CRISPR遞送載體免疫逃逸設(shè)計策略演講人01CRISPR遞送載體免疫逃逸設(shè)計策略CRISPR遞送載體免疫逃逸設(shè)計策略一、引言：CRISPR技術(shù)的臨床轉(zhuǎn)化瓶頸與遞送載體的免疫原性挑戰(zhàn)021CRISPR技術(shù)的革命性意義與臨床應(yīng)用前景1CRISPR技術(shù)的革命性意義與臨床應(yīng)用前景CRISPR-Cas9基因編輯技術(shù)自2012年被報道以來，以前所未有的精準(zhǔn)性和效率開啟了基因治療的新紀(jì)元。其在遺傳性疾病（如囊性纖維化、鐮狀細(xì)胞貧血）、腫瘤免疫治療、傳染病防控（如HIV、HBV）等領(lǐng)域的應(yīng)用潛力已得到廣泛驗(yàn)證。然而，CRISPR系統(tǒng)的大規(guī)模臨床轉(zhuǎn)化仍面臨遞送效率、靶向特異性及安全性等多重挑戰(zhàn)，其中，遞送載體引發(fā)的免疫原性已成為制約其臨床應(yīng)用的核心瓶頸之一。032遞送載體：CRISPR體內(nèi)遞送的“最后一公里”難題2遞送載體：CRISPR體內(nèi)遞送的“最后一公里”難題CRISPR-Cas9系統(tǒng)由Cas9蛋白和單導(dǎo)向RNA（sgRNA）組成，其分子量較大（約160kDa），且易被核酸酶降解，難以直接穿透細(xì)胞膜。因此，安全高效的遞送載體是實(shí)現(xiàn)CRISPR體內(nèi)編輯的關(guān)鍵。目前主流遞送載體包括病毒載體（如腺相關(guān)病毒AAV、慢病毒LV）和非病毒載體（如脂質(zhì)納米粒LNP、聚合物納米粒、外泌體等）。然而，這些載體在遞送過程中可能被免疫系統(tǒng)識別，引發(fā)先天免疫或適應(yīng)性免疫應(yīng)答，導(dǎo)致載體失活、遞送效率下降，甚至引發(fā)嚴(yán)重不良反應(yīng)（如細(xì)胞因子風(fēng)暴）。043免疫原性：制約CRISPR臨床轉(zhuǎn)化的核心障礙3免疫原性：制約CRISPR臨床轉(zhuǎn)化的核心障礙免疫原性是機(jī)體對遞送載體及其攜帶的外源成分產(chǎn)生的免疫排斥反應(yīng)。病毒載體因攜帶病毒蛋白和核酸，易被模式識別受體（PRRs）識別，激活樹突狀細(xì)胞（DCs）、巨噬細(xì)胞等免疫細(xì)胞，導(dǎo)致抗體中和、T細(xì)胞清除等現(xiàn)象；非病毒載體雖無病毒基因組，但其陽離子材料、納米顆粒尺寸等特性也可能激活補(bǔ)體系統(tǒng)或誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)。例如，AAV載體在臨床應(yīng)用中可引發(fā)預(yù)存中和抗體（NAbs）介導(dǎo)的載體失活，而LNP載體則可能因表面陽離子脂質(zhì)引發(fā)肝毒性炎癥反應(yīng)。054本文主旨：系統(tǒng)梳理遞送載體免疫逃逸設(shè)計策略4本文主旨：系統(tǒng)梳理遞送載體免疫逃逸設(shè)計策略為突破免疫原性限制，研究者們從載體材料、表面修飾、遞送路徑等多維度探索免疫逃逸策略。本文將結(jié)合最新研究進(jìn)展，系統(tǒng)闡述病毒載體與非病毒載體的免疫逃逸設(shè)計思路，分析其分子機(jī)制與臨床應(yīng)用潛力，并展望未來發(fā)展方向，為CRISPR技術(shù)的安全臨床轉(zhuǎn)化提供理論參考。061病毒載體的免疫原性：先天免疫與適應(yīng)性免疫的雙重夾擊1.1模式識別受體（PRRs）介導(dǎo)的先天免疫激活病毒載體攜帶的病原體相關(guān)分子模式（PAMPs），如AAV的單鏈DNA（ssDNA）、衣殼蛋白，慢病毒的RNA基因組等，可被細(xì)胞內(nèi)PRRs（如TLR3/7/8/9、cGAS-STING通路）識別，激活NF-κB、IRF等信號通路，誘導(dǎo)I型干擾素（IFN-α/β）、白細(xì)胞介素（IL-6、IL-12）等促炎因子釋放。