ICS07.080

CCSC01

團體標準

T/XXXXXXX—XXXX

干細胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范

Technicalspecificationsfordrugdeliveryofstemcellexosomes

XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施

中國商業(yè)經(jīng)濟學(xué)會發(fā)布

T/XXXXXXX—XXXX

干細胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范

1范圍

本文件規(guī)定了干細胞外泌體及載藥技術(shù)的術(shù)語和定義、制備工藝流程、技術(shù)要求、檢測方法、質(zhì)量

控制、安全與環(huán)保要求。

本文件適用于干細胞外泌體載藥技術(shù)的研發(fā)及檢測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB19489實驗室生物安全通用要求

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

干細胞外泌體stemcellexosomes

由干細胞分泌的小囊泡，直徑通常在30～150納米之間，攜帶多種生物活性分子，包括蛋白質(zhì)、核

酸和脂質(zhì)等，可在細胞間傳遞信息和影響靶細胞的功能。

載藥技術(shù)drugloadingtechnology

一種將藥物分子裝載到干細胞外泌體中的技術(shù)，目的是利用干細胞外泌體的天然傳遞機制，將藥物

有效、安全地輸送到靶組織或細胞，以實現(xiàn)治療或預(yù)防疾病的效果。

藥物釋放drugrelease

在達到靶組織或細胞后，干細胞外泌體中的藥物分子從載體中釋放出來，發(fā)揮其治療作用的過程。

4制備工藝流程

干細胞培養(yǎng)與擴增

選取適合的干細胞來源，如胚胎干細胞或誘導(dǎo)多能干細胞，進行體外培養(yǎng)。利用適當?shù)呐囵B(yǎng)基和培

養(yǎng)條件，如控制溫度、濕度、氣體組成等，使干細胞增殖擴增。

干細胞分化與外泌體收集

通過添加特定的生長因子或培養(yǎng)條件，促使干細胞向特定細胞類型分化。在分化過程中，干細胞會

釋放出外泌體，通過離心、超濾或其他分離技術(shù)收集這些外泌體。

外泌體純化與鑒定

通過進一步離心、過濾或色譜等方法純化收集到的外泌體，去除雜質(zhì)和細胞碎片，隨后對外泌體進

行鑒定，包括形態(tài)觀察、粒徑分析、蛋白質(zhì)標志物檢測等，確保其符合外泌體的特征。

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藥物裝載

將所需藥物與外泌體混合，在一定的條件下進行孵育，使藥物被外泌體有效裝載。裝載過程中需控

制藥物的濃度、孵育時間和溫度等參數(shù)。

裝載后處理與儲存

藥物裝載完成后，對外泌體進行必要的后處理，如清洗、離心等，以去除未裝載的藥物和雜質(zhì)，隨

后將裝載藥物的外泌體儲存于適當?shù)臈l件下，確保其穩(wěn)定性和生物活性。

5技術(shù)要求

干細胞外泌體的質(zhì)量要求

5.1.1來源與鑒定

干細胞外泌體應(yīng)來源于經(jīng)過認證的、健康的、無疾病的干細胞培養(yǎng)物。外泌體的來源應(yīng)進行嚴格的

篩選和鑒定，確保其安全性和有效性。

5.1.2形態(tài)與大小

干細胞外泌體應(yīng)呈現(xiàn)典型的囊泡結(jié)構(gòu)，直徑應(yīng)在一定的范圍內(nèi)（如30～150納米），且分布均勻，

無明顯的形態(tài)異常。

5.1.3純度

干細胞外泌體應(yīng)具有較高的純度，不應(yīng)含有明顯的細胞碎片、雜質(zhì)或其他污染物。外泌體的純度應(yīng)

