基因載體構(gòu)建設(shè)備運維技師（中級）考試試卷及答案一、填空題（共10題，每題1分）1.基因載體構(gòu)建中常用的質(zhì)粒載體需具備的三個關(guān)鍵元件是復(fù)制原點、______和標記基因。2.PCR儀的核心加熱模塊通常采用______技術(shù)實現(xiàn)快速升溫降溫。3.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA分子因帶______電荷向正極遷移。4.質(zhì)粒提取時，去除蛋白質(zhì)的常用試劑是______。5.基因載體構(gòu)建中，限制酶識別的DNA序列通常具有______結(jié)構(gòu)。6.高速冷凍離心機的轉(zhuǎn)子需定期進行______以確保安全運行。7.連接酶催化DNA片段連接的反應(yīng)需要______作為能量供體。8.電泳儀的輸出電壓范圍一般在______V之間。9.感受態(tài)細胞制備常用的化學(xué)試劑是______。10.基因載體構(gòu)建完成后，需通過______方法驗證載體結(jié)構(gòu)正確性。二、單項選擇題（共10題，每題2分）1.以下哪種設(shè)備用于質(zhì)粒DNA的大量提取？A.微量離心機B.大容量高速離心機C.電泳儀D.PCR儀2.限制酶EcoRI的識別序列是：A.GAATTCB.GCGGCCGCC.CTGCAGD.AAGCTT3.以下哪種載體屬于病毒載體？A.pUC18B.pET-28aC.腺病毒載體D.噬菌體M134.PCR儀的加熱模塊溫度偏差超過多少需校準？A.±0.1℃B.±0.5℃C.±1℃D.±2℃5.瓊脂糖凝膠電泳中，判斷DNA片段大小的參照物是：A.MarkerB.溴酚藍C.SYBRGreenD.EB6.以下哪種試劑用于DNA片段的末端平滑化？A.T4DNA聚合酶B.Taq酶C.逆轉(zhuǎn)錄酶D.RNA酶7.高速離心機運行時，轉(zhuǎn)子不平衡會導(dǎo)致：A.轉(zhuǎn)速下降B.噪音增大C.電壓升高D.試劑揮發(fā)8.轉(zhuǎn)化過程中，將重組載體導(dǎo)入大腸桿菌的常用方法是：A.電穿孔法B.熱激法C.脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染D.顯微注射9.以下哪種設(shè)備用于檢測DNA濃度？A.分光光度計B.電泳儀C.PCR儀D.離心機10.基因載體構(gòu)建中，防止載體自連的常用方法是：A.去磷酸化B.增加載體濃度C.減少插入片段濃度D.提高連接溫度三、多項選擇題（共10題，每題2分）1.質(zhì)粒載體的基本元件包括：A.復(fù)制原點B.多克隆位點C.標記基因D.啟動子2.基因載體構(gòu)建的主要步驟包括：A.目的基因獲取B.載體酶切C.連接反應(yīng)D.轉(zhuǎn)化鑒定3.電泳儀運維需注意的事項有：A.定期校準電壓B.保持電極清潔C.避免過載運行D.及時更換緩沖液4.以下屬于限制酶的是：A.EcoRIB.BamHIC.T4DNA連接酶D.HindIII5.基因載體的類型包括：A.質(zhì)粒載體B.病毒載體C.噬菌體載體D.人工染色體載體6.PCR儀的日常維護包括：A.清潔加熱模塊B.檢查電源連接C.校準溫度D.更換反應(yīng)管架7.感受態(tài)細胞制備的影響因素有：A.細菌生長狀態(tài)B.氯化鈣濃度C.處理溫度D.培養(yǎng)時間8.以下可用于DNA染色的試劑是：A.EBB.SYBRGreenC.溴酚藍D.考馬斯亮藍9.高速冷凍離心機的安全操作要點包括：A.對稱放置樣品B.