誤?解析：腸毒素為超抗原，需用貓腎細(xì)胞或ELISA檢測(cè)，Vero細(xì)胞不敏感。19.【判斷】對(duì)犬瘟熱病毒（CDV）進(jìn)行血凝試驗(yàn)時(shí)，需用1%狗紅細(xì)胞且4℃環(huán)境。答案：錯(cuò)誤?解析：CDV無(wú)血凝活性，需用猴紅細(xì)胞做血吸附試驗(yàn)。20.【判斷】在布魯氏菌AMOSPCR中，若擴(kuò)增出731bp條帶，可判定為羊種布魯氏菌3型。答案：正確?解析：AMOS引物對(duì)B.melitensis3型特異片段為731bp。21.【填空】在禽網(wǎng)狀內(nèi)皮組織增生癥病毒（REV）前病毒整合檢測(cè)中，常用__________基因作為整合位點(diǎn)篩查靶標(biāo)。答案：env?解析：REVenv基因保守，整合后穩(wěn)定存在。22.【填空】對(duì)豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌（APP）進(jìn)行ApxIVELISA抗體檢測(cè)，若血清稀釋__________倍仍呈陽(yáng)性，可提示野毒感染。答案：1:800?解析：疫苗株不表達(dá)ApxIV，高稀釋度陽(yáng)性提示野毒。23.【填空】用RTqPCR檢測(cè)新城疫病毒，若Ct值>35且熔解曲線主峰Tm=(80.2±0.5)℃，需進(jìn)行__________試驗(yàn)確認(rèn)。答案：測(cè)序?解析：Tm偏移可能為引物二聚體或突變，需測(cè)序驗(yàn)證。24.【填空】對(duì)兔出血癥病毒（RHDV）進(jìn)行VP60基因系統(tǒng)進(jìn)化分析，常用__________軟件構(gòu)建ML樹。答案：MEGAX?解析：MEGAX支持最大似然法，適合VP60高變區(qū)。25.【填空】在牛支原體（Mycoplasmabovis）分離培養(yǎng)時(shí)，培養(yǎng)基需添加__________以抑制雜菌。答案：林可霉素（50μg/mL）?解析：林可霉素抑制革蘭氏陽(yáng)性菌，不影響支原體。26.【簡(jiǎn)答】簡(jiǎn)述鑒別診斷牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）持續(xù)感染（PI）牛與一過(guò)性感染牛的實(shí)驗(yàn)室策略。答案：采集耳組織或全血，用免疫組化或抗原ELISA檢測(cè)病毒抗原；PI牛全生命周期抗原陽(yáng)性；一過(guò)性感染牛在抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)后抗原轉(zhuǎn)陰；輔以病毒分離與RTPCR，PI牛病毒載量高且序列一致；對(duì)6月齡以下?tīng)倥Ｐ栝g隔3周重復(fù)檢測(cè)，避免母源抗體干擾。27.【簡(jiǎn)答】說(shuō)明禽腺病毒4型（FAdV4）引起禽心包積液綜合征的致病機(jī)制及實(shí)驗(yàn)室確診流程。答案：FAdV4通過(guò)糞口途徑感染，hexon蛋白與肝細(xì)胞受體結(jié)合，誘導(dǎo)凋亡及炎癥因子風(fēng)暴，導(dǎo)致右心衰竭與心包積液；確診：無(wú)菌采集肝臟，PCR檢測(cè)hexon基因；病毒分離用LMH細(xì)胞，觀察CPE；免疫熒光檢測(cè)Fiber2蛋白；病理切片HE染色可見(jiàn)嗜堿性包涵體；測(cè)序鑒定血清型。28.【案例分析】某豬場(chǎng)2周齡仔豬突發(fā)嘔吐、水樣腹瀉，死亡率30%。RTPCR檢測(cè)PED/MEV/TGEV均陰性，但測(cè)序發(fā)現(xiàn)與豬急性腹瀉綜合征冠狀病毒（SADSCoV）同源性99%。請(qǐng)給出防控方案。答案：立即封鎖產(chǎn)房，全群口服初乳+電解質(zhì)；環(huán)境升溫至30℃，降低濕度；對(duì)母豬返飼發(fā)病仔豬腸道內(nèi)容物，誘導(dǎo)局部IgA；對(duì)7日齡以上仔豬緊急接種自研滅活疫苗；對(duì)運(yùn)輸車輛用2%戊二醛消毒；全場(chǎng)實(shí)行McREBEL管理，斷奶后嚴(yán)格全進(jìn)全出；對(duì)下周待產(chǎn)母豬肌注干擾素λ，降低垂直傳播；建立哨兵豬，連續(xù)3周肛拭子RTPCR陰性方可解除封鎖。29.【案例分析】某蛋雞場(chǎng)產(chǎn)蛋率驟降20%，蛋殼變薄，肝脾腫大。PCR檢出禽白血病病毒J亞群（ALVJ），env基因出現(xiàn)A143V突變。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)凈化程序。答案：對(duì)全群采血，用ALVJgp85ELISA篩查，陽(yáng)性雞淘汰；對(duì)留種雞苗出殼第1天采胎糞，用ALV群特異p27抗原ELISA，陽(yáng)性者淘汰；對(duì)陰性雞隔離飼養(yǎng)，每周肛拭子檢測(cè)，連續(xù)3次陰性進(jìn)入核心群；對(duì)公雞采精液，用ALVJRTPCR檢測(cè)，陽(yáng)性淘汰；對(duì)孵化廳徹底消毒，種蛋45℃14h熱處理；建立無(wú)ALVJ祖代場(chǎng)，配套使用ALVJ亞單位疫苗，但僅用于陰性場(chǎng)生物安全屏障維護(hù)，不作免疫替代。30.【案例分析】某奶牛場(chǎng)出現(xiàn)關(guān)節(jié)腫脹、發(fā)熱，關(guān)節(jié)液PCR檢出牛支原體（M.bovis），gyrA基因檢出S83F突變。請(qǐng)給出用藥與生物安全方案。答