通過適當?shù)姆椒ㄟM行驗證，如密度梯度離心、超濾等。

5.1.4生物活性

干細胞外泌體應(yīng)具有一定的生物活性，能夠傳遞生物信息并影響靶細胞的功能，其生物活性應(yīng)通過

體外或體內(nèi)實驗進行驗證，如細胞增殖實驗、遷移實驗等。

5.1.5穩(wěn)定性

干細胞外泌體應(yīng)具有良好的穩(wěn)定性，在儲存和運輸過程中應(yīng)保持其形態(tài)、大小和生物活性的穩(wěn)定。

穩(wěn)定性的評估應(yīng)包括在不同條件下的儲存實驗和加速穩(wěn)定性實驗。

5.1.6安全性

干細胞外泌體應(yīng)無毒性、無感染性，應(yīng)符合GB19489及其他國家相關(guān)生物安全標準的要求。外泌體

的安全性應(yīng)通過無菌性檢查、內(nèi)毒素檢測、過敏性試驗等方法進行驗證。

載藥過程的技術(shù)要求

5.2.1藥物選擇與適配性

所選藥物應(yīng)與干細胞外泌體具有良好的相容性，不影響外泌體的穩(wěn)定性和生物活性。同時，藥物應(yīng)

能夠有效載入外泌體中，且在載入過程中不發(fā)生化學(xué)變化。

5.2.2載藥方法與效率

應(yīng)明確描述載藥的具體方法，包括藥物的溶解、與外泌體的混合方式、孵育時間和溫度等條件。載

藥效率應(yīng)達到預(yù)定標準，確保足夠量的藥物被成功載入外泌體中。

5.2.3藥物釋放性能

載有藥物的外泌體應(yīng)具有良好的藥物釋放性能，能夠在預(yù)定的時間內(nèi)釋放藥物，且釋放速率應(yīng)符合

治療要求。

5.2.4載藥過程的可重復(fù)性

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載藥過程應(yīng)具有良好的可重復(fù)性，確保不同批次間藥物載入量和釋放性能的穩(wěn)定性，應(yīng)建立標準化

的操作流程，并對關(guān)鍵參數(shù)進行嚴格監(jiān)控。

5.2.5無菌操作與安全性

載藥過程應(yīng)在無菌條件下進行，以避免微生物污染。操作完成后，應(yīng)對載有藥物的外泌體進行安全

性評估，包括但不限于無菌性檢查、內(nèi)毒素檢測和生物相容性測試。

藥物釋放的控制要求

5.3.1釋放速率

應(yīng)明確干細胞外泌體載藥在體外和/或體內(nèi)的藥物釋放速率，釋放速率應(yīng)根據(jù)治療需求和藥物性質(zhì)

