2025年醫(yī)學(xué)實驗技術(shù)(醫(yī)學(xué)實驗設(shè)計與操作)試卷及答案一、單項選擇題（每題1分，共30分。每題只有一個最佳答案，錯選、多選均不得分）1.某研究擬比較三種抗凝劑對全血凝血時間的影響，采用完全隨機設(shè)計，每組樣本量n=10。若方差分析結(jié)果顯示P=0.032，則下一步最合理的操作是A.直接報告三種抗凝劑效果不同B.進行Bonferroni校正后兩兩比較C.擴大樣本量至n=30后再分析D.改用配對t檢驗繼續(xù)分析答案：B解析：方差分析僅提示總體均數(shù)不全相同，需進一步兩兩比較；Bonferroni可控制Ⅰ型錯誤膨脹，優(yōu)先于擴大樣本或更換檢驗方法。2.在ELISA間接法檢測抗體時，若空白對照孔OD值顯著高于歷史均值，最可能污染環(huán)節(jié)是A.酶標(biāo)二抗失效B.底物緩沖液pH降低C.洗滌不充分導(dǎo)致游離酶殘留D.終止液加入延遲答案：C解析：空白孔無抗原抗體反應(yīng)，OD升高提示游離辣根過氧化物酶殘留，洗滌不充分是首要原因。3.小鼠尾靜脈注射劑量為15mg/kg，藥品濃度10mg/mL，20g體重小鼠應(yīng)注射體積為A.0.02mLB.0.03mLC.0.04mLD.0.05mL答案：B解析：劑量=15mg/kg=0.3mg/20g；體積=0.3mg÷10mg/mL=0.03mL。4.關(guān)于qPCR中ΔΔCt法，下列說法正確的是A.要求目標(biāo)基因與內(nèi)參擴增效率差異<5%B.可消除不同樣本間RNA上樣量差異C.適用于比較不同物種間基因表達D.無需構(gòu)建標(biāo)準曲線答案：A解析：ΔΔCt法前提為擴增效率近似，效率差異<5%方可忽略；不能跨物種比較，仍需上量校正。5.流式細胞術(shù)檢測ROS時，DCFHDA探針最佳激發(fā)波長為A.488nmB.405nmC.633nmD.561nm答案：A解析：DCFHDA經(jīng)488nm藍光激發(fā)，發(fā)射在525nm附近，與FITC通道兼容。6.構(gòu)建重組質(zhì)粒時，若目的基因內(nèi)部含有一個BamHⅠ位點，而載體多克隆位點亦有BamHⅠ，最佳策略是A.直接BamHⅠ單酶切后連接B.改用BamHⅠ與HindⅢ雙酶切C.采用平末端連接D.對目的基因進行點突變消除位點答案：B解析：雙酶切可避免自連與反向連接，若目的基因內(nèi)部含BamHⅠ，則換用另一對酶切位點最穩(wěn)妥。7.動物實驗倫理審查中，3R原則不包括A.ReplacementB.ReductionC.RefinementD.Replication答案：D解析：3R為替代、減少、優(yōu)化，Replication為重復(fù)實驗，非倫理原則。8.在Westernblot轉(zhuǎn)膜過程中，若甲醇濃度由20%降至5%，最可能影響A.蛋白與SDS分離B.PVDF膜活化C.凝膠孔徑D.彩虹Marker清晰度答案：B解析：PVDF需甲醇活化，濃度不足導(dǎo)致膜親水性下降，結(jié)合效率降低。9.關(guān)于隨機區(qū)組設(shè)計，下列說法錯誤的是A.區(qū)組內(nèi)個體特征相似B.可控制已知混雜因素C.誤差項自由度高于完全隨機設(shè)計D.分析時需引入?yún)^(qū)組因素答案：C解析：區(qū)組設(shè)計將區(qū)組SS從誤差中分離，誤差自由度減少，而非增加。10.制備冰凍切片時，OCT包埋劑主要作用是A.防止冰晶損傷B.提供組織硬度C.增強染色親和力D.減少非特異熒光答案：A解析：OCT可填充組織間隙，降低冰晶形成，保持形態(tài)完整。11.