1.認識紫外-可見分光光度法紫外-可見分光光度法介紹01目視比色法起源與應(yīng)用

目視比色法起源約公元60年，老普林尼用目視比色法驗證鐵離子。目視比色法現(xiàn)代應(yīng)用現(xiàn)代應(yīng)用包括pH試紙、甲醛檢測盒、家庭懷孕檢測盒等。分光光度法發(fā)展分光光度法發(fā)展20世紀60年代后，精度更高的分光光度法逐漸替代比色法。紫外-可見分光光度法定義

紫外-可見分光光度法定義基于物質(zhì)對紫外光（200~400nm）和可見光（400~760nm）的選擇性吸收，實現(xiàn)定性與定量分析。物質(zhì)顏色的產(chǎn)生02光的性質(zhì)

復(fù)合光的定義由不同波長的光組合而成，如太陽光、燈光。

單色光的定義具有單一波長的光，如不同顏色的激光。

互補光的概念兩種不同顏色的單色光按一定強度比例混合得到白光?；パa光黃綠紫黃藍橙青藍紅青紫紅綠紫黃綠藍黃青藍橙青紅物質(zhì)顏色成因物質(zhì)顏色的產(chǎn)生原理物質(zhì)對可見光區(qū)域的光選擇性吸收后呈現(xiàn)出互補光的顏色。高錳酸鉀溶液顏色示例高錳酸鉀溶液呈紫紅色，因吸收了其互補色綠色。物質(zhì)顏色與吸收光波長關(guān)系物質(zhì)顏色與吸收光的對應(yīng)關(guān)系，如高錳酸鉀吸收525nm波長的綠色光。光的吸收定律03光的吸收相關(guān)定義入射光、吸收光、透過光關(guān)系入射光I?等于吸收光I?與透過光I?之和。透光率定義透光率T為透過光I?與入射光I?的比值乘以100%。吸光度計算吸光度A等于負對數(shù)透光率，與透光率成反比。朗伯-比爾定律

朗伯-比爾定律內(nèi)容吸光度A與溶液濃度c及液層厚度L成正比。

成立條件需平行單色光、溶液均勻無散射、條件恒定。

定量分析理論依據(jù)是分光光度法定量分析的理論基礎(chǔ)。A=KcLK：吸光系數(shù)吸光度的加和性

吸光度加和性定義溶液的吸光度等于各吸光性物質(zhì)吸光度總和。

多組分溶液分析適用于多組分溶液的定量分析。A（a+b+c）=Aa+Ab+Ac吸光系數(shù)吸光系數(shù)性質(zhì)吸光系數(shù)是物質(zhì)的物理常數(shù)，與濃度標度有關(guān)。摩爾吸光系數(shù)ε摩爾吸光系數(shù)ε單位為L/(mol·cm)與摩爾質(zhì)量相關(guān)。百分吸光系數(shù)百分吸光系數(shù)單位為ml/(g·cm)與質(zhì)量濃度相關(guān)。吸收強度判斷ε值在10?~10?為強吸收，小于102為弱吸收。吸收光譜04吸收光譜定義

定義溶液濃度、液層厚度一定時，以波長為橫坐標，對應(yīng)吸光度為縱坐標繪制的曲線關(guān)鍵參數(shù)及特征吸收光譜特性吸收光譜圖形相似性同一物質(zhì)不同濃度在相同條件下的吸收光譜圖形相似，最大吸收波長相同定性分析和結(jié)構(gòu)分析依據(jù)同一物質(zhì)最大吸收波長相同，是定性分析和結(jié)構(gòu)分析的依據(jù)2.紫外-可見分光光度法分析條件選擇儀器測量條件選擇01檢測波長選擇

最佳選擇：最大吸收波長最大吸收波長（λmax）是定量分析的最佳工作波長，對光的吸收靈敏度最高，相對誤差??；曲線平緩，吸光系數(shù)變化小，偏離吸收定律程度小。

干擾情況處理當(dāng)最大吸收波長處存在干擾時，可選擇另外的吸收峰或肩峰。例如，分析鈷配合物時，最大吸收波長處受顯色劑干擾，可選擇肩峰作為工作波長。讀數(shù)范圍調(diào)整最佳范圍：吸光度0.2~0.8為使?jié)舛葴y量的相對誤差較小，吸光度應(yīng)保持在0.2~0.8的范圍。調(diào)整方法吸光度過大時，應(yīng)稀釋溶液；吸光度過小時，應(yīng)使用光程更大的比色皿。顯色反應(yīng)條件選擇02顯色反應(yīng)理想條件

