1.認(rèn)識(shí)薄層色譜法薄層色譜法簡(jiǎn)介01定義薄層色譜法:將固定相涂布于平板上，通過(guò)點(diǎn)樣、展開(kāi)與顯色進(jìn)行色譜分離分析的方法。特點(diǎn)

分離能力強(qiáng)對(duì)分離物質(zhì)的性質(zhì)沒(méi)有限制，能有效分離多種物質(zhì)。

靈敏度高能夠檢出幾微克甚至幾十納克的物質(zhì)，具有很高的檢測(cè)靈敏度。

展開(kāi)時(shí)間短一般只需十至十幾分鐘，快速高效。

上樣量大可以點(diǎn)成點(diǎn)狀或帶狀，上樣量較大。

操作方便使用儀器簡(jiǎn)單，一次可同時(shí)上樣幾十種，操作簡(jiǎn)便。應(yīng)用

藥品分析應(yīng)用在藥品的鑒別、檢查及含量測(cè)定中廣泛應(yīng)用。吸附薄層色譜的應(yīng)用最為廣泛，故本章主要討論吸附薄層色譜法。薄層色譜法分配薄層色譜法吸附薄層色譜法離子交換薄層色譜法分子排阻薄層色譜法薄層色譜法分類(lèi)吸附薄層色譜法02簡(jiǎn)介定義

吸附薄層色譜法的固定相是吸附劑。將吸附劑均勻涂布于光滑表面的玻璃板，塑料板或鋁板表面上形成薄層，稱(chēng)為薄層板或薄板。分類(lèi)

是薄層色譜法中應(yīng)用最廣泛的一種。薄層板

吸附劑涂布于板上將氧化鋁、硅膠等吸附劑均勻涂布于玻璃板、塑料板或鋁板表面。

形成均勻薄層在光滑表面上形成均勻的薄層?；驹順悠啡芤狐c(diǎn)樣將樣品溶液點(diǎn)在薄層板一端。展開(kāi)劑展開(kāi)用適宜的展開(kāi)劑在密閉容器中展開(kāi)。吸附與解吸附過(guò)程不同極性組分在薄層板上發(fā)生反復(fù)吸附與解吸附。定性參數(shù)比移值定性參數(shù)：相對(duì)比移值相對(duì)比移值2.薄層色譜法操作技術(shù)薄層板01制版要求

吸附劑涂鋪均勻制板要求吸附劑涂鋪均勻，表面光滑，沒(méi)有劃痕，沒(méi)有氣泡，洗凈后不附水珠。

表面光滑無(wú)劃痕薄層板表面應(yīng)光滑，無(wú)劃痕，以確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。

無(wú)氣泡制板過(guò)程中需確保沒(méi)有氣泡，以避免影響薄層板的質(zhì)量和實(shí)驗(yàn)結(jié)果。薄層板分類(lèi)按支撐物質(zhì)分類(lèi)薄層板按支撐物質(zhì)分為玻璃板、塑料板、鋁板等。按固定相種類(lèi)分類(lèi)按照固定相的種類(lèi)，可以分為硅膠薄層板、鍵合硅膠板、聚酰胺薄層板、氧化鋁薄層板等。按固定相粒徑分類(lèi)按固定相粒徑的大小，可以分為普通薄層板，高效薄層板。市售與自制薄層板

