《凝血因子VⅢ抑制物定量檢測專家共

識(2025版)》解讀前言◆

凝血因子VⅢ(factor

VIⅢ,FVⅢ)

抑制物作為獲得性血友病A(acquiredhemophilia

A,AHA)

的診斷指標(biāo)，同時(shí)也是接受外源性FVⅢ輸注后

血友病A((hemophilia

A,HA)

患者是否產(chǎn)生抑制物的關(guān)鍵監(jiān)測指

標(biāo)。由此可見，

FVⅢ抑制物的定量檢測在這些疾病的鑒別診斷、治療

方案選擇及治療效果監(jiān)測等環(huán)節(jié)中均起著至關(guān)重要的作用。2018年，

中華醫(yī)學(xué)會血液學(xué)分會血栓與止血學(xué)組及中國血友病協(xié)作組聯(lián)合制定了《凝血因子VⅢ/I區(qū)X

抑制物診斷與治療中國指南(2018年版)》,

詳細(xì)介紹了凝血因子抑制物產(chǎn)生的危險(xiǎn)因素及治療方案，但在實(shí)驗(yàn)室檢測方面僅簡單提及了FVⅢ抑制物的檢測方法，并未明確標(biāo)準(zhǔn)化操

作及報(bào)告流程。前言◆

此后，多個(gè)指南及專家共識亦未能在此方面給出相對專業(yè)的意見或

建議。然而，當(dāng)前FVⅢ抑制物定量檢測存在著檢測過程中影響因素相

對較多、自動(dòng)化程度相對較低等問題，同時(shí)檢驗(yàn)醫(yī)師及技師對檢測

結(jié)果計(jì)算的相關(guān)概念較為模糊，加之新型非因子治療藥物的使用，使得FVⅢ抑制物定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)化面臨著巨大的挑戰(zhàn)。為了解各實(shí)驗(yàn)

室FVⅢ抑制物定量檢測現(xiàn)狀及存在的問題，中華醫(yī)學(xué)會檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會

臨床血液體液學(xué)組聯(lián)合中國血友病青年協(xié)作組設(shè)計(jì)并發(fā)布了調(diào)研問卷，最終共收到159家實(shí)驗(yàn)室的反饋。前言◆

調(diào)研問卷結(jié)果顯示在FVⅢ抑制物定量檢測的相關(guān)概念、檢測步驟和結(jié)

果計(jì)算及解釋等方面亟待規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化。結(jié)合調(diào)研問卷結(jié)果，學(xué)

組與協(xié)作組查閱國內(nèi)外相關(guān)文獻(xiàn)，整理并總結(jié)國內(nèi)血栓與止血領(lǐng)域

專家的臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，共同編寫了本共識?！?/p>

本共識主要從相關(guān)概念、啟動(dòng)檢測的時(shí)機(jī)、檢測方法、檢測步驟、結(jié)果計(jì)算及解釋和注意事項(xiàng)等方面進(jìn)行介紹，以期推進(jìn)我國FVⅢ抑

制

物定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)化，進(jìn)而推廣至各凝血因子抑制物定量檢測的標(biāo)

準(zhǔn)化，同時(shí)亦希望能給血栓與止血領(lǐng)域的臨床醫(yī)師、檢驗(yàn)醫(yī)師及技

師在臨床工作中帶來指導(dǎo)和幫助。一、FVⅢ抑制物的相關(guān)概念(一)基本概念◆

將不同稀釋度的患者血漿與等量的正?；旌涎獫{(normal

pooledplasma,NPP)

混合后，置于37℃孵育2h后測定混合樣本的剩余FVⅢ

活性

(factor

VⅢactivity,FVⅢ:C)。能使NPP的FVⅢ:C

減少50%的FVⅢ抑制物含量稱為1個(gè)Bethesda單位

(Bethesda

unit,BU),此時(shí)患

者血漿稀釋度的倒數(shù)即為FVⅢ抑制物滴度，報(bào)告單位為BU/ml

。同一

患者在一周至四周內(nèi)連續(xù)兩次檢出≥0.6BU/ml的FVⅢ抑制物，則為FVⅢ抑制物陽性。一、FVⅢ抑制物的相關(guān)概念(二)分類◆

FVⅢ抑制物可分為HA患者的抗FVⅢ同種抑制物及AHA患者的抗FVⅢ自

身抑制物。前者多為1型抑制物，而后者多為2型抑制物，兩者呈現(xiàn)