進行精確控制，確保藥物在預(yù)期的時間內(nèi)以適當?shù)乃俣柔尫拧?/p>

5.3.2釋放穩(wěn)定性

藥物從干細胞外泌體中釋放的過程應(yīng)具有穩(wěn)定性，即在相同的條件下，不同批次的外泌體載藥應(yīng)表

現(xiàn)出相似的釋放行為。對藥物與外泌體的結(jié)合方式、外泌體的儲存條件以及釋放介質(zhì)等進行嚴格控制。

5.3.3靶向釋放

如預(yù)期藥物需要在特定組織或細胞中釋放，應(yīng)提供證據(jù)表明干細胞外泌體載藥能夠?qū)崿F(xiàn)靶向釋放。

5.3.4觸發(fā)釋放機制

如藥物釋放是通過特定刺激（如pH變化、溫度變化或酶解等）來觸發(fā)的，應(yīng)明確觸發(fā)條件，并提供

實驗數(shù)據(jù)支持觸發(fā)機制的有效性和可靠性。

5.3.5藥物殘留檢測

在藥物釋放后，應(yīng)對殘留的藥物進行檢測，以確保藥物已經(jīng)完全釋放或殘留量在可接受的范圍內(nèi)。

6檢驗方法

干細胞外泌體的鑒定方法

6.1.1形態(tài)學(xué)鑒定

利用透射電子顯微鏡（TEM）觀察干細胞外泌體的形態(tài)。樣品經(jīng)過適當?shù)墓潭ê腿旧螅陔娮语@

微鏡下應(yīng)能觀察到典型的茶托型或一側(cè)凹陷的半球形雙層囊膜結(jié)構(gòu)，且直徑在30～150nm之間。

6.1.2粒徑分布分析

采用納米顆粒跟蹤分析（NanoparticleTrackingAnalysis,NTA）技術(shù)測定干細胞外泌體的粒徑

分布，該方法可追蹤納米顆粒的布朗運動軌跡，從而得到顆粒的粒徑大小和濃度信息。外泌體的粒徑主

峰應(yīng)在30～150nm范圍內(nèi)。

6.1.3蛋白質(zhì)標志物檢測

通過蛋白質(zhì)印跡法（WesternBlot,WB）檢測干細胞外泌體的特征性蛋白質(zhì)標志物，如CD9、CD63、

CD81等。這些蛋白質(zhì)是外泌體膜上的常見成分，可作為外泌體存在的依據(jù)。

6.1.4綜合鑒定

為確保鑒定的準確性，宜綜合采用形態(tài)學(xué)鑒定、粒徑分布分析、蛋白質(zhì)標志物檢測等方法進行干細

胞外泌體的鑒定。

載藥量的測定方法

6.2.1直接測定法

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如藥物本身具有特定的光譜吸收、熒光發(fā)射或其他可直接檢測的物理化學(xué)性質(zhì)，可直接利用這些性

質(zhì)對載入外泌體的藥物進行定量測定，如使用紫外-可見分光光度法、熒光光譜法等來測定載藥量。

6.2.2間接測定法

對于無法直接測定的藥物，可以采用間接方法來推算載藥量，常用的方法是利用放射性同位素或熒

光標記的藥物作為示蹤劑，通過測定標記物的量來推算出載藥量。

6.2.3色譜分析法

利用高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）等色譜分析技術(shù)，可分離并定量測定載入外泌體

中的藥物成分。

6.2.4質(zhì)譜分析法

如液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）或氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS），可提供更高的靈敏度和選擇性，用于精確測定載入外

泌體中的藥物量。

6.2.5標準曲線法

通過建立藥物濃度與檢測信號之間的標準曲線，可根據(jù)檢測信號推算出載入外泌體中的藥物量，需

要事先制備一系列已知濃度的藥物標準溶液，并建立相應(yīng)的檢測信號與濃度的關(guān)系曲線。

藥物釋放速率的測定方法

6.3.1體外釋放實驗

體外釋放實驗可以用來模擬藥物從干細胞外泌體中釋放的過程。實驗方法通常包括將載有藥物的

外泌體置于模擬生理條件的釋放介質(zhì)中，在一定的時間點取樣并測定釋放出的藥物量，通過繪制藥物釋

放曲線，可以計算藥物的釋放速率。

a)釋放介質(zhì)的準備

應(yīng)選擇與體內(nèi)環(huán)境相近的釋放介質(zhì)，如磷酸鹽緩沖液（PBS）或模擬體液等，以模擬藥物在體

內(nèi)的釋放環(huán)境；

b)取樣和時間點

在預(yù)定的時間點（如每隔一段時間）取樣，測定釋放介質(zhì)中的藥物濃度，時間點應(yīng)足夠密集，

以便準確描述藥物釋放曲線；

c)藥物濃度的測定

可以使用適當?shù)姆椒ǎㄈ绶止夤舛确ā⑸V法等）測定釋放介質(zhì)中的藥物濃度。

6.3.2藥物釋放曲線的繪制與分析

根據(jù)測定的藥物濃度數(shù)據(jù)，繪制藥物釋放曲線，通過分析曲線的形狀和斜率，可以計算藥物的釋放

速率，并評估藥物的控釋性能。

6.3.3體內(nèi)釋放實驗（可選）

對于需要更準確模擬體內(nèi)釋放情況，可以采用動物模型進行體內(nèi)釋放實驗，能夠更真實地反映藥物

在體內(nèi)的釋放過程和藥效。

6.3.4注意事項

在進行藥物釋放速率測定時，應(yīng)確保實驗條件的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。同時，應(yīng)詳細記錄實驗過程中

