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文檔簡介
T/GDSMMXXXX—XXXX
廣東省鐵皮石斛種苗繁育技術(shù)規(guī)程
1范圍
本文件規(guī)定了鐵皮石斛種苗繁育過程中的環(huán)境及器具消毒、培養(yǎng)基制備、外植體前處理和表面消毒、
初代培養(yǎng)、芽增殖培養(yǎng)、芽伸長和壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗和移栽、移栽后管理病蟲害防治、包裝、
運(yùn)輸和檔案管理。
本文件適用于廣東省區(qū)域內(nèi)鐵皮石斛種苗的繁育。
2規(guī)范性引用文件
下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中,注日期的引用文件,
僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本
文件。
GB5084農(nóng)田灌溉水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)
GB/T6001育苗技術(shù)規(guī)程
GB/T8321(所有部分)農(nóng)藥合理使用準(zhǔn)則
LY/T1000容器育苗技術(shù)
LY/T2700花木栽培基質(zhì)
NY/T496肥料合理使用準(zhǔn)則通則
NY/T1107大量元素水溶肥料
NY/T1276農(nóng)藥安全使用規(guī)范總則
NY/T2306花卉種苗組培快繁技術(shù)規(guī)程
DB37/T3852鐵皮石斛培育指南組培育苗
3術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo
為蘭科(Orchidaceae)石斛屬(DendrobiumSw.)植物鐵皮石斛。
鐵皮石斛種子seedsofDendrobiumofficinale
鐵皮石斛經(jīng)過傳粉受精,胚珠發(fā)育成種子。鐵皮石斛種子很小,呈黃色,無胚乳。
外植體explant
參照NY/T2306。
消毒disinfection
參照NY/T2306。
滅菌sterilization
參照NY/T2306。
接種inoculation
參照NY/T2306。
增殖培養(yǎng)proliferationculture
1
T/GDSMMXXXX—XXXX
將誘導(dǎo)的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),增殖出較多的不定芽
4環(huán)境及器具滅菌
準(zhǔn)備室消毒
準(zhǔn)備室地面用巴氏消毒液拖地消毒,空間噴灑75%酒精消毒,保持干凈。
接種室消毒
接種室用紫外燈照射30min消毒。接種前開啟超凈工作臺紫外燈20min~30min后方可進(jìn)行操作。
超凈工作臺使用時用75%酒精擦拭臺面清潔消毒。超凈工作臺內(nèi)過濾膜定期檢查,清洗,更換,并在使
用超凈工作臺過程中嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作,確保超凈工作臺安全使用。
培養(yǎng)室消毒
培養(yǎng)室采用二氧化氯組培室專用消毒劑定期熏蒸消毒。
接種器械消毒
接種之前,接種的剪刀、鑷子和解剖刀器械用報紙包好后高溫高壓進(jìn)行消毒,接種過程中,在酒精
燈上灼燒或在高溫消毒器內(nèi)進(jìn)行消毒。
5培養(yǎng)基制備
基本培養(yǎng)基的選擇
選擇MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。
母液的配制
5.2.1配制培養(yǎng)基前,先配制培養(yǎng)基母液。大量元素配制10倍,二水氯化鈣單獨(dú)配制。微量元素配制
1000倍,有機(jī)元素配制100倍,鐵鹽配制200倍,具體參數(shù)見附錄A。
5.2.2植物生長調(diào)節(jié)劑一般配制濃度為1mg/mL的母液,具體參數(shù)見附錄B。
