2025年大學(xué)大四（生物技術(shù)）分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)測試題及答案

（考試時間：90分鐘滿分100分）班級______姓名______第I卷（選擇題，共40分）（總共20題，每題2分，每題只有一個正確答案，請將正確答案填在括號內(nèi)）1.以下哪種技術(shù)常用于DNA片段的分離和純化？（）A.聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)B.凝膠電泳C.蛋白質(zhì)印跡法D.免疫沉淀2.在分子克隆中，常用的載體不包括以下哪種？（）A.質(zhì)粒B.噬菌體C.人工染色體D.核糖體3.關(guān)于限制性內(nèi)切酶，下列說法錯誤的是（）A.能識別特定的DNA序列B.切割DNA產(chǎn)生粘性末端或平末端C.可用于構(gòu)建重組DNA分子D.只作用于單鏈DNA4.進(jìn)行DNA測序時，常用的方法是（）A.桑格測序法B.化學(xué)降解法C.焦磷酸測序法D.以上都是5.以下哪種技術(shù)可用于檢測基因表達(dá)水平？（）A.Northern印跡B.Western印跡C.原位雜交D.免疫組化6.構(gòu)建cDNA文庫時，需要用到的酶是（）A.逆轉(zhuǎn)錄酶B.DNA聚合酶C.RNA聚合酶D.限制性內(nèi)切酶7.用于蛋白質(zhì)表達(dá)和純化的系統(tǒng)是（）A.大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)B.酵母表達(dá)系統(tǒng)C.昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)D.以上都是8.基因編輯技術(shù)CRISPR/Cas9的作用靶點(diǎn)是（）A.DNAB.RNAC.蛋白質(zhì)D.多糖9.檢測蛋白質(zhì)與DNA相互作用的技術(shù)是（）A.凝膠遷移實(shí)驗(yàn)B.染色質(zhì)免疫沉淀C.酵母雙雜交D.以上都是10.以下哪種方法可用于鑒定重組質(zhì)粒？（）A.酶切分析B.測序C.菌落PCRD.以上都是11.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用的緩沖液是（）A.Tris-HCl緩沖液B.PBS緩沖液C.醋酸緩沖液D.以上都是12.用于RNA提取的試劑是（）A.Trizol試劑B.氯仿C.異丙醇D.以上都是13.蛋白質(zhì)定量常用的方法是（）A.Bradford法B.BCA法C.考馬斯亮藍(lán)法D.以上都是14.進(jìn)行PCR反應(yīng)時，需要的成分不包括（）A.模板DNAB.引物C.dNTPD.核糖體15.以下哪種技術(shù)可用于分析基因的甲基化狀態(tài)？（）A.亞硫酸氫鹽測序B.甲基化特異性PCRC.染色質(zhì)免疫沉淀D.以上都是16.分子克隆中，連接反應(yīng)常用的酶是（）A.DNA連接酶B.限制性內(nèi)切酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.蛋白酶17.用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法有（）A.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染B.電穿孔轉(zhuǎn)染C.病毒介導(dǎo)轉(zhuǎn)染D.以上都是18.檢測蛋白質(zhì)磷酸化的技術(shù)是（）A.蛋白質(zhì)印跡法B.免疫沉淀C.Western印跡D.以上都是19.以下哪種技術(shù)可用于分析基因的拷貝數(shù)變異？（）A.熒光定量PCRB.基因芯片C.二代測序D.以上都是20.分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中，常用的離心機(jī)轉(zhuǎn)速單位是（）A.rpmB.gC.rad/sD.m/s第II卷（非選擇題，共60分）（總共5題，每題12分）1.簡述PCR反應(yīng)的基本原理和步驟。2.請?jiān)敿?xì)說明構(gòu)建重組DNA分子的一般步驟和方法。3.舉例說明蛋白質(zhì)印跡法的原理、操作流程及應(yīng)用。4.閱讀以下材料：在研究某基因與疾病的關(guān)系時，發(fā)現(xiàn)該基因在患病組織中的表達(dá)水平明顯高于正常組織。