的所有條件和操作步驟，以便后續(xù)的數(shù)據(jù)分析和比對。

7質(zhì)量控制

原材料質(zhì)量控制

應(yīng)確保所使用的干細胞來源清晰、無污染，并經(jīng)過適當?shù)暮Y選和鑒定。對培養(yǎng)基、生長因子和其他

輔助材料進行嚴格的質(zhì)量控制，確保其符合相關(guān)標準和規(guī)定。

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過程控制

在制備工藝流程的各個環(huán)節(jié)中，應(yīng)嚴格控制溫度、濕度、氣體組成等關(guān)鍵參數(shù)，確保干細胞的正常

擴增、分化和外泌體的產(chǎn)生，同時，對藥物裝載過程進行嚴密監(jiān)控，確保藥物的有效裝載和穩(wěn)定性。

成品質(zhì)量控制

對制備好的干細胞外泌體載藥產(chǎn)品進行全面的質(zhì)量檢測，包括但不限于形態(tài)觀察、粒徑分析、蛋白

質(zhì)標志物檢測、藥物裝載量測定、藥物釋放速率測定等，確保產(chǎn)品符合相關(guān)質(zhì)量標準和規(guī)定。

儲存與運輸控制

制定適當?shù)膬Υ婧瓦\輸條件，如溫度、濕度等，以確保干細胞外泌體載藥產(chǎn)品在儲存和運輸過程中

的穩(wěn)定性和生物活性，同時，對產(chǎn)品進行定期的質(zhì)量檢測和評估，確保其在使用過程中始終保持優(yōu)良的

性能。

8安全與環(huán)保要求

安全要求

8.1.1生物安全性

應(yīng)確保干細胞外泌體的來源安全、無污染，并經(jīng)過嚴格篩選和檢測，以防止病原體、毒素或其他有

害物質(zhì)的污染。在制備、儲存和運輸過程中，應(yīng)采取必要的生物安全防護措施，避免交叉污染。

8.1.2產(chǎn)品質(zhì)量與安全

干細胞外泌體載藥產(chǎn)品應(yīng)符合國家相關(guān)藥品質(zhì)量標準和安全要求。在產(chǎn)品的制備、檢驗、儲存和運

輸過程中，應(yīng)嚴格遵守《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（GMP）和其他相關(guān)法律法規(guī)，確保產(chǎn)品的質(zhì)量和安

全性。

8.1.3操作人員安全

操作人員應(yīng)接受專業(yè)培訓(xùn)，熟悉干細胞外泌體載藥技術(shù)的操作流程和安全規(guī)范。在實驗過程中，應(yīng)

穿戴適當?shù)姆雷o裝備，如實驗服、手套、護目鏡等，以確保個人安全。

環(huán)保要求

8.2.1廢棄物處理

在干細胞外泌體載藥技術(shù)的制備、檢驗和使用過程中產(chǎn)生的廢棄物，應(yīng)按照相關(guān)環(huán)保法規(guī)進行妥善

處理。廢棄物應(yīng)分類收集、存放，并定期交由專業(yè)機構(gòu)進行無害化處理。

8.2.2環(huán)境監(jiān)測與評估

應(yīng)定期對制備環(huán)境進行監(jiān)測和評估，確保環(huán)境質(zhì)量符合相關(guān)標準和要求。如發(fā)現(xiàn)環(huán)境問題，應(yīng)及時

采取措施進行整改。

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參考文獻

[1]干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導(dǎo)原則（試行）（國衛(wèi)辦科教發(fā)〔2015〕46號）

[2]人源干細胞產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則（試行）(國家藥監(jiān)局藥審中心〔2023〕33號)

[3]WHO實驗室生物安全手冊(第三版)

[4]細胞治療產(chǎn)品生產(chǎn)質(zhì)量管理指南（試行）（國家藥監(jiān)局核查中心〔2022〕4號）

[5]藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范（衛(wèi)生部令第79號）

[6]中華人民共和國藥典（2020年版）

6

團體標準

《干細胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范》

（征求意見稿）

編制說明

標準起草工作組

2024年5月

一、工作簡況

（一）任務(wù)來源

根據(jù)2024年全國標準化工作要點，加強質(zhì)量支撐和標準引領(lǐng)，深入推進國

家標準化發(fā)展綱要各項重點任務(wù)實施，以標準有力引領(lǐng)現(xiàn)代化產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)，