出截然不同的動(dòng)力學(xué)特征。此外，根據(jù)FVⅢ抑制物滴度，可將其分為

低滴度抑制物(即抑制物滴度<5.0BU/ml)

和高滴度抑制物(即抑制物滴度≥5.0BU/ml。二、啟動(dòng)FVⅢ抑制物定量檢測的時(shí)機(jī)(一)HA◆對于首次擬確診的HA患者(尤其是輕型和中間型患者),為與AHA進(jìn)行鑒別診斷，在接受替代治療前需進(jìn)行FVⅢ抑制物定量檢測。◆

對于已確診的HA患者，除預(yù)防治療時(shí)需定期監(jiān)測FVⅢ抑制物外，若

有以下情況，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行FVⅢ抑制物定量檢測：>(1)FVⅢ替代治療效果較既往欠佳；(2)在規(guī)范預(yù)防治療下，出血頻率增加或者仍有靶關(guān)節(jié)出血；>

(3)高強(qiáng)度輸注FVⅢ后；二、啟動(dòng)FVⅢ抑制物定量檢測的時(shí)機(jī)(一)HA>(

4

)

手

術(shù)

前

；>(5)手術(shù)后FVⅢ替代治療療效欠佳；>(6)輕型和中間型HA患者出血表現(xiàn)加重。具體情況可參考《血友病合并抑制物診斷與治療中國指南(2023年版)》。◆

對于抑制物持續(xù)陽性的重型HA患者，應(yīng)立即接受免疫耐受誘導(dǎo)治療

(immunetoleranceinduction,ITI)。FVII抑制物定量檢測對于ITI

的療效預(yù)測、劑量選擇及療效評估等均有重要的臨床意義。具體內(nèi)容可參考《血友病合并抑制物診斷與治療中國指南(2023年版)》。二、啟動(dòng)FVⅢ抑制物定量檢測的時(shí)機(jī)(二)HA◆對于擬確診AHA

