街84號(hào)芮海英李澤宇郭麗王迪李冬梅劉冰A01G31/00(2018.01)代理有限公司232130.2%的次氯酸鈉的三角瓶中進(jìn)行滅菌處理，培21.一種工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法按照以下步驟進(jìn)行：挑選成熟、完整飽滿、無(wú)病蟲(chóng)侵害、有光澤的工業(yè)大麻種子，種子凈度達(dá)到100%,純度達(dá)到100%,發(fā)芽率達(dá)到99%以上；用清水浸泡直至種子頂破種皮露出白色胚根后剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮；將剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮的工業(yè)大麻種子放入裝有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的次氯酸鈉的三角瓶中進(jìn)行滅菌處理，滅菌時(shí)間總計(jì)30～35分鐘；滅菌分3次處理，每隔10-12分鐘更換1次新的次氯酸鈉，滅菌處理過(guò)程中搖動(dòng)三角瓶以達(dá)到滅菌徹底的效果；滅菌處理后用無(wú)菌水沖洗種子3-4遍，將發(fā)芽種子表面的次氯酸鈉沖洗干凈；將MS固體培養(yǎng)基滅菌后分裝入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固冷卻后將滅菌完成的種子接種到皿中，培養(yǎng)皿用報(bào)紙包裹后，放于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)2-3天，得到無(wú)菌的發(fā)芽種子；將無(wú)菌的發(fā)芽種子轉(zhuǎn)移到裝有MS固體培養(yǎng)基的容器中繼續(xù)培養(yǎng)10-15天，得到無(wú)菌實(shí)生苗；將無(wú)菌實(shí)生苗直接移栽，或?qū)o(wú)菌實(shí)生苗擴(kuò)繁生根后進(jìn)行移栽。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟四所述培養(yǎng)條件為：溫度我25℃,濕度為40-50%,光照強(qiáng)度為2000-2500Lux,16h光照/8h黑暗。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟五所述容器為組培瓶或試管。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟五所述培養(yǎng)條件為：溫度為25℃,濕度為40-50%,光照強(qiáng)度為4000-5000Lux,16h光照/8h黑暗。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟六所述移栽方法為：選擇株型完整、莖稈粗壯、根系完整的無(wú)菌實(shí)生苗移栽，出瓶時(shí)將培養(yǎng)基與無(wú)菌實(shí)生苗一起取出，洗凈根部的培養(yǎng)基和瓊脂，轉(zhuǎn)移到裝有基質(zhì)的盆中，基質(zhì)需要提前滅菌；所述基質(zhì)由粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭組成；粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭的質(zhì)量比為0.15:0.35:0.5;所述基質(zhì)的滅菌方法為：在121℃的高壓鍋中濕熱滅菌30-40分鐘。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：步驟四和五中所述MS固體培養(yǎng)基中含有的營(yíng)養(yǎng)元素包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)物，每升培養(yǎng)基含有18-20g瓊脂粉。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：所述大量元素為7H?0、H?BO?、KI、Na?Mn04·2H?O、CuSO?·5H?0、CoCl?·6H7H?0;所述有機(jī)物為甘氨酸、鹽酸吡哆醇、鹽酸硫胺素、煙酸和肌醇。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法，其特征在于：所述培養(yǎng)基中大3所述培養(yǎng)基中微量元素的含量為：MnSO?·4H?0:0.023g/L,ZnSO4·7H?0:0.0086g/L,H?BO?:0.0062g/L,KI:0.00083g/L,Na?Mn04·2H?0:0.00025g/L,CuSO?