母液的保存
母液配制好后貼上標(biāo)簽,標(biāo)簽信息包括名稱、配制時間、配制人、濃度、倍數(shù),放入4℃冰箱保存
備用。使用前觀察有無沉淀或長菌情況,若有異樣,須及時重新配制。
培養(yǎng)基的配制
5.4.1準(zhǔn)備
5.4.1.1實驗材料:燒杯,玻璃棒,移液管,標(biāo)簽紙,記號筆,蒸餾水,洗耳球,鑰勺,培養(yǎng)瓶,PH
試紙。
5.4.1.2實驗試劑:配制的MS培養(yǎng)基母液。
5.4.1.3植物生長調(diào)節(jié)劑母液:6-BA,IBA,瓊脂粉,蔗糖。
5.4.1.4調(diào)試儀器設(shè)備:移液器,電子天平,電爐,電磁爐,微波爐,灌裝機(jī),高壓滅菌鍋。
5.4.2稱量
稱取蔗糖30g/L,瓊脂粉6g/L~7g/L,用700mL蒸餾水加熱溶解至澄清。
5.4.3量取母液
根據(jù)MS母液的倍數(shù)及配制培養(yǎng)基的體積,量取母液,具體吸取量見附錄A。根據(jù)配制培養(yǎng)基的配方,
體積及植物生長調(diào)節(jié)劑濃度吸取細(xì)胞分裂素和生長素。
5.4.4混合
2
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將吸取的母液與溶解的蔗糖和瓊脂粉混合。
5.4.5定容
加蒸餾水將培養(yǎng)基定容至配制體積。
5.4.6調(diào)PH
充分?jǐn)嚢韬?,?mol/L鹽酸溶液或1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)PH為5.8~6.0。
5.4.7分裝
將培養(yǎng)基均勻的分裝到培養(yǎng)瓶中,一般培養(yǎng)基的厚度為1.0cm~1.5cm,避免培養(yǎng)基粘到培養(yǎng)瓶壁。
5.4.8密封
將培養(yǎng)瓶用蓋子進(jìn)行密封。
5.4.9滅菌
培養(yǎng)瓶放入高壓滅菌鍋中進(jìn)行高溫高壓滅菌,溫度為121℃,壓力為0.11kPa,滅菌時間為20min~
30min。
5.4.10冷卻
培養(yǎng)基冷卻凝固后,放入接種室備用。
6外植體前處理
采集無病蟲害的鐵皮石斛藤條,去掉葉片,將藤條修剪為1.5cm~2.5cm小段,用洗潔凈或洗衣粉
清洗10min,再用流水沖洗1h。
7外植體表面消毒
將沖洗干凈的小段藤條用1:100的84消毒液浸泡并搖動10min,在75%酒精中浸泡30s,無菌水清洗
3次,濃度為0.1%二氯化汞溶液浸泡消毒時間8min~10min,無菌水清洗4次。
8初代培養(yǎng)
取經(jīng)過表面消毒的小段藤條,將其上面的側(cè)芽或頂芽切掉,切成大小約0.5cm×0.5cm作為外植
體,插入接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上進(jìn)行芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)。
初代培養(yǎng)條件:置于培養(yǎng)室內(nèi),培養(yǎng)溫度(25±2)℃,暗培養(yǎng)30d,誘導(dǎo)出不定芽。
誘導(dǎo)培養(yǎng)基的具體成份及含量:改良MS培養(yǎng)基+0.5mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+2g/LPVP+30g/L
蔗糖+6g/L~7g/L瓊脂粉。誘導(dǎo)培養(yǎng)基的pH為5.8~6.0。
9芽增殖培養(yǎng)
將鐵皮石斛藤條上的側(cè)芽或頂芽誘導(dǎo)的無菌芽,接于芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)。
增殖培養(yǎng)條件:置于培養(yǎng)室內(nèi),培養(yǎng)溫度(25±2)℃、光照1800LX~2500LX、光照時間12h/d。
培養(yǎng)30d,誘導(dǎo)出“多芽體”。