推動標準化更好服務(wù)經(jīng)濟社會高質(zhì)量發(fā)展。依據(jù)《中華人民共和國標準化法》

和《團體標準管理規(guī)定》（國標委聯(lián)[2019]1號）的相關(guān)要求，中國商業(yè)經(jīng)濟學(xué)

會批準立項并聯(lián)合相關(guān)單位共同制定《干細胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范》團體標

準。

（二）制定背景

干細胞外泌體技術(shù)是一種新興的生物技術(shù)，利用干細胞外泌體（一種由干

細胞釋放的微小囊泡）作為藥物遞送載體，具有獨特的優(yōu)勢，如更強的增殖能

力、極低的免疫原性和來源方便等。該技術(shù)已在免疫調(diào)節(jié)、組織修復(fù)、促進造

血、再生醫(yī)學(xué)等多個領(lǐng)域展現(xiàn)出潛在的治療作用。隨著干細胞外泌體技術(shù)的不

斷發(fā)展，其在醫(yī)藥領(lǐng)域的應(yīng)用前景日益廣闊。據(jù)統(tǒng)計，全球已開展數(shù)百項與干

細胞外泌體相關(guān)的臨床試驗，涉及骨關(guān)節(jié)炎、肺損傷、糖尿病等多種疾病的治

療。同時，干細胞外泌體在美容抗衰領(lǐng)域也顯示出巨大的應(yīng)用潛力。

制定標準《干細胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范》的目的和意義主要體現(xiàn)在以下幾

個方面：

一、規(guī)范行業(yè)操作：通過制定具體的操作流程、質(zhì)量控制和檢驗方法，為

干細胞外泌體載藥技術(shù)的研發(fā)和應(yīng)用提供標準化的指導(dǎo)，確保行業(yè)內(nèi)的操作符

合統(tǒng)一規(guī)范。

二、提升產(chǎn)品質(zhì)量：通過規(guī)定外泌體的制備、純化、載藥以及質(zhì)量控制等

關(guān)鍵環(huán)節(jié)的技術(shù)要求，確保干細胞外泌體載藥產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性，降低不良

事件的發(fā)生率。

三、保障患者權(quán)益：規(guī)范化的干細胞外泌體載藥技術(shù)可以確?；颊呤褂玫?/p>

產(chǎn)品安全有效，保障患者的權(quán)益和利益。

四、促進技術(shù)創(chuàng)新：鼓勵企業(yè)按照規(guī)范進行技術(shù)創(chuàng)新和研發(fā)，推動干細胞

外泌體載藥技術(shù)的不斷進步，以滿足日益增長的臨床需求。

五、加強行業(yè)合作與交流：通過制定標準，加強行業(yè)內(nèi)部的合作與交流，

共同推動干細胞外泌體載藥技術(shù)的健康發(fā)展。

（三）起草過程

3.1標準研制階段

2023年12～2024年3月，起草組通過企業(yè)調(diào)研，了解企業(yè)實際生產(chǎn)情況，并

組織收集、整理相關(guān)標準化資料、專業(yè)文獻等，經(jīng)成分分析、研討、論證后編

寫完成《干細胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)范》立項申請書及標準框架相關(guān)內(nèi)容，并向

中國商業(yè)經(jīng)濟學(xué)會提出標準立項申請。

3.2標準立項階段

2024年3月18日，中國商業(yè)經(jīng)濟學(xué)會正式發(fā)布了《干細胞外泌體載藥技術(shù)規(guī)