顯色劑選擇性好顯色劑應(yīng)具有良好的選擇性，干擾少，以確保反應(yīng)的特異性。

生成物摩爾吸光系數(shù)高生成物的摩爾吸光系數(shù)ε應(yīng)大于或等于10?，以提高檢測靈敏度。

顏色對比度大顯色劑顏色與生成物顏色對比度要大，最大吸收波長之差應(yīng)超過60nm。

生成物組成恒定穩(wěn)定生成物的組成應(yīng)恒定，性質(zhì)穩(wěn)定，以保證測定結(jié)果的可靠性。具體條件選擇

顯色劑用量控制根據(jù)顯色反應(yīng)的穩(wěn)定性，顯色劑用量需精準控制或可在一定范圍內(nèi)選擇。

溶液酸度適宜考慮酸效應(yīng)，選擇適宜的pH值，以獲得最佳顯色效果。

顯色時間確定通過繪制顯色時間與吸光度曲線，確定吸光度穩(wěn)定的合適時間。

溶劑選擇選擇有機溶劑以降低有色物質(zhì)的解離度，提高靈敏度。比色皿配套要求

石英比色皿透光率石英比色皿在220nm處，透光率之差應(yīng)控制在±0.5%以內(nèi)。

玻璃比色皿透光率玻璃比色皿在440nm處，透光率之差應(yīng)控制在±0.5%以內(nèi)。參比溶液選擇03選擇依據(jù)吸光度加和性原理通過參比溶液消除背景吸收，確保吸光度測量準確性。消除背景吸收使用參比溶液來消除除待測離子外的其他背景吸收。常見參比溶液類型溶劑參比適用于僅含溶劑和試樣的待測溶液，參比溶液為溶劑。試劑參比適用于含溶劑、其他試劑和顯色劑的待測溶液，參比溶液為溶劑+其他試劑+顯色劑。試樣參比適用于基質(zhì)復(fù)雜且干擾測定的待測溶液，參比溶液為溶劑+顯色劑+去除待測離子的試樣。平行操作參比適用于經(jīng)過復(fù)雜前處理的待測溶液，參比溶液為進行同步前處理的空白液。3.紫外-可見分光光度法的應(yīng)用定性分析方法01比較吸收光譜一致性吸收光譜特征對比對比吸收光譜的形狀、肩峰、吸收峰數(shù)目、峰位和吸光系數(shù)。測定條件需保持一致，以確保數(shù)據(jù)的可比性。吸收光譜不一致吸收光譜不一致時，表明不是同一種化合物。吸收光譜相同需進一步分析吸收光譜相同，并不能完全確定是同一種化合物。比較吸收光譜特征數(shù)據(jù)最大吸收波長對比對比最大吸收波長及其對應(yīng)的吸光系數(shù)。實例分析氟胞嘧啶片在286nm有最大吸收，在245nm有最小吸收。雜質(zhì)檢查方法供試品與標準光譜比較將供試品吸收光譜與標準吸收光譜進行比較。供試品與藥典值比較將供試品吸收光譜與藥典的值進行比較。雜質(zhì)檢定實例如甲醇中雜質(zhì)苯的檢定，乙醇在特定波長處吸光度的規(guī)定。定量分析方法02單組分溶液定量方法

吸光系數(shù)法操作：查手冊得吸光系數(shù)，相同條件下測試樣吸光度，按公式計算濃度。

標準對比法操作：配制標準溶液和試樣溶液，在最大吸收波長處測吸光度，通過兩式相除計算濃度。

標準曲線法原理：固定比色皿光程L，吸收定律為A=KC，以濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標繪制標準曲線。標準曲線法測定步驟：

01

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03

04配制標準系列：用標準物質(zhì)配制一系列不少于5種不同濃度的標準溶液。測定標準系列的吸光度：選擇合適的參比溶液，用最大吸收波長測定標準溶液吸光度繪制標準曲線：以濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標繪制標準曲線。確定供試品溶液濃度：按照相同實