增殖培養(yǎng)基的成份及其含量為:MS培養(yǎng)基+0.2mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L~7g/L
的瓊脂粉。增殖培養(yǎng)基的pH為5.8~6.0。
10芽伸長和壯苗培養(yǎng)
3
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將增殖出的多芽切分后,每組含有2個~3個芽,轉(zhuǎn)移到芽伸長和壯苗培養(yǎng)基進(jìn)行芽的伸長培養(yǎng)。
芽伸長和壯苗培養(yǎng)條件:置于培養(yǎng)室內(nèi),培養(yǎng)溫度(25±2)℃、光照1800LX~2500LX、光照時間
12h/d,培養(yǎng)30d。
芽伸長和壯苗培養(yǎng)基的成份及其含量為:MS培養(yǎng)基+0.1mg/L6-BA+0.1mg/LIBA+8%~10%椰子汁
+30g/L的蔗糖+6g/L~7g/L的瓊脂粉。芽伸長和壯苗培養(yǎng)基的pH為5.8~6.0。
11生根培養(yǎng)
將伸長約2cm~3cm不定芽切掉后轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基,誘導(dǎo)根系產(chǎn)生。
生根培養(yǎng)的條件:置于培養(yǎng)室,培養(yǎng)溫度(25±2)℃,光照培養(yǎng)30d,光照1800LX~2500LX、光
照時間12h/d。
生根培養(yǎng)基的成份及其含量為:改良MS培養(yǎng)基+0.5mg/LIBA+30g/L蔗糖+6g/L~7g/L瓊脂粉。
生根培養(yǎng)基的pH為5.8~6.0。
12煉苗和移栽
煉苗
生根培養(yǎng)后,選擇苗高4cm~6cm、有3片~5片葉子、根系有4條~5條、根長5cm~10cm的組
培苗,從培養(yǎng)室拿出到溫室大棚進(jìn)行煉苗,煉苗的溫度為(25±2)℃、光照1500LX~2000LX。閉瓶煉
苗1周后,開瓶煉苗2d~3d。
洗苗
將組培苗小心從組培瓶里面出,盡量避免傷其根系,洗干凈根系上的培養(yǎng)基。用0.1%多菌靈溶液
浸泡根部30s~60s。
煉苗基質(zhì)
選用泥炭土:園土:珍珠巖=1:1:1混合的栽培基質(zhì)。栽培基質(zhì)符合LY/T2700的規(guī)定。
苗杯
選擇直徑為8cm,深度為8cm的普通的圓形塑料育苗杯進(jìn)行育苗。苗杯符合LY/T1000的規(guī)定。
填裝基質(zhì)
將混合好的基質(zhì)轉(zhuǎn)入苗杯里面,并澆水使基質(zhì)濕潤。灌溉水符合GB5084的規(guī)定。
移栽
將組培苗小心的栽植于苗杯中,栽植深度以根系上部覆蓋基質(zhì)1cm~2cm為宜,每杯1株。栽植后澆
透水為“定根水”。
13移栽后管理
13.1.1生長環(huán)境
移栽前期保持環(huán)境溫度在20℃~25℃,濕度在85%左右。定期澆水保持基質(zhì)濕潤,保持基質(zhì)水分在
30%~50%。前期適當(dāng)遮蔭,15d后恢復(fù)正常自然光照。
13.1.2施肥
根據(jù)組培苗的長勢,每隔20d,可補(bǔ)澆含氮磷鉀(N15-P15-K15)或(N20-P20-K20)的水溶性肥料600
倍~800倍液。水溶性肥料符合NY/T1107的規(guī)定。
4
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13.1.3病蟲害防治
苗期病害以預(yù)防為主,綜合防治。視情況每隔15d噴灑50%多菌靈可濕性粉劑800倍液~1000倍液。
苗期蟲害,一般使用BT生物殺蟲劑進(jìn)行防治。施用農(nóng)藥應(yīng)符合GB/T8321(所有部分的規(guī)定)。
14出苗
當(dāng)組培苗的根系發(fā)達(dá),高度在20cm以上,葉片為3片~4片,無病蟲害時可移至大田栽植。
15設(shè)施建設(shè)
育苗基地建設(shè)
智能溫室、連棟塑料大棚或簡易拱棚均可用于鐵皮石斛種苗繁育或培育。大棚內(nèi)溫濕度要符合鐵皮
石斛育苗條件。
整地