的患者，應(yīng)進(jìn)行FVⅢ抑制物定量檢測以明確診斷?！?/p>

對于已確診的AHA

患者，在治療前6周，門診患者應(yīng)每周進(jìn)行1次FVⅢ抑制物定量檢測，住院患者應(yīng)每周進(jìn)行2次FVⅢ抑制物定量檢測。

完全緩解(即FVⅢ抑制物滴度<0.6BU/ml,FVⅢ:C≥50%,免疫抑制

劑停用或恢復(fù)至發(fā)病前劑量)后可根據(jù)臨床需求進(jìn)行FVⅢ抑制物定量

檢

測

。三、FVⅢ抑制物定量檢測方法(一)按檢測原理區(qū)分◆

FVⅢ抑制物定量檢測本質(zhì)上是剩余FVⅢ:C

檢測，從檢測原理上可分

為一期凝固法和發(fā)色底物法?！?/p>

1、一期凝固法：◆一期凝固法主要是基于檢測待測樣本對乏FVⅢ基質(zhì)血漿活化部分凝血

活酶時(shí)間

(activated

partial

thromboplastin

time,APTT)的糾正能力，

通過檢測混合后血漿的APTT

可計(jì)算得到樣本的FVⅢ:C

結(jié)果。

一期凝固法目前是國內(nèi)乃至全世界應(yīng)用最廣泛的FVⅢ:C檢測方法。但該

方法可能受其他凝血因子抑制物、狼瘡抗凝物質(zhì)和肝素等干擾APTT

糾正能力的物質(zhì)影響。此外，隨著HA新型非因子治療藥物(如艾美

賽珠單抗)的使用，

一期凝固法亦不能用于該人群的FVⅢ抑制物定量

檢

測

。三、FVⅢ抑制物定量檢測方法(一)按檢測原理區(qū)分◆2、發(fā)色底物法：◆

發(fā)色底物法的原理是基于檢測FVⅢ作為輔因子與活化的凝血因子區(qū)形

成的復(fù)合物活化凝血因子X

的能力，通過檢測生成的活化凝血因子X

的量來計(jì)算樣本的FVⅢ:C

結(jié)果。該方法抗干擾能力較一期凝固法強(qiáng)，

可應(yīng)用于FVⅢ抑制物與其他凝血因子抑制物或狼瘡抗凝物質(zhì)的鑒別診

斷。另外，牛源性發(fā)色底物法(即試劑為牛源性試劑)可應(yīng)用于使用艾美賽珠單抗預(yù)防治療的HA患者的FVⅢ抑制物定量檢測。三、FVⅢ抑制物定量檢測方法(二)按檢測體系區(qū)分◆Lawrence

和Johnson于1941年首次報(bào)道了一例產(chǎn)生FVⅢ抑制物的HA

病

例。此后又有多例FVⅢ抑制物陽性的病例先后被報(bào)道，但報(bào)道中的FVⅢ抑制物定量檢測方法卻大相徑庭。直至1975年，

Kasper等提出了

一種標(biāo)準(zhǔn)化程度較高的檢測方法，即Bethesda

法。1995年Verbruggen等在Bethesda

法的檢測體系上進(jìn)行改良，進(jìn)而提出了Nijmegen

法。相比Bethesda法，Nijmegen法提高了FVⅢ抑制物定量檢測的特異性。此后，Nijmegen

法被國際血栓與止血學(xué)會推薦為FVⅢ抑制物定量檢測

的參考方法。兩種方法的區(qū)別主要在檢測體系的不同，具體內(nèi)容將在本共識后續(xù)部分進(jìn)行詳細(xì)介紹。三、FVⅢ抑制物定量檢測方法(三)按正?；旌涎獫{的來源區(qū)分◆國際上，豬重組凝血因子VⅢ(recombinant

porcine

factor

VⅢ,rpFVⅢ)

已被用于成人AHA

患者按需治療和出血事件的控制。對于該人群而

言，需額外檢測抗rpFVⅢ抑制物。根據(jù)NPP

的來源，可將FVⅢ抑制物

定量檢測分為抗人FVⅢ抑制物定量檢測和抗rpFVⅢ抑制物定量檢測。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(一)樣本采集及制備◆應(yīng)使用含0.109mol/L(3.2%)

枸櫞酸三鈉抗凝劑(1:9抗凝)抗凝

管進(jìn)行樣本采集。若患者的紅細(xì)胞比容≥55%,應(yīng)按要求進(jìn)行抗凝劑

或采血量的調(diào)整。樣本采集后應(yīng)確認(rèn)無血凝塊存在，宜在常溫條件

下1h內(nèi)送檢，采用規(guī)定的離心速度和離心時(shí)間[室溫(18~24℃)、1500×g

、不少于15min]離心，以得到乏血小板血漿(血小板計(jì)數(shù)

<10×10?/L),

建議當(dāng)天內(nèi)完成檢測?！羧舨荒芗皶r(shí)檢測，應(yīng)盡快將離心分離后的血漿置于-20℃冰箱(最多

可保存2周)或-70℃冰箱(最多可保存6個(gè)月)保存。檢測前應(yīng)將樣本置于37℃水浴快速復(fù)融至少4~5min并充分混勻。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(二)樣本滅活◆