為進(jìn)一步探究其作用機(jī)制，科研人員設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。首先提取患病組織和正常組織的總RNA，并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA。然后利用熒光定量PCR技術(shù)檢測該基因在兩種組織中的表達(dá)量，同時檢測一些相關(guān)基因的表達(dá)情況。請分析該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的合理性，并說明熒光定量PCR技術(shù)在其中的作用。5.閱讀材料：在基因治療研究中，科研人員嘗試?yán)肅RISPR/Cas9技術(shù)對某致病基因進(jìn)行編輯。他們設(shè)計(jì)了針對該致病基因的sgRNA，并將其與Cas9蛋白一起導(dǎo)入細(xì)胞中。一段時間后，檢測細(xì)胞中該致病基因的突變情況以及相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。請分析該實(shí)驗(yàn)的目的、操作過程及可能面臨的問題，并提出解決策略。答案：1.B2.D3.D4.D5.A6.A7.Ds8.A9.A10.D11.D12.D13.D14.D15.D16.A17.D18.D19.D20.A第II卷答案1.PCR反應(yīng)的基本原理是在模板DNA、引物、dNTP和DNA聚合酶等存在的情況下，通過變性、退火和延伸三個步驟的循環(huán)，使特定DNA片段得以大量擴(kuò)增。步驟包括：變性，將模板DNA加熱至95℃左右使其雙鏈解開；退火，降溫至合適溫度使引物與模板結(jié)合；延伸，在DNA聚合酶作用下，以dNTP為原料合成新的DNA鏈，溫度一般在72℃左右。2.構(gòu)建重組DNA分子一般步驟：獲取目的基因，可通過PCR擴(kuò)增、從基因組文庫或cDNA文庫中篩選等方法；選擇合適載體，常用質(zhì)粒、噬菌體等；用限制性內(nèi)切酶切割目的基因和載體，產(chǎn)生互補(bǔ)粘性末端或平末端；用DNA連接酶將目的基因與載體連接形成重組DNA分子；導(dǎo)入宿主細(xì)胞，如大腸桿菌，通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)等方法；篩選陽性克隆，可利用載體上的抗性基因、藍(lán)白斑篩選等方法。3.蛋白質(zhì)印跡法原理：通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離蛋白質(zhì)，然后將其轉(zhuǎn)移到固相膜上，再用特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合，最后通過顯色或發(fā)光等方法檢測目標(biāo)蛋白。操作流程：樣品處理，提取蛋白質(zhì)并定量；電泳分離，將樣品加樣到凝膠孔中進(jìn)行電泳；轉(zhuǎn)膜，將凝膠上的蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移到膜上；封閉，用封閉液封閉膜上非特異性結(jié)合位點(diǎn)；孵育一抗，加入特異性抗體與目標(biāo)蛋白結(jié)合；孵育二抗，加入能與一抗結(jié)合并帶有標(biāo)記的二抗；檢測，通過顯色或發(fā)光檢測目標(biāo)蛋白條帶。應(yīng)用：可用于檢測蛋白質(zhì)表達(dá)水平、分子量大小、蛋白質(zhì)間相互作用等。4.該實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理。提取總RNA并逆轉(zhuǎn)錄成cDNA為后續(xù)檢測基因表達(dá)量做準(zhǔn)備。熒光定量PCR技術(shù)可準(zhǔn)確測定該基因在患病組織和正常組織中的表達(dá)量，通過對比能明確其表達(dá)差異。同時檢測相關(guān)基因表達(dá)情況，有助于進(jìn)一步探究該基因與其他基因的關(guān)系及在疾病發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。5.實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖抢肅RISPR/Cas9技術(shù)編輯致病基因，探究對基因及相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。操作過程包括設(shè)計(jì)sgRNA，將其與C