ICS65.020.01CCSB05DB21TechnicalregulationontissuecultureofPadusvirginiana遼寧省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB21/T3610—2022前言 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14外植體采集與處理 25培養(yǎng)基配制 26外植體消毒 37培養(yǎng)條件 38組織培養(yǎng) 39溫室煉苗與馴化 3 4 4附錄A（資料性）紫葉稠李生物學(xué)特性 5附錄B（資料性）常用植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)配制方法 6IDB21/T3610—2022本文件依據(jù)GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件得結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》給出的規(guī)則編寫。本文件由遼寧省林業(yè)和草原局提出并歸口管理。本文件起草單位：遼寧省沙地治理與利用研究所。本文件主要起草人：王斯彤、曹宇、王曼、成文博、金星、遲琳琳、王帝灃、張柏習(xí)、王浩、劉淑玲、李紅、艾婷婷、陳江燕、白雪峰、劉建華、安宇寧、石亮、張日升、韓輝、王賀秋、尚健。本文件發(fā)布實(shí)施后，任何單位和個(gè)人如有問題和意見建議，均可以通過來電和來函等方式進(jìn)行反饋，我們將及時(shí)答復(fù)并認(rèn)真處理，根據(jù)實(shí)際情況依法進(jìn)行評(píng)估及復(fù)審。歸口管理部門通訊地址：遼寧省林業(yè)和草原局（沈陽市和平區(qū)太原北街2號(hào)），聯(lián)系電話文件起草單位通訊地址：遼寧省沙地治理與利用研究所（阜新市細(xì)河區(qū)中華路東段55號(hào)聯(lián)系電話DB21/T3610—20221紫葉稠李組培快繁技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了紫葉稠李（Padusvirginiana）組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)方法，具體包括外植體的采集與處理、培養(yǎng)基的配制、組織培養(yǎng)程序等技術(shù)和要求。本文件適用于遼寧省范圍內(nèi)紫葉稠李的組培快繁育苗。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/TLY/TLY/TNY/T6001-19852306-2013育苗技術(shù)規(guī)程容器育苗技術(shù)林木組織培養(yǎng)育苗技術(shù)規(guī)程花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1紫葉稠李Padusvirginiana為薔薇科（Rosaceae）稠李屬（Padus）落葉喬木。生物學(xué)特性參見附錄A。3.2外植體explant用于植物組織培養(yǎng)的離體植物器官、組織、細(xì)胞以及原生質(zhì)體。3.3母液stocksolution按照培養(yǎng)基配方將培養(yǎng)基的成分配制成一定濃度和比例的溶液或混合溶液。3.4初代培養(yǎng)primaryculture將經(jīng)滅菌處理的外植體接種于瓊脂培養(yǎng)基上，誘導(dǎo)出愈傷組織或芽的培養(yǎng)過程。DB21/T3610—202213.5繼代培養(yǎng)subculture外植體經(jīng)初代培養(yǎng)后，再次以及以后各次接種于新培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)的過程。3.6生根培養(yǎng)rootingculture誘導(dǎo)無根試管苗產(chǎn)生根的過程。4外植體采集與處理4.1外植體采集外植體的采集一般在6月中旬，選擇優(yōu)良母樹當(dāng)年生莖段作為外植體，采集宜在晴天進(jìn)行，宜隨采隨用，若需長途運(yùn)輸，需將外植體保存在裝有冰塊放入保鮮盒中。4.2外植體處理將采集的外植體枝條進(jìn)行如下處理：剪除枝條上的葉片，并將其剪成長約2cm～3cm的帶腋芽（頂芽）莖段，放入燒杯中用洗衣粉或洗潔精浸泡5min，流水沖洗2h～3h，再用蒸餾水沖洗2次，轉(zhuǎn)至超凈工作臺(tái)上備用。5培養(yǎng)基配制5.1MS培養(yǎng)基母液配制MS培養(yǎng)基母液配制注意如下事項(xiàng)。a)母液配制使用蒸餾水。b)配制大量元素母液時(shí)，每個(gè)組分單獨(dú)溶解，避免沉淀發(fā)生。c)配制后的母液應(yīng)置于4℃冰箱中冷藏保存，微量元素母液用棕色瓶盛裝保存，母液配制后應(yīng)貼好標(biāo)簽，注明名稱、配制日期并及時(shí)使用，貯存時(shí)間不宜超過3個(gè)月，發(fā)現(xiàn)有沉淀或絮狀物出現(xiàn)應(yīng)停止使用。