范》團體標準立項通知，并在全國團體標準信息平臺進行公示。

3.3標準起草階段

2024年3～2024年5月，依據(jù)《中華人民共和國標準化法》、《國務(wù)院關(guān)于

深化標準化工作改革方案》等文件的要求，按照團體標準的制修訂程序組織有

關(guān)技術(shù)人員成立標準起草工作組，通過相關(guān)信息化手段進行多次內(nèi)容討論和交

流，并向相關(guān)單位和專家咨詢，在廣泛聽取各方意見和充分論證的基礎(chǔ)上，對

標準初稿進行了完善和修改后經(jīng)起草組確認，同意作為征求意見稿，公開征求

意見。

二、編制原則

在標準制定過程中，標準起草工作組按照GB/T1.1—2020給出的規(guī)則編

寫，主要遵循以下原則：

（1）協(xié)調(diào)性:保證標準與國內(nèi)現(xiàn)行國家標準、行業(yè)標準協(xié)調(diào)一致。

（2）規(guī)范性：嚴格按照GB/T1.1—2020《標準化工作導(dǎo)則第1部分：標準

化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》給出的規(guī)則起草，保證標準的編寫質(zhì)量。

（3）適用性：結(jié)合生產(chǎn)企業(yè)管理實踐和產(chǎn)品的主要環(huán)境影響，提出對企業(yè)

產(chǎn)品的具體質(zhì)量要求和生產(chǎn)經(jīng)營規(guī)范。

三、主要技術(shù)內(nèi)容及其確定依據(jù)

