Chemotherapeuticleukopenia標志物初步分析及中藥復方預防方案的Meta分析

目錄

摘要............................................................................I

關鍵詞...........................................................................I

Abstract.......................................................................II

Keywords.....................................................................Ill

前言............................................................................1

第一部分化療性白細胞減少癥標志物的初步分析.....................................2

1材料...........................................................................2

1.1樣本來源..................................................................2

1.2主要儀器設備與試劑........................................................2

2方法...........................................................................3

2.1樣品前處理................................................................3

2.1.1血液樣本..............................................................3

2.1.2組織樣本..............................................................3

2.2UHPLC-Q-TOF-MS檢測條件....................................................3

2.2.1血液樣本..............................................................3

2.2.2組織樣本..............................................................4

2.3數據分析方法..............................................................6

3結果...........................................................................6

3.1血液潛在極性化合物........................................................6

3.2血液潛在非極性化合物......................................................7

3.3組織潛在極性化合物........................................................8

3.4組織潛在非極性化合物......................................................9

4討論..........................................................................13

第二部分化療性白細胞減少癥中藥復方預防方案的薈萃分析.........................13

1資料與方法....................................................................13

1.1納入和排除標準...........................................................13

1.1.1納入標準.............................................................13

1.1.2排除標準.............................................................13

1.2檢索策略..................................................................14

1.2.1中國知網...........................................

1.2.2維普數據庫.........................................

1.2.3萬方數據庫.........................................

1.2.4中國生物醫(yī)學數據庫.................................

1.3納入研究文獻的質量評價標準...............................................14

1.4數據提取.................................................................14

1.5資料分析統計方法.........................................................14

2結果..........................................................................14

2.1檢索及篩選結果...........................................................14

2.2異質性檢驗結果.........................................

2.2.1艾迪注射液..........................................

2.2.2君子扶正湯..........................................

2.2.3康艾注射液..........................................

2.2.4升血湯..............................................