5.2植物生長調(diào)節(jié)物劑母液配制植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)母液的配制濃度為0.1mg/mL～1.0mg/mL，其配制方法參見附錄B。母液配制好后貼好標(biāo)簽并置于4℃冰箱中冷藏，保存期不超過3個(gè)月。5.3培養(yǎng)基制作培養(yǎng)基的制作按LY/T1882中4.2中執(zhí)行。培養(yǎng)基配制參考用量見附錄B。5.4培養(yǎng)基滅菌培養(yǎng)基滅菌按LY/T1882中4.2執(zhí)行5.5培養(yǎng)基保存DB21/T3610—20223滅菌后的培養(yǎng)基應(yīng)注明編號(hào)及配制日期，同時(shí)按培養(yǎng)基種類、配制先后順序分別儲(chǔ)存于接種室或培養(yǎng)室。存儲(chǔ)時(shí)間不宜超過2周。5.6培養(yǎng)基配方初代培養(yǎng)：MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L或MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L；繼代培養(yǎng)：MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.08mg/L；生根培養(yǎng)：MS+NAA0.5mg/L。6外植體消毒在超凈工作臺(tái)上，用0.1%的Hgcl2消毒液浸泡頂芽部分1min～3min，腋芽部分2min～5min，用無菌水沖洗5次~7次，再用無菌濾紙吸干水分后，最后剪成1.5cm~2.5cm的單芽莖段備用。7培養(yǎng)條件培養(yǎng)室內(nèi)溫度為25±2℃,光照強(qiáng)度為2000Lx，光照時(shí)間為每天12h～16h。8組織培養(yǎng)8.1初代培養(yǎng)將已消毒的外植體接種在初代培養(yǎng)基上，接種操作參照NY/T2306中10.5執(zhí)行。用記號(hào)筆在培養(yǎng)瓶上注明接種日期、編號(hào)或名稱，放至培養(yǎng)室進(jìn)行培養(yǎng)。10d～15d后芽開始萌發(fā)，20d左右莖尖變綠并伸長生長，莖段腋芽萌發(fā)新芽，誘導(dǎo)30d左右可獲得1cm～2cm的新芽。8.2繼代培養(yǎng)將初代培養(yǎng)誘導(dǎo)形成的幼芽或叢生芽，接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。增殖培養(yǎng)周期為30d～40d。8.3生根培養(yǎng)選取壯苗高2cm～3cm的幼苗，接種于生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)。9溫室煉苗與馴化9.1煉苗生根培養(yǎng)2～3周后，選取葉片綠色、株高大于3cm，根長1.5cm～2.5cm，須根柔軟且不少于3條的無菌苗，將組培苗置于溫室自然散射光下，封口煉苗2d～3d，溫度范圍在18℃~28℃。9.2馴化馴化基質(zhì)為細(xì)河沙、珍珠巖與草炭土比例為1:1:1，并加入0.5g/L的多菌靈攪拌均勻，然后裝入穴盤中壓緊待用。將無菌苗從培養(yǎng)容器中取出，將根部粘附的瓊脂用清水（或用0.01%高錳酸鉀）清洗干凈，移到營養(yǎng)缽中，用基質(zhì)將根埋好，澆水，覆膜，在膜上扎幾個(gè)透氣小孔。每天用細(xì)霧噴壺噴水，使環(huán)境濕度保持在90%左右。外面用遮陽網(wǎng)罩著，避免陽光直射。當(dāng)發(fā)現(xiàn)小苗基部或基質(zhì)上出現(xiàn)白色絮狀菌絲時(shí)，用多菌靈液噴灑基質(zhì)。馴化時(shí)間為2周～3周。DB21/T3610—202239.3移栽經(jīng)過馴化后，當(dāng)苗木表現(xiàn)為葉色深綠、葉片增大、有新葉長出時(shí)，將苗木移栽至12cm×12cm相同基質(zhì)的營養(yǎng)缽中培養(yǎng)。9.4苗期管理a)水肥管理移栽后，每天向葉面噴水1次，在遮陰且通風(fēng)條件下培養(yǎng)。1周后，撤掉遮蔭，注意通風(fēng)。施肥管理參照GB/T6001執(zhí)行。b)病蟲害防治當(dāng)發(fā)生紅蜘蛛危害時(shí)，可噴施500倍～1000倍的樂果稀釋液防治。翌年春季移栽至圃地。容器苗的定植參考LY/T1000執(zhí)行。11檔案管理每批移栽馴化的苗木都要配有標(biāo)簽，并建立管理檔案，按LY/T1000執(zhí)行。DB21/T3610—20225紫葉稠李生物學(xué)特性紫葉稠李（Padusvirginiana）為薔薇科落葉喬木，樹高可達(dá)7m。樹皮灰褐色，小枝紫紅色，有光澤。單葉互生，葉緣有鋸齒，近葉片基部有2腺體。葉質(zhì)地較厚，葉片長橢圓形至倒卵形，先端漸尖，鋸齒較稠李尖銳，初生葉為綠色，進(jìn)入5月后隨著溫度升高，逐漸由綠色轉(zhuǎn)至紫紅色，葉背脈腋白色簇毛變淡褐色，整個(gè)葉背有白粉，秋后變成紅色。紫葉稠李為總狀花序，花白色，花期4～5月。核果，果實(shí)為球形，較大，徑約1～11.2cm，果皮光亮，果熟期7～8月。隨著果實(shí)逐漸成熟，果色由淺綠到淡黃再到橘紅