本文件規(guī)定了干細胞外泌體及載藥技術(shù)的術(shù)語和定義、制備工藝流程、技

術(shù)要求、檢測方法、質(zhì)量控制、安全與環(huán)保要求。

本文件適用于干細胞外泌體載藥技術(shù)的研發(fā)及檢測。

本文件給出了干細胞外泌體的術(shù)語和定義。將干細胞外泌體定義為：由干

細胞分泌的小囊泡，直徑通常在30～150納米之間，攜帶多種生物活性分子，包

括蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等，可在細胞間傳遞信息和影響靶細胞的功能。

制備工藝流程

a）干細胞培養(yǎng)與擴增

選取適合的干細胞來源，如胚胎干細胞或誘導(dǎo)多能干細胞，進行體外培養(yǎng)。

利用適當?shù)呐囵B(yǎng)基和培養(yǎng)條件，如控制溫度、濕度、氣體組成等，使干細胞增殖

擴增。

b）干細胞分化與外泌體收集

通過添加特定的生長因子或培養(yǎng)條件，促使干細胞向特定細胞類型分化。在

分化過程中，干細胞會釋放出外泌體，通過離心、超濾或其他分離技術(shù)收集這些

外泌體。

c）外泌體純化與鑒定

通過進一步離心、過濾或色譜等方法純化收集到的外泌體，去除雜質(zhì)和細胞

碎片，隨后對外泌體進行鑒定，包括形態(tài)觀察、粒徑分析、蛋白質(zhì)標志物檢測等，

確保其符合外泌體的特征。

d）藥物裝載

將所需藥物與外泌體混合，在一定的條件下進行孵育，使藥物被外泌體有效

裝載。裝載過程中需控制藥物的濃度、孵育時間和溫度等參數(shù)。

e）裝載后處理與儲存

藥物裝載完成后，對外泌體進行必要的后處理，如清洗、離心等，以去除未

裝載的藥物和雜質(zhì)，隨后將裝載藥物的外泌體儲存于適當?shù)臈l件下，確保其穩(wěn)定

性和生物活性。

技術(shù)要求

干細胞外泌體的質(zhì)量要求

a）來源與鑒定

干細胞外泌體應(yīng)來源于經(jīng)過認證的、健康的、無疾病的干細胞培養(yǎng)物。外泌

體的來源應(yīng)進行嚴格的篩選和鑒定，確保其安全性和有效性。

b）形態(tài)與大小

干細胞外泌體應(yīng)呈現(xiàn)典型的囊泡結(jié)構(gòu)，直徑應(yīng)在一定的范圍內(nèi)（如30～150

納米），且分布均勻，無明顯的形態(tài)異常。

c）純度

干細胞外泌體應(yīng)具有較高的純度，不應(yīng)含有明顯的細胞碎片、雜質(zhì)或其他污

染物。外泌體的純度應(yīng)通過適當?shù)姆椒ㄟM行驗證，如密度梯度離心、超濾等。

d）生物活性

干細胞外泌體應(yīng)具有一定的生物活性，能夠傳遞生物信息并影響靶細胞的功

能，其生物活性應(yīng)通過體外或體內(nèi)實驗進行驗證，如細胞增殖實驗、遷移實驗等。

e）穩(wěn)定性

干細胞外泌體應(yīng)具有良好的穩(wěn)定性，在儲存和運輸過程中應(yīng)保持其形態(tài)、大

小和生物活性的穩(wěn)定。穩(wěn)定性的評估應(yīng)包括在不同條件下的儲存實驗和加速穩(wěn)定

性實驗。

f）安全性

干細胞外泌體應(yīng)無毒性、無感染性，應(yīng)符合GB19489及其他國家相關(guān)生物安

全標準的要求。外泌體的安全性應(yīng)通過無菌性檢查、內(nèi)毒素檢測、過敏性試驗等

方法進行驗證。

載藥過程的技術(shù)要求

a）藥物選擇與適配性

所選藥物應(yīng)與干細胞外泌體具有良好的相容性，不影響外泌體的穩(wěn)定性和生

物活性。同時，藥物應(yīng)能夠有效載入外泌體中，且在載入過程中不發(fā)生化學(xué)變化。

b）載藥方法與效率

應(yīng)明確描述載藥的具體方法，包括藥物的溶解、與外泌體的混合方式、孵育

時間和溫度等條件。載藥效率應(yīng)達到預(yù)定標準，確保足夠量的藥物被成功載入外

泌體中。

c）藥物釋放性能

載有藥物的外泌體應(yīng)具有良好的藥物釋放性能，能夠在預(yù)定的時間內(nèi)釋放藥物，

且釋放速率應(yīng)符合治療要求。

d)載藥過程的可重復(fù)性

載藥過程應(yīng)具有良好的可重復(fù)性，確保不同批次間藥物載入量和釋放性能的

穩(wěn)定性，應(yīng)建立標準化的操作流程，并對關(guān)鍵參數(shù)進行嚴格監(jiān)控。

e)無菌操作與安全性

載藥過程應(yīng)在無菌條件下進行，以避免微生物污染。操作完成后，應(yīng)對載有

藥物的外泌體進行安全性評估，包括但不限于無菌性檢查、內(nèi)毒素檢測和生物相

容性測試。

藥物釋放的控制要求

a)釋放速率

應(yīng)明確干細胞外泌體載藥在體外和/或體內(nèi)的藥物釋放速率，釋放速率應(yīng)根

據(jù)治療需求和藥物性質(zhì)進行精確控制，確保藥物在預(yù)期的時間內(nèi)以適當?shù)乃俣柔?/p>

放。

b)釋放穩(wěn)定性

藥物從干細胞外泌體中釋放的過程應(yīng)具有穩(wěn)定性，即在相同的條件下，不同

批次的外泌體載藥應(yīng)表現(xiàn)出相似的釋放行為。對藥物與外泌體的結(jié)合方式、外泌

體的儲存條件以及釋放介質(zhì)等進行嚴格控制。

c）靶向釋放

如預(yù)期藥物需要在特定組織或細胞中釋放，應(yīng)提供證據(jù)表明干細胞外泌體載

藥能夠?qū)崿F(xiàn)靶向釋放。

d）觸發(fā)釋放機制

如藥物釋放是通過特定刺激（如pH變化、溫度變化或酶解等）來觸發(fā)的，應(yīng)