在FVⅢ抑制物定量檢測前，應(yīng)將樣本置于56℃孵育30min以滅活樣本

中殘留的FVⅢ,減少殘留的FVⅢ對FVⅢ抑制物定量檢測結(jié)果的干擾。滅活后，需采用一定的離心速度和離心時(shí)間(如4000×g

、2min或

1500×g

、不少于15min等)離心，取上清液進(jìn)行后續(xù)的樣本稀釋?！?/p>

共識1所有待測乏血小板血漿均應(yīng)經(jīng)過56℃孵育30min滅活。滅活

后采用一定的離心速度和離心時(shí)間離心，取上清液進(jìn)行后續(xù)的樣本

稀釋。推薦強(qiáng)度：推薦，同意率：81.25%(13/16)四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(三)正常混合血漿的準(zhǔn)備◆當(dāng)檢測抗人FVⅢ抑制物時(shí)，可使用商品化的NPP,

商品化NPP的使用

和保存應(yīng)按照制造商說明書進(jìn)行操作。若無法獲得商品化NPP,實(shí)驗(yàn)室亦可自制NPP。自

制NPP時(shí)需注意：>(1)應(yīng)選擇至少20份(男女比例1:1)常規(guī)凝血試驗(yàn)結(jié)果均正常的血漿混合制得；>(2)避免選擇感染、腫瘤、創(chuàng)傷、術(shù)后、妊娠、新生兒、肝臟疾病、自身免疫性疾病及進(jìn)行抗凝治療等人群的樣本；(3)避免選擇性狀存在溶血、凝塊、黃疽和脂血等情況的樣本；四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(三)正常混合血漿的準(zhǔn)備(4)從每份樣本中采集足夠的血漿以獲得足夠的NPP;(

5

)自

制NPP的FVⅢ:C

結(jié)果應(yīng)在95%~105%之間?！?/p>

混合制得NPP后需采用一定的離心速度和離心時(shí)間(如1500×g、15min等)再次離心?？稍诿看蜦I抑制物定量檢測前制備新鮮的NPP,

抑或使用凍存的NPP?！?/p>

凍存及復(fù)融的要求可參考《活化部分凝血活酶時(shí)間延長混合血漿糾

正試驗(yàn)操作流程及結(jié)果解讀中國專家共識》。復(fù)融后應(yīng)重新檢測NPP的FVⅢ:C,

結(jié)果需在95%~105%之間才可繼續(xù)使用。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(三)正?；旌涎獫{的準(zhǔn)備◆

當(dāng)檢測抗rpFVⅢ抑制物時(shí)，可使用商品化的rpFVⅢ作為NPP,

商品化rpFVⅢ的使用和保存應(yīng)按照制造商說明書進(jìn)行操作。使用商品化的乏

FVⅢ血漿稀釋rpFVⅢ,使rpFVⅢ活性接近100%?！?/p>

共識2實(shí)驗(yàn)室自制NPP的FVⅢ:C結(jié)果應(yīng)在95%~105%之間。推薦強(qiáng)

度：強(qiáng)推薦，同意率：93.75%(15/16)四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(四)樣本稀釋及處理◆

1、Bethesda法：◆

使用pH=7.4的0.1mol/L咪唑緩沖液將樣本稀釋至各稀釋度(如1/2、1/4、1/8、1/16等),最大稀釋度可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。向0.1mol/L

咪唑緩沖液(后稱“標(biāo)準(zhǔn)管”)和原倍及各稀釋度的樣本(后稱“檢測管”)中加入等量的NPP,

混勻后閉蓋置于37℃孵育2h。原倍檢測管的稀釋度為1,1/2稀釋的檢測管的稀釋度為2,以此類推。具體操作步驟見圖1。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(四)樣本稀釋及處理混勻后閉蓋置于37

℃孵育2

h圖1

FVⅢ抑制物定量檢測樣本的稀釋及處理過程正?；旌涎獫{0.1

mol/L咪唑緩沖液

滅活后的樣本檢測管

檢測管

檢測管

檢測管標(biāo)準(zhǔn)管

檢測管

原倍標(biāo)準(zhǔn)管

檢測管

原倍加入等量的正常混合血漿檢測管四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(四)樣本稀釋及處理◆

2

、Nijmegen

法：◆

Nijmegen

法與Bethesda法檢測體系的不同點(diǎn)在于：>(1)使用乏FVⅢ血漿作為樣本稀釋液；>(2)使用0.

