生物制藥純化技術(shù)員崗位招聘考試試卷及答案填空題（每題1分，共10分）1.衡量層析柱分離效率的核心指標(biāo)是______2.單克隆抗體純化常用的親和層析配基是______3.除菌過濾常用的濾膜孔徑為______μm4.緩沖液pH值通常用______調(diào)節(jié)（酸堿溶液）5.蛋白純度檢測常用方法是______（SDS/HPLC）6.純化記錄需具備______性以確保產(chǎn)品可追溯7.帶正電的蛋白會結(jié)合到______型離子交換樹脂上8.病毒滅活常用方法包括低pH處理和______（溶劑-洗滌劑法）9.收率是目標(biāo)蛋白總活性與______的比值10.疏水相互作用層析（HIC）常用高鹽緩沖液是______（硫酸銨溶液）單項選擇題（每題2分，共20分）1.以下屬于親和層析的是？A.ProteinA層析B.DEAE層析C.CM層析D.凝膠過濾層析2.除菌過濾濾膜材質(zhì)一般不包括？A.PESB.尼龍C.PVDFD.玻璃纖維3.可檢測蛋白純度的方法是？A.紫外280nm（測濃度）B.SDSC.凱氏定氮法D.滲透壓測定4.GMP中純化工藝驗證的核心是？A.成本控制B.速度快C.工藝重現(xiàn)性D.設(shè)備數(shù)量5.陰離子交換樹脂的功能基團(tuán)是？A.季銨基B.羧甲基C.磺酸基D.羥基6.低pH病毒滅活的常用pH范圍是？A.2.0-3.0B.3.0-4.0C.4.0-5.0D.5.0-6.07.凝膠過濾中分子量小的蛋白會？A.先流出B.后流出C.同時流出D.不確定8.與緩沖液緩沖能力無關(guān)的是？A.緩沖對濃度B.pH與pKa差值C.溶液體積D.溫度9.上樣量通常不超過層析柱的？A.動態(tài)結(jié)合載量B.靜態(tài)結(jié)合載量C.10倍柱體積D.任意量10.導(dǎo)致柱效下降的情況是？A.樣品過濾充分B.填料壓縮過度C.緩沖液pH穩(wěn)定D.流速合適多項選擇題（每題2分，共20分）1.純化常用層析技術(shù)包括？A.親和層析B.離子交換層析C.凝膠過濾層析D.HIC2.除菌過濾關(guān)鍵要求包括？A.完整性測試B.無菌操作C.0.45μm濾膜D.壓力穩(wěn)定3.蛋白濃度檢測方法有？A.BCA法B.SDSC.Bradford法D.紫外280nm法4.GMP對純化記錄的要求是？A.真實B.準(zhǔn)確C.完整D.可追溯5.有效病毒滅活方法有？A.低pH處理B.溶劑-洗滌劑法C.納米過濾D.100℃加熱6.緩沖液配制注意事項包括？A.試劑純度B.準(zhǔn)確測pHC.任意溶解順序D.過濾除菌7.離子交換層析洗脫方式有？A.改變pHB.改變鹽濃度C.改變緩沖液類型D.改變流速8.凝膠過濾層析應(yīng)用包括？A.分子量測定B.脫鹽C.去除聚集體D.蛋白濃縮9.純化工藝驗證內(nèi)容包括？A.重現(xiàn)性B.關(guān)鍵參數(shù)范圍C.雜質(zhì)去除D.收率穩(wěn)定性10.純化關(guān)鍵控制點（CCP）包括？A.柱效B.緩沖液pHC.濾膜完整性D.病毒滅活條件判斷題（每題2分，共20分）1.凝膠過濾中分子量越大的蛋白越先流出。（√）2.ProteinA可純化所有蛋白。（×）3.0.22μm濾膜可去除所有微生物。（×）4.pH越接近pKa，緩沖能力越強(qiáng)。（√）5.陽離子交換樹脂結(jié)合帶負(fù)電蛋白。（×）6.GMP要求純化每一步都記錄。（√）7.HIC高鹽結(jié)合、低鹽洗脫。（√）8.溶劑-洗滌劑法可去除所有病毒。（×）9.柱效越高，分離效果越好。（√）10.HPLC-SEC可檢測蛋白聚集體。（√）簡答題（每題5分，共20分）1.簡述ProteinA親和層析純化單抗的原理。答案：ProteinA特異性結(jié)合單抗的Fc段。含單抗樣品上樣后，單抗結(jié)合填料，雜蛋白流穿；用低pH緩沖液（如pH3.0-4.0檸檬酸）破壞結(jié)合，收集洗脫峰得純化單抗；最后用高pH緩沖液再生填料。2.簡述除菌過濾完整性測試的方法及目的。答案：常用氣泡點法、擴(kuò)散流法。原理：濕潤濾膜后施加壓力，氣泡通過最大孔徑的壓力與孔徑成反比。目的是驗證濾膜無破損，確保產(chǎn)品無菌，符合GMP要求，記錄結(jié)果作為驗證依據(jù)。3.簡述離子交換層析緩沖液pH選擇原則。答案：①陰離子交換樹脂：pH高于目標(biāo)蛋白pI（使蛋白帶負(fù)電）；②陽離子交換樹脂：pH低于目標(biāo)蛋白pI（使蛋白帶正電）；③pH在緩沖液有效范圍（pKa±1）；④避免蛋白變性的pH范圍。4.簡述純化收率的常用計算方法。答案：①活性收率：（純化后總活性×體積）÷（純化前總活性×體積）×100%（需活性檢測）；②蛋白含量收率：（純化后總量×體積）÷（純化前總量×體積）×100%（需濃度檢測）。收率需結(jié)合純度、雜質(zhì)去除綜合評價。討論題（每題5分，共10分）1.如何在保證純度的前提下提高收率？答案：①優(yōu)化層析條件：調(diào)整上樣量（≤動態(tài)載量）、洗脫梯度（平緩）；②選高載量填料（如ProteinA）；③精準(zhǔn)控制洗脫pH（避免過度/不足）；④樣品預(yù)處理（過濾/離心除沉淀）；⑤過程監(jiān)控（實時檢測流穿/洗脫峰）；⑥驗證關(guān)鍵參數(shù)范圍（pH、鹽濃度）。2.層析柱柱效下降的原因及解決方法？答案：原因：①填料污染（雜質(zhì)吸附）；②填料壓縮（流速快/長期使用）；③緩沖液不當(dāng)（pH波動/鹽濃度高）；④樣品未過濾（顆粒堵塞）。解決：①清洗（高鹽/去污劑）或再生；②重新裝柱；③優(yōu)化緩沖液；④上樣前0.45μm過濾；⑤定期用標(biāo)準(zhǔn)蛋白測柱效。答案匯總填空題1.理論塔板數(shù)2.ProteinA3.0.224.HCl/NaOH5.SDS（或HPLC）6.可追溯7.陰離子交換8.溶劑-洗滌劑法9.上樣總活性10.硫酸銨溶液單項選擇題1.A2.D3.B4.C5.A6.B7.B8.