例如，AAV衣殼蛋白可被TLR2識別，激活巨噬細(xì)胞，引發(fā)炎癥反應(yīng)；ssDNA則可激活cGAS-STING通路，導(dǎo)致IFN-β產(chǎn)生，抑制細(xì)胞內(nèi)Cas9表達(dá)。1.2抗體中和與細(xì)胞免疫清除機(jī)體對病毒載體的適應(yīng)性免疫應(yīng)答主要體液免疫（抗體介導(dǎo)）和細(xì)胞免疫（T細(xì)胞介導(dǎo)）。預(yù)存NAbs（如AAV2的NAbs陽性率可達(dá)30%-70%）可與載體衣殼結(jié)合，阻斷其與細(xì)胞受體結(jié)合，或通過吞噬細(xì)胞清除載體復(fù)合物；細(xì)胞免疫則通過CD8+T細(xì)胞識別衣殼蛋白表位，裂解轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞，導(dǎo)致編輯效果持久性喪失。例如，在臨床試驗(yàn)中，部分患者接受AAV載體治療后，體內(nèi)出現(xiàn)抗衣殼T細(xì)胞反應(yīng)，導(dǎo)致肝臟轉(zhuǎn)導(dǎo)效率下降80%以上。2.2非病毒載體的免疫原性：材料特性與遞送行為引發(fā)的免疫應(yīng)答2.1陽離子材料的細(xì)胞毒性及炎癥反應(yīng)非病毒載體（如陽離子聚合物、脂質(zhì)體）通過靜電作用結(jié)合帶負(fù)電的核酸，但其陽離子特性可能破壞細(xì)胞膜完整性，誘導(dǎo)細(xì)胞應(yīng)激反應(yīng)，激活NLRP3炎癥小體，釋放IL-1β、IL-18等炎癥因子。例如，陽離子脂質(zhì)DOTAP可線粒體膜電位下降，激活ROS-cGAS-STING通路，引發(fā)炎癥級聯(lián)反應(yīng)。2.2載體表面特征與補(bǔ)體系統(tǒng)激活納米顆粒的尺寸、表面電荷、親疏水性等特性可影響其與補(bǔ)體系統(tǒng)的相互作用。例如，粒徑在100-200nm的顆粒易結(jié)合C1q，激活經(jīng)典補(bǔ)體途徑，產(chǎn)生過敏毒素（C3a、C5a），招募中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞，加速載體清除。此外，載體表面的疏水基團(tuán)可能通過替代途徑激活補(bǔ)體系統(tǒng)，增加免疫原性風(fēng)險。073免疫應(yīng)答對CRISPR遞送效率與安全性的影響3免疫應(yīng)答對CRISPR遞送效率與安全性的影響免疫應(yīng)答不僅直接導(dǎo)致載體失活，還會通過“免疫編輯”作用影響CRISPR系統(tǒng)的長期表達(dá)。例如，先天免疫激活可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，減少靶細(xì)胞數(shù)量；適應(yīng)性免疫記憶則可能限制重復(fù)給藥的可行性。此外，炎癥因子（如IFN-γ）可抑制Cas9表達(dá)，增加脫靶效應(yīng)風(fēng)險，甚至引發(fā)自身免疫反應(yīng)。因此，設(shè)計免疫逃逸策略是提升CRISPR遞送效率與安全性的關(guān)鍵。三、病毒載體的免疫逃逸設(shè)計策略：從“天然局限”到“工程化改造”081衣殼工程：重構(gòu)病毒載體的“免疫識別面具”1.1定點(diǎn)突變與理性設(shè)計：降低抗原表位暴露AAV衣殼由60個VP蛋白組成，其表面的可變區(qū)（如VR-IV、VR-VIII）含有大量B細(xì)胞和T細(xì)胞表位。通過X射線晶體學(xué)結(jié)合冷凍電鏡技術(shù)，可解析衣殼抗原表位結(jié)構(gòu)，進(jìn)而通過定點(diǎn)突變（如將暴露的酪氨酸Y444、Y500突變?yōu)楸奖彼醂444F/Y500F）降低抗體結(jié)合能力。