1mol/L的咪唑緩沖液將NPP的pH調(diào)整至7.4。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(五)剩余FVⅢ:C檢測◆

可通過“標(biāo)準(zhǔn)管與檢測管分別檢測FVⅢ:C”或“使用標(biāo)準(zhǔn)管制定標(biāo)

準(zhǔn)曲線”兩種方法中任意一種進(jìn)行剩余FVⅢ:C檢測?！?/p>

1、標(biāo)準(zhǔn)管與檢測管分別檢測FVⅢ:C:◆

分別檢測標(biāo)準(zhǔn)管與檢測管的FVIⅢ:C,

根據(jù)公式(1)計(jì)算檢測管的

剩余FVⅢ:C(%)。剩余FVⅢ:

公式(1)四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(五)剩余FVⅢ:C檢測◆

2、使用標(biāo)準(zhǔn)管制定標(biāo)準(zhǔn)曲線：◆

FVⅢ抑制物定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線制定可參考FVⅢ:C

檢測。將標(biāo)準(zhǔn)管

作為參考血漿(靶值定義為100%)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。FVⅢ抑制物定量

檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線中FVⅢ:C應(yīng)至少覆蓋25%~75%。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性回

歸方程的r值應(yīng)在0.998~1.000,斜率應(yīng)在0.9~1.1。若使用商品化的NPP,在試劑批號更換、NPP批號更換或儀器設(shè)備調(diào)整等情況下需

重新制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。使用凍存的實(shí)驗(yàn)室自制NPP前，除需確認(rèn)是否

有試劑批號更換或儀器設(shè)備調(diào)整等情況外，還需在復(fù)融NPP后重新

檢測FVⅢ:C。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(五)剩余FVⅢ:C檢測◆若結(jié)果在95%~105%之間，可省略標(biāo)準(zhǔn)曲線制定這一步驟。使用新

鮮的實(shí)驗(yàn)室自制NPP時(shí)，需重新制定標(biāo)準(zhǔn)曲線。在制定新的標(biāo)準(zhǔn)曲

線或確認(rèn)歷史標(biāo)準(zhǔn)曲線適用之后，開始檢測管剩余FVⅢ:C的檢測?！?/p>

3、起始檢測管：◆

起始檢測管的選擇可結(jié)合患者病史決定。若為首次進(jìn)行FVⅢ抑制物定

量檢測或無FVⅢ抑制物陽性史的患者，應(yīng)將原倍檢測管作為起始檢測

管。若為有FVⅢ抑制物陽性史的患者，可參考?xì)v史檢測結(jié)果選擇合適

的檢測管作為起始檢測管。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(六)結(jié)果判斷◆檢測管的剩余FVⅢ:C