2.3納入研究文獻質量評價.....................................................14

2.4納入研究文獻特征.........................................................15

2.5薈萃分析結果.............................................................15

2.5.1艾迪注射液...........................................................15

2.5.2君子扶正湯...........................................................15

2.5.3康艾注射液...........................................................15

2.5.4升血湯...............................................................15

3討論..........................................................................16

結論...........................................................................18

參考文獻........................................................................18

致謝...........................................................................21

誠信聲明........................................................................21

ChemotherapeuticIeukopenia標志物的初步分析及

中藥復方預防方案的Meta分析

摘要

目的：標志物分析方面：通過對結直腸癌患者組織和血液樣本進行代謝組學研究，篩選

可以有效預測化療性白細胞減少癥的內源性標志物；Meta分析方面：運用Meta分析方法在

常用輔助中藥方案中篩選可以有效預防化療性白細胞減少癥的中藥處方或制劑。方法：標志

物分析方面：運用代謝組學方法，通過高效液相色譜串聯四極桿飛行時間質譜連用技術對結

直腸癌患者組織和血液樣本中的極性和非極性化合物進吁初步研究。運用MelaboAnalysl軟

件進行主成分分析(PCA)、偏最小二乘投影判別分析(PLSDA),運用火山圖進行載荷

圖篩選。篩選對?兩組分離貢獻較大(P<0.()5,FC>1)差異化合物，其質譜數據經過HDMB

數據庫檢索篩選潛在差異性化合物；Meta分析方面：運用Meta分析的方法，以Cochrane

協作網檢索規(guī)范制定完善的檢索策略，系統全面地檢索四個常用中文數據庫(中國知網、維

普數據庫、萬方數據庫、中國生物醫(yī)學數據庫)中有關中藥預防或緩解結直腸癌化療性白細

胞減少癥相關文獻。根據納入及排除標準篩選文獻,提取入組文獻相關信息,采用RevMan5.3

軟件對各臨床實驗結果進行合并與分析。結果：標志物分析方面：在血液樣本中篩選出潛在

極性代謝物5個、潛在非極性代謝物2個：在組織樣本中篩選出潛在極性代謝物1個、潛在

非極性代謝產物3個；Mota分析方面：根據制定的納入與排除標準初步篩選得到73篇文獻。

進一步篩選其中使用相同中藥處方或制劑的臨床隨機對照實驗，最后入組13篇文獻。在13

個臨床研究中包含四種中藥處方或制劑(艾迪注射液、君子扶正湯、康艾注射液、升血物)。

四種中藥處方或制劑文獻異質性均較小。其薈萃分析結果如下：艾迪注射液(OR:0.28,

95%CI：0.18?0.43,P<0.00001)、君子扶正湯(OR:0.20,95%CI:0.10-0.41,P<0.00001)、升

血湯(OR:0.42,95%CI:0.20-0.87.P=0.02)。薈萃分析結果表明上述三種中藥處方或制劑能

有效地預防5-氟尿喀喔類化療藥物所致化療性白細胞減少癥?？蛋⑸湟核C萃分析結果尚

不能表明其可以有效地預方5-氟尿口密咤類藥物所致化療性白細胞減少癥(OR:0.52,

95%CIO20-1.32,P=0.17)。結論：標志物分析方面.：篩選的潛在內源性代謝物主要為脂類,

其與化療性白細胞減少癥的發(fā)生存在相關性；薈萃分析方面：艾迪注射液、君子扶正湯、升

血湯可以有效地預防5-氨尿喘咤類化療藥物所引起的白細胞減少癥。建議在化療的同時，

為結直腸癌患者使用上述中藥處方或制劑，切實地降低化療性白細胞減少癥的發(fā)生率。

關鍵詞

結直腸癌；5-氟尿喀咤；化療性白細胞減少癥；血液；組織；非靶向代謝組學；艾迪注

射液；康艾注射液；君子扶正湯；升血湯；Meta分析

I

PreliminaryAnalysisofChemotherapeuticleukopenia

MarkersandMeta-analysisofPreventiveSchemeofChinese

HerbalCompounds

Abstract

Objective:Markeranalysis:Toscreenendogenousmarkersthatcaneffectivelypredict

chemotherapeuticleukopenia,melabolomicstudieswerecarriedoutontissuesandbloodsamples

ofpatientswithcolorectalcancer;Meta-analysis:Toscreentheprescriptionsorpreparationsof

traditionalChinesemedicineswhichcouldeffectivelypreventchemotherapeuticleukopenia.

Methods:Markeranalysis:Highperformanceliquidchromatographycoupledwithquadrupole

timc-of-flightmassspectrometrywasusedtoconductpreliminarystudiesonpolarandnon-polar

compoundsintissuesandbloodsamples.UsingMctaboAnalystsoftwareforprincipalcomponent

analysis(PCA)andpartialleastsquaresprojectiondiscriminantanalysis(PLSDA),avolcanomap

wascreatedforloadmapscreening.Thetandemmassspectrometrydataofthecompoundswith

largeseparation(P<0.05)wereanalyzed,andtheMSMBdatawassearchedtomatchthemass

spectrometryinformation.Meta-analysis:Byusingmeta-analysismethod,acompleteretrieval

strategywasformulatedaccordingtotheretrievalstrategyofCochraneCollaborativeNetwork,

andrelevantliteraturesonthepreventionoralleviationofchemotherapeuticleukopeniaof

colorectalcancerincommonChinesedatabases(CNKI,VIPDatabase,WanfangDatabaseand

SinoMcddatabases)weresystematicallyandcomprehensivelyretrieved.Accordingtothe

inclusionandexclusioncriteria,(heliteraturewasscreenedandtherelatedinformationwas

extracted.RevMan5.3softwarewasusedtomergeandanalyzetheclinicalexperimental

results.Results:Markeranalysis:Eightpotentialpolarmetabolitesandtwopotentialnon-polar

metaboliteswerescreenedinbloodsamples.Onepotentialpolarmetaboliteand24potential

non-polarmetaboliteswerescreenedintissuesamples.Mcta-analysis:Accordingtotheinclusion

andexclusioncriteria,73literatureswerepreliminarilyscreened.Theclinicalrandomized

controlledtrialsusingthesameprescriptionorpreparationoftraditionalChinesemedicinewere

furtherscreened,and13literatureswereincludedinthefinalgroup.FourChineseherbal

prescriptionsorpreparationswereincludedin13clinicalstudies(AidiInjection,JunziFuzheng

Decoction,KangAiInjection,ShengxueDecoction)..Fourprescriptionsorpreparationsof

Chinesemedicine(AidiInjection,JunziFuzhengDecoction,KangaiInjection,ascendingblood