大棚內(nèi)鐵皮石斛種苗繁育要選擇富含有機(jī)質(zhì)的腐殖土(有機(jī)質(zhì)含量20%~30%),深翻土壤15cm~
25cm。播種前起壟作床,床寬120cm~130cm,高15cm~25cm,床面平整細(xì)耙,壓實。
施肥管理
播種后用噴霧器向苗床表面均勻噴水,保持苗床濕潤。出苗后每天淋水1次,保持土壤水分,并施
0.3%磷酸二氫鉀,施肥量為800mL/m2~1000mL/m2。所使用肥料符合NY/T496的規(guī)定。
16扦插繁育
扦插條選擇
選擇生長發(fā)育正常,芽飽滿充實,無病蟲害的鐵皮石斛嫩枝作為扦插穗條。
扦插條采集時間
扦插條采集時間為1月份~2月份。
扦插條剪取
按DB37/T3852執(zhí)行。
扦插條生根處理
插穗基部在50mg/L的NAA或IBA溶液中浸泡3h~5h。
扦插
16.5.1基質(zhì)配制及消毒
選擇珍珠巖、蛭石、泥炭土等基質(zhì),以1:3:6混合配比配制扦插育苗基質(zhì)。扦插前6d~7d,噴灑質(zhì)
量濃度為0.3%~0.5%的高錳酸鉀溶液進(jìn)行基質(zhì)消毒,用藥量為20kg/m2~25kg/m2。苗床直接育苗,其基
質(zhì)厚度為12cm~16cm。如容器育苗可采用無紡布等可降解材料的容器,并將基質(zhì)裝袋,以備扦插育苗。
16.5.2扦插時間
扦插條剪取,生根處理后及時進(jìn)行扦插育苗。
16.5.3扦插方法
扦插條扦插可采用錐孔苗床直插方法或采用容器扦插育苗方法,插后壓實基質(zhì)。
16.5.4扦插深度與密度
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苗床育苗深度為6cm~8cm;株行距以12cm×15cm為宜。
16.5.5容器規(guī)格
容器扦插育苗宜采用高度12cm~15cm、直徑為8cm~12cm的容器。
17田間管理
種子播種繁育基地田間管理
17.1.1土壤改良
根據(jù)土壤有機(jī)質(zhì)含量、礦物質(zhì)含量、微生物種類和豐度進(jìn)行土壤改良。
17.1.2灌溉
采用滴灌和噴管,提高水分利用率。
17.1.3有機(jī)肥
選擇顆粒度較小,完全腐熱的有機(jī)肥或0.3%~0.5%的尿素、0.3%~0.4%的磷酸二氫鉀。當(dāng)鐵皮石斛
種苗有3片~4片真葉時開始施肥,施肥時距離種苗分布5cm~10cm,少量多次。
17.1.4除草
人工除草為主,及時除草,便于鐵皮石斛種苗通風(fēng)。
17.1.5病蟲害防治
以“預(yù)防為主,綜合防治”為原則,加強(qiáng)田間管理,及時清楚枯枝和落葉。使用化學(xué)防治時,應(yīng)嚴(yán)格
按照GB/T8321和NY/T1276的規(guī)定執(zhí)行。鐵皮石斛苗木主要病蟲害綜合防治見附錄C。
扦插繁育基地田間管理
17.2.1噴水
扦插后要適時噴水,保持基質(zhì)含水量30%~50%。
17.2.2遮陽
扦插后進(jìn)行遮陽,可使用遮光率為70%~80%的遮光網(wǎng)進(jìn)行遮陽。
17.2.3病害防治
同17.1.5。
18煉苗、移栽
煉苗
種子播種100d后進(jìn)行煉苗;扦插40d~60d后進(jìn)行煉苗。
移栽方法
裸根苗移栽前修去多余枝、過長根及損傷根。移栽時盡量保留根際周圍基質(zhì),防止根系損傷和失水,
不窩根,栽正,踏實,栽后立即澆透水。容器苗可直接移栽至大田。
移栽苗密度
依苗木生長狀況、苗齡、管理方式而定,移栽株行距以30cm×60cm為宜。
移栽苗田間管理
苗木定植后立即灌足水,根據(jù)苗木生長狀況進(jìn)行澆水、中耕除草、追肥、防治病蟲害、除蘗抹芽等。
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19起苗、包裝、運(yùn)輸和檔案管理
按GB/T6001標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行。
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A
A
附錄A
(資料性)
MS培養(yǎng)基母液配方