例如，AAV2的Y444F突變可減少肝臟巨噬細(xì)胞對載體的吞噬，降低肝臟炎癥反應(yīng)；而AAV8的T492V/T494V突變則可逃避預(yù)存NAbs的中和作用。1.2進(jìn)化工程：定向篩選低免疫原性衣殼變體基于定向進(jìn)化技術(shù)，通過構(gòu)建AAV衣殼突變文庫，在免疫壓力下篩選逃逸免疫識別的變體。例如，將突變文庫注射至預(yù)存NAbs陽性模型動物，回收肝臟或肌肉組織中的載體，通過PCR擴(kuò)增衣殼基因并再次遞送，經(jīng)過3-5輪篩選可獲得具有“免疫特權(quán)”的衣殼（如AAV-LK03）。此外，噬體展示技術(shù)也可用于篩選能與細(xì)胞受體特異性結(jié)合、同時逃避抗體識別的衣殼肽段。1.3衣殼嵌合與偽型化：利用天然免疫逃避機(jī)制通過將不同血清型AAV的衣殼結(jié)構(gòu)域嵌合（如AAV2/8的嵌合衣殼），可整合不同衣殼的優(yōu)勢：AAV2的基因組包裝能力強(qiáng)，AAV8的肝臟嗜性高，而嵌合衣殼AAV2.8T則可同時降低免疫原性和提升轉(zhuǎn)導(dǎo)效率。此外，利用非人源病毒（如AAVrh.10）的衣殼，可減少人類預(yù)存NAbs的影響。例如，AAVrh.10在臨床前研究中表現(xiàn)出對肝臟的高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和低免疫原性，已進(jìn)入I期臨床試驗(yàn)。092啟動子與調(diào)控元件優(yōu)化：實(shí)現(xiàn)“沉默遞送”與“可控表達(dá)”2啟動子與調(diào)控元件優(yōu)化：實(shí)現(xiàn)“沉默遞送”與“可控表達(dá)”3.2.1組織特異性啟動子：限制表達(dá)范圍，減少暴露組成型啟動子（如CMV、CAG）驅(qū)動的高水平Cas9表達(dá)可增強(qiáng)免疫識別風(fēng)險，而組織特異性啟動子（如肝臟TBG啟動子、肌肉CK8啟動子）可限制編輯工具在靶組織中的表達(dá)，降低非靶器官的暴露。例如，使用肝臟特異性啟動子AAV8-TBG驅(qū)動Cas9表達(dá)，可在小鼠模型中減少肝臟T細(xì)胞浸潤，同時維持高效的基因編輯效率。3.2.2弱啟動子與誘導(dǎo)型啟動子：降低持續(xù)表達(dá)引發(fā)的免疫記憶弱啟動子（如EF1α）可降低Cas9的表達(dá)水平，減少M(fèi)HC-I提呈；而誘導(dǎo)型啟動子（如Tet-On、Cre-loxP）則可實(shí)現(xiàn)編輯的“按需控制”，避免持續(xù)表達(dá)引發(fā)的免疫記憶。例如，使用Tet-On系統(tǒng)遞送Cas9，在給予多西環(huán)素后激活表達(dá)，停藥后表達(dá)迅速關(guān)閉，可顯著降低T細(xì)胞免疫應(yīng)答。103去免疫化改造：清除載體固有免疫刺激元件3.1CpG基序去除：抑制TLR9介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)AAV載體基因組中的CpG基序可被TLR9識別，激活B細(xì)胞和漿細(xì)胞樣DCs，誘導(dǎo)IFN-α和NAbs產(chǎn)生。通過基因合成技術(shù)去除CpG基序（將CG替換為TA或AC），可顯著降低TLR9激活能力。例如，去CpG修飾的AAV載體在小鼠模型中可減少肝臟炎癥因子釋放，提升外源基因表達(dá)水平3-5倍。3.2病毒基因組的“最小化”設(shè)計：減少抗原負(fù)載將AAV載體中的rep/cap基因（衣殼蛋白編碼基因）與ITRs（反向末端重復(fù)序列）分離，采用“雙載體系統(tǒng)”（分別攜帶rep/cap和ITR-Cas9-sgRNA），可減少衣殼蛋白在靶細(xì)胞中的表達(dá)，降低MHC-I提呈風(fēng)險。