明確觸發(fā)條件，并提供實驗數(shù)據(jù)支持觸發(fā)機制的有效性和可靠性。

e）藥物殘留檢測

在藥物釋放后，應(yīng)對殘留的藥物進行檢測，以確保藥物已經(jīng)完全釋放或殘留

量在可接受的范圍內(nèi)。

檢驗方法

干細胞外泌體的鑒定方法

a）形態(tài)學(xué)鑒定

利用透射電子顯微鏡（TEM）觀察干細胞外泌體的形態(tài)。樣品經(jīng)過適當?shù)墓?/p>

定和染色后，在電子顯微鏡下應(yīng)能觀察到典型的茶托型或一側(cè)凹陷的半球形雙層

囊膜結(jié)構(gòu)，且直徑在30～150nm之間。

b）粒徑分布分析

采用納米顆粒跟蹤分析（NanoparticleTrackingAnalysis,NTA）技術(shù)測

定干細胞外泌體的粒徑分布，該方法可追蹤納米顆粒的布朗運動軌跡，從而得到

顆粒的粒徑大小和濃度信息。外泌體的粒徑主峰應(yīng)在30～150nm范圍內(nèi)。

c）蛋白質(zhì)標志物檢測

通過蛋白質(zhì)印跡法（WesternBlot,WB）檢測干細胞外泌體的特征性蛋白質(zhì)

標志物，如CD9、CD63、CD81等。這些蛋白質(zhì)是外泌體膜上的常見成分，可作為

外泌體存在的依據(jù)。

d）綜合鑒定

為確保鑒定的準確性，宜綜合采用形態(tài)學(xué)鑒定、粒徑分布分析、蛋白質(zhì)標志

物檢測等方法進行干細胞外泌體的鑒定。

載藥量的測定方法

a）直接測定法

如藥物本身具有特定的光譜吸收、熒光發(fā)射或其他可直接檢測的物理化學(xué)性

質(zhì)，可直接利用這些性質(zhì)對載入外泌體的藥物進行定量測定，如使用紫外-可見

分光光度法、熒光光譜法等來測定載藥量。

b）間接測定法

對于無法直接測定的藥物，可以采用間接方法來推算載藥量，常用的方法是

利用放射性同位素或熒光標記的藥物作為示蹤劑，通過測定標記物的量來推算出

載藥量。

c）色譜分析法

利用高效液相色譜法（HPLC）、氣相色譜法（GC）等色譜分析技術(shù)，可分離

并定量測定載入外泌體中的藥物成分。

d）質(zhì)譜分析法

如液質(zhì)聯(lián)用（LC-MS）或氣質(zhì)聯(lián)用（GC-MS），可提供更高的靈敏度和選擇性，

用于精確測定載入外泌體中的藥物量。

e）標準曲線法

通過建立藥物濃度與檢測信號之間的標準曲線，可根據(jù)檢測信號推算出載入

外泌體中的藥物量，需要事先制備一系列已知濃度的藥物標準溶液，并建立相應(yīng)

的檢測信號與濃度的關(guān)系曲線。

藥物釋放速率的測定方法

體外釋放實驗

體外釋放實驗可以用來模擬藥物從干細胞外泌體中釋放的過程。實驗方法通

常包括將載有藥物的外泌體置于模擬生理條件的釋放介質(zhì)中，在一定的時間點取

樣并測定釋放出的藥物量，通過繪制藥物釋放曲線，可以計算藥物的釋放速率。

a）釋放介質(zhì)的準備

應(yīng)選擇與體內(nèi)環(huán)境相近的釋放介質(zhì)，如磷酸鹽緩沖液（PBS）或模擬體液等，

以模擬藥物在體內(nèi)的釋放環(huán)境；

b）取樣和時間點

在預(yù)定的時間點（如每隔一段時間）取樣，測定釋放介質(zhì)中的藥物濃度，時

間點應(yīng)足夠密集，以便準確描述藥物釋放曲線；

c）藥物濃度的測定

可以使用適當?shù)姆椒ǎㄈ绶止夤舛确?、色譜法等）測定釋放介質(zhì)中的藥物濃度。

a）藥物釋放曲線的繪制與分析

根據(jù)測定的藥物濃度數(shù)據(jù)，繪制藥物釋放曲線，通過分析曲線的形狀和斜率，

可以計算藥物的釋放速率，并評估藥物的控釋性能。

b）體內(nèi)釋放實驗（可選）

對于需要更準確模擬體內(nèi)釋放情況，可以采用動物模型進行體內(nèi)釋放實驗，

能夠更真實地反映藥物在體內(nèi)的釋放過程和藥效。