·5H?0:0.0所述培養(yǎng)基中鐵鹽的含量為：Na?-EDTA:0.037g/L和FeSO?·7H?0:0.0278g/L;所述培養(yǎng)基中有機(jī)物的含量為：甘氨酸：0.0001g/L,鹽酸吡哆醇：0.00025g/L,鹽酸硫胺素：0.00005g/L,煙酸：0.00025g/L,肌醇：0.05g/L;所述鐵鹽的配置方法：將FeSO?·7H20和Na?-EDTA·2H?0分別稱好，分別放到餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使溶解，然后將兩種溶液混合，并將pH調(diào)至5.5,加熱至沸騰，當(dāng)顏色變深黃色后，定容到1L,保存在棕色玻璃瓶中。4一種工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法技術(shù)領(lǐng)域[0001]本發(fā)明涉及一種工業(yè)大麻繁育方法。背景技術(shù)[0002]大麻(CannabissativaL.)是大麻科(Cannabinaceae)大麻屬(Cannabis)1年生草本植物，分為工業(yè)大麻和毒品大麻，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外廣泛應(yīng)用的大麻為工業(yè)大麻。工業(yè)大麻是指四氫大麻酚含量低于0.3%的大麻，我國(guó)將工業(yè)大麻稱為漢麻(hemp)。大麻渾身是寶，主料等方面。[0003]我國(guó)工業(yè)大麻產(chǎn)業(yè)發(fā)展勢(shì)頭很猛，但由于大麻屬雌雄異株，為典型的異花授粉作物，在大麻的繁種過(guò)程中，由于生物學(xué)混雜、機(jī)械混雜和不良環(huán)境條件引起的品種混雜退化現(xiàn)象十分普遍，品種間極易串粉雜交，核心種質(zhì)資源的防雜保純和雄性大麻植株繁殖十分困難。要解決工業(yè)大麻種質(zhì)資源提純保存，具有優(yōu)良種質(zhì)特性的后代材料快速純化擴(kuò)繁，就需要解決工業(yè)大麻無(wú)性繁殖技術(shù)問(wèn)題，在大麻離體培養(yǎng)過(guò)程中，無(wú)菌實(shí)生苗和外植體的獲得是關(guān)鍵，選擇適宜的種子滅菌方法(消毒劑和處理時(shí)間),既有良好的除菌效果，大大降低了初始污染率，又獲得了生長(zhǎng)狀態(tài)更好的實(shí)生苗。目前種子的滅菌方法集中在用75%酒精、高濃度的次氯酸鈉或升汞三種消毒劑組合應(yīng)用對(duì)種子進(jìn)行直接滅菌，然后再浸泡剝?nèi)シN皮或不浸泡不剝?nèi)シN皮直接種植于培養(yǎng)基中，但由于大麻種皮厚并且內(nèi)生菌很多，這些方法發(fā)明內(nèi)容[0004]本發(fā)明為了解決現(xiàn)有的種子滅菌方法滅菌率低、對(duì)種子傷害大的問(wèn)題，提出一種工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法。[0005]本發(fā)明工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法按照以下步驟進(jìn)行：[0007]挑選成熟、完整飽滿、無(wú)病蟲(chóng)侵害、有光澤的工業(yè)大麻種子，種子凈度達(dá)到100%,純度達(dá)到100%,發(fā)芽率達(dá)到99%以上；[0009]用清水浸泡直至種子頂破種皮露出白色胚根后剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮；種子浸泡時(shí)間一般為24-48小時(shí)，根據(jù)環(huán)境溫度適當(dāng)調(diào)整；[0011]將剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮的工業(yè)大麻種子放入裝有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的次氯酸鈉的三角瓶中進(jìn)行滅菌處理，滅菌時(shí)間總計(jì)30～35分鐘；滅菌分3次處理，每隔10-12分鐘更換1次新的次氯酸鈉，滅菌處理過(guò)程中搖動(dòng)三角瓶以達(dá)到滅菌徹底的效果；滅菌處理后用無(wú)菌水沖洗種子3-4遍，將發(fā)芽種子表面的次氯酸鈉沖洗干凈；5[0013]將MS固體培養(yǎng)基滅菌后分裝入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固冷卻后將滅菌完成的種子接種到皿中，培養(yǎng)皿用報(bào)紙包裹后，放于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)2-3[0015]將無(wú)菌的發(fā)芽種子轉(zhuǎn)移到裝有MS固體培養(yǎng)基的容器中繼續(xù)培養(yǎng)，發(fā)芽種子播種密度和容器體積以不影響工業(yè)大麻植株生長(zhǎng)為宜，培養(yǎng)10-15天，得到無(wú)菌實(shí)生苗；獲得的無(wú)菌實(shí)生苗根系強(qiáng)壯，生長(zhǎng)良好，不需馴化煉苗，可直接出瓶，用做組織培養(yǎng)中的無(wú)菌外植體來(lái)源，用于工業(yè)大麻組織培養(yǎng)、遺傳轉(zhuǎn)化以及工廠化育苗等。