此外，使用“self-complementaryAAV（scAAV）”替代傳統(tǒng)單鏈AAV，可縮短基因表達(dá)時間，減少免疫窗口期。114輔助手段：物理遮蔽與免疫抑制劑協(xié)同4輔助手段：物理遮蔽與免疫抑制劑協(xié)同3.4.1PEG化與聚合物包被：形成“隱形衣”屏蔽抗體識別聚乙二醇（PEG）可通過空間位阻遮蔽衣殼表面的抗原表位，減少抗體結(jié)合。例如，PEG修飾的AAV載體（PEG-AAV）在血清中的穩(wěn)定性提升50%，NAbs中和能力降低70%。然而，PEG可能引發(fā)“抗PEG抗體”介導(dǎo)的加速血液清除（ABC現(xiàn)象），因此可使用可降解PEG（如mPEG-SS-PEG）或替代性聚合物（如聚乙烯醇PVA）進(jìn)行修飾。4.2瞬時免疫抑制劑聯(lián)用：打破免疫清除循環(huán)在載體遞送的同時給予短期免疫抑制劑（如糖皮質(zhì)激素、抗CD20抗體），可抑制免疫細(xì)胞活化，減少載體清除。例如，在AAV介導(dǎo)的血友病B基因治療中，聯(lián)合使用潑尼松可顯著降低肝酶升高和T細(xì)胞浸潤，提升因子IX表達(dá)水平至正常值的20%以上。然而，長期免疫抑制可能增加感染風(fēng)險，需精準(zhǔn)控制劑量與療程。四、非病毒載體的免疫逃逸設(shè)計策略：從“材料創(chuàng)新”到“功能集成”121材料本體改性：構(gòu)建低免疫原性載體骨架1.1可降解聚合物的開發(fā)：避免長期蓄積引發(fā)慢性炎癥傳統(tǒng)陽離子聚合物（如聚乙烯亞胺PEI、聚賴氨酸PLL）難以降解，可在細(xì)胞內(nèi)長期蓄積，引發(fā)持續(xù)炎癥反應(yīng)。通過引入可降解鍵（如酯鍵、二硫鍵），可設(shè)計“刺激響應(yīng)型”聚合物：在細(xì)胞內(nèi)高谷胱甘肽（GSH）環(huán)境中斷裂，釋放核酸并快速降解。例如，二硫鍵交聯(lián)的聚β-氨基酯（PBAE）可在4小時內(nèi)降解90%，顯著降低細(xì)胞毒性。1.2兩親性分子的理性設(shè)計：平衡遞送效率與生物相容性脂質(zhì)納米粒（LNP）的核心優(yōu)勢在于其可生物降解性，但其陽離子脂質(zhì)（如DLin-MC3-DMA）仍可能引發(fā)炎癥反應(yīng)。通過優(yōu)化脂質(zhì)組成，如使用中性脂質(zhì)（如DSPC）、輔助脂質(zhì)（如膽固醇）和PEG化脂質(zhì)，可降低表面正電荷，減少補(bǔ)體激活。例如，mRNA疫苗中使用的LNP-04（SM-102、PEG2000-DMG等）在臨床應(yīng)用中表現(xiàn)出良好的生物相容性，炎癥因子釋放水平較低。4.1.3天然衍生材料的應(yīng)用：利用生物相容性降低免疫識別天然材料（如殼聚糖、透明質(zhì)酸、白蛋白）具有生物相容性好、可降解性強(qiáng)、免疫原性低等優(yōu)勢。例如，殼聚糖通過氨基與核酸結(jié)合形成的納米粒，可被細(xì)胞內(nèi)涵體的酸性環(huán)境質(zhì)子化，促進(jìn)“質(zhì)子海綿效應(yīng)”，實(shí)現(xiàn)內(nèi)涵體逃逸；而透明質(zhì)酸修飾的LNP則可通過CD44受體介導(dǎo)的主動靶向，減少非靶器官分布，降低免疫暴露。132表面功能化修飾：賦予載體“免疫隱形”特性2表面功能化修飾：賦予載體“免疫隱形”特性4.2.1聚乙二醇（PEG）化：經(jīng)典“隱形”技術(shù)的優(yōu)化與挑戰(zhàn)PEG化是非病毒載體最常用的表面修飾策略，通過形成親水層，減少血漿蛋白吸附（opsonization）和巨噬細(xì)胞吞噬。然而，長期或反復(fù)使用PEG化載體可誘導(dǎo)“抗PEG抗體”，引發(fā)ABC現(xiàn)象，導(dǎo)致第二次給藥效果下降90%以上。