結(jié)果在25%~75%范圍內(nèi)(除原倍檢測管的剩余

FVⅢ:C>75%外)視為有效結(jié)果。◆若檢測管的剩余FVⅢ:C>50%,

則應(yīng)進(jìn)一步選擇更低稀釋度的檢測

管(直至原倍檢測管)進(jìn)行剩余FVⅢ:C

檢測，直至找到剩余FVⅢ:C≤50%的檢測管。若檢測管的剩余FVⅢ:C<50%,

則應(yīng)進(jìn)一步選擇

更高稀釋度的檢測管進(jìn)行剩余FVⅢ:C

檢測，直至找到剩余FVⅢ:C≥50%的檢測管。四、FVⅢ抑制物定量檢測步驟(五)剩余FVⅢ:C檢測◆若當(dāng)次制備的最高稀釋度的檢測管的剩余FVⅢ:C

仍<50%或最低稀

釋度的檢測管的剩余FVⅢ:C

仍>50%(除原倍檢測管的剩余FVⅢ:C>50%

外),需從樣本稀釋及處理起，調(diào)整合適的稀釋度后重新進(jìn)行FVⅢ抑制物定量檢測?！?/p>

選擇剩余FVⅢ:C

最接近50%的檢測管的結(jié)果進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。◆

共識3剩余FVⅢ:C結(jié)果應(yīng)在25%~75%范圍內(nèi)，選擇最接近50%的

檢測管的結(jié)果進(jìn)行結(jié)果計(jì)算。推薦強(qiáng)度：強(qiáng)推薦，同意率：100.00%(16/16)◆

FVⅢ抑制物定量檢測完整流程示意圖見圖2。FVⅢ抑制物定量檢測樣本采集及制備否，凍存及時(shí)檢測?-20

℃最多保存2周或

-70

℃最多保存6個(gè)月樣本滅活37

℃4～5min樣本離心取上清液樣本稀釋及處理←NPP樣本孵育37

℃孵育2h制定新的標(biāo)準(zhǔn)曲線或確認(rèn)歷史標(biāo)準(zhǔn)曲線適用計(jì)算剩余FVI:C

檢測剩余FVⅢ:C最高稀釋度的檢測管的剩余FVⅢ:C<50%或最低稀釋度的檢測管的剩余FVⅡ:C>50%(除原倍檢測管的剩余FVⅢ:C>50%外)結(jié)果判斷找到剩余FVⅡ:C最接近50%的檢測管(剩余FVⅢ:C結(jié)果應(yīng)在25%～75%范圍內(nèi)

或原倍檢測管的剩余FVⅢ:C>75%)結(jié)果計(jì)算注：FⅢ

為凝血因子Ⅲ;NPP

為正常混合血漿；FVⅢ:C

為

凝

血

因子Ⅲ活性圖

2

FVⅢ抑制物定量檢測完整流程圖分別檢測標(biāo)準(zhǔn)管

與檢測管的FVI:C56℃孵育30min剩余FVⅢ:C是五、結(jié)果計(jì)算及解釋(一)結(jié)果計(jì)算◆

根據(jù)公式(2),得到FVⅢ抑制物滴度計(jì)算系數(shù)。將FVⅢ抑制物滴度

計(jì)算系數(shù)代人公式(3)中計(jì)算樣本的FVⅢ抑制物滴度。FVⅢ抑制物滴度(BU/ml)=FVⅢ抑制物滴度計(jì)算系數(shù)×對應(yīng)的稀釋度公式(3)公式(2)五、結(jié)果計(jì)算及解釋(二)參考范圍◆目前，國內(nèi)外較為公認(rèn)的具有臨床意義的FVⅢ抑制物滴度為“≥0.6

BU/ml”,本共識建議在報(bào)告FVⅢ抑制物定量檢測結(jié)果時(shí)可將參考范

圍定為“<0.6BU/ml”?！艄沧R4FVⅢ抑制物定量檢測的參考范圍為“<0.6BU/ml”。推薦強(qiáng)度：

強(qiáng)推薦，同意率：100.00%(16/16)。五、結(jié)果計(jì)算及解釋(三)檢測限◆當(dāng)樣本的原倍管剩余FVⅢ:C>75%

時(shí)，通過計(jì)算可得其FVⅢ抑制物滴

度<0.42BU/ml。

盡管有學(xué)者通過實(shí)驗(yàn)得到“FVⅢ抑制物滴度檢測限

為0.2BU/ml”的結(jié)論，但綜合臨床實(shí)際應(yīng)用價(jià)值與國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化

委員會的相關(guān)指導(dǎo)文件，本共識建議在報(bào)告FVⅢ抑制物定量檢測結(jié)果

時(shí)應(yīng)將檢測限定為“0.4BU/ml”(檢測結(jié)果保留一位小數(shù)),即當(dāng)樣

本的原倍管剩余FVⅢ:C>75%

時(shí)，其FVⅢ抑制物滴度應(yīng)報(bào)告為“<0.4BU/ml”

。

若臨床確有更高的需求，實(shí)驗(yàn)室需根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行檢測限的性能驗(yàn)證。◆共識5

FVⅢ抑制物定量檢測的檢測限為“0.4BU/ml”。推薦強(qiáng)度：推薦，同意率：81.25%(13/16)五、結(jié)果計(jì)算及解釋(四)檢測灰區(qū)◆