[0017]將無(wú)菌實(shí)生苗直接移栽，或?qū)o(wú)菌實(shí)生苗擴(kuò)繁生根后進(jìn)行移栽。[0018]本發(fā)明原理及有益效果為：[0019]本發(fā)明種子先浸泡種子至胚根頂破種皮后去除外種皮和內(nèi)種皮，只將完全展開(kāi)、裸露的子葉以及胚軸、胚根進(jìn)行滅菌，低濃度的次氯酸鈉對(duì)種子發(fā)芽基本無(wú)傷害，種子發(fā)芽率100%,長(zhǎng)勢(shì)好，滅菌率達(dá)到90-100%。[0020]種子常用的滅菌劑主要為酒精、次氯酸鈉和升汞。酒精和次氯酸鈉的殺菌效果差不多，只是用途不一樣。次氯酸鈉主要用于物體表面和環(huán)境等滅菌，其水解的次氯酸能將有還原性的物質(zhì)氧化，使微生物最終喪失機(jī)能，無(wú)法繁殖或感染；醫(yī)用酒精的主要成分是乙醇并且是混合物，酒精主要是讓蛋白質(zhì)變性來(lái)達(dá)到滅菌的效果。升汞又稱氯化汞，具有殺菌力強(qiáng)，滲透性好的特點(diǎn)，但對(duì)人畜皆有劇毒。能達(dá)到滅菌的效果的酒精濃度通常是70-80%,常用的是75%,酒精濃度過(guò)高，用其滅菌對(duì)大麻種子發(fā)芽率影響很大，特別是去除種皮和內(nèi)種皮后的大麻種子，應(yīng)用其進(jìn)行滅菌后，會(huì)造成不可逆的傷害；升汞毒性大并具有腐蝕性，不能接觸金屬物，操作過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格防護(hù)，對(duì)操作人員要求極高，且其在種子滅菌過(guò)程中對(duì)種子的傷害也不可避免，更不能直接用于去除種皮的工業(yè)大麻種子；本發(fā)明只采用了0.2%的次氯酸鈉進(jìn)行滅菌，對(duì)種子幾乎不會(huì)造成任何傷害。附圖說(shuō)明[0021]圖1為實(shí)施例1中清水浸泡后的種子；成熟種子浸泡后胚根頂破種皮；[0022]圖2為實(shí)施例1中剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮后的發(fā)芽種子；[0023]圖3為實(shí)施例1中外種皮和內(nèi)種皮后的種子在幾種滅菌處理后的發(fā)芽情況；[0024]圖4為實(shí)施例1中挑選的0.2%次氯酸鈉處理后無(wú)菌的發(fā)芽種子；[0025]圖5為實(shí)施例1中獲得的無(wú)菌實(shí)生苗。具體實(shí)施方式[0026]本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式，還包括各具體實(shí)施方式間的任意合理組合。[0027]具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法按照以下步驟進(jìn)行：[0029]挑選成熟、完整飽滿、無(wú)病蟲(chóng)侵害、有光澤的工業(yè)大麻種子，種子凈度達(dá)到100%,純度達(dá)到100%,發(fā)芽率達(dá)到99%以上；6[0031]用清水浸泡直至種子頂破種皮露出白色胚根后剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮；種子浸泡時(shí)間一般為24-48小時(shí)，根據(jù)環(huán)境溫度適當(dāng)調(diào)整；[0033]將剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮的工業(yè)大麻種子放入裝有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的次氯酸鈉的三角瓶中進(jìn)行滅菌處理，滅菌時(shí)間總計(jì)30～35分鐘；滅菌分3次處理，每隔10-12分鐘更換1次新的次氯酸鈉，滅菌處理過(guò)程中搖動(dòng)三角瓶以達(dá)到滅菌徹底的效果；滅菌處理后用無(wú)菌水沖洗種子3-4遍，將發(fā)芽種子表面的次氯酸鈉沖洗干凈；[0035]將MS固體培養(yǎng)基滅菌后分裝入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固冷卻后將滅菌完成的種子接種到皿中，培養(yǎng)皿用報(bào)