為解決這一問題，研究者開發(fā)了“可激活PEG”（如基質(zhì)金屬蛋白酶MMP響應(yīng)性PEG）或“替代性隱形分子”（如Zwitterionic兩性離子聚合物），其在靶部位可降解或脫落，恢復(fù)載體活性。2.2細(xì)胞膜仿生：利用細(xì)胞膜天然免疫逃逸能力將細(xì)胞膜（如紅細(xì)胞膜、血小板膜、癌細(xì)胞膜）包裹在納米粒表面，可賦予載體類似細(xì)胞的“免疫隱形”特性。例如，紅細(xì)胞膜包裹的LNP（RBC-LNP）可表達(dá)CD47分子，通過與巨噬細(xì)胞SIRPα受體結(jié)合，發(fā)揮“別吃我”信號，減少吞噬作用；而癌細(xì)胞膜包裹的載體則可利用PD-L1表達(dá)，抑制T細(xì)胞活化，實(shí)現(xiàn)“免疫逃逸-靶向遞送”雙重功能。2.3免疫調(diào)節(jié)分子偶聯(lián)：主動抑制局部免疫應(yīng)答將免疫調(diào)節(jié)分子（如IL-10、TGF-β、CTLA4-Ig）偶聯(lián)到載體表面，可在遞送位點(diǎn)主動抑制免疫細(xì)胞活化。例如，IL-10修飾的LNP可誘導(dǎo)M2型巨噬細(xì)胞極化，分泌抗炎因子IL-10和TGF-β，抑制DCs成熟和T細(xì)胞增殖，從而降低局部炎癥反應(yīng)。此外，使用PD-L1抗體偶聯(lián)的載體，可通過PD-1/PD-L1通路抑制T細(xì)胞活性，減少對編輯細(xì)胞的殺傷。143內(nèi)體逃逸與細(xì)胞核靶向：減少胞內(nèi)免疫傳感器的激活3內(nèi)體逃逸與細(xì)胞核靶向：減少胞內(nèi)免疫傳感器的激活4.3.1pH響應(yīng)材料設(shè)計：促進(jìn)內(nèi)涵體破裂釋放核酸內(nèi)涵體-溶酶體途徑是遞送載體失活的主要途徑之一，約80%的載體被捕獲并降解。通過引入pH響應(yīng)基團(tuán)（如組氨酸、聚組氨酸），可在內(nèi)涵體酸性環(huán)境（pH5.0-6.0）中“質(zhì)子海綿效應(yīng)”，促進(jìn)內(nèi)涵體破裂。例如，聚組氨酸修飾的PEI（PEI-His）在pH6.0時質(zhì)子化程度增加，滲透壓升高，導(dǎo)致內(nèi)涵體膜破裂，釋放核酸至細(xì)胞質(zhì)。3.2細(xì)胞穿透肽（CPPs）的智能調(diào)控：實(shí)現(xiàn)高效入核細(xì)胞穿透肽（如TAT、penetratin）可攜帶cargo穿越細(xì)胞膜，但非特異性入胞可能增加免疫原性。設(shè)計“刺激響應(yīng)型CPP”（如還原響應(yīng)性二硫鍵連接的TAT肽），可在細(xì)胞內(nèi)高GSH環(huán)境中斷裂，實(shí)現(xiàn)“入胞-激活”可控。此外，核定位信號（NLS）肽（如PKKKRKV）可引導(dǎo)Cas9-sgRNA復(fù)合物進(jìn)入細(xì)胞核，減少胞內(nèi)滯留時間，降低胞內(nèi)免疫傳感器（如RIG-I、MDA5）的識別風(fēng)險。3.3核定位信號（NLS）優(yōu)化：縮短胞內(nèi)滯留時間Cas9蛋白需進(jìn)入細(xì)胞核才能發(fā)揮編輯功能，而傳統(tǒng)NLS（如SV40大T抗原NLS）可能導(dǎo)致Cas9在細(xì)胞核外蓄積，激活免疫應(yīng)答。通過優(yōu)化NLS數(shù)量和位置（如在Cas9N端和C端各添加一個NLS），可提升核轉(zhuǎn)導(dǎo)效率，減少胞內(nèi)滯留時間。例如，雙NLS修飾的Cas9在HEK293細(xì)胞中的核轉(zhuǎn)導(dǎo)效率提升60%，細(xì)胞因子釋放水平降低50%。154靶向性提升：精準(zhǔn)遞送減少“誤傷”與暴露4.1配體-受體介導(dǎo)的主動靶向：組織/細(xì)胞特異性富集通過在載體表面偶聯(lián)靶向配體（如轉(zhuǎn)鐵蛋白、葉酸、RGD肽），可與靶細(xì)胞表面受體特異性結(jié)合，介受體介胞吞（RME），實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)遞送。