Soup)wereincludedin13clinicalstudies.Theresultsofthemeta-analysiswereasfollows:Aidi

injection(OR:0.28,95%CI:0.18-0.43,P<0.00001),JunziFuzhengDecoction(OR:0.20,

95%CI:0.10-0.41,P<0.01)001),ascendingbloodSoup(OR:0.42,95%CI:0.20-0.87,P=0.02),

whichcouldeffectivelypreventleukopeniacausedby5-fluorouracilbasedchemotherapeutic

drugs.Themeta-analysisofKangaiinjectionhasnotshownthatitcaneffectivelyprevent

chemotherapy-inducedleukopeniacausedby5-fluorouracilbasedchemotherapy(OR:0.52,

95%CI:0.20-1.32,P=0.17).Conclusion:Markeranalysis:Thepotentialendogenousmetabolites

II

screenedarcmainlylipids,whicharcassociatedwiththeoccurrenceofchemotherapeutic

leukopenia.Meta-analysis:TheuseofAidiinjection,JunziFuzhengDecoction,ascendingblood

Soupcaneffectivelypreventleukopeniacausedby5-fluorouracilbasedchemotherapydrugs.Itis

recommendedtouse(heabove-mentionedtraditionalChinesemedicineprescriptionsor

preparationsforpatientswithcolorectalcanceratthesametimeofchemotherapytoeffectively

reduce(heincidenceofchemotherapy-inducedleukopenia.

Keywords

Colorectalcancer;5-fluorouracil;Chemotherapeuticleukopenia;Blood:Organizations;Non-targeted

metabolomics;Aidiinjection;JunziFuzhengDecoction;ascendingbloodSoup;Kangaiinjection;