市售薄層板種類(lèi)市售薄層板主要包括硅膠薄層板，硅膠GF254薄層板，聚酰胺薄膜、鋁基片薄層板等。

自制薄層板種類(lèi)自制薄層板主要包括不加粘合劑的軟板以及加了粘合劑的硬板。

硬板制備步驟硬板的制備步驟主要包括載板的準(zhǔn)備，勻漿的制備，涂板，活化。硬板制備步驟02載板準(zhǔn)備

載板材料選擇載板一般為玻璃板、塑料板和金屬板，常用玻璃板。

載板尺寸與清潔玻璃板大小根據(jù)操作需要而定，使用前需洗凈烘干。勻漿制備

勻漿成分勻漿主要包括吸附劑和粘合劑，常用硅膠作為吸附劑。

粘合劑選擇粘合劑包括羧甲基纖維素鈉和煅石膏，根據(jù)需要選用。

勻漿制備方法將一份固定相和三份的水或0.5%~1%的羧甲基纖維素鈉溶液混合研磨。涂板與活化

涂板方法涂板方法包括傾注法、平鋪器、機(jī)械涂板法，機(jī)械涂板法操作簡(jiǎn)單。

涂板后處理涂好的薄層板自然晾干或在105~110度加熱0.5~1小時(shí)進(jìn)行活化。

活化后的處理活化后的薄層板冷卻至室溫后備用，可進(jìn)行點(diǎn)樣操作。點(diǎn)樣操作03溶液準(zhǔn)備

01用甲醇、乙醇、氯仿等揮發(fā)性有機(jī)溶劑配制樣品溶液。

02水溶性樣品先用少量水溶解，再用甲醇或乙醇稀釋定容。

03避免用水溶解樣品，因?yàn)樗芤喊唿c(diǎn)易擴(kuò)散且不易揮發(fā)。使用揮發(fā)性有機(jī)溶劑水溶性樣品處理避免使用水作溶劑點(diǎn)樣方法使用玻璃毛細(xì)管或微量注射器用直徑小于一毫米的玻璃毛細(xì)管或微量注射器吸入試樣溶液進(jìn)行點(diǎn)樣。點(diǎn)樣位置與方式點(diǎn)樣前用鉛筆在距薄層板0.5~1厘米處畫(huà)基線，點(diǎn)樣為圓點(diǎn)，直徑2~4毫米。分次多點(diǎn)點(diǎn)樣每次點(diǎn)樣待溶劑揮發(fā)后再進(jìn)行，點(diǎn)樣時(shí)間不超過(guò)10分鐘。點(diǎn)樣注意事項(xiàng)

01點(diǎn)樣時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)使吸附劑在空氣中稀釋而降低活性。

02點(diǎn)樣后可用吹風(fēng)機(jī)吹干，以防止吸附劑活性降低。避免吸附劑活性降低點(diǎn)樣后吹干展開(kāi)過(guò)程04展開(kāi)容器要求使用玻璃質(zhì)展開(kāi)缸展開(kāi)容器應(yīng)為適合薄板大小的玻璃質(zhì)薄層色譜展開(kāi)缸，并有嚴(yán)密的蓋子。底部平整光滑展開(kāi)缸底部應(yīng)平整光滑，或有雙槽設(shè)計(jì)以保證展開(kāi)過(guò)程的順利進(jìn)行。展開(kāi)方式與方法盛行展開(kāi)下行展開(kāi)展開(kāi)的方式主要有盛行展開(kāi)、下行展開(kāi)、近水平展開(kāi)等。點(diǎn)樣板放入展開(kāi)缸點(diǎn)好樣的薄層板放入展開(kāi)缸，進(jìn)入展開(kāi)劑的深度為距離基線0.5厘米為宜。密閉展開(kāi)展開(kāi)過(guò)程必須在密閉的展開(kāi)容器中進(jìn)行，一般情況下展開(kāi)8~15厘米。溶劑前沿標(biāo)記取出薄層板后標(biāo)記溶劑前沿，溶劑揮散后進(jìn)行顯色解釋。顯色與解釋05顯色方法

直接觀察法對(duì)于有色物質(zhì)，直接在日光或燈光下進(jìn)行觀察。

熒光法利用熒光物質(zhì)在紫外燈下的暗斑或熒光斑點(diǎn)進(jìn)行觀察。

化學(xué)顯色法使用顯色劑與被測(cè)物質(zhì)產(chǎn)生顏色變化進(jìn)行檢視。顯色劑分類(lèi)