紙包裹后，放于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)2-3[0037]將無(wú)菌的發(fā)芽種子轉(zhuǎn)移到裝有MS固體培養(yǎng)基的容器中繼續(xù)培養(yǎng)，發(fā)芽種子播種密度和容器體積以不影響工業(yè)大麻植株生長(zhǎng)為宜，培養(yǎng)10-15天，得到無(wú)菌實(shí)生苗；獲得的無(wú)菌實(shí)生苗根系強(qiáng)壯，生長(zhǎng)良好，不需馴化煉苗，可直接出瓶，用做組織培養(yǎng)中的無(wú)菌外植體來(lái)源，用于工業(yè)大麻組織培養(yǎng)、遺傳轉(zhuǎn)化以及工廠化育苗等。[0039]將無(wú)菌實(shí)生苗直接移栽，或?qū)o(wú)菌實(shí)生苗擴(kuò)繁生根后進(jìn)行移栽。[0040]本實(shí)施方式種子先浸泡種子至胚根頂破種皮后去除外種皮和內(nèi)種皮，只將完全展開(kāi)、裸露的子葉以及胚軸、胚根進(jìn)行滅菌，低濃度的次氯酸鈉對(duì)種子發(fā)芽基本無(wú)傷害，種子發(fā)芽率100%,長(zhǎng)勢(shì)好，滅菌率達(dá)到90-100%。[0041]具體實(shí)施方式二：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一不同的是：步驟四所述培養(yǎng)條件為：溫度我25℃,濕度為40-50%,光照強(qiáng)度為2000-2500Lux,16h光照/8h黑暗。[0042]具體實(shí)施方式三：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一或二不同的是：步驟五所述容器[0043]具體實(shí)施方式四：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至三之一不同的是：步驟五所述培養(yǎng)條件為：溫度為25℃,濕度為40-50%,光照強(qiáng)度為4000-5000Lux,16h光照/8h黑暗。[0044]具體實(shí)施方式五：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至四之一不同的是：步驟六所述移栽方法為：選擇株型完整、莖稈粗壯、根系完整的無(wú)菌實(shí)生苗移栽，出瓶時(shí)將培養(yǎng)基與無(wú)菌實(shí)生苗一起取出，洗凈根部的培養(yǎng)基和瓊脂，轉(zhuǎn)移到裝有基質(zhì)的盆中，基質(zhì)需要提前滅菌；所述基質(zhì)由粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭組成；粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭的質(zhì)量比為0.15:0.35:0.5;所述基質(zhì)的滅菌方法為：在121℃的高壓鍋中濕熱滅菌30-40分鐘。[0045]具體實(shí)施方式六：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式一至五之一不同的是：步驟四和五中所述MS固體培養(yǎng)基中含有的營(yíng)養(yǎng)元素包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有機(jī)物，每基含有18-20g瓊脂粉。[0046]具體實(shí)施方式七：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式六不同的是：所述大量元素為KNO?、7[0047]具體實(shí)施方式八：本實(shí)施方式與具體實(shí)施方式七不同的是：所述培養(yǎng)基中大量元L,H?BO?:0.0062g/L,KI:0.00083g/L,Na?Mn04·2H?0:0.00025g/L,CuSO?·5H?0:[0049]所述培養(yǎng)基中鐵鹽的含量為：Na?-EDTA:0.037g/L和FeSO?·7H[0050]所述培養(yǎng)基中有機(jī)物的含量為：甘氨酸：0.0001g/L,鹽酸吡哆醇：0.00025g/L,鹽[0051]所述鐵鹽的配置方法：將FeSO?·7H20和Na?-EDTA·2H?0分別稱好，分別放到餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使溶解，然后將兩種溶液混合，并將pH調(diào)至5.5,加熱至沸騰，當(dāng)顏色變深黃色后，定容到1L,保存在棕色玻璃瓶中。