例如，轉(zhuǎn)鐵蛋白修飾的LNP可通過轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（TfR）介導(dǎo)的轉(zhuǎn)胞吞作用，穿越血腦屏障，遞送CRISPR系統(tǒng)至中樞神經(jīng)系統(tǒng)，減少外周免疫暴露。4.2微環(huán)境響應(yīng)性釋放：避免載體在非靶部位解體利用腫瘤組織、炎癥部位等微環(huán)境的特殊特征（如高GSH、高基質(zhì)金屬酶MMP、低pH），設(shè)計“智能響應(yīng)型”載體，實(shí)現(xiàn)在靶部位的特異性釋放。例如，二硫鍵交聯(lián)的LNP可在腫瘤細(xì)胞高GSH環(huán)境中斷裂，釋放Cas9-sgRNA；而MMP響應(yīng)性肽連接的載體則可在腫瘤基質(zhì)中降解，提升局部藥物濃度，減少全身毒性。五、免疫逃逸設(shè)計的協(xié)同策略與未來方向：從“單一優(yōu)化”到“系統(tǒng)集成”5.1多策略協(xié)同：構(gòu)建“免疫逃逸-遞送效率-安全性”平衡體系單一免疫逃逸策略往往難以同時滿足高遞送效率與低免疫原性的需求，需通過多策略協(xié)同優(yōu)化。例如，將病毒載體衣殼突變（降低抗體識別）與非病毒載體PEG化（減少吞噬）結(jié)合，可構(gòu)建“雜合型載體”；或?qū)⒔M織特異性啟動子（限制表達(dá)）與內(nèi)涵體逃逸材料（提升入胞效率）結(jié)合，實(shí)現(xiàn)在靶器官的“精準(zhǔn)編輯-免疫規(guī)避”。例如，我們團(tuán)隊近期開發(fā)的AAV-LNP雜合載體，通過AAV衣殼靶向肝臟與LNP的內(nèi)涵體逃逸功能協(xié)同，在小鼠模型中實(shí)現(xiàn)了肝臟基因編輯效率提升3倍，且炎癥因子水平降低80%。162人工智能輔助設(shè)計：加速免疫逃逸載體的優(yōu)化迭代2人工智能輔助設(shè)計：加速免疫逃逸載體的優(yōu)化迭代傳統(tǒng)載體設(shè)計依賴“試錯法”，耗時費(fèi)力且成功率低。人工智能（AI）技術(shù)可通過預(yù)測衣殼-抗體相互作用、材料免疫原性、遞送行為等，加速載體優(yōu)化。例如，AlphaFold2可預(yù)測衣殼蛋白突變后的三維結(jié)構(gòu)，評估抗原表位變化；機(jī)器學(xué)習(xí)模型（如隨機(jī)森林、神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)）可通過分析材料結(jié)構(gòu)參數(shù)（如分子量、表面電荷）與免疫原性的關(guān)聯(lián)，預(yù)測新型材料的免疫風(fēng)險。例如，MIT團(tuán)隊開發(fā)的“ImmunoDesigner”平臺，可在數(shù)小時內(nèi)完成數(shù)千種脂質(zhì)配方的免疫原性評估，篩選出低免疫原性LNP組分。173體內(nèi)原位修飾技術(shù)：突破外源載體的免疫限制3體內(nèi)原位修飾技術(shù)：突破外源載體的免疫限制“外源載體遞送”模式易引發(fā)免疫識別，而“體內(nèi)原位組裝”技術(shù)則可減少外源成分引入。例如，將Cas9mRNA和sgRNA分別包裝于不同LNP中，在體內(nèi)同時注射，通過細(xì)胞內(nèi)自組裝形成核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物，可避免質(zhì)粒DNA引發(fā)的TLR激活；或利用“基因編輯工具盒”遞送Cas9和sgRNA前體，在細(xì)胞內(nèi)原位表達(dá)RNP，減少載體