若某藥物半數(shù)致死量LD50為80mg/kg，其95%可信限為65–98mg/kg，則治療指數(shù)TI計算需用A.LD50/ED50B.LD1/ED99C.LD50下限/ED50上限D(zhuǎn).LD50上限/ED50下限答案：C解析：保守估計TI，應(yīng)取LD50下限與ED50上限之比，確保安全性。12.在CRISPRCas9敲除實驗中，若測序出現(xiàn)雙峰，最可能原因是A.引物二聚體B.雜合敲除C.模板降解D.dNTP不足答案：B解析：雙峰提示野生與突變序列混合，雜合敲除典型表現(xiàn)。13.關(guān)于CoIP實驗，下列操作可提高特異性的是A.增加抗體量B.提高裂解液NaCl至800mmol/LC.延長孵育時間至過夜D.使用預(yù)清除（preclearing）答案：D解析：預(yù)清除可去除與珠子非特異結(jié)合蛋白，降低背景。14.小鼠血糖儀檢測尾尖血前，用75%酒精消毒后必須A.立即穿刺B.擦干酒精后穿刺C.涂抹胰島素D.按壓30s答案：B解析：殘留酒精可稀釋血液并干擾電化學(xué)試紙反應(yīng)，必須擦干。15.若某次Westernblot目標(biāo)條帶在膜上呈“笑臉”狀，最可能原因是A.一抗?jié)舛冗^高B.轉(zhuǎn)膜電流過大C.凝膠濃度不均D.曝光時間過長答案：B解析：電流過大導(dǎo)致中心發(fā)熱，蛋白遷移速度差異形成微笑條帶。16.在細胞周期PI染色中，若G0/G1峰CV值>8%，應(yīng)優(yōu)先調(diào)整A.PI濃度B.RNaseA消化時間C.細胞密度D.激光功率答案：B解析：RNA未被充分消化可致PI結(jié)合變異，CV增大。17.關(guān)于動物實驗盲法，下列正確的是A.僅對觀察者設(shè)盲即可B.基因型檢測人員無需盲法C.隨機化與盲法可互換D.可減少測量偏倚答案：D解析：盲法可減少觀察者主觀影響，與隨機化互補。18.若qPCR熔解曲線出現(xiàn)雜峰，首先應(yīng)A.提高退火溫度2℃B.降低引物濃度C.重新設(shè)計引物D.檢查模板污染答案：A解析：雜峰提示非特異擴增，優(yōu)先提高退火溫度，簡單快速。19.在MTT實驗中，若空白孔OD570過高，最可能原因是A.培養(yǎng)基含酚紅B.血清濃度過低C.CO2濃度不足D.細胞接種過多答案：A解析：酚紅可吸光，干擾OD讀數(shù)，應(yīng)換無酚紅培養(yǎng)基。20.關(guān)于動物倫理終點（humaneendpoint），正確的是A.體重下降>30%必須處死B.由實驗員主觀判斷C.無需記錄D.可事后補批答案：A解析：國際規(guī)范規(guī)定體重下降超30%為強制終點，須立即執(zhí)行。21.在免疫組化中，采用pH6.0檸檬酸鈉緩沖液95℃修復(fù)20min，主要目的是A.封閉內(nèi)源過氧化物酶B.暴露抗原表位C.減少非特異染色D.增強DAB顯色答案：B解析：熱修復(fù)可逆轉(zhuǎn)甲醛交聯(lián)，恢復(fù)抗原性。22.若Western內(nèi)參GAPDH條帶在50kDa處出現(xiàn)，而目標(biāo)蛋白亦在50kDa，最佳策略是A.strip后重孵內(nèi)參B.更換βactin內(nèi)參C.降低上樣量D.采用熒光二抗雙色同時檢測答案：D解析：雙色熒光可區(qū)分通道，避免strip導(dǎo)致蛋白損失。23.小鼠眼眶靜脈叢采血最大安全量為A.0.5%體重B.1%體重C.1.5%體重D.2%體重答案：B解析：1%體重為一次性上限，避免失血性休克。24.在RNAseq建庫中，rRNA去除效率低會導(dǎo)致A.測序讀長降低B.GC偏好C.有效數(shù)據(jù)量下降D.接頭二聚體增加答案：C解析：rRNA占比高則mRNA讀數(shù)減少，有效數(shù)據(jù)下降。25.