meta-analysis

Ill

前言

結直腸癌是消化道常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率逐年提升。目前臨床常見治療結直腸癌

方法包括外科手術治療、輔助化療、新輔助化療、精準治療等⑴。其中化療是最常見的治療

手段，5-氟尿嗒咤類化療藥物是治療結直腸癌的一線化療用藥。

卡培他濱在體內經過三步代謝機制轉化為有活性的5-氟尿啥咤，與其它化療藥物相比,

具有口服用藥方便、療效好、不良反應輕的特點⑵。5-氟尿n密咤經過進一步體內代謝生成5-

氟尿嚏噬脫氧核昔酸和5-氟尿喀晚核昔進而發(fā)揮抗腫瘤作用。但是這些代謝產物可以通過

偽代謝物的形式摻入到正常細胞DNA和RNA中，產生細胞毒性，從而導致不良反應的發(fā)生⑶。

骨髓抑制是使用5-筑尿喀咤類化療方案可能引起的常見不良反應之一，表現為貧血、血小

板或白細胞的數量減少。據相關文獻報道，其化療性骨髓抑制的發(fā)生率高達70%至90%'\

根據課題組前期（2016年5月到2017年12月）在長征醫(yī)院開展的觀察性臨床試驗結果，

在接受卡培他濱方案化療的127例結直腸癌患者當中，中性粒細胞減少癥的發(fā)生率為

80.31%。其中,嚴重（大于二級）中性粒細胞減少癥發(fā)生率為的3.15%⑸。

化療藥物可以直接殺傷外周血白細胞，干擾或抑制正常粒細胞核酸的生物合成，進而影

響粒細胞的代謝，阻礙粒細胞的分裂；化療藥物同時可以損傷骨髓造血干細胞，從而導致骨

髓生成白細胞的能力下降久白細胞減少典型表現為頭暈、肢體酸軟、乏力、食欲減退、精

神萎靡、低熱等⑴。

由于基因、飲食習慣、環(huán)境的差異，不同患者對化療藥物的敏感性、耐受性都存在潛在

差異。目前現有文獻中使用基因檢測和代謝組學的方法研究基因或內源性代謝物和化療不良

反應之間的關系，用于預測結直腸癌患者接受化療后是否會出現不良反應。

其中代謝組學是研究生物體系在受到外界刺激或者基因修飾時所引起其機體代謝物變

化的一門學科⑻。代謝組學可以通過研究不良反應發(fā)生和未發(fā)生患者間內源性代謝物之間的

差異離子或化合物，尋找代謝物和生理病理變化之間的潛在關系，進而篩選可以預測化療不

良反應的內源性標志物。

目前臨床上治療白細胞減少癥的西藥包括重組人粒細胞集落刺激因子、咖啡酸⑼、

VitaminB4,利血生、多抗甲素、鯊肝醇、碳酸鋰等。其在臨床使用中存在價格昂貴、不良

反應較多、治療效果不穩(wěn)定等問題””與西藥相比，中藥治療白細胞減少癥作用平穩(wěn)、價格

低廉、能提高機體免疫功能，可以較好地改善其臨床癥狀⑺。雖然目前臨床上使用中藥預防

化療所致白細胞減少癥獲得了可喜的進展但是現在臨床上使用的中藥種類繁多，巖無綜

述對不同中藥的療效進行比較。

本研究旨在通過對患者術前血液和組織樣本進行代謝組學研究，運用軟件分析化療性白

細胞減少癥發(fā)生和未發(fā)生患者間內源性代謝物的差異，篩選可能預測結食腸癌化療性白細胞

減少癥的內源性標志物；運用薈萃分析方法對已發(fā)表的義獻進行系統全面的檢索，嚴格評價

文獻質量，對文獻干預實驗結果進行統計分析，比較不同中藥的臨床療效，制定出最佳的中

藥預防氟尿喀噬類化療藥物所致白細胞減少的用藥方案。

1

第一部分Chemotherapeuticleukopenia標志物的初步分析

1材料

1.1樣本來源

組織樣本和血液樣本均來自課題組前期在上海市長征醫(yī)院收集的樣本。

1.2主要儀器設備與試劑

表1T主要儀器設備

Table1-1maininstrumentsandequipment

儀器設備型號廠商

UHPLC系統1290系列Agilent,美國

四元泵G1311AAgilent,美國

真空脫氣機G1322AAgilent,美國

自動進樣器G1329AAgilent,莢國

柱溫箝G1316AAgilent.美國

三重四級桿串聯質譜儀6530Q-TOF-MSAgilent,美國

十萬分之一電子分析天平BPI106Sartorius,德國

臺式冷凍離心機UNIVERSAL32RHettich,德國

定時可調速漩渦混合器XW-OI上海醫(yī)科大學儀器廠

超聲儀SK72OOH上?？茖С晝x器有限公司

HILIC-Z(2.1x150mm)色譜柱No.673775-924Agilent圖33

HILIC-Z(2.1x5mm)預柱No.821725-947Agilent003

C182.”100mm色譜柱No.186005297Agilent,美國

CI81.7pm2.1*5mm頂柱No.186()05303Waters,美國

表1-2主要實驗試劑

Table1-2mainexperimentaIreagents

儀器設備使用級別批號純度廠商

p-氮化苯丙氨酸標準品CO253>98%Sigma,美國

甲酸餒標準品A5597>98.0%S1GAMALDRICH,美國

異丙醇分析純106>99Merck.德國

氯仿分析純C0761524023>99Merck,德國

甲酸色譜純TS09I1CA1498%Tedia,德國

甲醇色譜純JB03810799.9%Merck,德國

乙睛分析純JA059I0399.9%Merck,德國

純凈水屈臣氏，中國

2方法

2.1樣品前處理

2.1.1血液樣本

對待測的血液樣本進行蛋白沉淀法的預處理方法，然后精密吸取0.2mL血漿于l.5mLEP