給出MS培養(yǎng)基母液的配方。
表A.1MS培養(yǎng)基母液配方表
類別成分規(guī)定量/mg擴(kuò)大倍數(shù)/mL母液體積/mL稱量/mg吸取量/ml
NH4NO3165016500
KNO3190010100019000100
大量元素
KH2PO41701700
MgSO4.7H2O3703700
CaCl2.2H2O4401010004400100
KI0.83830
CoCl2.6H2O0.02525
H3BO36.26200
微量元素
CuSO4.5H2O0.02510001000251
MnSO4.4H2O22.322300
ZnSO4·7H2O8.68600
Na2MoO4·2H2O0.25250
鹽酸硫銨素0.15
鹽酸吡哆醇0.525
有機(jī)元素
煙酸0.51005002510
肌醇1005000
甘氨酸2.0100
Na2-EDTA37.257450
鐵鹽20010005
FeSO4·7H2O27.855570
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B
B
附錄B
(資料性)
常用的植物生長調(diào)節(jié)劑配制
給出常用的植物生長調(diào)節(jié)劑配制方法。
表B.1常用的植物生長調(diào)節(jié)劑配制
類別種類配制方法常配制濃度
6-BA
KT
用少量1mol/LNaOH溶解或用1mol/LHCl溶解后,
細(xì)胞分裂素TDZ
再用蒸餾水定容
ZT
CPPU1mg/mL
IAA
NAA用少量1mol/LNaOH溶解后,再用蒸餾水定容
生長素
IBA
2,4-D用95%酒精溶解后,再用蒸餾水定容
赤霉素GA3用95%酒精溶解后,再用蒸餾水定容
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C
C
附錄C
(資料性)
鐵皮石斛種苗病蟲害防治
給出鐵皮石斛種苗主要病蟲害的種類及防治方法。
表C.1鐵皮石斛種苗病蟲害防治
病蟲害種類生物防治或物理防治化學(xué)防治
1.及時維護(hù)清理種苗繁育基地水渠,避免在基地
鐵皮石斛根腐用多菌靈、硫酸銅或甲基硫菌靈等藥劑進(jìn)行防
內(nèi)出現(xiàn)大量積水情況。2.如發(fā)現(xiàn)根部腐爛情況,
病治。按照農(nóng)藥說明書進(jìn)行科學(xué)合理施用。
病害及時清除整株鐵皮石斛種苗。
鐵皮石斛葉枯1.及時清除帶有葉枯病的種苗。2.加強(qiáng)水肥管用代森錳鋅、氰笨唑或丙環(huán)唑等藥劑進(jìn)行防治。
病理。按照上述農(nóng)用使用說明書科學(xué)合理使用。
鐵皮石斛黃化1.做好排水,消除積水現(xiàn)象。2.做好松土除草,
在育苗過程中適當(dāng)補(bǔ)充鈣鎂磷和0.2%硫酸亞鐵。
病加強(qiáng)土壤疏松透氣。3.做好土壤蟲害防治工作。
1.一般每年4月份~8月份發(fā)生,發(fā)生蟲害初期,1.用15%~20%丁硫克百威乳油800倍~1000倍藥
鐵皮石斛茶黃
應(yīng)及時清除發(fā)病種苗,集中燒毀。2.在種苗基地液噴霧防治。2.育苗前用速效殺丁3000倍藥液噴
蟲害薊馬
內(nèi)插粘蟲黃斑灑地面。
1.利用大蠶蛾的趨光性特點(diǎn),成蟲羽化盛期用黑噴施50%殺螟松乳油800倍液或80%敵敵畏乳油
鐵皮石斛大蠶
光燈進(jìn)行捕殺。2.可利用大蠶蛾天敵進(jìn)行生物防1000倍液或50%敵百蟲1000倍液。按照上述農(nóng)用
蛾
治。使用說明書科學(xué)合理使用。
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ICS65.020.20
CCSA017
GDSMM
團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)
T/GDSMMXXXX—XXXX
廣東省鐵皮石斛種苗繁育技術(shù)規(guī)程
TechnicalRegulationsforbreedingofDendrobiumofficinaleseedlingsin