轉(zhuǎn)子擰緊到位C.運行時遠離設(shè)備D.定期檢查密封圈10.重組載體鑒定的方法包括：A.酶切電泳B.PCR鑒定C.測序D.WesternBlot四、判斷題（共10題，每題2分）1.限制酶切割DNA產(chǎn)生的末端只能是黏性末端。（）2.PCR儀的加熱模塊可通過更換帕爾貼元件維修。（）3.瓊脂糖凝膠電泳中，DNA片段越大遷移速度越快。（）4.質(zhì)粒提取時，RNA酶可去除殘留的RNA。（）5.連接酶只能連接平末端的DNA片段。（）6.電泳儀的電極板需定期用酒精擦拭清潔。（）7.高速離心機的轉(zhuǎn)子壽命與使用次數(shù)無關(guān)。（）8.轉(zhuǎn)化后的大腸桿菌需在含抗生素的培養(yǎng)基上篩選。（）9.分光光度計檢測DNA濃度時，OD260/OD280比值為1.8左右表示純度較好。（）10.基因載體構(gòu)建中，插入片段與載體的摩爾比通常為1:3~3:1。（）五、簡答題（共4題，每題5分）1.簡述PCR儀的日常運維要點。2.什么是基因載體？其在基因工程中的作用是什么？3.簡述質(zhì)粒提取的主要步驟及注意事項。4.電泳儀在使用過程中常見故障及排查方法有哪些？六、討論題（共2題，每題5分）1.討論重組載體自連的原因及解決方法。2.討論高速冷凍離心機在使用中的安全注意事項及維護策略。---答案部分一、填空題答案1.多克隆位點2.帕爾貼（Peltier）3.負4.酚-氯仿（或苯酚-氯仿）5.回文6.動平衡檢測7.ATP8.0-500（或0-600）9.氯化鈣（CaCl?）10.酶切鑒定（或測序、PCR鑒定）二、單項選擇題答案1.B2.A3.C4.B5.A6.A7.B8.B9.A10.A三、多項選擇題答案1.ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABD5.ABCD6.ABCD7.ABCD8.AB9.ABCD10.ABC四、判斷題答案1.×2.√3.×4.√5.×6.√7.×8.√9.√10.√五、簡答題答案1.PCR儀日常運維要點：①每日清潔：用75%酒精擦拭加熱模塊及表面，避免試劑殘留腐蝕；②定期校準：每季度校準溫度（標準溫度計檢測偏差）、電壓；③配件檢查：確認反應(yīng)管架無破損，帕爾貼模塊連接牢固；④環(huán)境維護：放置干燥通風處，遠離電磁干擾；⑤故障排查：溫度異常先查電源，勿自行拆解核心模塊。2.基因載體及作用：基因載體是攜帶外源基因進入受體細胞并復(fù)制表達的DNA分子。作用：①攜帶外源基因，解決直接導(dǎo)入細胞難題；②含復(fù)制原點，實現(xiàn)外源基因大量復(fù)制；③含標記基因，便于篩選含重組載體的細胞；④部分載體含啟動子/終止子，調(diào)控目的基因表達。3.質(zhì)粒提取步驟及注意事項：步驟：①細菌培養(yǎng)→②堿裂解（NaOH+SDS）→③中和（醋酸鉀）→④離心取上清→⑤酚-氯仿抽提+乙醇沉淀。注意：①裂解時間不宜過長，避免質(zhì)粒斷裂；②中和后立即離心，防止染色體DNA復(fù)性；③抽提后去除酚-氯仿殘留；④乙醇沉淀后徹底干燥。4.電泳儀常見故障及排查：①無電壓：查電源插頭、開關(guān)；②電壓不穩(wěn)：查電極清潔度、緩沖液新鮮度；③帶模糊：查凝膠濃度、電壓、樣品污染；④不遷移：查電極正負極、緩沖液是否沒過凝膠；⑤漏液：查密封圈老化，及時更換。六、討論題答案1.重組載體自連原因及解決方法：原因：①載體未去磷酸化（5’-P殘留）；②載體濃度過高；③酶切不完全。解決：①堿性磷酸酶去磷酸化；②插入片段與載體摩爾比3:1~10:1；③雙酶切產(chǎn)生不同黏性末端；④降低載體濃度；⑤驗