管內，然后加入0.8mL的2：1（三氯甲烷：甲醇）的混合液并充分渦旋，然后在4c的環(huán)境

卜使用12000r-min/離心lOmin,精密吸取上層極性液體0.3mL同時加入0.9mL的甲醇渦

旋,然后置于上述12000r?mi"的環(huán)境下離心lOmin,取上清液即為上層極性代謝物。使

用移液槍槍頭尖端緩慢的穿過蛋白質圓盤精密的吸取下層有機相0.4mL,置于室溫下經過氮

氣吹干，精密量取0.5mL的2：2：1（乙晴：異丙醇:水）混合液復溶即得下層非極性代謝

物。分別對每個樣本的上下層精密吸取20p1,然后分別混合均勻作為質量控制樣樣品（QC）。

2.1.2組織樣本

取結直腸癌患者組織樣本，室溫下解凍，濾紙吸干表面血水，精密稱定質量約lOOmg,

置于5ml離心管中，以1:5（m/v）比例加入0.9%氯化鈉注射液，于冰水浴下使用超細勻漿

機15000r?mi"下勻漿2min制備組織勻漿液。勻架液置于冰水浴下超聲5min后,再置于

離心機中4℃、l9060*g下離心15min,吸取上清液于-80℃下保存。

取上清液0.2mL,加入萃取劑（三氯甲烷:甲醇）0.8mL,渦旋1min,再置于離心機中

4℃、12000*g下離心lOmin。取上層含極性代謝產物的液體，加入含內標4-氯-DL-苯丙氨

酸甲酯鹽酸鹽0.2ng?mH的乙嘴，渦旋2min,在4C、12000、下離心lOmin,取上清液進

樣；取下層非極性層（）.1ml,于室溫下揮干，使用乙精：異丙醇：水=2:2:1進行復溶，渦旋

2min,在4℃、I2000*g下離心lOmin,取上清液進樣。

取上述制備好的極性樣本，各取10|iL,渦旋2min,在4℃、12（）0（）*g下離心lOmin,取上

清液作為記性代謝產物的質控樣本；同理制備非極性代謝產物的質控樣本。

2.2UHPLC-Q-TOF-MS檢測條件

2.2.1血液樣本

表1-3血液樣品色譜檢測條件

Table1-3chromatographicdetectionconditionsofbloodsamples

檢測條件極性非極性

系統安捷倫1290超高效液相色譜安捷倫1290超高效液相色譜

（UHPLC）系統（UHPLC）系統

色譜柱HILIC-Z2.1x150mm色譜柱T33.5pm2.1X100mm色譜柱+

+HILIC-Z2.1x5mm預柱C181.7pm2.1X5mm預注

柱溫40℃65℃

流速0.5mL,min-10.3mL,min'1

流動相A純水（10mM甲酸錢）60%乙睛的水溶液（0.1%甲酸

+10mm甲酸一）

流動相B90%乙箱（IOmM甲酸鉉）90%的異丙醇的水溶液（0.1%甲酸

+1Ornin甲酸鉉）

進樣體積10pLlOfiL

3

表1-4極性分子梯度洗脫條件

TabIe1-4polarmoleculargradientelutionconditions

時間(min)A(%)B(%)

00100

5298

121387

131684

203070

246040

24.17030

287030

28.10100

330100

表1-5非極性分子梯度洗脫條件

Table1-5non-polarmoleculargradientelutionconditions

時間(min)A(%)B(%)

09010

49010

56535

12.54060

19199

19.58515

298515

表16質譜檢測條件

Table1-6massspectrometrydetectionconditions

檢測條件極性非極性

系統安捷倫6530四級桿-飛行時間質安捷倫6530四級桿-飛行時間質

譜（Q-TOF-MS）系統譜（Q-TOF-MS）系統

采集模式全信息串聯質譜（MSE）

離子模式正離子/負離子正離子

毛細管電壓4000V4000V

截取錐電壓65V65V

氣體溫度350C350C

氣體流速11L,min'11IL,min-1

捕獲范圍1007700m"l00-1700m/z

2.2.2組織樣本

4

表1-7組織樣品色譜檢測條件

Table1-7chromatographicdetectionconditionsoftissuesampIes

檢測條件極性非極性

系統安捷倫1290超高效液相色譜（UHPLC）系安捷倫1290超高效液相色譜

統(UHPLC)系統

色譜柱HILIC-Z2.1x150mm色譜柱+HILIC-ZHILIC-Z2.1x150mm色譜柱

2.1x5mm預柱+HILIC-Z2.1x5mm預柱

柱溫40"C65c

流速500j.iL?min"300|iL,min'1

流動相A純水（10mM甲酸一）60%乙胎的水溶液（0.1%甲酸+IOmM

甲酸鐵）

流動相B90%乙臘（10inM甲酸鐵）異丙醇:水=9：1（0.1%甲酸+IOmM

甲酸鏤）

進樣體積10pL5pL

表1-8極性分子梯磨洗脫條件

Table1-8polarmoleculargradientelutionconditions

時間(min)A(%)B(%)

00100

5298

121387

131684

203070

246040

24.17030

287030

28.10100

330100

表1-9非極性分子梯度洗脫條件

Table1-9non-polarmoleculargradientelutionconditions

時間(min)A(%)B(%)