GuangdongProvince
(征求意見稿)
在提交反饋意見時,請將您知道的相關(guān)專利連同支持性文件一并附上。
XXXX-XX-XX發(fā)布XXXX-XX-XX實施
廣東省種子協(xié)會發(fā)布
T/GDSMMXXXX—XXXX
廣東省鐵皮石斛種苗繁育技術(shù)規(guī)程
1范圍
本文件規(guī)定了鐵皮石斛種苗繁育過程中的環(huán)境及器具消毒、培養(yǎng)基制備、外植體前處理和表面消毒、
初代培養(yǎng)、芽增殖培養(yǎng)、芽伸長和壯苗培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗和移栽、移栽后管理病蟲害防治、包裝、
運(yùn)輸和檔案管理。
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2規(guī)范性引用文件
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僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本
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鐵皮石斛DendrobiumofficinaleKimuraetMigo
為蘭科(Orchidaceae)石斛屬(DendrobiumSw.)植物鐵皮石斛。
鐵皮石斛種子seedsofDendrobiumofficinale
鐵皮石斛經(jīng)過傳粉受精,胚珠發(fā)育成種子。鐵皮石斛種子很小,呈黃色,無胚乳。
外植體explant
參照NY/T2306。
消毒disinfection
參照NY/T2306。
滅菌sterilization
參照NY/T2306。
接種inoculation
參照NY/T2306。
增殖培養(yǎng)proliferationculture
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T/GDSMMXXXX—XXXX
將誘導(dǎo)的不定芽接種到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng),增殖出較多的不定芽
4環(huán)境及器具滅菌
準(zhǔn)備室消毒
準(zhǔn)備室地面用巴氏消毒液拖地消毒,空間噴灑75%酒精消毒,保持干凈。
接種室消毒
接種室用紫外燈照射30min消毒。接種前開啟超凈工作臺紫外燈20min~30min后方可進(jìn)行操作。
超凈工作臺使用時用75%酒精擦拭臺面清潔消毒。超凈工作臺內(nèi)過濾膜定期檢查,清洗,更換,并在使
用超凈工作臺過程中嚴(yán)格按照操作規(guī)程進(jìn)行操作,確保超凈工作臺安全使用。
培養(yǎng)室消毒
培養(yǎng)室采用二氧化氯組培室專用消毒劑定期熏蒸消毒。
接種器械消毒
接種之前,接種的剪刀、鑷子和解剖刀器械用報紙包好后高溫高壓進(jìn)行消毒,接種過程中,在酒精
燈上灼燒或在高溫消毒器內(nèi)進(jìn)行消毒。
5培養(yǎng)基制備
基本培養(yǎng)基的選擇
選擇MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基。
母液的配制
5.2.1配制培養(yǎng)基前,先配制培養(yǎng)基母液。大量元素配制10倍,二水氯化鈣單獨(dú)配制。微量元素配制
1000倍,有機(jī)元素配制100倍,鐵鹽配制200倍,具體參數(shù)見附錄A。
5.2.2植物生長調(diào)節(jié)劑一般配制濃度為1mg/mL的母液,具體參數(shù)見附錄B。
母液的保存
母液配制好后貼上標(biāo)簽,標(biāo)簽信息包括名稱、配制時間、配制人、濃度、倍數(shù),放入4℃冰箱保存
備用。使用前觀察有無沉淀或長菌情況,若有異樣,須及時重新配制。
培養(yǎng)基的配制
5.4.1
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