若某藥物ED50為5mg/kg，LD50為50mg/kg，則TI為A.5B.10C.45D.55答案：B解析：TI=LD50/ED50=50/5=10。26.在細胞轉(zhuǎn)染中，使用Lipo3000時，DNA：試劑比例1:2優(yōu)于1:1的主要原因是A.減少毒性B.提高內(nèi)吞C.降低血清抑制D.增強核定位答案：B解析：適量增加陽離子脂質(zhì)可促進DNA內(nèi)吞，比例過低轉(zhuǎn)染效率差。27.關(guān)于實驗動物微生物等級，SPF級含義是A.無特定病原體B.無菌C.僅含已知菌D.普通環(huán)境答案：A解析：SPF（specificpathogenfree）指無特定病原體清單。28.在流式分選GFP陽性細胞時，若分選后純度<80%，應(yīng)優(yōu)先調(diào)整A.激光器功率B.分選門邏輯C.鞘液壓力D.細胞過濾答案：B解析：門策略不當(dāng)會混入陰性細胞，優(yōu)化門邏輯最直接。29.若PCR產(chǎn)物電泳出現(xiàn)拖尾，最可能原因是A.dNTP過量B.引物特異性差C.延伸時間不足D.模板GC過高答案：B解析：引物非特異擴增致拖尾，優(yōu)先檢查引物。30.在動物行為學(xué)實驗Morris水迷宮中，若平臺直徑由10cm縮至5cm，主要影響A.游泳速度B.學(xué)習(xí)難度C.視覺線索D.水溫感知答案：B解析：平臺減小增加空間記憶難度，不影響速度。二、配伍題（每題1分，共10分。每組選項在前，試題在后，每個選項可重復(fù)選用）A.防止RNA降解B.防止蛋白降解C.防止氧化D.防止pH波動E.防止冰晶31.組織勻漿時加入EDTA（B）32.冰凍切片前驟冷異戊烷（E）33.采血后即刻加入RNAlater（A）34.配置RIPA時加入Na3VO4（C）35.PBS加入0.02%NaN3長期保存抗體（D）三、判斷題（每題1分，共10分。正確寫“√”，錯誤寫“×”）36.動物實驗方案獲批后，若更換藥品批號無需再次申報?！两馕觯焊鼡Q批號可能影響毒性，須報備。37.在PCR中，退火溫度越高，產(chǎn)物特異性越好，但產(chǎn)量可能下降?！?8.采用t檢驗比較三組均數(shù)符合統(tǒng)計學(xué)要求?！两馕觯喝M應(yīng)使用方差分析。39.細胞凍存時，DMSO終濃度為5%即可滿足大部分細胞系?！?0.Westernblot轉(zhuǎn)膜方向由負極向正極?！?1.實驗記錄本可用鉛筆書寫，便于修改?！两馕觯喉氂貌煌噬P，禁止鉛筆。42.在ELISA中，TMB顯色后需避光?！?3.小鼠灌胃最大體積為10mL/kg?！两馕觯簯?yīng)為8mL/kg，避免胃擴張。44.流式細胞儀每日開機后需運行CST微球校準?！?5.基因編輯小鼠必須鑒定F1代才能確認生殖系傳遞?！趟?、簡答題（每題6分，共30分。要求要點完整，邏輯清晰）46.簡述RNA提取中TRIzol法的關(guān)鍵步驟及注意事項。答案：（1）樣本新鮮或液氮研磨，避免RNase污染；（2）每50–100mg組織加1mLTRIzol，充分勻漿；（3）室溫靜置5min，加200μL氯仿，劇烈振蕩15s，靜置3min；（4）4℃12000g15min，取上層水相；（5）加等體積異丙醇混勻，室溫10min沉淀RNA；（6）4℃12000g10min棄上清，75%乙醇洗一次；（7）晾干后DEPC水溶解，測濃度并跑膠驗證28S/18S≥2。注意事項：全程戴手套，使用RNasefree耗材；氯仿抽提勿吸中間層；異丙醇沉淀可?20℃過夜提高得率；溶解后?80℃保存，避免反復(fù)凍融。47.說明CRISPRCas9系統(tǒng)介導(dǎo)基因敲除的實驗流程。