通用型顯色劑包括碘、高錳酸鉀溶液、硫酸乙醇溶液等。

專(zhuān)屬型顯色劑包括茚三酮試劑、三氯化鐵-鐵氰化鉀試劑等。顯色方式噴霧顯色將顯色劑呈均勻細(xì)霧狀噴灑在薄層板上。浸漬顯色將薄層板一端浸入顯色劑中，待顯色劑擴(kuò)散后顯色。記錄與保存06數(shù)據(jù)記錄保存方式

圖像或電子圖形薄層色譜圖像一般可以采用攝像設(shè)備拍攝，以光學(xué)照片或電子圖形的形式保存。薄層色譜掃描儀也可以用薄層色譜掃描儀或其他示意的方式來(lái)記錄相應(yīng)的色譜圖。3.薄層色譜法定性和定量分析定性分析方法01比移值Rf定性對(duì)照品比較供試品所顯主斑點(diǎn)的顏色（或熒光）與位置（Rf）應(yīng)與對(duì)照品的主斑點(diǎn)一致，而且主斑點(diǎn)的大小與顏色深淺也應(yīng)大致相同，則可初步認(rèn)定供試品與對(duì)照品為同一物質(zhì)。AB基線溶劑前沿A:供試品溶液B:對(duì)照品溶液比移值Rf定性對(duì)照品比較采用供試品溶液與對(duì)照品溶液混合點(diǎn)樣、展開(kāi)，與對(duì)照品相應(yīng)斑點(diǎn)應(yīng)為單一、緊密斑點(diǎn)。AB基線溶劑前沿A:供試品+對(duì)照品混合溶液B:對(duì)照品溶液可采用多種系統(tǒng)展開(kāi)，若供試品主斑點(diǎn)的Rf值及斑點(diǎn)顏色仍與對(duì)照品一致，則可認(rèn)定該樣品與對(duì)照品是同一化合物。該法適用于已知范圍的未知物定性。比移值Rf定性相對(duì)比移值Rs定性與對(duì)照品的Rs值比較定性,

也可與文獻(xiàn)收載的Rs值比較定性。雜質(zhì)檢查主要是雜質(zhì)限量的檢查,一般無(wú)須測(cè)定雜質(zhì)的含量。雜質(zhì)對(duì)照法AB基線溶劑前沿A:供試品溶液B:雜質(zhì)對(duì)照

品溶液適用于雜質(zhì)已知，并且有雜質(zhì)對(duì)照品的藥物。 判斷：供試品溶液如顯與對(duì)照品溶液相應(yīng)的雜質(zhì)斑點(diǎn)，其顏色不得深于對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)。供試品自身稀釋對(duì)照法ABA:供試品溶液B:自身稀釋對(duì)照品溶液基線溶劑前沿判斷：供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，與對(duì)照品溶液所顯主斑點(diǎn)比較,其顏色不得更深。該法適用于雜質(zhì)結(jié)構(gòu)不確定或無(wú)雜質(zhì)對(duì)照品的藥物。 兩法并用當(dāng)藥物中存在多個(gè)雜質(zhì)，其中已知雜質(zhì)有對(duì)照品時(shí)，采用雜質(zhì)對(duì)照品法檢查；共存的未知雜質(zhì)或沒(méi)有對(duì)照品的雜質(zhì)，可采用供試品溶液自身稀釋對(duì)照法檢查。要求：供試品溶液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)不得多于2個(gè)，與雜質(zhì)對(duì)照品溶液相同位置上所顯雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色比較，不得更深，另一雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色與自身稀釋液主斑點(diǎn)比較,不得更深。AB基線溶劑前沿A:供試品溶液C:自身稀釋對(duì)照品溶液CB:雜質(zhì)對(duì)照品溶液定量分析方法02目視定量法

目視比較顏色深淺通過(guò)目視比較供試品斑點(diǎn)與對(duì)照品斑點(diǎn)的顏色深淺，判斷近似含量。

比較斑點(diǎn)面積大小通過(guò)比較供試品斑點(diǎn)與對(duì)照品斑點(diǎn)的面積大小，進(jìn)行近似含量的判斷。洗脫定量法樣品與對(duì)照品展開(kāi)將樣品和