[0052]實(shí)施例1:[0053]本實(shí)施例工業(yè)大麻無(wú)菌實(shí)生苗繁育方法按照以下步驟進(jìn)行：[0055]挑選成熟、完整飽滿、無(wú)病蟲(chóng)侵害、有光澤的工業(yè)大麻種子，種子凈度達(dá)到100%,純度達(dá)到100%,發(fā)芽率達(dá)到99%以上；[0057]用清水浸泡直至種子頂破種皮露出白色胚根后剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮；[0058]所述種子浸泡時(shí)間為36小時(shí)，根據(jù)環(huán)境溫度適當(dāng)調(diào)整；[0060]將剝?nèi)ネ夥N皮和內(nèi)種皮的工業(yè)大麻種子放入裝有質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%的次氯酸鈉的100ml三角瓶中進(jìn)行滅菌處理，滅菌時(shí)間總計(jì)30分鐘；滅菌分3次處理，每隔10分鐘更換1次新的次氯酸鈉，滅菌處理過(guò)程中搖動(dòng)三角瓶以達(dá)到滅菌徹底的效果；滅菌處理后用無(wú)菌水沖洗種子4遍，將發(fā)芽種子表面的次氯酸鈉沖洗干凈；[0062]將MS固體培養(yǎng)基滅菌后分裝入培養(yǎng)皿中，待培養(yǎng)基凝固冷卻后將滅菌完成的種子接種到皿中，培養(yǎng)皿用報(bào)紙包裹后，放于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)3天，得到無(wú)菌的發(fā)芽種[0063]步驟四所述培養(yǎng)條件為：溫度我25℃,濕度為45%,光照強(qiáng)度為2500Lux,16h光照/[0065]將無(wú)菌的發(fā)芽種子轉(zhuǎn)移到裝有MS固體培養(yǎng)基的容器中繼續(xù)培養(yǎng)，發(fā)芽種子播種密度和容器體積以不影響工業(yè)大麻植株生長(zhǎng)為宜，培養(yǎng)15天，得到無(wú)菌實(shí)生苗；獲得的無(wú)菌實(shí)用于工業(yè)大麻組織培養(yǎng)、遺傳轉(zhuǎn)化以及工廠化育苗等。[0066]步驟五所述容器為組培瓶；[0067]步驟五所述培養(yǎng)條件為：溫度為25℃,濕度為45%,光照強(qiáng)度為4500Lux,16h光照/8[0069]將無(wú)菌實(shí)生苗直接移栽，或?qū)o(wú)菌實(shí)生苗擴(kuò)繁生根后進(jìn)行移栽；[0070]步驟六所述移栽方法為：選擇株型完整、莖稈粗壯、根系完整的無(wú)菌實(shí)生苗移栽，出瓶時(shí)將培養(yǎng)基與無(wú)菌實(shí)生苗一起取出，洗凈根部的培養(yǎng)基和瓊脂，轉(zhuǎn)移到裝有基質(zhì)的盆[0071]所述基質(zhì)由粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭組成；粗椰糠、細(xì)椰糠和泥炭的質(zhì)量比為0.15:[0072]所述基質(zhì)的滅菌方法為：在121℃的高壓鍋中濕熱滅菌40分鐘；[0073]移栽后管理：移植好的盆栽苗需要進(jìn)行覆膜處理，先放于培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)條件為：溫度為24-25℃,濕度為65-70%,光照強(qiáng)度為4000-5000Lux、16h光照/8h黑暗條件下培養(yǎng)7天左右將覆蓋的膜揭開(kāi)，繼續(xù)培養(yǎng)7天左右，有新葉長(zhǎng)出，可轉(zhuǎn)移到室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)，然后按照常規(guī)方法管理即可。[0074]步驟四和五中所述培養(yǎng)基中含有的營(yíng)養(yǎng)元素包括大量元素、微量元素、鐵鹽和有[0076]所述培養(yǎng)基中大量元素的含量為：KNO?:1.9g/L,NH?NO?:1.65g/L,MgSO?·7H?0:0.37g/L,KH?PO?:0.17/L,CaCl?·[0077]所述微量元素為MnSO?·4H?0、ZnSO4·7H?0、H?BO?、KI、Na?Mn04·2H?0、CuSO?·[0078]所述培養(yǎng)基中微量元素的含量為：MnSO?·4H?0:0.023g/L,ZnSO4·7H?0:0.0086g/L,H?BO?:0.0062g/L,KI:0.00083g/L,Na?Mn04·2H?0:0.00025g/L,CuSO?·5H?0:[0080]所述培養(yǎng)基中鐵鹽的含量為：Na?-EDTA:0.037g/L和FeSO?·7H?0:0.0278g/L;[0082]所述培養(yǎng)基中有機(jī)物的含量為：甘氨酸：0.0001g/L,鹽酸吡哆醇：0.00025g/L,鹽[0083]所述鐵鹽的配置方法：將FeSO?·7H20和Na?-EDTA·2H?0分別稱好，分別放到餾水中，邊加熱邊不斷攪拌使溶解