FVⅢ抑制物定量檢測(一期凝固法)結(jié)果<2.0BU/ml為檢測灰區(qū)，可

采用回收試驗(yàn)進(jìn)一步確認(rèn)FVⅢ抑制物是否存在；同時(shí)改用發(fā)色底物法

(如條件允許)或重復(fù)一期凝固法進(jìn)行FVIⅢ抑制物定量檢測。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(一)中和性抑制物與非中和性抑制物◆

使用Bethesda法或Nijmegen法可檢測到的FVⅢ抑制物是中和性抑制物，

主要是免疫球蛋白G(immunoglobulin,IgG)(以IgG4

亞類為主)。

而非中和性抑制物的功能主要是加速FVⅢ的清除，縮短FVⅢ的半衰期，可以通過酶聯(lián)免疫吸附法及免疫沉淀法等方法檢測非中和性抑制物。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(二)1型抑制物與2型抑制物◆

HA患者的抗FVⅢ同種抑制物多為1型抑制物，而AHA

患者的抗FVⅢ自

身抑制物多為2型抑制物。1型抑制物的結(jié)合位點(diǎn)通常是FVⅢ的A2

或C2結(jié)構(gòu)域，破壞了FVⅢ與凝血因子區(qū)復(fù)合物的形成。整個(gè)反應(yīng)呈現(xiàn)1

型反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特征，抑制物可完全中和FVⅢ。2型抑制物的結(jié)合位點(diǎn)

通常是FVⅢ的C2結(jié)構(gòu)域，干擾了磷脂和血管性血友病因子的結(jié)合位點(diǎn)。整個(gè)反應(yīng)呈現(xiàn)2型反應(yīng)動(dòng)力學(xué)特征，抑制物不可完全中和FVⅢ。在FVⅢ抑制物定量檢測過程中，隨著檢測管稀釋度的變化，1型抑制

物的剩余FVⅢ:C

結(jié)果與稀釋度呈現(xiàn)線性-對數(shù)關(guān)系，而2型抑制物的

剩余FVⅢ:C

結(jié)果與稀釋度無線性-對數(shù)關(guān)系，表現(xiàn)為多個(gè)稀釋度檢測

管的剩余FVⅢ:C

結(jié)果相近。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(二)1型抑制物與2型抑制物◆因此在檢測(疑似)AHA

患者的樣本或在發(fā)現(xiàn)上述現(xiàn)象時(shí)，應(yīng)制備

足夠多的檢測管進(jìn)行檢測，選擇其中剩余FVⅢ:C最接近50%的檢測

管的結(jié)果進(jìn)行最終的結(jié)果計(jì)算。◆

共識6在(疑似)AHA

患者的FVⅢ抑制物定量檢測或發(fā)現(xiàn)多個(gè)稀釋

度檢測管的剩余FVⅢ:C

結(jié)果相近時(shí)，應(yīng)制備足夠多的檢測管進(jìn)行檢測。推薦強(qiáng)度：強(qiáng)推薦，同意率：100.00%(16/16)六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(三)樣本保存◆

本共識中提到的樣本保存條件與時(shí)長是針對需同時(shí)檢測凝血因子活

性和凝血因子抑制物的樣本而言。根據(jù)國外文獻(xiàn)報(bào)道，僅需檢測凝

血因子抑制物時(shí)，可將樣本置于-70℃冰箱保存15年。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(四)

Bethesda法與Nijmegen法◆

相較于Bethesda法

，Nijmegen

法的改良主要是使用咪唑緩沖液調(diào)整

NPP的pH及使用乏FVⅢ血漿代替Bethesda法中的稀釋液。這些改良可

以減少37℃孵育時(shí)FVⅢ的非特異性降解，進(jìn)而提高FVⅢ抑制物定量檢

測的特異性(即降低了假陽性)。◆國外多篇文獻(xiàn)提出使用4%牛血清白蛋白溶液代替Nijmegen法中的乏FVⅢ血漿并已證明此方法的可行性。而國內(nèi)開展FVⅢ抑制物定量檢測的實(shí)驗(yàn)室多使用Bethesda