答案：（1）靶點設(shè)計：選擇CDS區(qū)早期外顯子，NGG前20bp，GC40–60%，脫靶評估；（2）sgRNA合成：體外轉(zhuǎn)錄或質(zhì)粒表達，加polyA尾；（3）Cas9mRNA制備：使用T7啟動子載體體外轉(zhuǎn)錄，加帽加尾；（4）顯微注射：將Cas9mRNA（50ng/μL）與sgRNA（25ng/μL）混合，注入小鼠受精卵原核；（5）胚胎移植：將注射后胚胎移植至0.5dpc假孕母鼠；（6）F0代鑒定：提取尾DNA，PCR擴增靶區(qū)，T7E1酶切或TA克隆測序，計算突變率；（7）生殖系傳遞：F0與野生型交配，F(xiàn)1代測序確認雜合突變；（8）純合培育：F1互交獲得純合敲除，表型分析。全程需倫理審批，注射后觀察母鼠健康，幼鼠編號清晰。48.列舉三種常用動物行為學(xué)實驗及其檢測指標(biāo)。答案：（1）Morris水迷宮：檢測空間學(xué)習(xí)記憶，指標(biāo)為逃避潛伏期、平臺穿越次數(shù)、目標(biāo)象限停留時間百分比；（2）開場實驗：檢測焦慮與自主活動，指標(biāo)為總路程、中央停留時間、站立次數(shù)；（3）強迫游泳實驗：檢測抑郁樣行為，指標(biāo)為不動時間百分比、游泳/攀爬時間。實驗需控制水溫、光照、時間一致，視頻追蹤軟件分析，雙盲評分。49.解釋W(xué)esternblot內(nèi)參的作用及選擇原則。答案：作用：校正上樣量差異，評估轉(zhuǎn)膜效率，作為數(shù)據(jù)歸一化基準。原則：（1）分子量與目標(biāo)蛋白相差>5kDa，避免條帶重疊；（2）表達穩(wěn)定，不受實驗處理影響；（3）在樣本組織中高豐度且易檢測；（4）與目標(biāo)蛋白細胞定位一致，如胞漿GAPDH、核LaminB、膜Na/KATPase；（5）若目標(biāo)蛋白為50kDa，避免GAPDH（36kDa）與降解條帶混淆，可改用βactin（42kDa）或Tubulin（55kDa）。50.說明流式細胞術(shù)PIAnnexinV雙染檢測凋亡的原理及結(jié)果判讀。答案：原理：AnnexinV與磷脂酰絲氨酸外翻結(jié)合，標(biāo)記早期凋亡；PI為膜不通透核酸染料，標(biāo)記壞死或晚期凋亡。結(jié)果：（1）AnnexinV?/PI?：活細胞；（2）AnnexinV+/PI?：早期凋亡；（3）AnnexinV+/PI+：晚期凋亡或壞死；（4）AnnexinV?/PI+：極少見，機械損傷細胞。需設(shè)單染管調(diào)補償，使用鈣離子緩沖液維持AnnexinV結(jié)合，1h內(nèi)上機。五、綜合設(shè)計題（20分）51.研究背景：二甲雙胍（Metformin）被認為可延緩小鼠動脈粥樣硬化，但機制未明?，F(xiàn)擬探討其是否通過激活A(yù)MPK通路抑制血管內(nèi)皮炎癥。要求：（1）寫出實驗?zāi)康呐c科學(xué)假設(shè)；（2）設(shè)計動物模型與分組（含劑量、樣本量計算依據(jù)）；（3）列出主要實驗技術(shù)與檢測指標(biāo)；（4）給出統(tǒng)計學(xué)方案與預(yù)期結(jié)果；（5）說明潛在偏倚及控制措施。答案：（1）目的：驗證二甲雙胍通過激活A(yù)MPK抑制動脈粥樣硬化小鼠血管內(nèi)皮炎癥反應(yīng)。假設(shè)：二甲雙胍激活A(yù)MPK，降低NFκB磷酸化，減少IL6、VCAM1表達，從而減輕斑塊面積。（2）模型與分組：選用8周齡ApoE?/?雄性小鼠，高脂飼料（21%fat，0.15%cholesterol）喂養(yǎng)12周建立粥樣硬化模型。樣本量：預(yù)實驗顯示斑塊面積均值±SD=0.35±0.10mm2，期望下降30%，α=0.05，power=80%，經(jīng)公式n=2×(Zα+Zβ)2×SD2/Δ2，計算得n=8，考慮20%脫落，每組10只。分組：A.對照組（高