09010

49010

56535

12.54060

19I99

19.58515

298515

5

表1-10質譜檢測條件

Table1-10massspectrometrydetectionconditions

檢測條件極性非極性

系統安捷倫6530四級桿-飛行時同質安捷倫6530四級桿-飛行時間質

譜（Q-TOF-MS）系統譜(Q-TOF-MS)系統

采集模式全信息串聯質譜（MSE）全信息串聯質譜（MSE）

離子模式正離子/負離子正離子/負離子

毛細管電壓4000V4000V

截取錐電壓60V60V

氣體溫度300℃350℃

氣體流速13L,min111L,min1

捕獲范圍100-l700m/zl0(M7()0m/z

2.3數據分析方法

運用安捷倫定性分析軟件Profinder對原始數據進行初步提取、面積歸一化處理，將結

果轉化為包含化合物保留時間和質合比等信息的txt文件。提取其中化療性白細胞減少癥發(fā)

生和未發(fā)生患者的數據，運用MetaboAnalyst軟件進行主成分分析（PCA）、偏最小二乘投影

判別分析（PLSDA）,制作火山圖進行載荷圖篩選，通過分析對各組分離貢獻較大（P<0.05,

FC>I）化合物的串聯質譜數據，經過HDMB數據庫中LC-MS檢索（IonMode:Neutral;Adduct

Type:M:MolecularWeightTolerance±:2ppm）,進行質譜信息匹配，篩選其中內源性差異化

合物。

3結果

3.1血液潛在極性化合物

PCA得分圖（見圖IA）所示，化療性白細胞減少癥發(fā)生組和未發(fā)生組組間代謝物區(qū)分

不明顯，但仍顯示兩組間代謝物差異的趨勢。為了進一步放大兩組組間差異，采用PLSDA

的方法進行處理，其PLSDA得分圖（見圖1B）顯示，化療性白細胞減少癥發(fā)生組和未發(fā)

生組可以明顯的區(qū)分。運用Vocanonplot分析（見圖1C）兩組間離子峰的差異，篩選出Pv

0.05、組間差異FC>1的特征離子峰共118個。通過對比HMDB（人類代謝組數據庫）進

一步的篩選其中內源性的差異化合物，最后篩選出差異性極性化合物共5個（見表1-11

NO.1-5）o

6

Sc?rcP*0<SccmPkM

8

a0

■*

2

43?

tog2(FC)

圖1-1發(fā)生組和未發(fā)生組血液極性代謝物對比A.PCA圖，B.PLSDA圖，C.火山圖

Figure1-1comparisonofbloodpolaritymetabolitesbetweentheoccurrencegroupandthe

non-occurrencegroup(A.PCAplot.B.PLSDAplot.c.volcanoplot)

3.2血液潛在非極性化合物

PCA得分圖（見圖1-2A）所示，化療性白細胞減少癥發(fā)生組和未發(fā)生組組間區(qū)別不明

顯。為了進一步放大兩組組間的差異，采用PLSDA的方法進行處理，其PLSDA得分圖（見

圖I-2B）顯示，化療性白細胞減少癥發(fā)生組和未發(fā)生組可以明顯的區(qū)分。運用Vocanonplol

分析（見圖1-2C）兩組間離子峰的差異，篩選出P<0.05、組間差異FC>1的特征離子峰

共41個。通過對比HMDB（人類代謝組數據庫）進一步的篩選其中內源性的差異化合物，

最后篩選出差異性非極性化合物共2個（見表1-11NO.6-7）。

7

-15-10-5

?ogz(卜C)

圖1-2發(fā)生組和未發(fā)生組血液非極性代謝物對比A.PCA圖，B.PLSDA圖，C.火山圖

Figure1-2comparisonofbloodnon-polarmetabolitesbetweentheoccurrencegroupandthe

non-occurrencegroup(A.PCAplot.B.PLSDAplot,c.volcanoplot)

3.3組織潛在極性化合物

PCA得分圖（見圖L3A）所示，化療性白細胞減少癥發(fā)生組和未發(fā)生組代謝物組間區(qū)

別不明顯，但仍顯示兩組間代謝物差異的趨勢。為了進一步放大兩組組間的差異，采用

PLSDA的方法進行處理，其PLSDA得分圖（見圖L3B）顯示，化療性白細胞減少癥發(fā)生

組和未發(fā)生組可以明顯的區(qū)分。運用Vocanonploi分析（見圖I-3C）兩組間離子峰的差異,

篩選出PV0