法，一般使用儀器配套的因子稀釋液代替咪唑緩沖液。結(jié)合多年臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，由此帶來的差異尚可接受，但仍建議各實(shí)驗(yàn)室在開展FVⅢ抑制物定量檢測前進(jìn)行相關(guān)的性能驗(yàn)證。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(五)滅活與否及滅活時(shí)長◆之前的多個(gè)國內(nèi)指南及專家共識均提出在未經(jīng)過足夠洗脫期(即48h)

或FVⅢ:C>5%時(shí)必須將樣本進(jìn)行滅活?？紤]到部分實(shí)驗(yàn)室無法獲取

患者是否經(jīng)過足夠洗脫期的信息或未同步檢測患者的FVⅢ:C,

同

時(shí)

為推動(dòng)FVⅢ抑制物定量檢測流程的標(biāo)準(zhǔn)化，本共識提出FVⅢ抑制物定

量檢測時(shí)所有樣本均需經(jīng)過滅活。國內(nèi)外有文獻(xiàn)建議滅活條件為58

℃孵育90min

或58℃孵育30min等。而Boylan

等提出58℃孵育30min可能導(dǎo)致IgG4降低，因此本共識結(jié)合國外相關(guān)文獻(xiàn)及臨床實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，

推薦滅活條件為56℃孵育30min。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(六)標(biāo)準(zhǔn)曲線制定◆

本共識中提出的FVⅢ抑制物定量檢測的標(biāo)準(zhǔn)曲線的制定旨在推動(dòng)FVⅢ

抑制物定量檢測流程的標(biāo)準(zhǔn)化?！?/p>

需要注意的是，若通過該方法進(jìn)行剩余FVIⅢ:C檢測，需間隔一定時(shí)

間進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)管的處理與檢測管的稀釋及處理。若同時(shí)處理，在使用

標(biāo)準(zhǔn)管進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)曲線制定時(shí)，檢測管中的FVⅢ與FVⅢ抑制物會繼續(xù)反

應(yīng)。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(六)標(biāo)準(zhǔn)曲線制定◆

盡管可以在制定標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)，將待檢的各稀釋度檢測管置于4℃冰箱，

以降低FVⅢ與FVⅢ抑制物繼續(xù)反應(yīng)的程度，但兩者間的反應(yīng)并不可被

完全終止。◆

就制定標(biāo)準(zhǔn)曲線的必要性，考慮到實(shí)驗(yàn)室條件限制，對于尚無能力

完成的實(shí)驗(yàn)室，可通過檢測標(biāo)準(zhǔn)管和檢測管的FVⅢ:C,

進(jìn)

一

步計(jì)算

剩余FVⅢ:C的方式來進(jìn)行FVⅢ抑制物定量檢測。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(

七

)狼瘡抗凝物質(zhì)或其他凝血因子抑制物的干擾或艾美賽珠單抗的使用◆當(dāng)樣本中存在狼瘡抗凝物質(zhì)或其他凝血因子抑制物時(shí)，其FVⅢ抑制物

定量檢測(一期凝固法)結(jié)果會存在假陽性的可能。在這些情況下，

可使用發(fā)色底物法替代一期凝固法進(jìn)行FVⅢ抑制物定量檢測。除此之

外，當(dāng)樣本中存在狼瘡抗凝物質(zhì)時(shí)，還可以考慮使用含高濃度磷脂

的APTT試劑的一期凝固法進(jìn)行FVⅢI抑制物定量檢測。六、FVⅢ抑制物定量檢測注意事項(xiàng)(

七

)狼瘡抗凝物質(zhì)或其他凝血因子抑制物的干擾或艾美賽珠單抗的使用◆

當(dāng)HA患者使用艾美賽珠單抗時(shí)，使用一期凝固法無法真實(shí)地評估患者體內(nèi)FVⅢ抑制物滴度，應(yīng)使用牛源性發(fā)色底物法替代一期凝固法進(jìn)

行FI抑制物定量檢測。◆共識